青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法
【专利摘要】青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，具体为：取青稞面粉溶解于缓冲溶液，避光酶解，酶解液趁热离心，沉淀为青稞中不可溶性膳食纤维-多酚复合物(IDF-PC)，收集后低温冻结，真空冷冻干燥，-20℃储藏；离心后的上清液，加入乙醇，静置自然冷却至室温，低温沉淀过夜，取下层浑浊部分离心，沉淀为青稞中可溶性膳食纤维-多酚复合物(SDF-PC)，收集后低温冻结，真空冷冻干燥，-20℃储藏。本研究利用酶重量法对青稞中可溶性膳食纤维-多酚复合物、不可溶性膳食纤维-多酚复合物进行分离制备，为青稞的开发利用提供科学依据，也为青稞的精深加工提供新思路，促进青稞产业的发展。
【专利说明】青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品加工领域，具体涉及青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法。
【背景技术】
[0002]全谷物食品可有效预防代谢综合症，预防和降低心血管疾病、II型糖尿病、肥胖和某些癌症的发病率。谷物食品作为世界上主要的食物来源，提供了 50%人体摄入的膳食纤维。研究发现，摄入膳食纤维能够调节人体饥饿状态、血糖生成指数、脂肪代谢和炎症，起到益生元作用，可有效预防慢性心脏病和消化系统疾病。许多研究者对于谷物中的多糖组分进行了研究，但是至今未阐明其有益健康的生化机制。因谷物多糖组分包含了大量的多酚化合物，95%的谷物多酚和细胞壁多糖紧密结合，研究者提出了“膳食纤维抗氧化剂(dietary fibre-ant1xidants)，，和“膳食纤维-多酌.复合物(dietary fibre-phenoliccompounds, DF-PC) ”的概念，认为谷物膳食纤维是体内传送多酹化合物的天然功能成分。谷物中膳食纤维包括可溶性膳食纤维(soluble dietary fibre, SDF)和不可溶膳食纤维(insoluble dietary fibre, IDF)，二者在谷物中的例与谷物种类关系很大；谷物中的酚酸主要是羟基肉桂酸，其中阿魏酸含量最为丰富，被视为谷物抗氧化活性最主要的多酚化合物。膳食纤维和多酚化合物通过酯键共价结合在一起，形成DF-PC复合物。一般认为，谷物中SDF/IDF比例越高，DF-PC复合物抗氧化效果越好。
[0003]青稞作为云南省迪庆藏族自治州的传统种植作物，含有丰富的膳食纤维、多酚化合物和微量元素等功能成分，具有较好的开发价值。但是目前青稞深加工程度不深，限制了农民增收，制约了青稞产业的发展。本技术通过研究青稞DF-PC复合物的制备方法，并通过研究其中多酚化合物、类黄酮含量以及其抗氧化活性，为阐明膳食纤维和多酚相互作用对多酚生物利用度的作用机制，提高多酚化合物的生物有效性和生物利用度，持续发挥抗氧化作用，预防疾病，维持机体健康提供科学依据，同时为青稞开发利用提供思路，促进云南省青稞产业的发展。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供青稞膳食纤维-多酚复合物制备方法，本法采用酶重量法，制备纯度高、性能好、成本低的青稞膳食纤维-多酚复合物制备方法。
[0005]本发明通过以下技术方案实现:
[0006]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0007]1)将青稞除杂后粉碎，过50目筛，筛下青稞面粉备用；
[0008]2)称取筛下青稞面粉，用pH6.25、浓度0.05mol/L的MES-TRIS缓冲溶液溶解青稞面粉，磁力搅拌直至样品完全分散在缓冲溶液中；
[0009]3)避光加入耐高温α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高温α -淀粉酶)溶液，置于95°C恒温振荡水浴锅中持续搅拌，当溶液的温度升高至95°C开始计时，反应30min ；
[0010]4)反应完成后，待溶液冷却至45°C，调节溶液pH:用NaOH溶液调节pH至10.5，在溶液中加入碱性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加碱性蛋白酶)溶液，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当溶液温度达45°C时开始计时，持续搅拌,反应30min ；
[0011]5)反应结束后，调节溶液pH:用HC1溶液调节pH至4.25，往溶液中边搅拌边加入糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)，持续搅拌，当温度达61°C时开始计时，反应30min ；
[0012]6)将酶解液趁热于4000r/min离心15min，沉淀为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18 °C避光储存；
[0013]7)上清液中加入4倍体积的60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0_4°C冰箱中沉淀12小时以上；
[0014]8)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存。
[0015]本发明制备方法步骤(3)耐高温α-淀粉酶酶解时，加入的耐高温α-淀粉酶通过现用现称取耐高温α -淀粉酶，用pH = 6.25、浓度0.05mol/L的MES-TRIS缓冲溶液溶解制得。
[0016]本发明制备方法步骤(4)冷却时，直接将烧杯放入低温水中进行冷却。
[0017]本发明制备方法步骤(5)碱性蛋白酶酶解时，加入的碱性蛋白酶溶液通过现用现称取的碱性蛋白酶用pH = 10.5、浓度0.05mol/L的MES-TRIS缓冲溶液溶解制得。
[0018]本发明制备方法步骤(8)保证乙醇溶液温度为60°C，当温度达不到时，沉淀不完全，且上清液较浑浊，待温度冷却至室温再放入冰箱。
[0019]本发明的有益效果为:本发明技术用酶重量法对青稞中可溶性膳食纤维-多酚复合物、不可溶性膳食纤维-多酚复合物进行分离制备，为青稞的开发利用提供科学依据，也为青稞的精深加工提供新思路，促进青稞产业的发展。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0021]以下实施例中所使用的膳食纤维原料为青稞，其他含膳食纤维的原料，如大麦、小麦等也都可以通过本发明的方法制备。
[0022]实施例1
[0023]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0024]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0025]2)称筛下物青稞面粉 10g，置于 500mL 中，加入 400mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液，水浴加热至95°C，加入330u/mL耐高温α -淀粉酶5mL ；
[0026]3)加入耐高温α -淀粉酶后温度升高至95°C开始计时，反应30min，并不断搅拌；
[0027]4)将烧杯取出，冷却至45°C ;
[0028]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)缓冲溶液配置的7500U/mL碱性蛋白酶溶液lmL，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45°C时开始计时,持续搅拌反应30min ；
[0029]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)30 μ L，持续搅拌，当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，反应30min ；
[0030]7)将酶解液置于布氏漏斗，滤纸为快速定量滤纸(9cm)，0.08MP抽滤，过滤速度较慢，无法进行大量提取，将酶解液于4000r/min条件下离心15min,结果可充分分离不溶性膳食纤维-多酚复合物(IDF-PC)；
[0031]8)收集沉淀IDF-PC，后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，_18°C避光储存；
[0032]9)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的95%乙醇溶液，静置，于0 — 4°C冰箱中沉淀12小时以上；
[0033]10)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存。
[0034]实施例2
[0035]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0036]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0037]2)称筛下物青稞面粉5g，置于500mL中，加入200mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)缓冲溶液；
[0038]3)水浴加热至95°C，加入330u/mL的耐高温α -淀粉酶2.5mL,当烧杯中温度达95°C时开始计时，反应30min,并不断搅拌；
[0039]4)将烧杯取出，冷却至45 °C ;
[0040]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)缓冲溶液配置的7500U/mL碱性蛋白酶溶液0.5mL,置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45 °C时开始计时,持续搅拌,反应30min ；
[0041]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)15 μ L，持续搅拌，当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，反应30min ；
[0042]7)将酶解液置于4000r/min离心15min，沉淀部分为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18 °C避光储存；
[0043]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的预热60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀过夜；
[0044]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀部分为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存。
[0045]实施例3
[0046]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0047]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0048]2)称筛下物青稞面粉100g，置于5L塑料桶中，加入2L MES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液；
[0049]3)水浴加热至95°C，加入330u/mL的耐高温α -淀粉酶50mL，当烧杯中温度达95°C时开始计时,并不断搅拌,反应30min ；
[0050]4)将塑料桶取出，冷水浴冷却至45°C ；
[0051]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)缓冲溶液配置的7500U/mL碱性蛋白酶溶液10mL，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45 °C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0052]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至
4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)600 μ L，当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0053]7)将酶解液趁热置于4000r/min离心15min，沉淀为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18 °C避光储存；
[0054]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的预热到60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀过夜；
[0055]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存；
[0056]实施例4
[0057]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0058]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0059]2)称筛下物青稞面粉300g，置于5L塑料桶中，加入4.5LMES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液；
[0060]3)水浴加热至 95°C，加入用 150mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的耐高温α-淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高温α-淀粉酶)12.375g，当烧杯中温度达95°C时开始计时,并不断搅拌,反应30min ；
[0061 ] 4)将塑料桶取出，冷水浴冷却至45 °C ;
[0062]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入用30mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的碱性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加碱性蛋白酶)1.875g，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0063]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至
4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)1.8mL,当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0064]7)将酶解液趁热置于4000r/min离心15min，沉淀为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18 °C避光储存；
[0065]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的预热到60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀过夜；
[0066]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存。
[0067]实施例5
[0068]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0069]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0070]2)称筛下物青稞面粉500g，置于塑料桶中，加入7.5L MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液；
[0071]3)水浴加热至 95°C，加入用 250mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的耐高温α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高温α -淀粉酶)20.625g，当烧杯中温度达95°C时开始计时,并不断搅拌,反应30min ；
[0072]4)将塑料桶取出，冷水浴冷却至45 °C ;
[0073]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入用50mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的碱性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加碱性蛋白酶)3.125g，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0074]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至
4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)3mL，当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0075]7)将酶解液趁热置于4000r/min离心15min，沉淀为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，得到IDF-PC133.75g，得率为26.75%，装入自封袋中，_18°C避光储存；
[0076]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的预热到60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀过夜；
[0077]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，得到SDF-PC35.97g，得率为7.20%，装入自封袋中，-18 °C避光储存。
[0078]实施例6
[0079]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0080]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0081]2)称筛下物青稞面粉250g，置于塑料桶中，加入3.75L MES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液；
[0082]3)水浴加热至 95°C，加入用 125mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的耐高温α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高温α -淀粉酶)10.3125g，当烧杯中温度达95 °C时开始计时，并不断搅拌，反应30min ；
[0083]4)将塑料桶取出，冷水浴冷却至45 °C ;
[0084]5)调节溶液pH:用6mol/L NaOH调节烧杯中的溶液pH至10.5，加入用25mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的碱性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加碱性蛋白酶)1.5625g，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当烧杯中温度达45°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0085]6)反应结束后，将烧杯至于61°C水浴中，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至
4.25，在烧杯中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)1.5mL,当烧杯中的溶液内温度达61°C时开始计时，持续搅拌，反应30min ；
[0086]7)将酶解液趁热置于4000r/min离心15min，沉淀为IDF-PC，收集后于_18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，得到IDF-PC51.41g，得率为20.56%，装入自封袋中，_18°C避光储存；
[0087]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的预热到60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀过夜；
[0088]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑池部分于4000r/min离心15min,所得沉淀为SDF-PC，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，得到SDF-PC24.95g，得率为9.98%，装入自封袋中，-18 °C避光储存。
[0089]实施例7
[0090]青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，包括以下步骤:
[0091]1)将云黑青稞除杂后粉碎，过50目筛，取筛下物备用；
[0092]2)称筛下物青稞面粉100g，置于28cm电磁炉适用平底蒸锅中，在平底蒸锅中加入1500mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液，磁力搅拌直至样品完全分散在缓冲溶液中。
[0093]3)反应结束后，加入用50mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)缓冲溶液溶解的耐高温α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高温α -淀粉酶)4.1498g，置于沸腾的40cm电磁炉适用平底汤锅中持续搅拌，当28cm电磁炉适用平底蒸锅内的温度升高至95°C开始计时，反应30min ；
[0094]4)将28cm电磁炉适用平底蒸锅取出，在冷水浴中冷却至45 °C ；
[0095]5)调节溶液pH:用2mol/L NaOH调节28cm电磁炉适用平底蒸锅中的溶液pH至10.5，加入用10mL MES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)缓冲溶液溶解的碱性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加碱性蛋白酶)0.3882g，置于45°C的恒温振荡水浴锅中，当28cm电磁炉适用平底蒸锅中温度达45°C时开始计时,持续振摇反应30min ；
[0096]6)反应结束后，调节溶液pH:用6mol/L HC1调节pH至4.25，在28cm电磁炉适用平底蒸锅中的溶液中边搅拌边加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)600 μ L，持续振摇，当28cm电磁炉适用平底蒸锅中的溶液内温度达61°C时开始计时，反应 30min ；
[0097]7)将酶解液趁热于^OOiymin离心15min，沉淀为IDF-PC，IDF-PC重量为152.9467g，得率为1.53g/g (每克青稞面粉中可得到1.53g IDF-PC)，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18 °C避光储存；
[0098]8)上清液转移到另一烧杯中，加入等于上清4倍体积的60°C 95%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-4°C冰箱中沉淀12小时以上；
[0099]9)沉淀后轻轻倒出上清，取下层浑浊部分于4000r/min离心15min，所得沉淀为SDF-PC，SDF重量为34.5342g，得率为0.34g/g (每克青稞面粉中可得到0.34gSDF_PC)，收集后于-18°C下冻结，真空冷冻干燥4d，装入自封袋中，-18°C避光储存。
【权利要求】
1.青稞膳食纤维-多酚复合物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)将青稞除杂后粉碎，过50目筛，筛下青稞面粉备用； 2)称取筛下青稞面粉，用腿3-11？13缓冲溶液溶解青稞面粉，磁力搅拌直至样品完全分散在缓冲溶液中； 3)避光加入耐高温淀粉酶溶液，置于951恒温振荡水浴锅中持续搅拌，当溶液的温度升高至951开始计时，反应30111111 ； 4)反应完成后，待溶液冷却至451，调节溶液邱:用版10?溶液调节邱至10.5，在溶液中加入碱性蛋白酶溶液，置于451的恒温振荡水浴锅中，当溶液温度达451时开始计时，持续搅拌，反应30-11 ； 5)反应结束后，调节溶液邱:用此1溶液调节邱至4.25，往溶液中边搅拌边加入糖化酶，持续搅拌，当温度达611时开始计时，反应30111111 ； 6)将酶解液趁热于400017111111离心15111111，沉淀为收集后于-181下冻结，真空冷冻干燥4(1，装入自封袋中，-181避光储存； 7)上清液中加入4倍体积的60195%乙醇溶液，静置，自然冷却至室温，于0-41冰箱中沉淀12小时以上； 8)沉淀后轻轻倒出上清液，取下层浑浊部分于400017^111离心15-11，所得沉淀为
收集后于-181下冻结，真空冷冻干燥4山装入自封袋中，-181避光储存。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(3)中耐高温0-淀粉酶酶解时，力口入的耐高温0 -淀粉酶通过现用现称取耐高温0 -淀粉酶用邱为6.25、浓度0.05001/1的
缓冲溶液溶解制得，且每克青稞粉添加1651耐高温0 -淀粉酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(4)中冷却时，直接将溶液放入低温水中进行冷却。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(4)碱性蛋白酶酶解时，加入的碱性蛋白酶溶液通过现用现称取的碱性蛋白酶用邱=10.5、浓度0.05001/1的123-1^13缓冲溶液溶解制得，且每克青稞粉添加7501碱性蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(5)添加糖化酶按每克青稞粉添加600口。
【文档编号】A23L1/29GK104382020SQ201410604115
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】李永强, 杨士花, 吴国星, 高熹, 冯励, 高斌, 李海平, 张建平, 赵存朝, 黄勇桦, 冯志祥 申请人:云南农业大学