一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型属于分析检测技术领域，涉及到一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒。其包含试剂盒盖、试剂盒以及置于试剂盒内的四个试剂瓶；所述的四个试剂瓶分别盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液；所述检测缓冲液为NADPH、底物和磷酸钾缓冲液；所述终止缓冲液为DTNB和盐酸胍溶液；所述标准液为5μg/mL的人硫氧还蛋白和0.1％wt血清白蛋白混合液。与现有技术相比，本实用新型检测灵敏度高；与此同时，其成分的组合配置能够基本满足现行常用自动检测设备基本流程配置的需要。此外，该试剂盒还能检测细胞、组织裂解液及纯化硫氧还蛋白活性，且无独特的组织特异性。
【专利说明】
一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒
技术领域
[0001]本实用新型属于分析检测技术领域，具体来说，涉及到一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]硫氧还蛋白存在于所有活细胞中，与细胞生长与存活密切相关。硫氧还蛋白也会分泌到细胞外，存在于血液及细胞外液中。该蛋白活性变化与许多疾病的发生发展有关。目前，硫氧还蛋白ELISA试剂盒，是以免疫学反应为基础，依靠抗原、抗体的特异性反应，检测硫氧还蛋白的蛋白水平。然而，硫氧还蛋白极易被体内的代谢物、中间产物修饰改变活性，组织和细胞中硫氧还蛋白的蛋白水平，不能确切地反映硫氧还蛋白的功能状态。此外，ELISA试剂盒有独特的组织特异性，实验中可能用到不同来源的样本，需要辨别哪种ELISA试剂盒能测手中的样本。至今，实验室研究中，硫氧还蛋白的测活方法主要有两种:胰岛素测活法(Luthman,B1chemistry 21:6628-6633 ； 1982.)、终点法(Arner ,Methods Enzymol300:226-239.； 1999.)及改良后的终点法(Wu，Y.Atherosclerosis 212:351-355;2010.)。胰岛素测活法，适合酶动力学研究，不适合大批量样本的测定。终点法及改良后的终点法，各实验室所用的条件及标准不尽相同，步骤较复杂，所测得的结果难以比较。
【发明内容】
[0003]为解决上述技术问题，本实用新型提供了一种高灵敏度、高效且使用简便的简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒。
[0004]本实用新型所述的一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，所述活性检测试剂盒包含试剂盒盖1、试剂盒3以及置于试剂盒内的四个试剂瓶2;所述的四个试剂瓶2分别盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液;所述检测缓冲液为NADPH-底物缓冲液；所述终止缓冲液为DTNB的盐酸胍缓冲液；所述标准液为人硫氧还蛋白的血清白蛋白稀释液。
[0005]所述NADPH-底物缓冲液为NADPH、底物和磷酸钾缓冲液;所述DTNB的盐酸胍缓冲液为DTNB和盐酸狐溶液;所述人硫氧还蛋白的血清白蛋白稀释液为5yg/mL的人硫氧还蛋白和0.1 % wt血清白蛋白混合液。
[0006]所述试剂瓶2为塑料瓶或EP管。
[0007]所述血清白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。
[0008]所述试剂盒盖I扣盖在试剂盒3上构成外部大小为1cmX 1cmX 3cm的立方体。
[0009 ]上述盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液的试剂瓶2的容量分别为
3.7mL、15mL、100yUS200yL。
[0010]与现有技术相比，本实用新型所述的简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒检测灵敏度高，足以分辨出20微升人血清/血浆中硫氧还蛋白给出的信号；与此同时，其成分的组合配置能够基本满足现行常用自动检测设备基本流程配置的需要。此外，该试剂盒还能检测细胞、组织裂解液及纯化硫氧还蛋白活性，且无独特的组织特异性。
【附图说明】
[0011 ]图1:简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒组件示意图；试剂盒盖-1、试剂瓶-
2、试剂盒-3。
【具体实施方式】
[0012]下面结合具体的实施例对本实用新型所述的简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒做进一步说明，但是本实用新型的保护范围并不限于此。
[0013]实施例1
[0014]—种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，所述活性检测试剂盒包含试剂盒盖1、试剂盒3以及置于试剂盒内的四个试剂瓶2;所述的四个试剂瓶2分别盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液;所述检测缓冲液为NADPH-底物缓冲液;所述终止缓冲液为DTNB的盐酸胍缓冲液;所述标准液为人硫氧还蛋白的血清白蛋白稀释液。
[0015]所述NADPH-底物缓冲液为2mM NADPH、ΙΟμΜ底物和250mM磷酸钾缓冲液(pH=7.5)，底物为FITC-胰岛素;所述DTNB的盐酸胍缓冲液为ImM DTNB和8M盐酸胍溶液;所述人硫氧还蛋白的血清白蛋白稀释液为5yg/mL的人硫氧还蛋白(hTrxl)和0.1 % wt人血清白蛋白混合液;所述酶溶液是5μΜ牛硫氧还蛋白还原酶。所述试剂瓶2为EP管。所述试剂盒盖子I和试剂盒框3能构成外部大小为1cmXlOcmX 3cm的立方体。所述检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液所对应的试剂瓶2的容量以及盛装容量依次为3.7mL、15mL、100yUS200yL。
[0016]与现有技术相比，本实用新型所述的简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒检测灵敏度高，足以分辨出20微升人血清/血浆中硫氧还蛋白给出的信号；与此同时，其成分的组合配置能够基本满足现行常用自动检测设备基本流程配置的需要。此外，该试剂盒还能检测细胞、组织裂解液及纯化硫氧还蛋白活性，且无独特的组织特异性。
【主权项】
1.一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于，所述活性检测试剂盒包含试剂盒盖(I)、试剂盒(3)以及置于试剂盒内的四个试剂瓶(2);所述的四个试剂瓶(2)分别盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液;所述检测缓冲液为NADPH-底物缓冲液;所述终止缓冲液为DTNB的盐酸胍缓冲液;所述标准液为人硫氧还蛋白的血清白蛋白稀释液。2.根据权利要求1所述的一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶(2)为塑料瓶或EP管。3.根据权利要求1所述的一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。4.根据权利要求1所述的一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒盖(I)扣盖在试剂盒(3)上构成外部大小为1cmX 1cmX 3cm的立方体。5.根据权利要求1所述的一种简易的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于，盛装检测缓冲液、终止缓冲液、酶溶液和标准液的试剂瓶(2)的容量分别为3.7mL、15mL、100yL及200yL。
【文档编号】C12Q1/26GK205473834SQ201620150746
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年2月29日
【发明人】梁巍, 刘军, 杜澄
【申请人】北京中科研源科技发展有限公司