冷冻甜点的制作方法

文档序号:11438360阅读:517来源:国知局
本发明属于冷冻组合物领域。具体地,本发明涉及冰糕型冷冻组合物。本发明还涉及用于制备冷冻甜点的方法。
背景技术
::传统冰糕通常是用水果调味的冷冻糖溶液,但不添加乳蛋白和脂肪(参见icecream第5版,robertt.marshall和w.s.arbuckle编著,chapman&hall,第1章,1-2页)。这种组合物通常是未充气的或很少充气的。由于这些特征,冰糕和相关的冷冻甜点可能变得非常坚硬。因此,这种冰糕的口感相对无吸引力,并且可能不好吃。虽然有些成分一定程度上可有助于软化冰糕,但这种冰糕在冷冻条件下储存时趋于硬化的普遍问题仍然存在。这种所谓的后硬化因此降低制造更软冰糕(其在典型的商业相关保质期内保持其有吸引力的感官特征)的可能性。其他基于冰糕的甜食在储存时遭受同样的硬化。对于基于冰糕的冷冻饮料,这将导致可感知的冰晶聚集体,其产生令人不快的口感。同样地,使用通常用于冰淇淋的刮面式换热器制作基于冰糕形式的软冰类甜点是不可能的,因为这种配方会相对快地变得不能挤出。使冰糕更软的一种方法是增加糖含量,但这会增加甜点的卡路里含量,被许多有健康意识的消费者认为无吸引力。这同样适用于添加油和脂肪。此外,添加油和脂肪会使冰糕变成冰淇淋,这不是消费者对冰糕的预期。迄今为止已经研究了不同类型的添加剂来改变和/或增强冰糕的感官性质。值得注意的是,这些添加剂包括水胶体如树胶。然而,以会抑制后硬化的水平使用树胶会获得一旦它们融化则产生令人不快的粘腻或粘稠口感的冰糕。不溶性膳食纤维如纤维素纤维也已得到研究,主要是针对其作为稳定剂和形状保留助剂的用途。例如,wo2012/072335涉及使用酶处理的柑橘纤维作为冰淇淋中的稳定剂。在其表1中公开了包含0.75重量%柑橘纤维的冷冻甜点(配方1)。在冷冻之前,将该配方在140巴的压力下均化,并进行酶处理。jp59/042850-a公开了冰品甜点组合物,其包含作为稳定剂的从木浆获得的微纤丝化的纤维素。us4923981涉及薄壁细胞纤维素改善食物。其公开了将薄壁细胞纤维素添加到食品、药物和其他食物中可以改善这些物质的物理性质、物理化学性质和稳定性性质。鉴于上述情况,仍然需要提供新方法来减少或抑制冰糕的后硬化。因此,本发明的目的是提供克服上述现有技术中观察到的一个或多个问题的冷冻甜点。具体地,本发明的目的是提供包括冰糕和相关产品形式的冷冻甜点,其遭受后硬化作用较少或完全不遭受后硬化作用。本发明的另一目的是提供基于冰糕产品形式的冷冻甜点,在其商业保质期内保持其预期的相对硬度。本发明的又一目的是减少或甚至抑制冰糕和/或相关产品形式的后硬化,同时保持其他期望的特征。本发明的再一目的是提供制做冷冻甜点的方法,所述冷冻甜点显示减少或抑制的后硬化。技术实现要素:我们已发现,通过本发明的冷冻甜点可以实现一个或多个这些目的。具体地,令人惊讶地发现,包含微纤丝的初生细胞壁材料(其已去原纤至合适的水平,使得甜点的微纤丝可用性参数、甜点的均匀性参数、初生细胞壁材料的纤维去原纤参数或初生细胞壁材料的纤维均匀性参数具有适当的值)可用于抑制或防止该冷冻甜点的后硬化。冷冻甜点通常是冰糕型的。因此,根据第一方面,本发明提供冷冻甜点,其包含a.水,b.1-40重量%的凝固点抑制剂,c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料,其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织,·至少80重量%的微纤丝直径小于50nm;并且,·所述冷冻甜点具有至少0.11hz的微纤丝可用性参数map。类似地,根据第二方面,本发明提供冷冻甜点,其包含a.水,b.1-40重量%的凝固点抑制剂,c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料,其中,·初生细胞壁材料源自植物薄壁组织,·至少80重量%的微纤丝直径小于50nm;并且,·所述冷冻甜点具有至少0.022的甜点均匀性参数chp。类似地,根据第三方面,本发明提供冷冻甜点,其包含a.水,b.1-40重量%的凝固点抑制剂,c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料,其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织,·至少80重量%的所述微纤丝直径小于50nm;并且,·所述去原纤的初生细胞壁材料具有至少0.10hz的纤维去原纤参数fdp。同样地,根据第四方面,本发明提供冷冻甜点,其包含a.水,b.1-40重量%的凝固点抑制剂,c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料,其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织,·至少80重量%的所述微纤丝直径小于50nm;并且·所述去原纤的初生细胞壁材料具有至少0.022的纤维均匀性参数fhp。本发明的冷冻甜点尤其可通过使用特定方法获得。因此,根据第五方面,本发明还提供用于制备冷冻甜点的方法,其中所述冷冻甜点包含a.水,b.1-40重量%的凝固点抑制剂,和c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料,并且其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织,·至少80重量%的所述微纤丝直径小于50nm;并且其中所述方法包括以下步骤:i.提供初生细胞壁材料源;ii.将所述初生细胞壁材料分散在水相中,从而形成包含0.1-4重量%的所述初生细胞壁材料的水分散体;iii.处理所述水分散体以获得包含去原纤的初生细胞壁材料的分散体,其中所述处理包括高剪切处理步骤,所述高剪切处理步骤选自500-2000巴压力下的高压均化和500-2000巴压力下的微流化;iv.冷冻所述甜点;其中在步骤ii之前、在步骤ii和iii之间、在步骤iii和iv之间或者在步骤iv之后,将所述冷冻甜点的其它组分独立地混入水相中。本发明的方法产生显示期望性质的冷冻甜点,所述性质包括因源自所述方法的特定结构所致的减少或抑制的后硬化。因此,在第六方面,本发明还提供能够通过本发明第五方面的方法获得的冷冻甜点。根据第七方面,本发明还涉及包含微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述冷冻甜点具有至少0.11hz的微纤丝可用性参数map。类似地,根据第八方面,本发明还涉及包含微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述冷冻甜点具有至少0.022的甜点均匀性参数chp。附图说明图1示出实施例1:2的t2分布曲线。图2示出比较例1:b的t2分布曲线。图3示出比较例1:b的共焦扫描激光显微照片。图4示出实施例1:2的共焦扫描激光显微照片。图5示出比较例1:b的共焦扫描激光显微照片。图6示出实施例1:2的共焦扫描激光显微照片。具体实施方式本发明一个方面的任何特点均可用于本发明的任何其他方面。词语“包含”旨在表示“包括”,但不一定是“由...组成”或“由...构成”。换言之,列出的步骤或选项不必是穷举的。应当注意,在以下说明中给出的实例旨在阐明本发明,并不意图将本发明限于那些实例本身。类似地,除非另有说明,所有百分比均为重量/重量百分比。除了在操作实施例和比较例中,或另有明确说明的情况下,本说明书中表示物质量或反应条件、物质的物理性质和/或用途的所有数字均应被理解为由词语“约”修饰。除非另有说明,以“x-y”的形式表示的数值范围被理解为包括x和y。当针对特定特征,以“x-y”的形式描述多个优选范围时,应当理解,组合不同端点的所有范围也被涵盖。对本发明的目的而言,环境温度定义为约20℃的温度。冷冻甜点术语冷冻甜点是指适合人类消费的包装或即时制作的组合物。在优选形式中,本发明的冷冻甜点为基于冰糕的甜点。基于冰糕的甜点通常被认为包括未充气冰糕、充气冰糕、软冰糕(包括例如可挤出组合物)以及基于冰糕的冷冻饮料(例如在-9℃以上的温度下可流动和/或可吮吸的甜点)。根据本发明任何方面的冷冻甜点均包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂。凝固点抑制剂可以是适合用于冷冻甜点的任何凝固点抑制剂。这样的凝固点抑制剂的混合物也被涵盖。优选地,凝固点抑制剂选自单糖、二糖、淀粉水解产物、麦芽糖糊精、可溶性纤维、多元醇及其混合物。用作凝固点抑制剂的物质通常不仅用于在低于水凝固点的温度下降低冷冻饮料的冰含量,而且还可以用作甜味剂,并且用作增容剂占据空间改善基质相的流变性。这些物质必须具有与冷冻饮料风味相容的味道和/或风味。合适的单糖的实例为右旋糖、果糖和半乳糖。合适的二糖的实例包括蔗糖和乳糖。合适的淀粉水解产物的实例为葡萄糖浆和玉米糖浆。可溶性纤维的实例包括菊糖、低聚果糖和聚右旋糖。多元醇实例为赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、纤维二糖醇和甘油。取决于所需的最终产品性质(包括甜度、卡路里含量、质构、冰含量等),可使用这些物质的不同组合。优选地,凝固点抑制剂包含单糖和/或二糖。甚至更优选地,凝固点抑制剂包含蔗糖,其中优选至少30重量%的凝固点抑制剂为蔗糖,更优选至少40重量%的凝固点抑制剂为蔗糖。在一些实施方案中,优选凝固点抑制剂包含30-80重量%,更优选40-60重量%的蔗糖。初生细胞壁材料对本发明的目的而言,“初生细胞壁材料”定义为基本上所有冷水(即在约20℃的温度下)可溶的组分都已被去除的细胞壁材料。这可以通过用水洗涤轻易地实现。初生细胞壁材料源自(即制备于)植物薄壁组织。本发明的冷冻甜点中的微纤丝是从初生细胞壁材料获得的微纤丝。植物薄壁细胞的来源可以是含有植物薄壁细胞(具有纤维素骨架)的任何植物。植物细胞壁通常含有纤维素和半纤维素、果胶并且在在许多情况下含有木质素。这与真菌的细胞壁(由几丁质构成)和细菌的细胞壁(由肽聚糖构成)形成对比。初生植物细胞壁仅含少量木质素(如果有的话)。本发明的冷冻甜点中使用的初生细胞壁材料可包含一些木质素,如基于细胞壁材料总量计,小于10重量%,但优选不含大量木质化组织。如植物生物学领域技术人员所理解的,优选初生细胞壁材料基本上由非木质化组织组成。优选地,初生细胞壁材料的来源选自果实、根、鳞茎、块茎、种子、叶及其组合的薄壁组织;更优选选自柑橘果实、番茄果实、桃果实、南瓜果实、猕猴桃果实、苹果果实、芒果果实、糖用甜菜、甜菜根、芜菁、欧洲防风、玉米、燕麦、小麦、豌豆及其组合;并且甚至更优选选自柑橘果实、番茄果实及其组合。初生细胞壁材料最优选的来源为柑橘果实的薄壁组织。初生细胞壁材料在其进入去原纤状态前可任选地经历若干预处理步骤。这种预处理包括但不限于加热、蒸煮、洗涤、精制、脱果胶,只要如本发明所要求,包含微纤丝的去原纤的细胞壁材料存在于冷冻甜点中即可。因此,薄壁组织也可以例如以果泥形式提供。微纤丝在本发明的上下文中,存在于或源于初生细胞壁材料的微纤丝是通常在植物细胞壁中发现的强自缔合纤维结构。在天然植物组织中,它们通常以几十纳米到几微米的聚集体的形式存在。这些聚集体由基本微纤丝组成。本发明的冷冻甜点包含0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料。这里,总组合物的重量%是基于基本上所有冷水可溶组分都已被去除的初生细胞壁材料的干重(即不溶部分,也被理解为纤维部分)。优选地,本发明的冷冻甜点中去原纤的细胞壁材料的量为0.3-2重量%,更优选为0.5-1.5重量%,并且甚至更优选为0.7-1.2重量%。优选地,通过去除可溶性和非结合的糖类、蛋白质、多糖、油溶性油、蜡和植物化学物质(例如类胡萝卜素、番茄红素)从初生细胞壁材料获得微纤丝。如本领域技术人员所公知,这使用公知技术适当地实现,所述技术包括切碎细胞壁材料、蒸煮、洗涤、离心、倾析和干燥。优选地,初生细胞壁材料包含至少50重量%微纤丝,更优选至少60重量%,甚至更优选至少70重量%,还更优选至少80重量%,甚至还更优选至少90重量%,并且最优选地,初生细胞壁材料基本上由微纤丝组成。这里,重量%是基于初生细胞壁材料和微纤丝的干重。植物细胞壁(特别是薄壁组织中的植物细胞壁)除纤维素外还含有半纤维素和果胶。因此,初生细胞壁材料中的微纤丝通常可包含纤维素、半纤维素和果胶。然而,本发明的初生细胞壁材料不一定含有半纤维素和/或果胶。当从植物薄壁组织制备初生细胞壁材料时,半纤维素或其部分可已被去除。因此,本发明的初生细胞壁材料任选地包含半纤维素,例如其量为0-40重量%。优选地,初生细胞壁材料包含半纤维素,优选其量为至多40重量%,例如5-40重量%,并且更优选其量为10-30重量%。同样地,当从植物薄壁组织制备初生细胞壁材料时,果胶或其部分可已被去除。因此,本发明的初生细胞壁材料任选地包含果胶,例如其量为0-30重量%。优选地,初生细胞壁材料包含果胶,优选其量为至多30重量%,例如5-30重量%,并且更优选其量为10-20重量%。优选地,本发明的初生细胞壁材料包含半纤维素和果胶。本发明的冷冻甜点中的初生细胞壁材料包含去原纤的细胞壁材料,即微纤丝(其构成存在于初生细胞壁中的纤维)至少部分地解缠结而不破坏它们。是解缠结度为本发明的冷冻甜点提供了惊人的性质。map、fdp、chp和fhp参数都与该解缠结度相关。优选地,来自去原纤的初生细胞壁材料的微纤丝的平均长度大于1微米,并且优选大于5微米。至少80重量%的微纤丝直径小于50nm。优选至少80重量%的微纤丝直径小于40nm,更优选小于30nm,甚至更优选小于20nm,并且还更优选小于10nm。微纤丝直径可以使用下面实施例部分中所述的方法适当地测定。通过使初生细胞壁材料经受机械能和/或汽蚀从而使纤维素微纤丝解缠结来适当地将去其原纤。这可以作为从初生细胞壁材料获得微纤丝的方法的一部分来完成,从而产生包含微纤丝的分离的去原纤的细胞壁材料。或者,初生细胞壁材料可以与冷冻甜点的一种或多种其他成分(包括例如凝固点抑制剂)组合,其中所得混合物经受机械能和/或汽蚀,从而使纤维素纤维中的微纤丝解缠结。所需的去原纤水平也可以通过一系列各种这样的解缠结处理来达到,例如首先对初生细胞壁材料的分散体进行高剪切处理,并在稍后阶段对冷冻甜点的预混物进行另一高剪切处理。或者,如果初生细胞壁材料的预处理提供足够的解缠结以在最终的冷冻甜点中产生所需的去原纤水平,则初生细胞壁材料与冷冻甜点的其他组分组合的制作步骤仅包括相对低剪切的混合步骤可能就足够了。本发明的任何组合物中去原纤的初生细胞壁材料中的微纤丝中的纤维素优选具有小于50%的平均结晶度。优选微纤丝中的纤维素的平均结晶度小于40%,更优选小于35%,并且甚至更优选小于30%。下表示出了纤维素微纤丝的典型来源的平均结晶度。其示出源自植物薄壁组织的初生细胞壁材料中的纤维素通常具有小于50重量%的结晶度。表1:纤维素(所有多晶型纤维素i)的平均结晶度平均结晶度可以根据下面实施例部分中所述的方法适当地测定。微纤丝可用性参数map根据本发明的第一方面,冷冻甜点具有至少0.11hz的微纤丝可用性参数map。基于对包含去原纤的细胞壁材料的标准化样品进行的nmr(核磁共振)方法,map提供初生细胞壁材料去原纤程度的度量。冷冻甜点的map通过以下方案确定。确定参数的方案包括三个部分:样品制备、用于收集cpmg弛豫衰减数据的nmr测量,以及用于计算map值的数据分析。因此,方案包括样品制备步骤:a.融化在5℃下储存的冷冻甜点样品;b.在室温下从熔融样品制备300ml浓度标准化样品,其中浓度标准化样品包含浓度为0.100重量%(相对于标准化样品的重量)的去原纤的初生细胞壁材料中含有的微纤丝;c.通过用装有具有1mm孔的小筛网的silverson顶置式混合器于2000rpm下搅拌样品60秒,将初生细胞壁材料均匀分布于浓度标准化样品体积;d.将浓度标准化样品的ph调节至3.3±0.1;e.将浓度和ph标准化样品的等分试样转移到直径10mm的平底nmr管,确保填充高度使得当样品放置在步骤h的nmr波谱仪中时,填充高度在其中nmr波谱仪线圈的射频场是均匀的区域内。如果冷冻甜点包含高于0.100重量%的水平的去原纤的细胞壁材料,步骤b将包括稀释以获得此水平。样品优选地保持为没有较大颗粒材料或使之不含较大颗粒材料,包括例如水果块、整个或多个细胞的碎片和其他未去原纤的材料。分布步骤c旨在提供微纤丝材料于样品体积的均匀分布,同时对样品的去原纤水平具有有限和受控制的影响。在步骤d中,借助柠檬酸适当地将ph标准化。如本领域技术人员所知,步骤e中的最佳填充高度可取决于使用的nmr波谱仪的类型。其通常为约1cm。在方案的进一步步骤中,浓度和ph标准化样品将被称为标准化样品。数据分析需要比较标准化样品与基质参比样品(其应优选地基本上不含纤维素微纤丝材料)的t2分布曲线(见下文)。因此,方案还包括以下步骤:f.如下制备基质参比样品:将标准化样品的等分试样在2mleppendorf杯中以15000的相对离心力离心10分钟,并将上清液转移到直径10mm的平底nmr管,确保填充高度使得当样品放置在步骤h的nmr波谱仪中时,填充高度在其中nmr波谱仪线圈的射频场是均匀的区域内。随后,为了收集和分析数据,方案包括以下步骤:g.在20℃的温度下平衡nmr管;h.使用cpmg(carrpurcellmayboomgill)t2弛豫脉冲序列,以200微秒的180°脉冲间隔和30秒的循环延迟时间,在以20mhz的质子共振频率操作的nmr波谱仪上于20℃下记录标准化样品的弛豫衰减数据;i.在与步骤h相同的条件下记录基质参比样品的弛豫衰减数据;j.对获得的标准化样品和基质参比样品两者的衰减数据执行拉普拉斯逆变换,要求t2在0.01-10秒的范围内;k.在标准化样品的t2分布曲线中识别对应于水质子的峰,其中t2通过本体水相与去原纤的初生细胞壁材料表面之间的交换进行平均,并且在基质参比样品的t2分布曲线中识别对应于本体水相的峰;l.计算t2(样品),其定义为标准化样品的t2分布曲线中识别的峰的加权平均t2值,并且类似地计算t2(基质),其定义为基质参比样品的t2分布曲线中识别的峰的加权平均t2值;m.计算r2(样品)和r2(基质)的值,其中:r2(样品)=1/t2(样品),并且r2(基质)=1/t2(基质);n.按照map=r2(样品)-r2(基质)计算冷冻甜点的微纤丝可用性参数map。cpmgt2弛豫脉冲序列在nmr波谱学领域中是公知的(参见effectsofdiffusiononfreeprecessioninnuclearmagneticresonanceexperiments,carr,h.y.,purcell,e.m.,physicalreview,volume94,issue3,1954,pages630-638/modifiedspin-echomethodformeasuringnuclearrelaxationtimes,meiboom,s.,gill,d.,reviewofscientificinstruments,volume29,issue8,1958,pages688-691)。合适的时域nmr波谱仪是公知的,执行这一类型的波谱法是公知的。类似地,确保记录可靠数据的通常措施在时域nmr波谱学领域是公知的。例如,放置样品体积位置的场应足够均匀。场均匀性可以通过验证纯水的参比样品是否对水质子产生超过2毫秒的t2*(t-two-star)来检验。步骤j的拉普拉斯逆变换可使用非负最小二乘约束算法lsqnonneg适当地进行(lawson,c.l.和r.j.hanson,solvingleastsquaresproblems,prentice-hall,1974,chapter23,p.161),正则化参数λ设为0.2。适合实现算法和进行变换的软件包是公知的,matlab是这种软件的实例。如果系统足够均匀,在步骤k中,标准化样品的t2分布曲线中选择的峰通常是主峰。在那些情况下,只有一个峰。一般而言,t2分布曲线中应选择的峰是对应于水质子的峰,其中t2通过本体与去原纤的初生细胞壁材料表面位点之间的扩散和化学交换进行平均。如果去原纤的初生细胞壁材料均匀分布于标准化样品,则该峰特别明确。在大多数通常情况下,只有一个这样的峰,如在下面实施例部分中的实施例中所见。步骤l中的加权平均t2例如通过如下求和适当地计算这里,i(t2)是值t2处的强度,并且两个求和均在峰宽度上。确定冷冻甜点map的优选方式是以下面实施例部分中所述的方式遵循方案。以上方案和实施例提供了测量map的方法。然而,map也可通过不同方案测定,只要该方案会导致相同的物理结果,即其对于特定冷冻甜点会与以上方案产生相同的map。总而言之,如此处所述测定的微纤丝可用性参数map因此提供对初生细胞壁材料去原纤程度的度量。因此,根据本发明的这一方面,冷冻甜点具有至少0.11hz的微纤丝可用性参数map。冷冻甜点优选具有至少0.13hz并且更优选至少0.15hz的微纤丝可用性参数map。冷冻甜点优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz,并且甚至更优选至多0.20hz的微纤丝可用性参数map。甜点均匀性参数chp根据本发明的第二方面,冷冻甜点具有至少0.022的甜点均匀性参数。基于对包含去原纤的细胞壁材料的标准化样品进行的共焦扫描激光显微术(cslm),chp提供初生细胞壁材料去原纤程度的度量。冷冻甜点的chp通过以下方案确定。确定参数的方案包括三个部分:样品制备、用于获得样品的显微照片的cslm显微术,以及用于计算chp值的数据图像分析。因此,方案包括以下样品制备步骤:a.融化在5℃下储存的冷冻甜点样品;b.在室温下从熔融样品制备300ml浓度标准化样品,其中浓度标准化样品包含浓度为0.100重量%(相对于标准化样品的重量)的去原纤的初生细胞壁材料中含有的微纤丝;c.通过用装有具有1mm孔的小筛网的silverson顶置式混合器于2000rpm下搅拌样品60秒,将初生细胞壁材料均匀分布于浓度标准化样品体积;d.通过提供刚果红染料的0.5%-w/v储备水溶液并将标准化样品的等分试样与一定量的刚果红溶液接触来将微纤丝染色,其中所述量相对于标准化样品的等分试样的体积为1.0体积%;e.用经染色的标准化样品的等分试样填充适合于进行cslm的样品保持器。在步骤d中,例如将2ml标准化样品与20μl刚果红溶液接触。为了确保染料在整个样品中的均匀分布,例如,可以轻轻摇动之。步骤e的样品保持器适当地包括由包括孔的间隔物分隔开的两个盖滑动件,所述孔有足够体积以便能够记录如下所述的用于数字图像分析的足够的显微照片。为了获得显微照片,方案包括以下步骤:f.用共焦扫描激光显微镜成像经染色的标准化样品,所述共焦扫描激光显微镜装有在561nm的波长发射的二极管泵浦固体激光器,并在固定的激光功率下运行,使用数值孔径为1.25的油浸40x物镜,并且以1024×1024像素的分辨率记录至少25个独立的显微照片,其中每个像素代表在350×350nm至400×400nm的范围内的样本量,调整强度和增益设置,使得像素在0.1-5%的每张照片都是饱和的,并且以每像素至少8位的色彩深度记录显微照片。chp是涉及初生细胞壁材料的度量。因此,记录显微照片的同时应避免气泡或样品边缘成像。同样地,如果冷冻甜点包含肉眼可见的果粒或类似颗粒,则应注意不要将这些颗粒成像。这可以例如通过在步骤a中的样品制备期间除去这些肉眼可见尺寸的颗粒或者通过在采集显微照片时避免样品中的这些颗粒来方便地实现。这些肉眼可见尺寸的颗粒包括例如水果块、整个或多个细胞的碎片和其它未去原纤的材料。通常,一个或多个光电倍增管用作显微镜中的光检测器。优选显微镜装有三个光电倍增管(pmt)。独立的显微照片是在x-y平面和z方向上都不重叠的显微照片。可以在高于8位(例如24位rgb)的颜色深度适当地记录显微照片,因为这可以容易地通过公知的手段转换为较低的颜色深度。方案的数字图像分析部分包括以下步骤:g.确保显微照片以每个像素具有单个强度值的格式存在或者被转换为每个像素具有单个强度值的格式;h.如下归一化每个单独的显微照片:重新计算图像的像素值,使得图像中使用的像素值的范围等于给定颜色深度的最大范围,从而要求0.4%的像素变得饱和;i.获得每个单独的显微照片的图像直方图并通过目视检查从每个直方图去除尖峰;j.对于每个单独的图像直方图,如下确定半峰全宽(fwhm):首先确定直方图中的最大计数和包含该最大计数的通道(最大通道),然后对包含等于或高于最大值的一半的值的第一通道与包含等于或高于最大值的一半的值的最后一个通道之间的通道数n进行计数,由此在计数n中包括该第一个和最后一个通道,然后通过将计数n除以通道总数来计算fwhm;k.计算甜点均匀性参数chp,其中chp是对各个显微照片获得的fwhm值的平均值。数字图像分析步骤可以适当地使用包括例如imagej的公知图像分析软件进行。步骤g的结果应当是图像是其中每个像素的强度被表示为单个值的格式。例如,如果图像是“灰度”图像,则是这种情况。相反,rgb格式的图像或每像素具有三个强度值的相关格式应被转换。这通过数字图像分析领域的公知操作容易地实现。合适的输出格式的实例是具有每像素8位的灰度图像。步骤h的归一化操作通常被称为直方图拉伸操作。步骤i的图像直方图是数字图像的公知性质,通过提供每个强度通道的像素数来表示像素在可能的强度上的分布。为了步骤i的去除尖峰的目的,如果特定通道的值显著高于相邻通道的值,通常至少高1.5倍,则认为该值是尖峰。步骤j中的下半部最大通道对应于如下通道,其含有最大计数一半的计数,在最大通道的低强度侧最远离最大通道。类似地,上半部最大通道对应于如下通道,其含有最大计数一半的计数,在最大通道的高强度侧最远离最大通道。步骤j中获得的fwhm是0-1的值。确定冷冻甜点chp的优选方式是以下面实施例部分中所述的方式遵循方案。以上方案和实施例提供了测量chp的方法。然而,chp也可通过不同方案测定,只要该方案会导致相同的物理结果,即其对于特定冷冻甜点会与以上方案产生相同的chp。冷冻甜点优选具有至少0.025,更优选至少0.030的甜点均匀性参数chp。优选冷冻甜点具有至多0.10,更优选至多0.07并且甚至更优选至多0.06的甜点均匀性参数chp。纤维去原纤参数fdp根据本发明的第三方面,通过纤维去原纤参数fdp适当地表征冷冻甜点中初生细胞壁材料的去原纤程度。与map一样,通过nmr技术测量fdp,但样品的制备方式不同。对分散在水中的去原纤的初生细胞壁材料定义fdp。也就是说,对单独的初生细胞壁材料而非冷冻甜点测定fdp。因此,根据本发明第三方面的冷冻甜点的去原纤的初生细胞壁材料具有至少0.10hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.11hz,更优选至少0.12hz,甚至更优选至少0.13hz并且还更优选至少0.15hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz并且甚至更优选至多0.20hz的纤维去原纤参数fdp。确定参数的方案包括三个部分:样品制备、用于收集cpmg弛豫衰减数据的nmr测量,以及用于计算fdp值的数据分析,类似于确定map的方案。因此,方案包括以下样品制备步骤:a.在室温下制备去原纤的初生细胞壁材料的300ml浓度标准化样品,其中浓度标准化样品包含浓度为0.100重量%(相对于标准化样品的重量)的去原纤的初生细胞壁材料中含有的微纤丝;b.通过用装有具有1mm孔的小筛网的silverson顶置式混合器于2000rpm下搅拌样品60秒,将初生细胞壁材料均匀分布于浓度标准化样品体积;c.将浓度标准化样品的ph调节至3.3±0.1;d.将浓度和ph标准化样品的等分试样转移到直径10mm的平底nmr管,确保填充高度使得当样品放置在步骤h的nmr波谱仪中时,填充高度在其中nmr波谱仪线圈的射频场是均匀的区域内。去原纤的初生细胞壁材料的标准化样品可以以不同的方式制备,所述方式可以根据去原纤的初生细胞壁材料和/或冷冻甜点的制备条件适当选择。因此,例如,标准化样品可以适当地通过使用基本上由分散在水中的去原纤的初生细胞壁材料组成的分散体来制备,其中所述分散体得自去原纤方法。如果初生细胞壁材料在与冷冻甜点的其它组分接触之前经历去原纤步骤,则这是特别有用的。可能的替代方案是将初生细胞壁材料与冷冻甜点的其它组分在制备后者之后分离。分布步骤b旨在提供微纤丝材料于样品体积的均匀分布,同时对样品的去原纤水平具有有限和受控制的影响。在步骤c中,借助柠檬酸适当地将ph标准化。如本领域技术人员所知,步骤d中的最佳填充高度可取决于使用的nmr波谱仪的类型。其通常约为1cm。用于测定fdp的方案的另外部分,即基质参比样品制备、数据收集和分析遵循与上文所述的用于测定map的方案的步骤f至n相同的步骤,条件是在步骤n中,纤维去原纤参数fdp计算为fdp=r2(样品)–r2(基质)确定冷冻甜点的fdp的优选方式是以下面实施例部分中关于map所述的方式遵循方案,同时考虑测量map和fdp的方法之间的上述差异。以上方案和实施例提供了测量fdp的方法。然而,fdp也可通过不同方案测定,只要该方案会导致相同的物理结果,即其对于特定冷冻甜点会与以上方案产生相同的fdp。纤维均匀性参数fhp根据本发明的第四方面,通过纤维均匀性参数fhp适当地表征冷冻甜点中初生细胞壁材料的去原纤程度。与chp一样,基于cslm显微照片的分析测量fhp,但样品的制备方式不同。对分散在水中的去原纤的初生细胞壁材料定义fhp。也就是说,对单独的初生细胞壁材料而非冷冻甜点测定fhp。因此,根据本发明第四方面的冷冻甜点的去原纤的初生细胞壁材料具有至少0.022的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.023,更优选至少0.025,甚至更优选至少0.027并且还更优选至少0.030的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.10,更优选至多0.070并且甚至更优选至多0.060的纤维去原纤参数fhp。确定fhp的方案包括三个部分:样品制备,用于获得样品的显微照片的cslm显微术,以及用于计算fhp值的数据图像分析,类似于确定chp的方案。因此,方案包括以下样品制备步骤:a.在室温下制备去原纤的初生细胞壁材料的300ml浓度标准化样品,其中浓度标准化样品包含浓度为0.100重量%(相对于标准化样品的重量)的去原纤的初生细胞壁材料中含有的微纤丝;b.通过用装有具有1mm孔的小筛网的silverson顶置式混合器于2000rpm下搅拌样品60秒,将初生细胞壁材料均匀分布于浓度标准化样品体积;c.通过提供刚果红染料的0.5%-w/v储备水溶液并将标准化样品的等分试样与一定量的刚果红溶液接触来将微纤丝染色,其中所述量相对于标准化样品的等分试样的体积为1.0体积%;d.用经染色的标准化样品的等分试样填充适合于进行cslm的样品保持器。去原纤的初生细胞壁材料的标准化样品可以以不同的方式制备,所述方式可以根据去原纤的初生细胞壁材料和/或冷冻甜点的制备条件适当选择。因此,例如,标准化样品可以适当地通过使用基本上由分散在水中的去原纤的初生细胞壁材料组成的分散体来制备,其中所述分散体得自去原纤方法。如果初生细胞壁材料在与冷冻甜点的其它组分接触之前经历去原纤步骤,则这是特别有用的。可能的替代方案是将初生细胞壁材料与冷冻甜点的其它组分在制备后者之后分离。用于测定fhp的方案的另外部分,即显微术和数字图像分析遵循与上文所述的用于测定chp的方案的步骤f至k相同的步骤,条件是在步骤k中,纤维均匀性参数fhp计算为各个显微照片获得的fwhm值的平均值。确定冷冻甜点的fhp的优选方式是以下面实施例部分中关于chp所述的方式遵循方案,同时考虑测量chp和fhp的方法之间的上述差异。以上方案和实施例提供了测量fhp的方法。然而,fhp也可通过不同方案测定,只要该方案会导致相同的物理结果,即其对于特定冷冻甜点会与以上方案产生相同的fhp。参数的组合还涵盖其中map、chp、fdp和fhp中超过一种同时满足map、chp、fdp、fhp的上述要求的冷冻甜点。例如,其中微纤丝可用性参数map具有上文所述的值并且同时甜点均匀性参数chp如上文所定义的冷冻甜点是优选的。同样地,其中微纤丝可用性参数fdp具有上文所述的值并且同时甜点均匀性参数fhp如上文所定义的冷冻甜点也是优选的。类似地,map、chp、fdp和fhp中的一种或多种的其它组合是优选的。冷冻甜点的其他成分根据本发明的任何方面的冷冻甜点可包含通常用于本发明类型的冷冻甜点中的任何其它成分。因此,它可以特别地包含通常用于冰糕型冷冻甜点中的成分。尽管冷冻甜点可能含有油或脂肪,但其优选含有有限量的油或脂肪。因此,冷冻甜点优选包含0-10重量%的在-20℃的温度下为固体的脂肪。甚至更优选地,冷冻甜点包含0-3重量%的在-20℃的温度下为固体的脂肪。甚至更优选冷冻甜点不含添加的乳制品脂肪。还更优选冷冻甜点基本上不含脂肪。除了作为去原纤的初生细胞壁材料的一部分引入的成分之外,冷冻甜点可适当地包含乳化剂、稳定剂或水胶体。合适的乳化剂和稳定剂包括例如arbuckle,w.s.,icecream,第5版,avipublishing,1996,ch6,第71-79页中所述的乳化剂和稳定剂。冰结构蛋白冰结构蛋白(isp)可适当地用于增强冷冻甜点的再冻结性质。然而,ips的已知缺点是它们倾向于增加冷冻甜点的硬度,特别是如果甜点是冰糕或类似的甜点时。现已惊奇地发现,当冷冻甜点包含本发明的去原纤的初生细胞壁材料与isp的组合时,可以克服该缺点,而不失去使用ips的益处。冰结构蛋白(isp)是可以影响当冷冻发生时形成的冰晶体的形状和大小并抑制冰的再结晶的蛋白质(clarke等人,cryoletters23:89-92(2002))。许多这些蛋白质最初在生活在零度以下的环境中的生物体中被鉴定,并被认为保护生物免受生物体细胞中冰晶形成的有害作用。因此,许多冰结构蛋白也被称为抗冻蛋白(afp)。在本发明的上下文中,isp定义为具有冰再结晶抑制(ri)活性的蛋白质。用于本发明的冷冻甜点中的isp可以得自任何来源,只要它们适于包含在食品中。迄今为止,已经在鱼、植物、地衣、真菌、微生物和昆虫中鉴定了isp。此外,已经描述了许多合成的isp。合适的isp及其来源描述于wo2005/058058中。本发明的冷冻甜点优选包含冰结构蛋白。更优选地,其包含至少0.0005重量%的isp。isp可以以非常低的浓度使用,并且因此优选地,冷冻甜点包含少于0.05重量%的isp。更优选地,其包含0.001-0.01重量%的isp,并且甚至更优选0.005-0.01重量%。具有若干部分的冷冻甜点根据本发明的任何方面的冷冻甜点均可以是旨在和适合消费的即时食用产品,或者可以是最终产品的一部分。后者可能是最终产品仅有一部分是如本文所述的冷冻甜点而另一部分是不同类型的冷冻甜点的情况。例如,最终产品可能具有不同类型的冷冻甜点的核心或包层,或者例如具有非冰面层如巧克力层。这里也考虑这样的包含不同形式的冷冻甜点材料的甜点。硬度根据本发明,在冷冻甜点中,制造后的后硬化惊奇地被减少或抑制,而其它期望的特征通常被保留。因此,冷冻甜点优选在-10℃(零下10摄氏度)保存至少三天后具有小于5n,更优选小于4n,并且甚至更优选小于3n的针穿硬度(penetrometrichardness)。类似地,在-18℃(零下18摄氏度)保存至少九十天之后,冷冻甜点优选具有小于100n,更优选小于75n,并且甚至更优选小于50n的针穿硬度。通过针穿测量法(penetrometry)测量针穿硬度,为使用2mm直径的探头、2mm/s的穿透速度和10mm的穿透深度所需的最大力。如实施例部分所述适当地测量针穿硬度。制备冷冻甜点的方法根据第五方面,本发明涉及制备如上文所定义的冷冻甜点的方法。根据本方法制做的冷冻甜点令人惊讶地在冷冻条件下储存时显示出减少或抑制的后硬化。据信这些惊人的性质是由于特定的加工条件及其对包含纤维素微纤丝的初生细胞壁材料的影响。本发明的方法是如下方法,其中所述冷冻甜点包含a.水;b.1-40重量%的凝固点抑制剂;和c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料;并且其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织;并且·至少80重量%的所述纤维素微纤丝直径小于50nm。方法优选是制备如上文所描述的本发明的冷冻甜点的方法。因此,关于本发明的冷冻甜点的任何有选项于此也适用。方法优选是制备冰糕形式的冷冻甜点的方法。特别优选其为制备根据本发明第一方面或根据本发明第二方面或根据本发明第三方面或根据本发明第四方面的冷冻甜点的方法。步骤i的初生细胞壁材料的来源优选如上关于冷冻甜点所述。特别优选初生细胞壁材料包含柑橘纤维。方法的步骤ii包括将初生细胞壁材料分散在水相中。分散初生细胞壁材料的任何方法都考虑,只要其产生适于在步骤iii中进行处理的分散体即可。因此,分散步骤可包括搅拌、混合或相对低剪切的另一种处理如用顶置式或在线silverson混合器处理。步骤ii的水分散体包含0.1-4重量%的初生细胞壁材料。优选地,其包含0.1-3重量%,更优选0.5-1.5重量%的初生细胞壁材料。为获得包含去原纤的初生细胞壁材料的分散体的步骤iii的处理包括使初生细胞壁材料受到机械剪切和/或汽蚀。为此效果,处理包括高剪切处理步骤,所述高剪切处理步骤选自500-2000巴压力下的高压均化和500-2000巴压力下的微流化。高压均化和微流化都是众所周知的技术,涉及众所周知的设备。优选地,高剪切处理步骤是如所具体说明的高压均化,更优选地,其为500-1000巴压力下并且甚至更优选600-800巴压力下的高压均化。因此,特别优选步骤ii的水相包含0.5-1.5重量%的初生细胞壁材料并且步骤iii的高剪切处理步骤为600-800巴压力下的高压均化。获得本发明的益处所需的精确压力和通过次数和/或处理阶段的数目(无论是高压均化还是微流化)可取决于例如存在的初生细胞壁材料的浓度和在此步骤之前的粉碎/预处理水平,但容易通过实验确定。步骤iii中的处理优选使得该处理后去原纤的初生细胞壁材料的纤维去原纤参数fdp为至少0.10hz。这里纤维去原纤参数fdp如上所描述那样定义和测定。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.11hz,更优选至少0.12hz,甚至更优选至少0.13hz并且还更优选至少0.15hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz并且甚至更优选至多0.20hz的纤维去原纤参数fdp。类似地,优选步骤iii中的处理使得该处理后去原纤的初生细胞壁材料的纤维均匀性参数fhp为至少0.022。这里纤维去原纤参数fhp如上所描述那样定义和测定。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.023,更优选至少0.025,甚至更优选至少0.027并且还更优选至少0.030的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.10,更优选至多0.070并且甚至更优选至多0.060的纤维去原纤参数fhp。如果水相基本上由水和初生细胞壁材料组成,则可以方便地测定fdp和/或fhp,因为在那种情况下,测定fdp和/或fhp的方案的样品制备步骤是相对直接的。当步骤iii中的处理使得fdp和/或fhp的上述优选要求被满足时,获得由本方法制做的冷冻甜点的惊人的有益性质(就减少或抑制后硬化同时保留其它期望的性质而言)。方法的步骤iv包括冷冻甜点。涵盖任何合适的冷冻方法。因此,冷冻步骤可包括例如冷冻甜点制造领域中众所周知的静止冷冻、鼓风冷冻、快速冷冻、刮板式冷冻(scrapedfreezing)中的一种或多种。在步骤ii之前、在步骤ii和iii之间、在步骤iii和iv之间或者在步骤iv之后,将除初生细胞壁材料之外的冷冻甜点组分独立地混入水相中。如本领域技术人员已知和理解的情况,取决于组分类型和冰糕形式,其他组分可以在最方便和/或有效的阶段混入。唯一的要求是步骤iii中的水分散体适合于其所以经受的处理。本发明的方法可适当地包括在冷冻甜点制造领域,特别是在冰糕制造领域中通常和公知的其它常规步骤和设备。本发明还提供制备冷冻甜点的方法,其中所述冷冻甜点包含a.水;b.1-40重量%的凝固点抑制剂;和c.0.1-4重量%的包含微纤丝的去原纤的初生细胞壁材料;并且其中,·所述初生细胞壁材料源自植物薄壁组织;并且·至少80重量%的所述微纤丝直径小于50nm;并且其中所述方法包括以下步骤:i.提供初生细胞壁材料源;ii.将所述初生细胞壁材料分散在水相中,从而形成包含0.1-4重量%的所述初生细胞壁材料的水分散体;iii.处理所述水分散体以获得包含去原纤的初生细胞壁材料的分散体,其中所述处理包括一个或多个高剪切处理步骤,并且其中所述处理使得所述去原纤的初生细胞壁材料的纤维去原纤参数fdp为至少0.10hz或者所述去原纤的初生细胞壁材料的纤维均匀性参数为至少0.022;iv.冷冻所述甜点;其中在步骤ii之前、在步骤ii和步骤iii之间、在步骤iii和步骤iv之间或者在步骤iv之后,将所述冷冻甜点的其它组分独立地混入水相中。关于根据本发明第五方面的方法的优选项和考量简单地适用于该方法。因此,例如,步骤iii的处理通常包括一个或多个选自高压均化和微流化的高剪切处理。对于该方法,这样的处理步骤的任何数目和顺序都被涵盖,只要所得的冷冻甜点的fdp和/或fhp的要求得到满足。其它步骤可以存在于这样的多个剪切步骤之间,包括例如混入其它成分。能够通过本发明的方法得到的冷冻甜点根据第六方面,本发明涉及能够通过根据本发明第五方面的方法获得的冷冻甜点,因为本发明的方法产生显示出期望性质的冷冻甜点,所述期望性质包括因该方法所得特定结构所致的减少或抑制的后硬化。优选地,该冷冻甜点能够通过如下的该方法获得,其中步骤ii的水分散体包含0.5-1.5重量%的初生细胞壁材料并且步骤iii的高剪切处理步骤为600-800巴压力下的高压均化。同样地,优选甜点能够通过如下的本发明的方法获得,其中步骤iii中的处理优选使得在该处理后去原纤的初生细胞壁材料的纤维去原纤参数fdp为至少0.10hz。这里纤维去原纤参数fdp如上所描述那样定义和测定。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.11hz,更优选至少0.12hz,甚至更优选至少0.13hz并且还更优选至少0.15hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz并且甚至更优选至多0.20hz的纤维去原纤参数fdp。类似地,优选甜点能够通过如下的本发明的方法获得,其中步骤iii中的处理使得在该处理后去原纤的初生细胞壁材料的纤维均匀性参数fhp为至少0.022。这里纤维去原纤参数fhp如上所描述那样定义和测定。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.023,更优选至少0.025,甚至更优选至少0.027并且还更优选至少0.030的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.10,更优选至多0.070并且甚至更优选至多0.060的纤维去原纤参数fhp。本发明的用途本发明还涉及包含纤维素微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述冷冻甜点具有至少0.11hz的微纤丝可用性参数map。这里,冷冻甜点优选地具有至少0.13hz并且更优选至少0.15hz的微纤丝可用性参数map。冷冻甜点优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz并且甚至更优选至多0.20hz的微纤丝可用性参数map。本发明还涉及包含纤维素微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述冷冻甜点具有至少0.022的甜点均匀性参数chp。这里,冷冻甜点优选具有至少0.025,更优选至少0.030的甜点均匀性参数chp。冷冻甜点优选具有至多0.10,更优选至多0.07并且甚至更优选至多0.06的均匀性参数hp。本发明还涉及包含纤维素微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述去原纤的细胞壁材料具有至少0.010hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.11hz,更优选至少0.12hz,甚至更优选至少0.13hz并且还更优选至少0.15hz的纤维去原纤参数fdp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.50hz,更优选至多0.30hz并且甚至更优选至多0.20hz的纤维去原纤参数fdp。本发明还涉及包含纤维素微纤丝的去原纤的细胞壁材料减少包含水和1-40重量%的凝固点抑制剂的冷冻甜点的后硬化的用途,其中所述去原纤的细胞壁材料具有至少0.022的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至少0.023,更优选至少0.025,甚至更优选至少0.027并且还更优选至少0.030的纤维均匀性参数fhp。去原纤的初生细胞壁材料优选具有至多0.10,更优选至多0.070并且甚至更优选至多0.060的纤维去原纤参数fhp。实施例借助以下非限制性实施例,可以更好地理解本发明。概述微纤丝表征:纤维素微纤丝的结晶度使用以下方案,使用广角x射线散射(waxs)测定结晶度。用具有gadds(generalareadetectordiffractionsystem)的brukerd8discoverx射线衍射仪(购自bruker-axs,delft,nl)(部件号:882-014900序列号:02-826)以θ/θ配置进行测试。使用铜阳极,并且选择具有0.15418nm波长的k-α辐射。所使用的仪器参数如下表所示。表2:用于waxs测量的d8discover仪器参数2θ(9–42°)θ110.000θ210.000/25.000检测器偏压(kv/ma)40/40时间(秒)300准直仪(mm)0.3检测器距离(cm)25显像管阳极cu根据下列等式计算结晶度xc:通过使用brukereva软件(版本12.0),将结晶相衍射线的面积与无定形相的面积分开。微纤丝表征:纤维素微纤丝的直径使用透射电镜(tem)直接测定纤维素微纤丝的直径(d.harris等人,toolsforcelluloseanalysisinplantcellwallsplantphysiology,2010(153),420)。用蒸馏水稀释富含初生细胞壁材料的植物源的分散体,产生大部分为单一纤维或单一纤维簇的薄层。将分散体在仅300目铜tem格栅(agarscientific)上成像,并且使用在200kv电压下操作的tecnai20透射电镜(feicompany)成像。为了提高单个微纤丝之间的图像反差,ph5.2的2%磷钨酸溶液用作负染剂。在2%磷钨酸中孵育该纤维负载的tem格栅,并且在除去过量液体后风干。离心力当给出离心力时,其作为三维“相对离心力”给出,三维“相对离心力”被定义为rω2/g,其中g=9.8m/s2,为地球重力加速度,r为离心机旋转半径,ω为角速度(弧度/单位时间)。角速度为ω=rpm×2π/60,其中rpm为离心机“转数/分钟”。实施例1-包含柑橘纤维的冷冻甜点制备包含柑橘纤维的、具有不同的微纤丝可用性参数map和均匀性参数hp值的冰糕组合物。比较储存后的硬度。冰糕预混料的制备在室温下,向净化水(millipore)中加入蔗糖(基于总配方,20重量%)。搅拌混合物直至所有蔗糖都溶解。然后,加入0.8重量%粉末形式的柑橘纤维(herbacelaq+typen,购自herbafoodingredientsgmbh),并且使用具有1mm环形孔的筛网的silversonl4rt-a顶置式搅拌器在3500rpm下搅拌混合物10分钟。通过分别使一部分分散体在500巴(实施例1:1)、700巴(实施例1:2)以及1000巴(实施例1:3)的压力下通过高压均质机(nirosoavins1001l)来制备各实施例组合物1:1至1:3。通过使用g10z相互作用室使一部分分散体在1200巴下通过微流化器(来自microfluidics的m110-s)来制备实施例1:4。这里,微流化器的水浴未被冷却(在冷却浴中没有水)。在1000ml塑料烧杯中收集所有均化组合物,并且在5℃下储存过夜。对比预混料的制备通过向净化水(millipore)中加入蔗糖(基于总配方,20重量%)并且搅拌直至所有蔗糖都溶解来制备比较例1:a。然后,加入0.8重量%粉末形式的柑橘纤维(herbacelaq+typen,购自herbafoodingredientsgmbh),并且使用具有1mm环形孔的筛网的silversonl4rt-a顶置式搅拌器在3500rpm下搅拌混合物10分钟。通过向净化水(millipore)中加入蔗糖(基于总配方,20重量%)并且搅拌直至所有蔗糖都溶解来制备比较例1:b。然后,加入0.8重量%粉末形式的柑橘纤维(herbacelaq+typen,购自herbafoodingredientsgmbh),并且使用桨式搅拌器在200rpm下搅拌混合物10分钟。随后在140巴的压力下使样品通过高压均质机(nirosoavins1001l)。冰糕的制备由上述实施例预混料和比较例预混料制备冰糕。在每种情况下,将500克分散体放入意式冰淇淋机(gelatochef2500)中并且(在搅拌下)冷却至-3℃。将由此获得的冰糕放入样品瓶(高度68mm,直径33mm)中。在每个瓶中放入约50ml的冰糕,并在-10℃下储存三天。冰糕表征i:微纤丝可用性参数map的测定测定实施例1:1–1:3及比较例1:a和1:b的各冰糕的微纤丝可用性参数map。确定参数的方法包括三个部分:样品制备、用于收集cpmg驰豫数据的nmr测量,以及用于计算map值的数据分析。map-样品制备从冷冻箱(-10℃)取出具有冰糕的瓶,并且在5℃下储存一晚以融化。通过取37.5克样品并且在室温下于500ml塑料烧杯中加入262.5克去离子水来将融化的冰糕样品稀释到0.100重量%的柑橘纤维浓度。使用silversonl4rt-a顶置式搅拌器(小筛,1mm孔),在80mm直径烧瓶中于2000rpm下将混合物搅拌60秒。该混合步骤确保柑橘纤维均匀分布于稀释样品体积。最后用柠檬酸将ph调节至3.3。将所得稀释和ph标准化样品的等分试样直接转移到直径10mm的18cm平底nmr管,填充高度为1cm。为了背景校正,在15000的相对离心力下将另一等分试样在2mleppendorf杯中离心(eppendorfcentrifuge5416)10分钟,随后将没有纤维的顶层(基质)转移到另一18cm平底nmr管,填充高度为1cm,我们将其称为基质参比样品。在测量之前,孵育样品和基质参比样品,并在20℃下平衡10分钟。map-测量收集各样品和各基质参比样品的cpmg弛豫衰减数据。采用brukermq20minispec,在质子共振频率为20mhz下操作,其装有稳定在20℃的可变温度探头。在20℃下,使用cpmg(carrpurcellmayboomgill)t2弛豫脉冲序列进行测量以观测弛豫衰减(参见effectsofdiffusiononfreeprecessioninnuclearmagneticresonanceexperiments,carr,h.y.,purcell,e.m.,physicalreview,volume94,issue3,1954,pages630-638/modifiedspin-echomethodformeasuringnuclearrelaxationtimes,meiboom,s.,gill,d.,reviewofscientificinstruments,volume29,issue8,1958,pages688-691)。180°脉冲间隔设置为200μs、30秒再循环延迟时间、5μs(微秒)的180°-脉冲长度以及使用14.7k180°-脉冲,收集数据。序列采用相循环和复模式检测。在测量之前,通过验证纯水的t2*>2ms来检查这些测量所用nmr系统的合适性(就场均匀性等而言)。map-数据分析使用奇异值分解对正交数据进行相校正,从而用matlab处理数据(towardsrapidanduniquecurveresolutionoflow-fieldnmrrelaxationdata:trilinearslicingversustwo-dimensionalcurvefitting”,pedersen,h.t.,bro,r.,engelsen,s.b.,journalofmagneticresonance.08/2002;157(1),pages141-155.doi:10.1006/jmre.2002.2570)。使用matlab非负最小二乘约束函数isqnonneg,将所得相校正的数据拉普拉斯逆变换为t2谱(lawson,c.l.和r.j.hanson,solvingleastsquaresproblems,prentice-hall,1974,chapter23,p.161),非负最小二乘约束函数isqnonneg具有t2的边界设定,需要t2在0.01-10秒的范围内,并且正则化参数λ设定为0.2。图1示出分别从实施例1:2的样品和相应的基质参比样品的拉普拉斯逆变换得到的t2分布曲线。图2示出分别从比较例1:b的样品和相应的基质参比样品的拉普拉斯逆变换得到的t2分布曲线。对于每个样品,如下处理数据以获得map:在特定样品的t2分布曲线中,鉴定对应于水质子的峰,通过在本体水相与去原纤的初生细胞壁材料表面之间交换对其t2进行平均。据信该交换(和所得平均)是本体与纤维素表面位点之间的扩散和化学交换所致。如在图1和2的谱中可以看到的,在本案中,容易区别本体水相的峰,因为它们是强度最高的峰。类似地鉴定基质参比样品中对应于本体水相的峰。通过计算峰的强度-加权平均值来确定平均t2值。r2被定义为该平均t2的倒数,即r2=1/t2,并以hz来表达。给定样品的微纤丝可用性参数map计算为样品r2和基质参比样品r2之间的差:map=r2(样品)-r2(基质参比)因此,map为本体水与可用微纤丝表面相互作用的度量(k.r.brownstein,c.e.tarr,journalofmagneticresonance(1969)volume26,issue1,april1977,pages17–24)。实施例就它们的map的表征在表3中给出。表3:微纤丝可用性参数冰糕表征ii:甜点均匀性参数chp的测定测定实施例1:1–1:3及比较例1:a和1:b的各冰糕的甜点均匀性参数chp。确定参数的方案包括三个部分:样品制备、共焦扫描激光显微术(cslm),以及用于计算chp值的数字图像分析。chp-样品制备从冷冻箱(-10℃)取出具有冰糕的瓶,并且在5℃下储存一晚以融化。通过取37.5克实施例组合物并且在室温下于500ml塑料烧杯中加入262.5克去离子水来将融化的冰糕样品稀释到0.100重量%的柑橘纤维浓度。使用silversonl4rt-a顶置式搅拌器(小筛,1mm孔),在80mm直径烧瓶中于2000rpm下将混合物搅拌60秒。该混合步骤确保柑橘纤维均匀分布于稀释样品体积。对于每个实施例,用finn移液管(labsystems4500,h37095)取2ml体积的所得稀释样品,并且置于eppendorfsafelock管中。用finn移液管(labsystems4027,h56580)向其中加入20μl0.5w/v%刚果红染料水溶液。轻轻摇动样品以使染料散开。为了成像,用染色的样品材料填充样品保持器。样品保持器由两个由间隔物分隔开的盖滑动件组成。间隔物为3mm厚的矩形玻璃片,其具有样品可以在其中沉积的圆孔(0.5cm直径)。chp-共焦扫描激光显微术在leicatcs-sp5共焦显微镜与dmi6000反向显微镜框架上进行共焦扫描激光显微术(cslm)。以58%的固定激光功率使用在561nm处发射的二极管泵浦固体(dpss)561激光器,从而用刚果红染料成像。为了检测,系统装有三个pmt(光电倍增管)检测器。使用符合din58884/iso8036/1的无自动荧光的leica浸镜油,用数值孔径为1.25的油浸40x物镜(截面厚度0.968μm)采集图像。在单一深度处,进行5×5图像的瓦片扫描,以获得25个用于分析的非覆盖图像。小心不要在样品保持器的边缘成像;在离边缘几微米距离处获得图像。当样品含有气泡的时候,特别小心地记录图像,从而图像在视野内不含有任何气泡。使用防止图像过饱和的“智能增益”和“智能偏离”选项,调节pmt。随后调节密度和增益,从而像素在0.1与5%得到饱和。图像的分辨率被设定为1024×1024像素,并且使用为3的线平均。每个像素代表378.8×378.8nm的采样区域。在成像后,构成瓦片扫描的单个图片输出为具有24位rgb颜色深度而不包括任何比例尺的tiff文档(在图像分析中不会使用重构的更大瓦片图像)。根据本发明的实施例与比较例之间的不同在显微照片中清晰可见。图3示出了比较例1:b的样品显微照片(0.10重量%),正如上述设置所记录。图4示出了实施例1:2的样品显微照片(0.10重量%),同样条件下所记录的。同样地,图5示出了比较例1:b的另一样品显微照片(即,0.8重量%),但是其它方面如上述处理和成像。同样地,图6示出了实施例1:2的样品显微照片(即,0.8重量%),其省略了稀释步骤,但是其它方面如上述处理和成像。所有四张显微照片代表387.5×387.5μm的采样面积。chp-数字图像分析对于图像分析,一起使用了microsoftexcel和程序imagej(免费下载于:http://rsbweb.nih.gov/ij/)。在分析前将每个图像转化为8位灰度。在分析中,首先使用允许0.4%的像素变得饱和的imagej的“增强对比”选项,将图像标准化(即,直方图延伸)。在这一步骤后,对含有像素强度分布的直方图进行计算。所得列表含有像素的数量/通道,其中每个通道代表图像中256个灰度值的一个,该列表被转移至microsoftexcel。在确定分布最大值之前,通过目视观察,将峰值/离群值从获得的直方图中移除,考虑到显示峰值的通道比其紧邻通道(约2倍或更大)具有显著较大的值。当直方图显示光滑分布的时候,峰值大于这一分布的最大值,并且位于真最大值的右侧或左侧。移除后,确定分布的最大值并且除以2。通过对具有大于或等于最大值一半的值的通道计数,确定半峰全宽(fwhm)。任何含有0值(邻近具有大于最大值一半的计数的通道)的通道包括在计数中。获得的通道计数除以256,以获得用于每个单独图像的0和1的fwhm数字。随后,对于特定样品的单个图像,将甜点均匀性参数计算为所得fwhm值的算术平均值。所报告的误差为这一平均值的标准偏差。实施例在其chp中的特征总结于表4。表4:甜点均匀性参数chp冰糕性质:后硬化的评估使用textureanalyzer针入度计(stablemicrosystems,taxtplus),使用针穿硬度法,确定冷冻保存样品的硬度,该针入度计装备有2mm直径的探针和使用peltier板制冷系统(stablemicrosystems,peltierplatecontroller)保持在0℃的温度控制室。从冰箱中取出样品瓶并马上分析。穿透速度为2mm/s并且穿透深度设定为10mm。在10mm的穿透期间,测定所需的力。在10mm穿透期间测定的最大力用于描述硬度。对于每个样品,测量离样品瓶壁至少5mm以及不同测量位置间至少5mm,这进行5次。每个实施例和比较例中得到的平均值报道于表5中。表5:在-10℃保存三天后的冰糕硬度最大力(n)标准偏差1:a11.741.681:b4.170.351:12.800.491:22.070.301:32.690.481:43.240.50显示在表5中的结果示出了根据本发明组合物中由最大穿刺力(单位为n)所测量的硬度得到了显著降低,该组合物包括去原纤的初生细胞壁材料和具有根据本发明范围内的map或chp。随着增加微纤丝植物细胞材料的含量,发现了额外的硬度降低。实施例2:包含isp和去原纤的柑橘纤维的冰糕预混料的制备组成和制备细节概括在表6所有的实施例中。使用电热水器,将除盐水加热煮沸。其次,加入蔗糖。使用silversonlr4t-a顶置式搅拌器(小筛,1mm孔),在3500rpm的搅拌5分钟下,将柑橘纤维(herbacelaq+typenexherbafood)加入2000ml和135mm直径的塑料烧杯中。所得分散体经过500巴(第一步为450巴,第二步为50巴)的高压均质机(hph)或经过使用1200巴的g10z室的微流化器m-110s(除了microfluidics,mf),正如表6所示。微流化器的冷水浴没有被冷却(在冷却浴没有水)。在1000mlpet瓶中收集产品。将瓶上下颠倒10分钟。其次,将瓶子放在冰水中冷却至5℃。对于这些包含冰结构蛋白(isp)的样品,下一步为通过手动搅拌冷却的分散体以加入isp(ispii型,c259,exfermpro,16.2g/l储备液)。在那些情况中,3.47g的isp储备液加入至746.53g的预混料中(总重量为750克)。在冰糕制备之前,产品在5℃下过夜保存。比较例2:a为没有去原纤的柑橘纤维材料的冰糕。比较例2:b为包含isp但没有去原纤的柑橘纤维材料的冰糕。表6:基于包含isp甜点冰糕的组成和硬度冰糕的制备对于每个实施例,将700克量的预混料放入意式冰淇淋机(gelatissimonemox)中并冷冻(在搅拌下)直到搅拌停止或当搅拌期间所形成的冰物料不再混合。通常,这进行约20-40分钟。将所得冰糕以每份50ml在-18℃下保存在55ml塑料瓶中。硬度测量如以上在实施例1中所描述分析储存后的冰糕硬度。在-18℃下分别储存4天和90后的冰糕硬度在表6中提供。比较例2:a和2:b的比较显示isp造成显著增加的后硬化。实施例2:3和2:4表明去原纤的初生细胞壁材料能够减少冰糕的后硬化,不管是否存在冰结构蛋白。当前第1页12当前第1页12
当前第1页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1