用于治疗补体-相关失调的适体治疗的制作方法
【专利摘要】本发明提供了核酸治疗及在补体-相关失调的治疗中使用这些核酸治疗的方法。
【专利说明】用于治疗补体-相关失调的适体治疗 本申请是2006年2月14日递交的申请号为201310253256. 9,发明名称为"用于治疗 补体-相关失调的适体治疗"的分案申请。 发明领域 本发明通常涉及核酸的领域并且尤其涉及能够结合补体系统的C5蛋白的适体，用于 补体-相关的心脏，炎症，和自身免疫失调，缺血再灌注损伤和/或其它C5介导的补体活性 相关的疾病或失调的治疗。本发明进一步涉及能够结合C5补体系统蛋白的适体给药的材 料和方法。 技术背景 适体是通过经典的Watson-Crick碱基对之外作用的具有与分子特异结合亲合力的核 酸分子。 适体，正如通过噬菌体显示或单克隆抗体（"Mabs"）产生的多肽，可以特异的结合选择 靶标和调控靶标的活性，如，适体通过结合可以阻止其靶标的功能。由源于任意序列寡核苷 酸集的体外选择方法制备，已经制备超过100种蛋白的适体，包括生长因子，转录因子，酶， 免疫球蛋白，和受体。典型的适体是10_15kDa大小（30-45核酸），通过亚-纳摩尔亲合力结 合其靶标，并且区分密切相关的靶标（例如，适体将典型的不结合来源于相同基因家族的 其它蛋白）。一系列结构研究已经说明了适体能够使用在抗体-抗原复合物中产生亲合力 和特异性的相同种类的结合作用（例如，氢键结合，静电相互作用，疏水作用，空间排阻）。 适体具有许多的希望的用于治疗和诊断的特征，包括高特异性和亲合力，生物活性，和 良好的药代动力学特征。此外，他们提供优于抗体和其它蛋白生物制剂的特异性竞争优势， 例如： 1) 速度和控制通过体外方法制备的适体，允许快速制备初始引导序列，包括治疗引导 序列。体外选择允许适体的特异性和亲合力被严格地控制并允许制备引导序列，包括针对 毒性和非-免疫原靶标的引导序列。 2) 毒件和免疫原件已经证明适体作为一种类型具有极少或无毒件或免疫原件。在用 高剂量的适体（每天l〇mg/kg，连续90天）慢性给药的大鼠或土拨鼠中，通过任何临床，细 胞，或生化测定没有发现毒性。尽管通过自身抗体的免疫反应，许多单克隆抗体的功效能被 严格受限，但是引发针对适体的抗体是十分困难的，最可能是因为适体不能被由MHC介导 的T-细胞表达并且通常免疫反应不识别核酸片断。 3) 给药尽管当前大多数认可抗体治疗是通过静脉注射给药(典型地，大于2-4小 时），但是适体能通过皮下注射给药（在猴体试验中通过皮下注射的适体生物活性> 80% (Tucker et al.，J. Chromatography Β·732:203_212，1999))。这种不同主要归因于较低溶 解性及由此大多数治疗Mbs需要的大体积。具有良好的溶解性（> 150mg/mL)和较低分 子量（适体；10_15kDa;抗体：150kDa)，周剂量适体可以以小于0.5mL的体积注射。此外，小 尺寸的适体被允许渗透进入构象缢痕区域，而抗体或抗体片断不被允许，表明了适体-基 础治疗或预防的另一优势。 4) 可量测件和成本治疗适体是化学合成的从而ιΗ如需要，能容易地被量化以适合牛产 的要求。但是在量化生产中的困难目前限制了某些生物制剂的有效性并且大量蛋白产品制 备的资金成本是巨大的，单一的大量寡核苷酸合成器每年能生产IOOkg以上且需要相关合 适的起动资金。目前在千克数量上适体合成的成本大约是$500/g，比得上高度优化的抗体 的成本。在未来5年中，工艺发展上的继续改善是希望将适体合成的成本降低至< $100/g。 5) 稳定性治疗适体具化学稳定性。本质上在暴露如加热和变性剂的因素下之后他们适 合恢复活性并且以冻干粉的形式在室温被储存较长时期（>1年）。 补体系统 补体系统包括在级联调控系统中攻击病原菌（如，细菌）细胞外形式的起作用的一组 至少20种浆和膜蛋白。补体系统包括两种不同的酶激活级联，经典的和可选择的路径（图 1)，和膜攻击路径的非-酶路径。 第一种酶激活级联，即经典路径，包括一些组合物，Cl，C4, C2, C3和C5(以路径中的次 序排列）。通过免疫和非-免疫催化剂，随着第一补体组合物（Cl)的结合和激活，补体系统 的经典路径开始出现。Cl包括Clq，Clr和Cls组合物的钙-依赖性复合物，且通过Clq组 合物的结合被激活。Clq包括六个相同的亚单位并且每一亚单位包括三条链（A，B和C链）。 每一链具有一个球状的头部区域与胶原质状尾部连接。抗原-抗体复合物引发的Clq的结 合和激活发生在Clq的头部区域。大量非抗体Clq催化剂，包括蛋白，脂质和核酸，在胶原 质状的茎部区域的不同位点结合和激活Clq。Clqrs复合物随即催化补体组合物C4和C2 的激活，形成作为C3转化酶的C4bC2a复合物。 第二条酶联激活，即可选择的路径，对补体系统的激活和扩大是一条快速的，抗体-依 赖的路径。可选择路径包括一些组合物，C3,因子B，和因子D (在路径的中以次序排列）。 当C3b，C3的一种蛋白裂解形式，被绑定到一种催化表面试剂如细菌时，发生可选择路径的 激活。然后因子B被绑定到C3b，且由因子D裂解产生活性酶，Ba。然后酶Ba裂解更多C3 产生更多C3b，在催化表面产生C3b-Ba复合物的广泛的沉积。 因此，经典的和可选择的补体路径都产生分裂因子C3为C3a和C3b的C3转化酶。与 此同时，两种C3转化酶进一步装配成C5转化酶（C4b2a3b和C3b3Bb)。随后这些复合物分 裂补体组合物C5形成两种组合物：C5a多肽（9kDa)和C5b多肽（170kDa)。C5a多肽结合 7重跨膜G-蛋白偶联受体，其起初与白细胞相关而现在认为在各种组织，包括肝细胞和神 经细胞中表达。C5a分子是人类补体系统的主要的趋化性组合物并且能够引发各种生物反 应，包括白细胞趋化性，平滑肌收缩，胞内信号转换路径的激活，嗜中性粒细胞-内皮细胞 粘连，细胞因子和脂质调节子的释放和氧化剂的形成。 随后，较大的C5b片断结合补体级联的较大组合物，C6，C7，C8和C9以形成C5B-9膜攻 击复合物（"MAC"）。C5b-9MAC能直接溶解红细胞，并且在更大数量上，它是白细胞溶解酶 并且破坏如肌肉，上皮和内皮细胞等组织。在亚溶破数量上，MAC能刺激粘附分子的上调作 用，并增加细胞内钙浓度和细胞因子释放。此外，C5b-9MAC能刺激细胞，如内皮细胞和血小 板，而不引发细胞裂解。C5a和C5b-9MAC的非-裂解作用有时非常相似。 尽管补体系统在维持健康中起了重要的角色，但是它也具有引发疾病的潜能。例如，补 体系统的副作用涉及心脏冠状动脉旁路术（"CABG")，众多肾，风湿性的，神经的，皮肤病学 的，血液系统的，血管/肺部，敏感症，感染和生物适应性/休克的疾病和/或状况，和糖尿 病视网膜病变。补体系统不是疾病的必要唯一原因，而是引发发病机理的多因子之一。 在Fitch et al.，Circ. 100 :2499-506(1999)中，测试了心脏冠状动脉旁路术体外循环 ("CPB"）病人的抗-C5单链抗体片断Pexeliz μ Mab的作用。在CPB之前，病人在十分钟之 内分别以〇· 5mg/kg，I. Omg/kg和2. Omg/kg施用单-丸剂量的Pexeliz μ Mab。在给药前，给 药5分钟后，28°C 5分钟后，在复温开始后，在37°C下5分钟后，和在CPB后7天，提取血液 样本并测试补体的活性。药效分析表明，补体溶血活性的抑制作用具有重要的剂量-依赖 性，在2mg/kg的剂量下大于14小时，并且促炎症补体副产品（sC5b-9)的产生以剂量-依 赖性形式有效地被抑制。如上所述，但是，抗体治疗具有一定的限制性。 因此，在补体-相关疾病治疗的治疗和诊断中，使用补体系统的新型抑制剂是有益的。 【专利附图】
【附图说明】 图1是描述补体系统的经典和可选择路径的图表。 图2是来源于随机序列寡核苷酸集落的体外适体选择（SELEXtm)方法的示意性说明。 图3A是描述抗-C5适体（序列号：1)的核酸序列和二级结构的图表，下划线残基可以 是2' -H嘧啶残基或2' -氟嘧啶残基，加框的残基可以是2' -氟嘧啶残基或2' -OMe嘧啶 残基，由箭头（一）表示的残基代表包扩2' -氟修饰的残基。 图3B是描述AR330抗-C5适体（序列号：2)的核酸序列和二级结构的图表，圆圈残基 是2' -H残基，嘧啶残基是2' -氟替代，大多数嘌呤残基是2' -OMe替代，此外三个2' -OH 嘌呤残基突出显示。 图3C是描述述ARC186抗-C5适体（序列号：4)的核酸序列和二级结构的图表，所有 21个嘧啶残基有2' -氟修饰且大多数嘌呤（14个残基）有2' -OMe修饰，此外，三个2' -OH 嘌呤残基突出显示。 图4是40kD的分支PEG(1，3-双（mPEG-[20kDa])_丙基-2(4' - 丁酰胺）示意图。 图5是适体5'末端带有40kD分支PEG(1，3-双（mPEG-[20kDa])_丙基-2(4'- 丁酰 胺）的示意图。 图6是描述合成高分子量PEG-核酸共轭物的各种方法的示意图。 图7A是一张比较了 PEG化抗-C5适体（ARC657 (序列号：61)，ARC658 (序列号：62)和 ARC187(序列号：5))与非-PEG化抗-C5适体（ARC186(序列号：4))的溶血抑制的剂量依 赖性的图表；图7B是一张根据图7A的描述，用于溶血分析的适体IC 5tl值的表格；图7C是 一张比较了 PEG化抗-C5适体（ARC187(序列号：5)，ARC1537(序列号：65)和ARC1730(序 列号：66))和ARC1905(序列号：67)的溶血抑制的剂量依赖性的图表；图7D是一张根据图 7C的描述，用于溶血分析的适体IC 5tl值的表格。 图8是食蟹猴血清补体与人血清补体的，抗-C5适体，ARC658 (序列号：62)的溶血抑制 百分数的图表。 图9是描述经15分钟孵育后，在37°C和室温（23°C )下，ARC186(序列号：4)与纯化的 C5蛋白结合的图表。 图10是描述经4小时孵育后，在37°C和室温（23°C )下，ARC186(序列号：4)与纯化的 C5蛋白结合的另一图表。 图11是显示在23°C下，C5 · ARC186复合物溶解时间的图表。 图12是显示在23°C下，C5 · ARC186复合物形成平衡时间的图表。 图13是描述在补体级联上游和下游，ARC186(序列号：4)与C5蛋白或蛋白补体结合的 图表。 图14是描述在未标记的竞争者ARC186(序列号：4)，ARC657(序列号：61)，ARC658(序 列号：62)或ARC187(序列号：5)存在时，放射性标记的ARC186(序列号：4)与C5结合的百 分数。 图15是描述在不同浓度的ARC186(序列号：4)适体存在时，在25°C和37°C下，孵育5 小时后，在血样本中产生C5b补体蛋白数量的图表。 图16是描述在未稀释的人血清，柠檬酸化的人全血或食蟹猴血清中的酵母聚糖存在 时，ARC187的（序列号：5)补体抑制百分数图表。 图17是显不在实施例ID描述的管环模型中，ARC658(序列号：62)对补体活性（C5a) 的完全抑制。 图18是描述C5选择集落Round 10分裂常数的图表。通过将合适的数据填入等式：RNA 片断结合=振幅XKd/(Kd+[C5])评估分裂常数（Kds)。"ARC520"（序列号：70)指天然的未 选择的dRmY集落且" + "表示竞争者的存在（0· lmg/ml tRNA，0. lmg/ml鲑鱼精液DNA)。 图19是描述C5克隆的分裂常数曲线的图表。通过将合适的数据填入等式：RNA片断 结合=振幅XKd/(Kd+[C5])评估分裂常数（Kds)。 图20是描述对比ARC186(序列号：4)，不同浓度的抗-C5适体克隆ARC913(序列号： 75)对溶血活性抑制作用的IC5tl曲线的图表。 图21是描述ARC187(序列号：5)结构的不意图。 图22是描述ARC1905序列号：67)结构的示意图。 图23是描述第一个分离灌注心脏研究的试验设计的图表。 图24是暴露于人血浆（A)的分离心脏左心室（LV)心室内压力轨迹与暴露于对照适体 溶液⑶的分离心脏LVP压力轨迹的比较图。 图25是暴露于等摩尔，IOX和50X适体/C5溶液（其中假设C5在正常，未稀释的人 类血浆中的浓度大约为500nM)的分离心脏左心室（LV)心室内压力轨迹比较图。 图26是暴露于人血浆和各种血浆/适体溶液的分离的小鼠心脏间每分钟心跳（bpm) 改变比较图。 图27是暴露于包括0-1 X摩尔比例ARC186 (序列号：4)(衰竭心脏），或10-50 X摩尔 比例（C5适体保护的心脏）的人血浆之前和之后的分离小鼠心脏重量改变比较图。 图28是灌注分离小鼠心脏后，含有不同适体浓度的人血浆中相关C5a产生的比较图。 相对C5a浓度以吸收单位（Abs)作图，其中高读数反应存在高C5a水平。 图29是灌注分离小鼠心脏后，含有不同适体浓度的人血浆中相关可溶性C5b-9产生的 比较图。 图30是显示在小鼠心脏流出物中ARC186(序列号：4)对C3分裂作用的图表。 图31是显示分离灌注小鼠心脏研究中免疫组化染色结果表。 图32是显示人类或灵长类血清中，保护心脏免受C5b-介导损害所需的ARC658 (序列 号：62)的摩尔比例表。 图33是显示大鼠和食蟹猴血浆中作为孵育时间函数的全长ARC186剩余百分数的对 数-线性图。 图34是显示实施例5描述的Sprague-Dawley大鼠中药代动力学研究试验设计的表。 图35显不Sprague-Dawley大鼠中相对于时间的ARC657 (序列号：61), ARC658 (序列 号：62)或ARC187(序列号：5)的平均血浆浓度表。 图36是描述在大鼠中静脉施用适体后ARC657 (序列号：61)，ARC658 (序列号：62)或 ARC187(序列号：5)的平均血浆浓度图。 图37是显示图35和36描述的浓度相对于时间数据的非室分析表。 图38A是显示小鼠中ARC187(序列号：5)和ARC1905(序列号：67)药代动力学设计表； 图38B是显示⑶-1小鼠中ARC187(序列号：5)和ARC1905(序列号：67)静脉内推注给药后 的药代动力学特征；图38C是显示图38描述的浓度相对于时间数据的非室分析表。 图39是显示静脉给药后小鼠心脏中所列适体的测定表。 图40是显示实施例5E中描述的动物研究1的试验设计表。 图41是显示食蟹猴静脉推注给药后适体血浆浓度相对于时间的表。 图42是研究1中对食蟹猴静脉内施用ARC657 (序列号：61)，ARC658 (序列号：62)和 ARC187(序列号：5)后药代动力学参数罗列表。 图43(&)和43(〇)是描述对食蟹猴静脉内施用抗-05适体4此657(序列号：61)， ARC658(序列号：62)和ARC187(序列号：5)后的sC5b-9和C5a血浆浓度图；图43(b)和 43 (d)是描述sC5b-9和C5a血浆浓度相对于抗-C5适体ARC657 (序列号：61)，ARC658 (序 列号：62)和ARC187(序列号：5)浓度的图。 图44是显示实施例5F描述的研究2的试验设计图。 图45是显不对食蟹猴静脉内施用抗-C5适体ARC657 (序列号：61)，ARC658 (序列号： 62)和ARC187(序列号：5)后不同时间点的平均血浆适体浓度图。 图46是显示对食蟹猴静脉内推注适体后对浓度相对于时间数据的两室分析表。 图47是存在酵母聚糖时食蟹猴血浆中C5b-9浓度相对于ARC187(序列号：5)或 ARC658(序列号：62)浓度描述图。 图48是存在酵母聚糖时食蟹猴血浆中C5a浓度相对于ARC187(序列号：5)或 ARC658(序列号：62)浓度描述图。 图49是概述食蟹猴静脉内推注加上灌注给药期间和之后ARC187 (序列号：5) PK-H)研 究表。 图50是概述食蟹猴静脉内推注ARC187(序列号：5)后药代动力学参数表。 图51是描述食蟹猴静脉内推注加上灌注给药期间和之后ARC187(序列号：5)药代动 力学特征的计算和实际测定值图。 图52描述食蟹猴静脉内推注加上灌注给药期间和之后活性ARC187(序列号：5)血浆 剩余恒量水平图。 图53是显示CABG手术所需抗-C5适体的人类剂量预测表。 图54是通过凝血时间（PT)和活性部分凝血时间（APTT)测定ARC187(序列号：5)对 于凝结没有体外效应的显示图。 图55是ARC187 (序列号：5)对于肝素抗-凝结活性，和鱼精蛋白促凝活性体外效应的 概述表。 图56是ARC187(序列号：5)在体内不影响肝素抗凝结逆转的显示图。 图57是通过测定对酵母聚糖补体活性的抑制，肝素和鱼精蛋白不影响ARC187(序列 号：5)的抗-补体功能显示图。 图58是作为抗-C5适体ARC187(序列号：5)或ARC658(序列号：62)浓度的函数，在存 在人血清时绵羊红细胞溶血抑制百分率的显示图。 图59A是在存在人类，食蟹猴和大鼠血清时ARC1905(序列号：67)对于溶血抑制百分 数的描述图；图59B是抗-C5适体ARC1905或不结合C5的非相关适体（阴性对照）对于人 类，食蟹猴和大鼠血清的补体活性抑制平均IC 5tl值的概述表。 图60是在竞争结合试验中，作为未标记的竞争ARC1905 (序列号：67)或ARC672 (序列 号：63)(水平轴）的函数，放射标记ARC186 (序列号：4)(垂直轴）抑制IC5tl值的显示图。 图61是在竞争结合试验中，作为未标记的竞争ARC1905(序列号：67)(水平轴）的函 数，放射标记ARC186(序列号：4)(垂直轴）在37°C和25°C抑制IC5tl值的显示图。 图62是描述人类C5a(hC5a)和食蟹猴C5a(hC5a eq)标准曲线显示图。 图63是酵母聚糖-诱导的补体激活试验中测定的，ARC1905 (序列号：67)在人类和食 蟹猴血清中抑制C5活性的IC5tl, IC9tl和IC99值的概述表。 图64是酵母聚糖-诱导的补体激活试验中测定的，作为人类和食蟹猴血清中 ARC1905(序列号：67)函数的C5a产生抑制百分数的描述图。 图65是酵母聚糖-诱导的补体激活试验中测定的，ARC1905 (序列号：67)对于人类或 食蟹猴血清中C3a产生的效应描述图。 图66是补体活性管环模型中测定的，5位自愿者中ARC1905抑制补体活性的IC5tl, IC9q 和IC99平均值概述表。 图67在补体活性管环模型中，作为ARC1905, 一种抗-C5适体，或ARC127, 一种不结合 C非相关适体（阴性对照）的函数，C5a和C3a产生抑制百分数的显示图。
【发明内容】
本发明提供了治疗，预防和改善补体相关疾病的材料和方法。在某一实施方案中，提供 了包括与PEG亚基共轭的ARC186(序列号：4)核酸序列的适体。在特定的实施方案中，这种 ARC186适体/PEG共轭物与由序列号：4组成但缺乏PEG亚基的适体具有与C5补体蛋白完 全相同的结合亲合力。这里所述的完全相同的亲合力指通过印迹杂交分析测得的分裂常数 差异不超过大约2-10倍，尤其不超过2-5倍。在某一实施方案中，正如实施例IA所述，分 裂常数由竞争性印迹杂交分析测定。在某一实施方案中，聚乙二醇亚基的分子量大于10kD， 甚至有20kD，更甚至有30kD和40kD。在某一实施方案中，PEG亚基与ARC186(序列号：4) 的5'末端共轭。在某一实施方案中，通过实施例5E描述的方法测定的灵长类中，适体/PEG 共轭物两室模型的半衰期，尤其末端半衰期为至少15,尤其至少24小时，最合适地为至少 48小时。在某一实施方案中，在大鼠中，适体/PEG共轭物两室模型的半衰期，尤其末端半衰 期为至少10,尤其至少15小时。在某一实施方案中，与ARC186(序列号：4) 5'末端共轭的 PEG是40kD的PEG。在特定的实施方案中，40kD PEG是分支PEG。在某一实施方案中，分支 的40kDPEG是l，3-双（mPEG-[20kDa])-丙基-2-(4'-丁酰胺）。在另一实施方案中，分 支的40kD PEG是2,3_双（mPEG-[20kDa])_丙基-1-氨基甲酰。 在分支的40kDPEG是l，3-双（mPEG-[20kDa])-丙基-2-(4'-丁酰胺）的实施方案 中，提供的适体结构见下面所列：
【权利要求】
1. 一种适体或其盐，其中适体的核酸序列为序列号：4。
2. 根据权利要求1所述的适体/聚乙二醇（PEG)共轭物或其盐，其中所述适体/PEG共 轭物的适体指的是权利要求1所述的适体。
3. 根据权利要求1所述的适体/PEG共轭物或其盐，其中聚乙二醇基团的分子量为 10kDA、20kDA、30kDA或 40kDA。
4. 根据权利要求3所述的适体/PEG共轭物或其盐，其中聚乙二醇基团包含40kDA的分 子量，并且所述40kDA聚乙二醇基团是带有支链的。
5. 根据权利要求2所述的适体/PEG共轭物或其盐，其中所述适体/PEG共轭物的序列 为：序列号：5、序列号：61、序列号：62、序列号：64、序列号：65或者序列号：67。
6. 权利要求1所述的适体或其盐或权利要求2-5任意一项所述的适体/PEG共轭物或 其盐在制备用于治疗C5补体蛋白、C5a和/或C5b-9介导的疾病的药物中的应用。
7. 根据权利要求6所述的应用，其中所治疗的疾病是与CABG外科手术相关的心肌损 伤，与球囊血管成形术相关的心肌损伤、与再狭窄相关的心肌损伤、与CABG外科手术相关 的补体蛋白介导的并发症、与经皮冠状动脉介入治疗术相关的补体蛋白介导的并发症、阵 发性血红蛋白尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亚急性移植排斥或慢性移植排斥。
8. -种具有下述所示结构的适体/聚乙二醇（PEG)共轭物或其盐：
其中， .....表示C6烷基连接子 适体=fCmGfCfCGfCmGmGfUfCfUfCmAmGmGfCGfCfUmGmAmGfUfCfUmGmAmGfUfUfUAfCfCfU mGfCmG-3T(SEQ ID NO：4), 其中fC和fU= 2'-氟核酸，并且mG和mA= 2'-0Me核酸而所有其它的核酸是2'-0H且3T表示反向的脱氧胸腺嘧啶。
9. 根据权利要求8所述的适体/PEG共轭物或其盐，其中所述适体/PEG共轭物或其盐 具有下述所示的结构：
其中适体=f CmGf Cf CGf CmGmGf Uf Cf Uf CmAmGmGf CGf Cf UmGmAmGf Uf Cf UmGmAmGf Uf Uf UAfC fCfUmGfCmG-3T(SEQ ID NO：4) 其中fC和fU= 2'-氟核酸，并且mG和mA= 2'-0Me核酸而所有其它的核酸是2'-0H且3T表示反向的脱氧胸腺嘧啶。
10. 权利要求8或9所述的适体/PEG共轭物或其盐在制备用于治疗C5补体蛋白，C5a 和/或C5b-9介导的疾病的药物中的应用。
11. 根据权利要求10所述的应用，其中所治疗的疾病是与CABG外科手术相关的心肌损 伤，与球囊血管成形术相关的心肌损伤以及与再狭窄相关的心肌损伤、与CABG外科手术相 关的补体蛋白介导的并发症、与经皮冠状动脉介入治疗术相关的并发症、阵发性血红蛋白 尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亚急性移植排斥或慢性移植排斥。
12. -种适体或其盐，其中，所述适体包括序列号：75、76、95或者96的核酸序列。
13. 根据权利要求12所述的适体或其盐，其中，所述适体在糖位点、磷酸位点或者碱基 位点包括一种化学取代物。
14. 根据权利要求12所述的适体或其盐，其中，所述适体包括修饰的核苷。
15. 根据权利要求12所述的适体或其盐，其中所述适体进一步包括3'封端。
16. 根据权利要求12所述的适体或其盐，其中，所述适体与一种高分子量部分共轭。
17. 根据权利要求12所述的适体或其盐，其中，所述高分子量部分是聚乙二醇基团。
18. 根据权利要求17所述的适体或其盐，其中聚乙二醇基团的大小是至少10、20、30、 40、50、60 或80KD。
19. 根据权利要求17所述的适体或其盐，其中，所述聚乙二醇基团是线性的。
20. 根据权利要求17所述的适体或其盐，其中，所述聚乙二醇基团是带有支链的。
21. -种组合物，包括权利要求12-20中任意一项所述的适体或其盐、以及一种药学上 可接受的载体或者稀释剂。
22. 权利要求12-20中任意一项所述的适体或其盐在制备用于治疗C5补体蛋白、C5a 和/或C5b-9-介导的失调的药物中的应用。
23. 根据权利要求22所述的应用，其中治疗的疾病是与CABG外科手术相关的心肌损 伤，与球囊血管成形术相关的心肌损伤、与再狭窄相关的心肌损伤、与CABG外科手术相关 的补体蛋白介导的并发症、与经皮冠状动脉介入治疗术相关的补体蛋白介导的并发症、阵 发性血红蛋白尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亚急性移植排斥或慢性移植排斥。
【文档编号】C12N15/115GK104404046SQ201410685384
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2006年2月14日 优先权日:2005年2月14日
【发明者】克劳德·本尼蒂特, 大卫·爱泼斯坦, 查尔斯·威尔逊, 迪拉尔·格拉特, 杰弗里·库尔兹, 马克斯·库尔兹, 托马斯·格瑞恩·卡尤利, 詹姆斯·罗特曼 申请人:阿切埃米克斯股份有限公司