一种多功能试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种多功能试剂盒。该试剂盒包括盒盖、盒体、衬垫、装有QPCR用的试剂的容器、装有siRNA转染用的试剂的容器、装有细胞裂解用的试剂的容器或试剂瓶。本实用新型结构简单、设计合理，使用方便、不易受污染。
【专利说明】一种多功能试剂盒
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于生物【技术领域】，涉及一种多功能试剂盒，该试剂盒中含有细胞转 染、细胞裂解、QPCR实验用的试剂。
【背景技术】
[0002] hnRNPs是一种主要存在于细胞核内的具有调节前体RNA剪切、拼接、转录的过 程的核糖核蛋白，广泛存在于各种组织细胞内。hnRNPA2/Bl是hnRNPs家族的主要成员， hnRNPA2/Bl能与单链端粒酶重复序列特异性结合，起到保护端粒酶防止核酸酶使其降解， 并活化端粒酶的作用。
[0003] AXL 是一种受体酪氨酸激酶 receptor tyrosine kinases (RTKs)，AXL 与其他两种 RTKs :Tyr〇3和Mer共同称作TAM酪氨酸受体亚家族，研宄证明TAM的活化及信号转导在细 胞的诸多生物学行为方面起作用，包括细胞存活、增殖、迀移、粘附等方面。有研宄显示在多 种肿瘤中存在AXL的高表达，包括急性白血病、乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌及前列腺癌。
[0004] RNA干扰（SiRNA)是机体内广泛存在的一种双链RNA介导的序列特异性基因沉默 现象[Fire A.，et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.Nature 1998;391:806-811]，因其具有沉默效率高、 特异性强以及操作简便等优于传统基因敲除手段的优点而得到迅速发展，现成为生命科 学领域中重要的研宄工具[Arziman Z.，et al.E_RNAi:a web application to design optimized RNAi constructs. Nucleic Acids Res2005;33:W582_W588]。siRNA 与蛋白质 结合形成RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC)。该复合物能够 结合到同源的mRNA上并诱导其降解。
[0005] Y. He在其2009年的研宄中通过高通量基因芯片筛查技术检测到在Colol6鳞 癌细胞系中通过RNA干扰技术人为降低hnRNPA2/Bl的表达，引起下游123个目标基因 的差异表达，其中就包括 AXL[He Y，et al·，Downstream targets of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2 mediate cell proliferation, Molecular carcinogenes is，2009, 48 (2) : 167-179]，初步提示我们二者存在相互作用的可能性。但关于二者相关性 更深入的研宄目前未见报道。
[0006] 为了研宄肺癌细胞中hnRNPA2/Bl基因与AXL基因、癌症细胞增殖和生长的关系， 申请人:在肺癌细胞中干扰hnRNPA2/Bl基因的表达，检测其对AXL基因表达的影响以及检测 其对癌症细胞增殖和生长的影响。在研宄的过程中需要进行siRNA转染、细胞裂解、RNA提 取、QPCR等实验，因此需要使用大量的试剂，每一实验步骤中使用的试剂分散放置给操作人 员带来诸多不便，如需要大量的时间寻找上述试剂，因此将上述试剂分类放置在同一个地 方能够节省操作人员的不少时间，并且方便日后进行同一实验。
【发明内容】
[0007] 为了解决现有技术的不足，本实用新型的目的在于提供一种多功能试剂盒。所述 试剂盒中含有细胞转染、细胞裂解、QPCR实验用的试剂，方便实验人员进行连续实验，节省 寻找试剂的时间。本实用新型结构简单、设计合理，使用方便、不易受污染。
[0008] 为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：一种多功能试剂盒，所述试剂 盒包括盒盖1、盒体2、衬垫3、挡板4、装有5XPrimeScript RT Master Mix的容器5、装有 hnRNPA2/Bl基因 QPCR上游引物的容器6和下游引物的容器7、装有AXL基因 QPCR上游引 物的容器8和下游引物的容器9、装有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器10和下游引物的容 器11、装有SYBR染料的容器12、装有针对hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13、装有阴性对 照siRNA的容器14、装有Lipofcctaminc? 2000的容器15、装有PMSF的容器16、装有RNAiso Plus的容器17、装有RIPA裂解液的试剂瓶18 ;所述衬垫3放置于所述盒体2内，所述衬垫 3上设有容器孔31和凹槽32 ;2个所述挡板4将3个所述衬垫3隔开并固定于所述盒体2 上，最左侧所述衬垫3上只设有所述容器孔31，中间所述衬垫3上只设有所述容器孔31，最 右侧衬垫3上设有所述凹槽32和所述容器孔31 ;所述容器孔31的大小与各容器的大小相 匹配；所述凹槽32的大小与所述试剂瓶18的大小相匹配；所述装有RIPA裂解液的试剂瓶 18和所述装有PMSF的容器16及所述装有RNAiso Plus的容器17放置于最右侧所述衬垫 3上，装有针对hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13和装有阴性对照siRNA的容器14以及 装有Lipoil'clamine? 2000的容器15放置于中间所述衬垫3上，其他容器放置于最左侧所述 衬垫3上。
[0009] 优选地，所述容器是1. 5ml的EP管。
[0010] 优选地，所述容器孔31是贯穿衬垫3的。更优选地，所述容器孔31是上端开口、 下端封闭的。
[0011] 优选地，所述容器孔31在衬垫上平行排列。
[0012] 本实用新型的优点和有益效果：
[0013] (1)本实用新型含有细胞转染、细胞裂解、QPCR实验用的试剂，方便实验人员拿取 试剂，进行连续实验，节省时间。
[0014] (2)本实用新型结构简单、设计合理，使用方便、不易受污染。
【专利附图】
【附图说明】
[0015] 图1为本实用新型的构造图；
[0016] 其中，1.盒盖；2.盒体；3.衬垫；31.容器孔；32.凹槽；4.挡板；5.装有 5XPrimeScript RT Master Mix的容器；6.装有hnRNPA2/Bl基因 QPCR上游引物的容器； 7.装有hnRNPA2/Bl基因 QPCR下游引物的容器；8.装有AXL基因 QPCR上游引物的容器； 9.装有AXL基因 QPCR下游引物的容器；10.装有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器；11.装 有GAPDH基因 QPCR下游引物的容器；12.装有SYBR染料的容器；13.装有针对hnRNPA2/Bl 基因的siRNA的容器；14.装有阴性对照siRNA的容器；15.装有Lipoibctamine? 2000的容 器；16.装有PMSF的容器；17.装有RNAiso Plus的容器；18.装有RIPA裂解液的试剂瓶。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本实用新型的【具体实施方式】作进一步描述，本实用新型的优点 和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围 构成任何限制。
[0018] 实施例1多功能试剂盒
[0019] -种多功能试剂盒，该试剂盒包括盒盖1、盒体2、衬垫3、挡板4、装有 5XPrimeScript RT Master Mix 的容器 5、装有 hnRNPA2/Bl 基因 QPCR 上游引物的容 器6和下游引物的容器7、装有AXL基因 QPCR上游引物的容器8和下游引物的容器9、 装有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器10和下游引物的容器11、装有SYBR染料的容器 12、装有针对hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13、装有阴性对照siRNA的容器14、装有 Lipofcctamiiic? 2000的容器15、装有PMSF的容器16、装有RNAiso Plus的容器17、装有 RIPA裂解液的试剂瓶18 ;衬垫3放置于所述盒体2内，衬垫3上设有容器孔31和凹槽32 ; 2个挡板4将3个衬垫3隔开并固定于盒体2上，最左侧衬垫3上只设有容器孔31，中间 衬垫3上只设有容器孔31，最右侧衬垫3上设有凹槽32和容器孔31 ;容器孔31的大小 与各容器的大小相匹配；凹槽32的大小与试剂瓶18的大小相匹配；装有RIPA裂解液的 试剂瓶18和装有PMSF的容器16及装有RNAiso Plus的容器17放置于最右侧衬垫3上， 装有针对hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13和装有阴性对照siRNA的容器14以及装有 Li.p〇rectaminc? 2000的容器15放置于中间衬垫3上，其他容器放置于最左侦Ij衬垫3上。
[0020] 其中，容器是I. 5ml的EP管；容器孔31是贯穿衬垫3的，且容器孔31是上端开 口、下端封闭的；容器孔31在衬垫上平行排列。
[0021] 综上所述，本实用新型的实施方式仅提供最佳的实施方式，本实用新型的技术内 容及技术特点已揭示如上，然而熟悉本项技术的人士仍可能基于本实用新型所揭示的内容 而作各种不背离本实用新型创作精神的替换及修饰；因此，本实用新型的保护范围不限于 实施例所揭示的技术内容，故凡依本实用新型的形状、构造及原理所做的等效变化，均涵盖 在本实用新型的保护范围内。
【权利要求】
1. 一种多功能试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括盒盖（1)、盒体（2)、衬垫（3)、挡板 (4)、装有5XPrimeScriptRTMasterMix的容器（5)、装有hnRNPA2/Bl基因QPCR上游引物 的容器（6)和下游引物的容器（7)、装有AXL基因QPCR上游引物的容器（8)和下游引物的 容器（9)、装有GAPDH基因QPCR上游引物的容器（10)和下游引物的容器（11)、装有SYBR染 料的容器（12)、装有针对hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器（13)、装有阴性对照siRNA的容 器（14)、装有Liporcctaminc? 2000 的容器（15)、装有PMSF的容器（16)、装有RNAisoPlus 的容器（17)、装有RIPA裂解液的试剂瓶（18);所述衬垫（3)放置于所述盒体（2)内，所述 衬垫（3)上设有容器孔（31)和凹槽（32) ;2个所述挡板（4)将3个所述衬垫（3)隔开并固 定于所述盒体（2)上，最左侧所述衬垫（3)上只设有所述容器孔（31)，中间所述衬垫（3)上 只设有所述容器孔（31)，最右侧所述衬垫（3)上设有所述凹槽（32)和所述容器孔（31);所 述容器孔（31)的大小与各容器的大小相匹配；所述凹槽（32)的大小与所述试剂瓶（18)的 大小相匹配；所述装有RIPA裂解液的试剂瓶（18)和所述装有PMSF的容器（16)及所述装有 RNAisoPlus的容器（18)放置于最右侧所述衬垫（3)上，所述装有针对hnRNPA2/Bl基因的 siRNA的容器（13)和所述装有阴性对照siRNA的容器（14)以及所述装有Lipolbctamine? 2000的容器（15)放置于中间所述衬垫（3)上，其他容器放置于最左侧所述衬垫（3)上。
2. 根据权利要求1所述的多功能试剂盒，其特征在于，所述容器孔（31)贯穿所述衬垫 (3)〇
3. 根据权利要求1所述的多功能试剂盒，其特征在于，所述容器孔（31)上端开口，下端 封闭。
4. 根据权利要求1所述的多功能试剂盒，其特征在于，所述容器孔（31)平行排列于所 述衬垫（3)上。
【文档编号】C12M1/34GK204198741SQ201420653901
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月4日 优先权日:2014年11月4日
【发明者】金国贤, 刘莹, 金硕 申请人:中国人民解放军第四六三医院