专利名称：一种光合细菌富集培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物培养基，具体地说是一种光合细菌富集培养基，属于生物 技术领域。
背景技术：
光合细菌(Photosynthetic bacteria，简称PSB)是地球上最早出现的具有原始 光能合成体系的原核生物，是一类能进行光合作用而不产氧的特殊生理类群的原核生物的 总称。在不同自然条件下，光合细菌具有固氮、脱氢、固碳、氧化硫化物等多种功能，它与其 他光合生物一起构成了自然界生态系统中的原始生产者，并在自然界碳素循环和物质转化 中起着重要的作用。光合细菌菌体本身无毒，富含有多种营养物质和生理活性物质，具有调节微生态 平衡、促进动植物生长、增加产量和提高质量等独特的生理功能。它能够促进许多有益微生 物的增殖，通过多种微生物群相互促进的共生繁殖关系，形成一个复杂而稳定的微生物系 统。随着人们对光合细菌研究的不断深入，大量研究结果表明，光合细菌在种植业、水产、畜 禽养殖及有机污水处理方面均有很好的应用价值。为适合生产的需要，研究和开发出适用于不同用途的光合细菌培养基，更有利于 光合细菌培养技术的推广和应用。现有技术中已经公开了许多光合细菌常规培养基，概括 起来主要有(1)酵母膏 1. 5g，NH4Cl 1. OgjMgCl2 0. 2g, K2HPO4 0.5g，NaCl 1.0g，NaHC03 5. Og, 水 IOOOmL, pH = 7. 0-7. 2，115°C灭菌 30min。(2) (NH4)2SO4 1. Og, MgSO4 · 7H20 0. 2g, NaHCO3 5. Og, K2HPO4 0. 5g, NaCl 0. 2g,蛋 白胨 1.5g，蒸馏水 IOOOmL, pH = 7. 0-7. 2，115°C灭菌 30min。(3) NH4Cl 1. Og, NaHCO3 1. Og，K2HPO4 0. 2g,蛋白胨 2. Og，CH3COONa 3. 0g, MgSO4 · 7Η20 0. 2g，NaCl 1. 25g，酵母膏 lg，蒸馏水 lOOOmL，无机盐溶液 1. OmL, pH = 7. 0， 115°C 灭菌 30min。注无机盐溶液的配制=FeCl35. Omg, CuSO4 0. 05mg, H3BO4,1. Omg, MnCl2 · 4H20 0. 05mg, ZnSO4 · 7H20 1. Omg, Co (NO3) 20. 5mg,蒸馏水 IOOOmL0(4) NH4Cl 1. Og, Na2HPO4,0. 5g, MgCl2 0. 2g, NaC12. 0g，蛋白胨 1. 5g, NaHCO3 5. Og, 乙醇 1. 5mL,蒸馏水 IOOOmL,用 0. IN 的(NH4)3PO4 或 Na2CO3 溶液调至 pH = 7. 0，115°C 灭菌 30mino(5) NaHCO3 1. 0g, CH3COONa 3. 0g，酵母膏 2. 0g,，K2HPO4O. 5g, Fe-EDTA 0. 005g, NH4Cl 1. Og, MgCl2 · 6H 20 0. 2g, NaC15. 0g，水 IOOOmL, pH = 7. 6，115°C灭菌 30min。不过，上述这些培养基还存在着一些不够完善的地方，如光合细菌生长周期长， 光合细菌在生长过程中所产生的特殊异味较大，菌液颜色较暗等。这些问题都不利于高品 质光合细菌制剂及相关产品的开发。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有技术的不足，而提供一种能提高光合细菌活性，增 加菌液颜色鲜艳度，降低光合细菌在生长过程中所产生的特殊异味，适用于开发高品质光 合细菌产品的富集培养基。本发明所提供的光合细菌富集培养基，该培养基中含有骨髓浸膏和速溶豆浆粉 两种成分，每升培养基中含有骨髓浸膏0. 5-1. 5g，速溶豆浆粉0. 8-1. 2g。培养基中其它 成分以光合细菌常规培养基为基础，经过优选而获得，包括氯化铵，乙酸钠，氯化钠，硫酸 镁，磷酸氢二钾几种成分。通过正交试验，最终确定光合细菌富集培养基配方为骨髓浸膏 0. 5-1. 5g，速溶豆菜粉 0. 8-1. 2g, NH 4C10. 5-1. 0g, CH 3C00Na 1. 0-2. 0g, NaCl 0. 5-1. 0g, MgSO 40· 1-0. 15g, K2HPO4 0. lg, ρΗ = 6. 7-7. 0，水 IOOOmL0所述的骨髓浸膏为目前市场上所销售的根据传统煲汤技术所生产的用于调配浓 缩汤品的食品添加剂-骨髓浸膏。所述的速溶豆浆粉为目前市场上所销售的用于制作豆浆的食品原料-速溶豆浆 粉。应用光合细菌富集培养基进行光合细菌培养的方法将配制好的光合细菌富集培 养基经121°C灭菌20分钟后，以5-30%的接种量接入培养好的光合细菌菌液，在27-30°C， 3000-5000Lux条件下培养，每天搅拌或摇晃1_2次，培养2_5天使光合细菌数达到2 X IO8/ HlL以上。本发明的优点和效果1、提高光合细菌的活菌数量，缩短光合细菌的生长周期。采用本发明提供的培养 基，以5%接种量进行富集培养，48小时后OD66tl值迅速增长，在120小时OD66tl值达到最高峰 2. 1，之后菌液浓度略有下降，但仍保持较高浓度水平。2、菌液颜色更加鲜艳。采用本发明所培养的光合细菌菌液颜色为鲜红色，与目前 其它培养方法相比颜色更加鲜艳。3、在培养过程中光合细菌所特有的异味有了很大程度的降低。4、所生产的光合细菌菌液的品质有了更显著的提高。本发明所提供的光合细菌富 集培养基，选用食品级添加剂作为原料，所生产的光合细菌制剂的品质有了显著提高，适用 于高品质的光合细菌制剂及相关产品的开发，具有更广泛的实用价值。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作详细说明实施例1光合细菌富集培养的方法(1)光合细菌富集培养基的配制骨髓浸膏0. 5g，速溶豆浆粉0. 8g, NH 4C1 0. 8g， CH 3C00Na 1. 5g, NaCl 0. 5g, MgSO4O. 15g, K2HPO4O. lg, pH = 6. 7，水 IOOOmL0(2)光合细菌富集培养将上述配制好的培养基在121°C下灭菌30min，取培养好 的光合细菌种子液，以5%的比例接种于培养基中，置于27°C，3000-5000LuX条件下，厌氧 培养5天后，达到最大生长量，培养液呈鲜红色，测定OD66tl = 1.94，采用试管稀释法测定光 合细菌培养液中活菌数为2. 7X 109。实施例2光合细菌高效率富集培养的方法
(1)光合细菌富集培养基的配制骨髓浸膏1. 2g，速溶豆浆粉1. 0g, NH4Cl 1. Og, CH 3C00Na 2. 0g, NaCl 0. 5g, MgSO4 0. 15g, K2HPO4O. lg, pH = 6. 7，水 IOOOmL0(2)光合细菌富集培养将上述配制好的培养基在121°C下灭菌30min，取培养好 的光合细菌种子液，以30%的比例接种于培养基中，置于27°C，3000-5000LuX条件下，厌氧
培养2天后，达到最大生长量，培养液呈鲜红色，测定OD66tl = 2. 4，采用试管稀释法测定光合 细菌培养液中活菌数为3. 47X 109。上述光合细菌培养条件以28_30°C，4000-5000Lux为宜。实施例3光合细菌富集培养基的具体配方骨髓浸膏0. 5g ；速溶豆浆粉1. Og ； NH4Cl 0. 5g ；CH3COONa 1. 5g ；NaCl 0. 5g ；MgSO4O. Ig ；K2HPO4O. lg, pH = 6. 7-7. 0，水 1000mL。实施例4光合细菌富集培养基的具体配方骨髓浸膏1. Og ；速溶豆浆粉0. Sg ；NH 4C1 0. 8g ；CH 3C00Na Ig ；NaCl 0. 8g ；MgSO4O. 15g ；K2HPO4O. lg, pH = 6. 7-7. 0，水 IOOOmL0实施例5光合细菌富集培养基的具体配方骨髓浸膏1. 5g ；速溶豆浆粉1. 2g ； NH4Cl 1. Og ；CH3COONa 2. Og ；NaCl 1. Og ；MgSO4O. 15g ；K2HPO4O. lg, pH = 6. 7-7. 0,水 1000mL。实施例6光合细菌培养液在蛋鸡养殖中的应用(1)实验对象的选择选取同一蛋鸡场结构相同的两栋鸡舍中饲养的蛋鸡作为实 验对象，蛋鸡品种均为海兰褐蛋鸡。实验组存栏6534只，十三月龄；对照组存栏6124只， 十二月龄。实验组和对照组蛋鸡均饲喂同样的饲料，其他管理方式一致。(2)实验方法以实施例2所制备的光合细菌培养液对实验组蛋鸡以1 200比 例投加入饮水中进行饲喂，对照组不投加菌液。投加的菌液要求当天用完，其他饲养条件不 变，实验时间为4个月。(3)实验结果实验组在投加菌液饲喂5天后，采食量比以前增加3. 4%，实验期 间，实验组与对照组相比较平均每千只鸡产蛋量提高4. 7%，鸡蛋破损率降低68% ；实验期 间，实验组没有发病，预防用药花费500元左右，对照组实验期间发病用药花费4200元；实 验期间实验组淘汰弱病鸡37只，对照组淘汰弱病鸡174只。实施例7光合细菌培养液对玉米幼苗生长的影响实验方法(1)以实施例2所制光合细菌液，用1 500稀释液对玉米种子浸泡处 理12小时，对照组用清水浸种，再置于28°C条件下培养5天后测定发芽率。2)浸泡后的种 子进行播种试验(沙壤土)，在玉米苗期4-5片叶时，测定玉米幼苗的株高、叶鲜重和干重， 根长、根鲜重和干重等指标。实验结果经1 500稀释液浸种处理的玉米种子与清水浸种处理的玉米种子相 比，发芽率提高3.4%，幼苗生长期(4-5片叶)株高增加18.2%，叶鲜重增加8.9%，叶干重 增加6.8% ；根长增加4. 1%，根鲜重增加24.6%，叶干重增加17.3%。
权利要求
一种光合细菌富集培养基，其特征在于该培养基由骨髓浸膏；速溶豆浆粉；氯化铵；乙酸钠；氯化钠；硫酸镁；磷酸氢二钾七种原料组成。
2.如权利要求1所述的光合细菌富集培养基，其特征在于每升培养基中含有骨髓浸 膏0. 5-1. 5g，速溶豆浆粉0. 8-1. 2g。
3.如权利要求1所述的光合细菌富集培养基，其特征在于每升培养基中含有NH4Cl 0. 5-1. Og ；CH3COONa l_2g ；NaCl 0. 5-1. Og ；MgSO4O. 1-0. 15g ；K 2HP040. lg。
4.如权利要求2和3所述的光合细菌富集培养基，其特征在于该培养基的具体配方 骨髓浸膏 0. 5g;速溶豆浆粉 1.0g;NH4C10. 5g;CH3C00Na 1. 5g ；NaCl 0. 5g ；MgSO4 0. Ig ； K2HPO4 0. lg, pH = 6. 7-7. 0，水 IOOOmL0
5.如权利要求2和3所述的光合细菌富集培养基，其特征在于该培养基的具体配 方骨髓浸膏 l.Og;速溶豆浆粉 0. 8g;NH4Cl 0. 8g ；CH3COONa Ig ；NaCl 0. 8g ；MgSO4O. 15g ； K2HPO4 0. lg, pH = 6. 7-7. 0，水 IOOOmL0
6.如权利要求2和3所述的光合细菌富集培养基，其特征在于该培养基的具体配方 骨髓浸膏 1. 5g ；速溶豆浆粉 1. 2g ;NH4C1 1. Og ；CH3COONa 2. Og ；NaCl 1. Og ；MgSO4O. 15g ； K2HPO 40. lg, pH = 6. 7-7. 0，水 1000mL。
7.如权利要求1或2或3或4或5或6所述的光合细菌富集培养基，其特征在于它的 培养方法将上述配制好的培养基在121°C下灭菌30min，取培养好的光合细菌种子液，以30%的 比例接种于培养基中，置于27°C -30°C，3000-5000Lux条件下，厌氧培养2天后，达到最大生 长量，培养液呈鲜红色，测定OD66tl = 2. 4，采用试管稀释法测定光合细菌培养液中活菌数为 3. 47 X IO90
8.如权利要求7所述的光合细菌富集培养基，其特征在于光合细菌培养条件以 28-30°C,4000-5000Lux 为佳。
全文摘要
一种光合细菌富集培养基，属于生物技术领域。它含有骨髓浸膏和速溶豆浆粉，其他成分根据光合细菌常规培养基的基础成分通过筛选而最终确定为氯化铵，乙酸钠，氯化钠，硫酸镁，磷酸氢二钾。该培养基可提高光合细菌的培养效率，菌液颜色更加鲜艳，在培养过程中光合细菌所特有的异味有了很大程度的降低。采用此培养基所生产的光合细菌菌液的品质有了显著提高，所生产的光合细菌制剂具有更广泛的实用价值。该富集培养基更适用于高品质的光合细菌制剂及相关产品的开发。
文档编号C12R1/01GK101886052SQ201010194208
公开日2010年11月17日 申请日期2010年6月8日 优先权日2010年6月8日
发明者孔健健, 张阳, 潘晶, 陶思源, 马莲菊, 黄琳丽 申请人:沈阳师范大学