一种显色触酶反应液及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种显色触酶反应液，其含有以下组分：过氧化氢、气泡保护剂和颜色指示剂。本发明的显色触酶反应液具有以下优点：1）稳定性高，产品有效期从传统时间的一个星期延长至1年；2）可产生显色反应，相对于传统的无色气泡更加方便肉眼观察结果，提高了实验的准确性及灵敏度；3）反应产生的气泡量大，气泡保存时间长，与传统方法相比提高了检测的灵敏度；4）生物安全性能得到大大的提高。
【专利说明】一种显色触酶反应液及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于检测试剂领域，，具体涉及一种变色触酶反应试剂及其应用。
【背景技术】
[0002]自然界和人体存在的微生物种类繁多，且新的微生物不断涌现，这给从事微生物检测的工作者带来了很大的困难与挑战，而且通过空气传染的微生物也在不断增多，给临床操作者的人身安全带来很大的威胁。如何将感染人类的病原微生物快速准确地鉴定，同时减少生物安全的传染，最大限度保证临床操作者的人身安全。这两方面内容是摆在临床微生物研究人员及诊断试剂厂家面前的一个非常重要的课题。
[0003]触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，可通过触酶反应进行检测。但传统的触酶反应有一定的局限性，主要表现为:1、灵敏度不高，产生气泡少；
2、产生的气泡消失快，影响结果的判读，经常误判；3、产生的气泡无色透明，对临床操作者的经验提出了较高的要求，主观因素较大；4、气体放量过快，气溶胶给操作者的人身安全带来很大的威胁；5、试剂稳定性差，放置室温一个星期就失效需要从新配制。
[0004]针对上述不足，本发明旨在对传统触酶反应作出改进。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种可以显色的触酶反应液，及其在检测产过氧化氢酶细菌上的应用。
`[0006]本发明所采取的技术方案是:
一种显色触酶反应液，其含有以下组分:过氧化氢、气泡保护剂和颜色指示剂。
[0007]所述气泡保护剂为油基二羟乙基氧化胺。
[0008]所述颜色指示剂为pH指示剂、氧化还原指示剂或有色染料。
[0009]作为优选的，所述pH指示剂包括:溴氯酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝等中的任一种； 所述氧化还原指示剂包括:亚甲基蓝、二苯胺磺酸钠中的任一种；
所述有色染料包括:结晶紫、复红中的任一种。
[0010]作为优选的，反应液中各组分的浓度为:过氧化氢2%~10%，气泡保护剂5%~20%，颜色指示剂0.005%~0.01%，溶剂为水。
[0011]作为优选的，所述反应液中还可以含有焦磷酸钠和EDTA，可提高反应液的稳定性。
[0012]作为优选的，反应液中各组分的浓度为:过氧化氢2%~10%，焦磷酸钠0.001%~
0.01%,气泡保护剂5%~20%, EDTA0.001%~0.05%,颜色指示剂0.005%~0.01%,溶剂为水。
[0013]一种显色触酶反应试剂盒，其含有以上所述的显色触酶反应液。
[0014]所述试剂盒中的显色触酶反应液装于黑色滴瓶或其它避光材料的瓶子中。
[0015]一种产过氧化氢酶细菌的检测方法，包括将以上所述的显色触酶反应液滴加于待检样品上，根据是否出现气泡和颜色变化来判断样品中是否含有产过氧化氢酶的细菌。
[0016]本发明的有益效果是:
本发明显色触酶反应液的检测原理是:产过氧化氢酶的细菌能催化由氢离子和氢氧根组成的过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡，由于氢离子的减小和氧气的产生导致颜色指示剂发生颜色的改变。油基二羟乙基氧化胺加强了气泡膜上的粘度从而起到保护气泡的作用。本发明的显色触酶反应液具有以下优点:
(1)稳定性高，产品有效期从传统的一个星期延长至I年；
(2)可产生显色反应，相对于传统的无色气泡更加方便肉眼观察结果，提高了实验的准确性及灵敏度；
(3)反应产生的气泡量大，气泡保存时间长，与传统方法相比提高了检测的灵敏度；
(4)生物安全性能得到大大的提高，原因是传统触酶产生的气泡快速破裂造成气溶胶的污染，本专利产品中有气光保护剂就是防止气泡快速破裂造成气溶胶的污染。
【专利附图】
【附图说明】
[0017]图1为本发明产品与传统触酶试剂的比较；
图2为本发明产品的检测结果示意图；
图3为本发明实施例1~3显色触酶反应液的检测结果图。
【具体实施方式】
[0018]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0019]实施例1
一种显色触酶反应液，其组分为:过氧化氢3.5%，油基二羟乙基氧化胺10%，溴氯酚蓝
0.005%，溶剂为水。
[0020]实施例2
一种显色触酶反应液，其组分为:过氧化氢3%，焦磷酸钠0.008%，油基二羟乙基氧化胺15%，EDTA0.005%,溴氯酚蓝0.005%,溶剂为水。
[0021]实施例3
一种显色触酶反应液，其组分为:过氧化氢3.5%，焦磷酸钠0.008%，油基二羟乙基氧化胺15%, EDTA0.005%，亚甲基蓝0.005%，溶剂为水。
[0022]实施例4
一种显色触酶反应液，其组分为:过氧化氢2%，焦磷酸钠0.01%,油基二羟乙基氧化胺20%, EDTA0.001%,溴酚蓝 0.01%,溶剂为水。
[0023]利用本反应液进行触酶反应，未发生反应时为黄色澄清液体，出现蓝色气泡时为阳性。
[0024]实施例5
一种显色触酶反应液，其组分为:过氧化氢10%，焦磷酸钠0.001%，油基二羟乙基氧化胺5%, EDTA0.05%,复红0.01%,溶剂为水。
[0025]利用本反应液进行触酶反应，未发生反应时为红色澄清液体，出现红白色气泡时为阳性。[0026]应用例:
用上述实施例1~3的显色触酶反应液分别检测过氧化氢酶阳性菌(金色葡萄球菌)和过氧化氢酶阴性菌(链球菌)，实验结果见图3。检测结果表明，本发明的检测方法相对于传统的触酶方法更加方便肉眼观察结果，且实验的准确性及灵敏度高。
[0027]将本发明实施例1的显色触酶反应液置于避光材料瓶子内常温可保存12个月。
[0028]实施例2~5的显色触酶反应液置于避光材料瓶子内常温可保存18个月，保质期内检测结果无异，由此可见，本发明的显色触酶反应液稳定性高，可长期保存不变质。
[0029]以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。
【权利要求】
1.一种显色触酶反应液，其含有以下组分：过氧化氢、气泡保护剂和颜色指示剂。
2.根据权利要求1所述的反应液，其特征在于，所述气泡保护剂为油基二羟乙基氧化胺。
3.根据权利要求1所述的反应液，其特征在于，所述颜色指示剂为pH指示剂、氧化还原指示剂或有色染料。
4.根据权利要求3所述的反应液，其特征在于，所述pH指示剂包括：溴氯酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝等中的任一种； 所述氧化还原指示剂包括：亚甲基蓝、二苯胺磺酸钠中的任一种； 所述有色染料包括：结晶紫、复红中的任一种。
5.根据权利要求1~4任一项所述的反应液，其特征在于，反应液中各组分的浓度为：过氧化氢2%~10%，气泡保护剂5%~20%，颜色指示剂0.005%~0.01%，溶剂为水。
6.根据权利要求1所述的显色触酶反应液，其特征在于，所述反应液中还含有焦磷酸钠和EDTA。
7.根据权利要求6所述的反应液，其特征在于，反应液中各组分的浓度为：过氧化氢2%~10%,焦磷酸钠0.001%~0.01%,气泡保护剂5%~20%, EDTA0. 001%~0.05%,颜色指示剂0.005%~0.01%，溶剂为水。
8.—种显色触酶反应试剂盒，其含有权利要求1~7任一项所述的显色触酶反应液。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于显色触酶反应液装于黑色滴瓶或其它避光材料的瓶子中。
10.一种产过氧化氢酶细菌的检测方法，包括将权利要求1~7任一项的显色触酶反应液滴加于待检样品上，根据是否出现气泡和颜色变化来判断样品中是否含有产过氧化氢酶的细菌。
【文档编号】C12Q1/04GK103602717SQ201310576566
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月18日 优先权日:2013年11月18日
【发明者】林华青, 蔡桂林 申请人:珠海迪尔生物工程有限公司