专利名称：一种富含磷酸盐的保健饮品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种可以提高机体端粒酶活性的富含磷酸盐的保健饮品，属于延迟生物衰老的保健饮品技术领域。
背景技术：
随着社会的发展和人类生活质量的提高，人们越来越关注健康，越来越期盼寿命的延长，近年来国内外生物科学工作者利用果蝇研究了多种因素对寿命的影响。吴亦帆等研究发现刺梨原汁有促进果绳生长发育和延缓衰老过程的作用。许今博等研究表明新疆紫草提取物AE- I、AE- II对果蝇均能延长雌雄果蝇的平均寿命和最高寿命，并使果蝇的生存曲线显著右移。黄代青应用化学发光法研究表明桑叶提取液对氧自由基中的羟自由基具有相当强的清除作用，在剂量比中医大辞典规定的大3倍以上时，并不降低果蝇的平均寿命，且对果蝇的最高寿命均有一定程度的提高。李连德等研究发现，从虫草深层发酵产物中提 取的多糖对果蝇具有延缓衰老的作用，来源于ATOl的胞内、胞外多糖效果最好，延寿效果随纯度的增大而提高。生物体所含的大量元素包括C、H、O、N、P、S,其中磷是人体含量较多的元素之一。成人体内磷含量约为600-900g，约占体重的1%。它不但是构成人体的重要成分，而且参与生命活动中一些非常重要的代谢过程。因此磷的充分摄入对生物体的各项生命活动具有重要的作用。在我国湖北省中部的钟祥镇千年来素有长寿县之称。如今这里生活着77位百岁老人。钟祥磷矿镇是全市磷矿石品位最高的一个镇。这些高龄人群的密集分布地恰恰是钟祥的磷矿区域及其辐射圈。钟祥人长寿的主要原因之一可能是由于本地生活用水中含较高浓度的磷元素造成。因此可以推测，在一定范围内，高浓度的磷元素摄入可能对人体具有一定的延缓衰老作用。研究表明，在动物体内磷元素的摄入主要通过扩散机制，以无机离子的形式在肠道被吸收。另外，在磷矿区排放的废水中磷元素主要以KH2PO4形式存在，KH2PO4是允许在食品中使用的添加剂，在饮料中的使用限度为2g/Kg，对生物体饲喂一定的KH2PO4不会对机体产生有害的影响。因此，利用磷酸盐KH2PO4饲喂生物体有望揭示摄入磷元素对其各种生理指标的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以提高机体端粒酶活性的富含磷酸盐的保健饮品。本发明的富含磷酸盐的保健饮品的组成是以水作为溶剂，每升溶液中含有80 400mg的食品级磷酸二氢钾(KH2PO4)15本发明的富含磷酸盐的保健饮品的组成是经过大量实验确定的。为了实现本发明的目的，本申请人进行了以下实验研究
将小鼠随机分为6组，每组10只。对照CK组小鼠正常培养，五个处理组小鼠均通过背部皮下注射D-半乳糖建立为衰老模型，分别标记为TO T4组，每个处理组饮用水中添加KH2PO4,使其终浓度依次为0mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其脑、肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对D-半乳糖衰老模型小鼠和对照小鼠饲喂含有不同KH2PO4浓度的饮用水，6周后检测结果表明与对照组相比，D-半乳糖衰老模型小鼠的脑、肝组织中丙二醛的含量明显升高。在饮用含有不同浓度KH2PO4的饮用水后，均能不同程度降低小鼠体内丙二醛的含量。当饮用水中KH2PO4浓度为80mg/L时，降低效果较为显著(表I)。表I不同浓度KH2PO4对衰老小鼠脑肝组织丙二醛(MDA)含量的影响
八MDA (rmo I /rog)
脑组织肝组织
对照_934rbQ.44__8.84土0.68·
TO17,98 土0.91# 17.29 ±O.S5#
Tl_17.45=t=1.54__HSO 土 1.67
T217.2 *7 ±1.821β.38±Ο.Ι8
3_16.43 土 1*23- IS.g 土O.雜*
T416.77+0.7815.95 ±1.99
* 与TO组比较，p〈0. 05，差异达到显著水平。# :与对照组比较，p〈0. 05，差异达到显著水平
对脑、肝组织中端粒酶的活性的检测表明，D-半乳糖衰老模型小鼠的脑、肝组织中端粒酶的活性明显降低，衰老小鼠的饮用水中添加不同浓度的KH2PO4均能够提高端粒酶的活性，当添加KH2PO4浓度为80mg/L时，端粒酶活性提高的效果最为明显(表2)。表2不同浓度无机磷对衰老小鼠脑肝组织端粒酶活性的影响
#_端粒酶(rmoI /g)_
匁-脑组织:MTmm
对照 O. 26士 α 013O. 15士 CL OlO
TOO. 12土 O. 007#O. 08±0. 009—
Tl__O. 16± O. 006O. 09=b0. 008
T2O. 17±0. 018O. IOzb O. 003*
_ 3__O. 19 土 O. 006*O. 12士 O. 019木
T4O. 18+: O. 021O· IidbCX 007
*:与TO组比较，p〈0. 05，差异达到显著水平.
#:与对照组比较，p〈0. 05，差异达到显著水平.
## p<0. 01，差异达到极显著水平.通过小鼠检测获知80mg/L的KH2PO4溶液可以提高其端粒酶活性和降低其体内的丙二醛(MDA)含量，推测一定量的KH2PO4溶液对生物体寿命有所影响，因此利用大肠杆菌和果蝇为实验对象，对其培养基中分别添加一定量的KH2PO4,检测对其生长的影响情况。对大肠杆菌的实验接种DH5 α大肠杆菌到LB培养基(胰蛋白胨10g，酵母浸出物5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml，pH 7. 0-7. 2)，培养过夜后，接种ImL同浓度的菌液到分别含有 0mg/L、0. 64mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L、2g/L、5g/L、10g/L、25g/L KH2PO4 的LB培养基中，37°C，160rpm摇床培养4h。8000rpm，5min离心收集菌体，测量其重量。实验结果表明，在培养基中添加不同浓度的KH2PO4对大肠杆菌的生长状况有明显影响。以大肠杆菌菌体净重为指标进行检测表明，当KH2PO4浓度为O. 64 2000 mg/L时，大肠杆菌菌体净重比不添加KH2PO4的对照均有不同程度的增加，当KH2PO4浓度为3. 2mg/L 时，大肠杆菌菌体净重达到85. 35mg,比对照的菌体净重70. 95mg增加最为明显。因此,培养基中添加一定的KH2PO4对大肠杆菌生长有促进作用，添加3. 2mg/L的KH2PO4对大肠杆菌生 长促进作用最大。当培养基中KH2PO4浓度达到5000mg/L以上时，大肠杆菌的菌体净重相对于对照组表现出逐渐减少，因此，高浓度的KH2PO4对大肠杆菌生长具有抑制作用(图I)。对果蝇的实验以野生型黒腹果蝇为实验材料，收集处女蝇，接种到含有Omg/L、O. 64mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L KH2PO4 的果蚬培养基(水 1L,玉米粉 105g,鹿糖75g，琼脂7. 5g，丙酸6. 25ml，酵母粉20g)。25°C进行培养，每个处理共接种果蝇40只。接种后每天观察果蝇生活状况，并记录果蝇死亡情况，绘制果蝇寿命曲线图。试验结果表明，对果蝇饲喂少量的KH2PO4均可以不同程度延长果蝇的寿命。在培养基中添加的KH2PO4浓度为16mg/L时，果蝇寿命得到延长的现象最为明显。添加的KH2PO4浓度高于16mg/L时，果蝇寿命虽得到延长，但随培养基中KH2PO4浓度的增加果蝇寿命延长的程度呈现逐渐下降的趋势，因此，在培养基中添加16mg/L的KH2PO4浓度对果蝇的生存最为有利(图2)。以上实验结果中，由于大肠杆菌细胞是直接接触到培养基中的KH2PO4溶液，吸收效率高，因此3. 2mg/L为其最适浓度。对果蝇的试验中，食物和水分来源均来自培养基，因此培养基中含有16mg/L的KH2PO4浓度对果蝇的生存最为有利。对于小鼠的实验结果，试验中只在饮用水中添加KH2PO4,其饲喂饲料中并未添加，因此其饮用水中含有80mg/L的KH2PO4对小鼠的端粒酶活性提高和丙二醛(MDA)含量降低最为有利。由于小鼠作为哺乳动物的模式生物，其生活方式最接近于人类，因此本发明的富含磷酸盐的保健饮品可以主要借鉴小鼠实验的数据结果，考虑到80mg/L的KH2PO4对提高小鼠机体端粒酶活性的效果最佳，而400mg/L的KH2PO4溶液对小鼠端粒酶活性的提高效果与80mg/L的KH2PO4溶液效果基本持平。因此本富含磷酸盐的保健饮品组成确定为每升水添加80 400mg的食品级KH2PO4。本发明的磷酸盐保健饮品的最佳组成是每升水溶液中含有80mg的食品级磷酸二氢钾(KH2PO4)15本发明所说的富含磷酸盐的保健饮品制备方法简单，用食品级KH2PO4配制成水溶液，即直接利用食品级KH2PO4配置成80 400mg/L的饮用水,其中，水可用矿泉水、纯净水、自来水均可。每天坚持饮用，可起到提高人体端粒酶活性、延缓衰老的保健效果。
按照大肠杆菌培养基中添加2000 5000 mg/L的KH2PO4可能会对细胞产生负面影响计算，如果矿泉水中添加的KH2PO4浓度为400mg/L，则人体每人每天服用本饮品的上限为5升。本发明取得的有益效果是本保健饮品制备方法简单，长期饮用，能够显著提高机体组织中端粒酶的活性，降低体内丙二醛(MDA)的含量，拮抗自由基损伤，从而起到延缓衰老的积极作用，对机体无害。还可以按照一定浓度添加到饮料中，坚持服用能起到延缓机体衰老的功效。
图I为不同浓度的KH2PO4对大肠杆菌生长的影响。当KH2PO4浓度为3. 2mg/L时，大肠杆菌菌体净重达到85. 35mg,比对照的菌体净重70. 95mg增加最为明显。图2为不同浓度KH2PO4的添加对果蝇寿命影响，在培养基中添加的KH2PO4浓度为16mg/L时,果蚬寿命得到延长的现象最为明显。
具体实施例方式下面的实施例用于说明本发明，但本发明的保护范围不受实施例的限制。实施例I
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工诱导为衰老模型。同时将其分为对照组和处理组，处理组饮用水组成为每升水中含有IOOmg的食品级KH2PO4,对照组饮用水中不添加KH2PO4，两组饲料配方均为玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素0.1%，不做其他任何特殊处理。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对处理组和对照组小鼠的检测，结果表明对照组相小鼠的肝组织中丙二醛的含量为18. 23±0. 68，与饮用水中添加IOOmg的KH2PO4处理组小鼠的肝组织中丙二醛含量15. 70±0. 12具有显著差异。对照组相小鼠的肝组织端粒酶活性检测为O. 07±0. 006，处理组小鼠的肝组织端粒酶活性为O. 10±0. 002两者之间具有显著差异。上述检测表明，在衰老小鼠的饮用水中每升水中添加IOOmg的KH2PO4能够显著提高其肝组织端粒酶的活性，降低其肝组织中的丙二醛含量。实施例2
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工诱导为衰老模型。同时将其分为对照组和处理组，处理组饮用水中添加200mg/L的KH2PO4,对照组饮用水中不添加KH2PO4,两组饲料配方均为玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊处理。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对处理组和对照组小鼠的检测，结果表明对照组相小鼠的肝组织中丙二醛的含量为19. 26±0. 37，与饮用水中添加200mg/L的KH2PO4处理组小鼠的肝组织中丙二醛含量16. 85±0. 17具有显著差异。对照组相小鼠的肝组织端粒酶活性检测为O. 09±0. 002，处理组小鼠的肝组织端粒酶活性为O. 12±0. 011两者之间具有显著差异。上述检测表明，在衰老小鼠的饮用水中添加200mg/L的KH2PO4同样能够显著提高其肝组织端粒酶的活性，降低其肝组织中的丙二醛含量。实施例3
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工诱导为衰老模型。同时将其分为对照组和处理组，处理组饮用水中添加300mg/L的KH2PO4,对照组饮用水中不添加KH2PO4,两组饲料配方均为玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊处理。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对处理组和对照组小鼠的检测，结果表明对照组相小鼠的肝组织中丙二醛的含量为18. 21 ±0. 87，与饮用水中添加300mg/L的KH2PO4处理组小鼠的肝组织中丙二醛含量16. 12±0. 52具有显著差异。对照组相小鼠的肝组织端粒酶活性检测为O. 07±0. 011，处理组小鼠的肝组织端粒酶活性为O. 10±0. 005两者之间具有显著差异。上述检测表明，在衰老小鼠的饮用水中添加300mg/L的KH2PO4同样也能显著提高其肝组织端粒酶的活性，降低其肝组织中的丙二醛含量。实施例4
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工诱导为衰老模型。同时将其分为对照组和处理组，处理组饮用水中添加400mg/L的KH2PO4,对照组饮用水中不添加KH2PO4,两组饲料配方均为玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊处理。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对处理组和对照组小鼠的检测，结果表明对照组相小鼠的肝组织中丙二醛的含量为17. 62 ± O. 59，与饮用水中添加400mg/L的KH2PO4处理组小鼠的肝组织中丙二醛含量15. 75±0. 64具有显著差异。对照组相小鼠的肝组织端粒酶活性检测为O. 08±0. 007，处理组小鼠的肝组织端粒酶活性为O. 10±0. 015两者之间具有显著差异。上述检测表明，在衰老小鼠的饮用水中添加400mg/L的KH2PO4也能显著提高其肝组织端粒酶的活性，降低其肝组织中的丙二醛含量。实施例5
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工诱导为衰老模型。同时将其分为对照组和处理组，处理组饮用水中添加80mg/L的KH2PO4，对照组饮用水中不添加KH2PO4，两组饲料配方均为玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊处理。每天观察记录小鼠的饮水量及生活状况，6周后处死小鼠，检查其肝组织端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通过对处理组和对照组小鼠的检测，结果表明对照组相小鼠的肝组织中丙二醛·的含量为17. 49 ± O. 47，与饮用水中添加80mg/L的KH2PO4处理组小鼠的肝组织中丙二醛含量14. 63±0. 37具有极显著差异。对照组相小鼠的肝组织端粒酶活性检测为O. 06±0. 001，处理组小鼠的肝组织端粒酶活性为O. 10±0. 002两者之间具有极显著差异。
上述检测表明，在衰老小鼠的饮用水中添加80mg/L的KH2PO4能极显著提高其肝组织端粒酶的活性，降低其肝组织中的丙二醛含量。
权利要求
1.一种富含磷酸盐的保健饮品，其特征在于其组成如下以水作为溶剂，每升水溶液中含有食品级磷酸二氢钾(KH2PO4) 80 400mg。
2.根据权利要求I所述的富含磷酸盐的保健饮品，其特征在于每升水溶液中含有食品级磷酸二氢钾(KH2PO4) 80mg。
全文摘要
本发明公开了一种富含磷酸盐的保健饮品。利用食品级磷酸二氢钾(KH2PO4)，以一定浓度配制成饮用水，每升水溶液中含有80～400mg的食品级磷酸二氢钾(KH2PO4)。长期饮用，可以达到提高机体端粒酶活性的效果。本发明制备方法简单，成本低，对生物体无害。应用范围广，可以按照一定浓度添加到饮料中，坚持服用能起到延缓机体衰老的功效。
文档编号A23L2/38GK102934829SQ20121048384
公开日2013年2月20日 申请日期2012年11月26日 优先权日2012年11月26日
发明者葛荣朝, 李小敏, 李明明, 乔玉倩, 李越, 何宁, 吴琼, 杨秋爽, 郗亚萍, 杨帅 申请人:河北师范大学