专利名称：一种组织匀浆增效剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种组织勻浆增效剂及其应用。
背景技术：
朊病毒既可引起人类疾病，也可引起动物疾病。人类朊病毒病(Prion Diseases) 或称为传染性海绵样脑病(The Transmissible Spongiform Encephalopathies, TSEs) 克包括雅氏病(CJD)、库鲁病(Kuru)、吉斯综合症(GSS)、致死性家族失眠症(FFI)等，动物 TSEs疾病包括羊瘙痒病(Scrapie)、疯牛病(BSE)、鹿萎缩病(CWD)等。朊病毒(Prion)是一种传染性的蛋白质，不含疾病所特有的核酸。这种传染性的蛋白质是由正常的生理型蛋白质(PrPC)在特定外因和内因的“诱导”下，蛋白质的空间构象发生改变，由α螺旋变成β片层，形成传染性的病理型蛋白质(PrPk)，这类疾病的实验室诊断标志物是I^rPSc。中枢神经系统组织例如大脑和脊髓组织含有高浓度的I^rPSc，是诊断这类疾病理想的组织病理材料，但是使用大脑和脊髓组织进行实验室检测时必须杀死动物，而进行临床上检测时多用于尸体解剖。非中枢神经系统如脾脏、淋巴结、扁桃体、直肠等组织中PrPk含量很低，但是在疾病的早期诊断中非常重要，因为当动物感染疾病时，这类组织最先聚集I^rPSc。由于这类组织含有较多结缔组织，制备勻浆时组织细胞不易破碎，很难勻浆彻底，这样PrPk就不能很好地从细胞碎片中分离出来，而影响检测诊断的准确性。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种组织勻浆增效剂。该组织勻浆增效剂可以提高勻浆效果而对勻浆液中的化学成分没有影响。本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种组织勻浆增效剂的制备方法。本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种利用组织勻浆增效剂制备组织勻浆液的方法。该方法尤其适用于非中枢神经系统如脾脏、淋巴结、扁桃体、直肠等含有较多结缔组织的组织器官，制备勻浆时使组织细胞更易破碎，勻浆彻底。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是 一种组织勻浆增效剂，它是粒径为广2mm的沙粒。该组织勻浆增效剂是通过将建筑工程用的沙子原料用水洗涤，然后用双层纱布过滤，筛选出粒径为广2mm的沙粒。本发明还提供了一种制备组织勻浆液的方法，该方法是在进行组织勻浆时，加入粒径为广2mm的沙粒，与勻浆液一起勻浆；所述沙粒重量/勻浆液体积为0. 02、. 05g/mL。进一步地，所述制备组织勻浆液的方法尤其适用于脾脏、淋巴结、扁桃体、直肠或肌肉组织等含有较多结缔组织的组织器官。进一步地，所述勻浆的条件为10秒/次，间隔30秒，勻浆3飞次。本发明的有益效果
(1)对于含有较多结缔组织或肌肉组织的样本检测来说，因为这些组织细胞不易破碎，很难勻浆彻底，给检测低含量病毒带来了困扰。通过本发明所述的组织勻浆方法，可以达到很好的勻浆效果。(2)本发明是将建筑工程用的沙子用于组织样本的勻浆处理，通过控制沙子的粒径及加入量，有效解决了较难破碎组织的勻浆液制备，增强了组织勻浆效果，而且对于勻浆液中的化学成分没有任何影响，并且节约了检测成本。下面结合具体实施方式
对本发明作进一步说明，不以任何方式限制本发明。凡是依照本发明公开内容所进行的任何本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。具体实施例方式
实施例1动物脾脏组织勻浆液的制备
1.取组织块(200mg)，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入aiil 的微离心管中。2.用移液管量取1. 8ml预冷的组织勻浆介质(0. 86%冷生理盐水)，勻浆液终体积为ani，勻浆介质的体积总量应该是组织块重量的9倍。3.用水洗涤过的沙子再用双层纱布过滤，筛选粒径为广2mm的粗沙粒，称重已筛选的粗沙粒40-100 mg加入到勻浆液中与脾脏组织一起勻浆。4.用组织勻浆机在冰水中进行上下研磨10%组织勻浆，勻浆时间10秒/次，间隙 30秒，连续3 5次)，取少量组织勻浆做涂片，显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长勻浆时间。5.将制备好的10%勻浆用微型离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心1 分钟，将离心好的勻浆留下上清液，废弃下面沉淀的细胞碎片。根据实验需要，取适量上清夜进行脾脏组织里PrPk测定。实施例2动物直肠组织勻浆液的制备
1.取组织块(2g)，在冰冷的生理盐水中漂洗去除粪便，剪除脂肪等，滤纸拭干，称重， 放入20ml的离心管中。2.用移液管量取18ml预冷的组织勻浆介质(0. 86%冷生理盐水)，勻浆液终体积为20ml，勻浆介质的体积总量应该是组织块重量的9倍。3.用水洗涤过的沙子再用双层纱布过滤，筛选粒径为广2mm的粗沙粒，称重已筛选的粗沙粒0. 4-1. Og加入到勻浆液中与脾脏组织一起勻浆。4.用组织勻浆机在冰水中进行上下研磨10%组织勻浆，勻浆时间10秒/次，间隙 30秒，连续3 5次)，取少量组织勻浆做涂片，显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长勻浆时间。5.将制备好的10%勻浆用微型离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心1 分钟，将离心好的勻浆留下上清液，废弃下面沉淀的细胞碎片。根据实验需要，取适量上清夜进行直肠组织里PrPk测定。对比试验例
不同浓度沙粒对脾脏组织勻浆效果的对比实验
权利要求
1.一种组织勻浆增效剂，其特征在于，它是粒径为广2mm的沙粒。
2.—种组织勻浆增效剂的制备方法，其特征在于，将沙子原料用水洗涤，然后用双层纱布过滤，筛选出粒径为广2mm的沙粒。
3.一种制备组织勻浆液的方法，其特征在于，该方法是在进行组织勻浆时，加入粒径为广2mm的沙粒；所述沙粒重量/勻浆液体积为0. 02、. 05g/mL。
4.根据权利要求3所述的制备组织勻浆液的方法，其特征在于，所述组织为脾脏、淋巴结、扁桃体、直肠或肌肉组织。
5.根据权利要求3所述的制备组织勻浆液的方法，其特征在于，所述勻浆的条件为10 秒/次，间隔30秒，勻浆；Γ5次。
全文摘要
本发明公开了一种组织匀浆增效剂及其应用。该组织匀浆增效剂是粒径为1~2mm的沙粒。在进行组织匀浆时，通过加入沙粒，提高了较难破碎组织的匀浆效果。
文档编号C12R1/93GK102443657SQ201110370969
公开日2012年5月9日 申请日期2011年11月21日 优先权日2011年11月21日
发明者刘全国, 刘哲明, 史喜菊, 李冰玲, 李炎鑫, 马贵平 申请人:中华人民共和国北京出入境检验检疫局