本发明属于家畜养殖饲料
技术领域：
，特别涉及一种含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂，同时还提供了该添加剂的制备方法。
背景技术：
：仔猪断奶后，由于饮食的改变易发生应激反应，严重时导致腹泻和死亡，对于畜牧业养殖者造成巨大的经济损失。低剂量抗生素长期使用能够帮助仔猪在断奶以后降低应激反应和腹泻，促进其消化与生长，避免由此带来的经济损失。然而，抗生素长期使用也存在潜在的危害，例如导致病原菌耐药性的产生、破坏宿主肠道微生物平衡、引起宿主内源性感染和二重感染、造成动物机体免疫力下降、抗生素在动物体内残留和环境污染等潜在的危害。开发能替代抗生素的绿色饲料添加剂对于畜牧业健康发展迫在眉睫。现有抗生素替代物种类主要有：植物提取物（中草药）、微生态制剂、饲用酶制剂、噬菌体及内溶素、靶向病原抑制剂、免疫调节剂和抗菌肽等，而这些抗生素替代物存在稳定性差、抗菌谱窄和生产成本过高等问题。因此，迫切需要开发更安全、更高效的替代饲用抗生素的饲料添加剂。六神曲（MassaMedicataFermentata，MMF）是传统发酵用于中药药效成分转化的代表之一，历史悠久，由青蒿、辣蓼、苍耳、苦杏仁、赤小豆、麦麸和面粉按一定比例混合经自然发酵而成的曲剂。性温、味甘、辛，具有很强的抑菌和杀菌功效，且富含多种消化酶，如蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶等，具有消食化积、健脾开胃、中止泻的作用，且其中蛋白质、脂肪和糖类三大营养物质含量较为丰富，其中蛋白质含量最高，同时六神曲中还含有15种含量较高的必须营养元素（K、P、Mg、Ca、Na、Fe、Zn、Mg、Cu、Sr、Ni、Mo、Cr、V、Co）。益生菌能够维持肠道菌群正常化，提高免疫力、改善新陈代谢和提高营养物质的消化吸收等功能。益生菌在动物体内大量繁殖，并附着于肠粘膜表面，阻止有害菌的附着与繁殖，还会产生乳酸、乙酸，使肠道PH值下降，有利提高饲料报酬。益生菌还可产生溶菌酶、过氧化氢等起到抑制和杀死病原性大肠杆菌、梭菌、沙门氏菌等，从而恢复并保持正常的消化道菌群的优势。技术实现要素：本发明的目的是解决上述现有技术问题，本发明提供一种含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂的配方，其由六神曲、凝结芽孢杆菌菌粉、纳豆芽孢杆菌菌粉、酿酒酵母菌粉、粪肠球菌菌粉、植物乳杆菌菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉、唾液乳杆菌菌粉和嗜热链球菌菌粉混合制成。本发明提供的饲料添加剂的配方能促进仔猪促生长、提高仔猪免疫力和抗病力、降低仔猪腹泻率和死亡率的优点。本发明所述的一种含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂，其特征在于由以下原料按重量比制成的：六神曲88-96份、凝结芽孢杆菌菌粉0.5-1.5份、纳豆芽孢杆菌菌粉0.5-1.5份、酿酒酵母菌粉0.5-1.5份、粪肠球菌菌粉0.5-1.5份、植物乳杆菌菌粉0.5-1.5份、鼠李糖乳杆菌菌粉0.5-1.5份、唾液乳杆菌菌粉0.5-1.5份、嗜热链球菌菌粉0.5-1.5份。本发明所述的所述的饲料添加剂，其特征在于其优配比：六神曲92、凝结芽孢杆菌菌粉1、纳豆芽孢杆菌菌粉1、酿酒酵母菌粉1、粪肠球菌菌粉1、植物乳杆菌菌粉1、鼠李糖乳杆菌菌粉1、唾液乳杆菌菌粉1、嗜热链球菌菌粉1。本发明所述的饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：1）六神曲的制备首先将各个中药成分粉碎，然后称取100份青蒿、100份辣蓼、100份苍耳，加2倍水，煎煮0.5~1.5h之后，趁热与20份苦杏仁、20份赤小豆、500份面粉和1000份麦麸充分混匀，密封，于121℃灭菌30min，冷却至室温；在无菌条件下，接种凝结芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母菌悬液（107cfu/mL），接种量为4%（v/w），再接入市售生六神曲，接种量为2%（w/w），混匀，于28-32℃，相对湿度70-80%，发酵9天；完成后于40-50℃减压烘干，粉碎，过100目；2）益生菌的制备凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌使用MRS培养基；纳豆芽孢杆菌使用LB培养基；嗜热链球菌使用M17培养基；酿酒酵母使用麦芽汁培养基。凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌及嗜热链球菌采用厌氧发酵法培养菌体。配制1L液体培养基，放入厌氧发酵瓶中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1mL，于37℃培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体。纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母采用好氧发酵法培养菌体。配制2L液体培养基，放入5L发酵罐中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1mL；纳豆芽孢杆菌于37℃下培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体；酿酒酵母于30℃下培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体。3）保护剂制备称取脱脂奶粉100份，乳糖100份，甘油10份，用去离子水定容至1L，110℃灭菌20min，4℃储存备用；4）将步骤2）中的八种菌体加入步骤3）的保护剂（菌体：保护剂=1:4-5），将菌体充分悬浮，放入冻干机中，冷冻干燥制备成菌粉。5）将步骤4）制备的八种益生菌菌粉与步骤1）制备的六神曲，按每种菌粉添加量0.5-1.5%的比例混合入六神曲中，即得猪饲料添加剂。本发明的优点和有益效果是：采用生六神曲制备六神曲，其特点是富含多种消化酶（如蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶等），具有消食化积、健脾开胃、和中止泻的作用，六神曲制备过程中，接种了3种菌（凝结芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母菌），有效抑制了外来有害菌的污染，提高了中药有效成分的转化和释放效率。本发明利用生六神曲和益生菌菌粉复合作为仔猪饲料添加剂，充分发挥了中药六神曲的抑菌和杀菌功效，和富含多种消化的消食化积、健脾开胃、和中止泻功效；同时，添加的8种益生菌具有维持肠道正常微生物菌群、提高免疫力、提高营养物质的消化吸收等功能。这些功能的协同作用，可以有效促进仔猪促生长、提高仔猪免疫力和抗病力、降低仔猪腹泻率和死亡率、改善仔猪肠道环境，同时具有部分替代饲用抗生素的功能。具体实施方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。实施例11）六神曲的制备首先将各个中药成分粉碎，然后称取100份青蒿、100份辣蓼、100份苍耳，加2倍水，煎煮0.5~1.5h之后，趁热与20份苦杏仁、20份赤小豆、500份面粉和1000份麦麸充分混匀，密封，于121℃灭菌30min，冷却至室温；在无菌条件下，接种凝结芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母菌悬液（107cfu/mL），接种量为4%（v/w），再接入市售生六神曲，接种量为2%（w/w），混匀，于28℃，相对湿度70-80%，发酵9天；完成后于50℃减压烘干，粉碎，过100目；2）益生菌的制备凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌使用MRS培养基；纳豆芽孢杆菌使用LB培养基；嗜热链球菌使用M17培养基；酿酒酵母使用麦芽汁培养基。凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌及嗜热链球菌采用厌氧发酵法培养菌体。配制1L液体培养基，放入厌氧发酵瓶中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1ml，于37℃培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体。纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母采用好氧发酵法培养菌体。配制2L液体培养基，放入5L发酵罐中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1ml；纳豆芽孢杆菌于37℃下培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体；酿酒酵母于30℃下培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体。3）保护剂制备称取脱脂奶粉100份，乳糖100份，甘油10份，用去离子水定容至1L，110℃灭菌20min，4℃储存备用；4）将步骤2）中的八种菌体加入步骤3）的保护剂（菌体：保护剂=1:5），将菌体充分悬浮，放入冻干机中，冷冻干燥制备成菌粉。5）将步骤1）制备的六神曲92g、步骤4）制备的八种益生菌菌粉：凝结芽孢杆菌菌粉1g、纳豆芽孢杆菌菌粉1g、酿酒酵母菌粉1g、粪肠球菌菌粉1g、植物乳杆菌菌粉1g、鼠李糖乳杆菌菌粉1g、唾液乳杆菌菌粉1g和嗜热链球菌菌粉1g，混合均匀后即得猪饲料添加剂。实施例21）六神曲的制备首先将各个中药成分粉碎，然后称取100份青蒿、100份辣蓼、100份苍耳，加2倍水，煎煮0.5~1.5h之后，趁热与20份苦杏仁、20份赤小豆、500份面粉和1000份麦麸充分混匀，密封，于121℃灭菌30min，冷却至室温；在无菌条件下，接种凝结芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母菌悬液（107cfu/ml），接种量为4%（v/w），再接入市售生六神曲，接种量为2%（w/w），混匀，于30℃，相对湿度70-80%，发酵9天；完成后于45℃减压烘干，粉碎，过100目；2）益生菌的制备凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌使用MRS培养基；纳豆芽孢杆菌使用LB培养基；嗜热链球菌使用M17培养基；酿酒酵母使用麦芽汁培养基。凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌及嗜热链球菌采用厌氧发酵法培养菌体。配制1L液体培养基，放入厌氧发酵瓶中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1ml，于37℃培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体。纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母采用好氧发酵法培养菌体。配制2L液体培养基，放入5L发酵罐中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1ml；纳豆芽孢杆菌于37℃下培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体；酿酒酵母于30℃下培养至菌数达到109cfu/ml，离心收集菌体。3）保护剂制备称取脱脂奶粉100份，乳糖100份，甘油10份，用去离子水定容至1L，110℃灭菌20min，4℃储存备用；4）将步骤2）中的八种菌体加入步骤3）的保护剂（菌体：保护剂=1:5），将菌体充分悬浮，放入冻干机中，冷冻干燥制备成菌粉。5）将步骤1）制备的六神曲88g、步骤4）制备的八种益生菌菌粉：凝结芽孢杆菌菌粉1.5g、纳豆芽孢杆菌菌粉1.5g、酿酒酵母菌粉1.5g、粪肠球菌菌粉1.5g、植物乳杆菌菌粉1.5g、鼠李糖乳杆菌菌粉1.5g、唾液乳杆菌菌粉1.5g和嗜热链球菌菌粉1.5g，混合均匀后即得猪饲料添加剂。实施例31）六神曲的制备首先将各个中药成分粉碎，然后称取100份青蒿、100份辣蓼、100份苍耳，加2倍水，煎煮0.5~1.5h之后，趁热与20份苦杏仁、20份赤小豆、500份面粉和1000份麦麸充分混匀，密封，于121℃灭菌30min，冷却至室温；在无菌条件下，接种凝结芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母菌悬液（107cfu/ml），接种量为4%（v/w），再接入市售生六神曲，接种量为2%（w/w），混匀，于28℃，相对湿度70-80%，发酵9天；完成后于40℃减压烘干，粉碎，过100目；2）益生菌的制备凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌使用MRS培养基；纳豆芽孢杆菌使用LB培养基；嗜热链球菌使用M17培养基；酿酒酵母使用麦芽汁培养基。凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌及嗜热链球菌采用厌氧发酵法培养菌体。配制1L液体培养基，放入厌氧发酵瓶中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1mL，于37℃培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体。纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母采用好氧发酵法培养菌体。配制2L液体培养基，放入5L发酵罐中，121℃灭菌30min，冷却至室温，接入-80℃保存的菌种1ml；纳豆芽孢杆菌于37℃下培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体；酿酒酵母于30℃下培养至菌数达到109cfu/mL，离心收集菌体。3）保护剂制备称取脱脂奶粉100份，乳糖100份，甘油10份，用去离子水定容至1L，110℃灭菌20min，4℃储存备用；4）将步骤2）中的八种菌体加入步骤3）的保护剂（菌体：保护剂=1:5），将菌体充分悬浮，放入冻干机中，冷冻干燥制备成菌粉。5）将步骤1）制备的六神曲96g、步骤4）制备的八种益生菌菌粉：凝结芽孢杆菌菌粉0.5g、纳豆芽孢杆菌菌粉0.5g、酿酒酵母菌粉0.5g、粪肠球菌菌粉0.5g、植物乳杆菌菌粉0.5g、鼠李糖乳杆菌菌粉0.5g、唾液乳杆菌菌粉0.5g和嗜热链球菌菌粉0.5g，混合均匀后即得猪饲料添加剂。试验例1以下试验为利用本发明实施例1、实施例2和实施例3制备的仔猪饲料添加剂饲喂断奶仔猪试验。考察本发明的饲料添加剂对仔猪的平均日增重、饲料转化率、腹泻和死亡等的影响。试验地点：松辽黑猪饲养于吉林省农业科学院畜牧科学分院畜牧研究所。试验仔猪品种：体格健壮、发育良好、体重相近（15±1kg）的仔猪（松辽黑猪（松辽黑猪×松辽黑猪），猪龄：40±5d）48头，随机分为3组，即实施例1、实施例2、实施例3，每组16头。饲料及本发明添加剂的添加量：饲料使用仔猪基础饲料，由吉林省农业科学院畜牧科学分院畜牧研究所提供；本发明的饲料添加剂的使用量为0.2%（w/w）。试验方式及时间：试验开始后第0、7、14、21、28、35、42和49天空腹称重。仔猪均饲养在相同的条件下，即猪舍面积、温度、湿度和光照等条件均保持一致。实验开始前一周对猪舍进行清洗和消毒，挑选体重一致的仔猪，标号。实验前对仔猪进行健康检查，并注射常规疫苗，预实验7天后，空腹称重，进入正式实验，饲养期49天。随意采食和饮水，每天打扫猪舍一次，并定期对猪舍进行消毒。试验指标：记录每组采食量、体重增加量、腹泻和死亡情况。计算各阶段平均日增重、平均日采食量和饲料转化率。平均日增重：分别于正式试验的第一天和最后一天早晨，仔猪逐头空腹称重，由末重与始重之差除以实验天数，计算各重复组仔猪的平均日增重。平均日采食量：记录各组的投料量和剩料量，投料量减去剩料量再除以实验天数，算出平均日采食量。饲料转化率：用各组仔猪的平均日采食量除以各组仔猪的平均日增重，即得出个各组仔猪饲料转化率。仔猪腹泻率计算：腹泻率（%）=试验期腹泻仔猪头数/（试验仔猪头数×试验天数）×100%。腹泻指数判断标准见表1。表1腹泻指数判断标准腹泻程度粪便的表现形式腹泻评分等级正常正常、圆柱形0轻度腹泻稀软、有形1中度腹泻粘稠、不成形、水分含量高2严重腹泻液态、不成形、水样稀粪3试验结果如下：1、仔猪的生长性能测定结果不同处理组在平均日增重和饲料转化率方面末见显著差异，结果见表2。说明本发明各实施例所制备的饲料添加剂在生长性能方面效果一致。表2仔猪生长性能项目实施例1实施例2实施例3起始体重（kg）15.53±0.7615.81±0.5915.88±0.37末体重（kg）33.08±1.8232.94±2.1732.85±1.58平均日增重（g/d）358.16±8.99349.61±9.44346.12±7.88饲料转化率（kg/kg）3.203.133.15表中数值为：平均值±标准误，p<0.05。2、仔猪的腹泻率和死亡率测定结果腹泻是仔猪死亡的重要原因之一。仔猪的腹泻率和死亡率测定结果见表3。试验数据表明各实施例仔猪腹泻情况相似。各实施例均无仔猪死亡，说明本发明的饲料添加剂对断奶仔猪的腹泻及死亡方面就有良好的控制作用。表3仔猪腹泻率和死亡率项目实施例1实施例2实施例3一级腹泻率（%）1.791.912.04二级腹泻率（%）1.661.531.66三级腹泻率（%）0.510.510.51死亡率（%）0.000.000.00试验例2以下试验为八种益生菌菌粉（≥109CFU/g）饲喂断奶仔猪，添加量为0.1%，考察各个益生菌对仔猪的平均日增重、饲料转化率、腹泻率和死亡率的影响。试验地点：松辽黑猪饲养于吉林省农业科学院畜牧科学分院畜牧研究所。试验仔猪品种：体格健壮、发育良好、体重相近（15±1kg）的仔猪（松辽黑猪（松辽黑猪×松辽黑猪），猪龄：40±5d）144头，随机分为9组，每组16头。试验方式及时间、试验指标同试验例1。结果如下：1、仔猪的生长性能测定结果不同益生菌处理组末重、平均日增重和饲料转化率没有显著差异（p<0.05），但日增重水平和饲料转化率均高于对照组。具体检测数据见表4。表4仔猪生长性能表中数值为：平均值±标准误，p<0.05。2、仔猪的腹泻率和死亡率统计结果试验数据表明不同益生菌处理组仔猪一级与对照组相当，二级腹泻率较对照组有所降低，三级腹泻率有明显改善，因此，没有仔猪死亡。具体统计结果见表5。表5仔猪腹泻率和死亡率试验例3饲用抗生素是畜牧业不可缺少的添加剂，为畜牧业带来良好收益的同时，也给环境和人类健康带来了危害。为了对比分析本发明产品与饲用抗生素对仔猪生长性能等因素的影响，我们设置了本试验。试验地点：松辽黑猪饲养于吉林省农业科学院畜牧科学分院畜牧研究所。试验仔猪品种：体格健壮、发育良好、体重相近（15±1kg）的仔猪（松辽黑猪（松辽黑猪×松辽黑猪），猪龄：40±5d）48头，随机分为3组，即对照组、实施例1和抗生素组，每组16头。试验方式及时间、试验指标同试验例1。饲料添加剂添加量：饲料使用仔猪基础饲料，由吉林省农业科学院畜牧科学分院畜牧研究所提供；本发明实施例1饲料添加剂的使用量为2%（w/w）；对照组不添加任何添加剂；抗生素组使用硫酸粘杆菌素和枯草杆菌肽锌，添加量分别为0.3%和0.5%。结果如下：1、仔猪的生长性能测定结果不同处理组平均日增重差异显著（p<0.05），实施例1饲养的仔猪饲料转化率显著高于对照组，略低于抗生素组，结果见表6。表6仔猪生长性能项目对照组实施例1抗生素组起始体重（kg）16.18±0.2915.88±0.3715.70±0.85末体重（kg）26.83±1.4032.85±1.5836.47±1.25平均日增重（g/d）215.47±15.55346.12±7.88423.92±15.57饲料转化率（kg/kg）3.973.152.63表中数值为：平均值±标准误，p<0.05。2、仔猪的腹泻率和死亡率测定结果试验数据表明实施例1饲养的仔猪其三级腹泻率为较对照组有显著降低，抗生素组没有出现三级腹泻。死亡率对照组最高，抗生素组次之，实施例1没有仔猪死亡。结果见表7。表7仔猪腹泻率和死亡率项目对照组实施例1抗生素组一级腹泻率（%）1.531.790.80二级腹泻率（%）2.041.660.53三级腹泻率（%）3.830.510.00死亡率（%）25.000.006.25试验结果显示，用实施例1的含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂的配方饲喂仔猪，平均日增重是对照组的1.6倍，仔猪饲料转化率显著高于对照组；仔猪的三级腹泻率明显低于对照组，且无死亡率。对照组仔猪死亡主要是严重腹泻所致，其中只有一头是圆环病毒引起的脏器衰竭致死；而抗生素组仔猪死亡均是患有脑炎所致。本发明结合发酵中药六神曲和益生菌二者的优点，六神曲具有好的抑菌和杀菌功效，且富含多种消化酶，如蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶等，具有消食化积、健脾开胃、和中止泻等作用，同时还含有15种含量较高的必须营养元素。益生菌能够维持肠道菌群正常化，提高免疫力、改善新陈代谢和提高营养物质的消化吸收等功能。本发明是一种高效安全的仔猪饲料添加剂的配方，六神曲和八种益生菌协同作用，能够有效促进仔猪促生长、提高仔猪免疫力和抗病力、降低仔猪腹泻率和死亡率、提高仔猪生产效率，能够部分替代饲用抗生素。当前第1页1 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