不含农药的罗汉果提取物及其制备方法与流程
技术领域本发明涉及一种有选择地和有效地从含有农药的罗汉果提取物中除去农药、制备高度安全的不含农药的罗汉果提取物的方法。更具体而言，本发明涉及制备罗汉果提取物的方法，其有选择地和有效地从含有农药的罗汉果提取物除去农药，并且可以以高收率回收用作甜味剂成分的罗汉果糖苷。本发明还涉及具有类似于糖的甜味和无农药的、高品质和安全性高的罗汉果提取物，以及含有所述罗汉果提取物的甜味剂组合物。
背景技术：
近年来，许多高甜度甜味剂已经被批准为糖的替代甜味剂，并且在市场上广泛流通。高甜度甜味剂通常可分为人造甜味剂(或合成甜味剂)和天然甜味剂。
人造高甜度甜味剂的实例包括糖精，阿斯巴甜，三氯蔗糖，乙酰氨基磺酸钾和advanteme。尽管这些人造甜味剂中的任何一种都被保证是安全的，但安全评估的讨论仍然在不断进行中。
天然高甜度甜味剂包括植物衍生的天然甜味剂，如甘草提取物，甜菊提取物和罗汉果提取物等。据说这些天然甜味剂具有悠久的历史和对人体具有高度的安全性。
在这些中罗汉果提取物是中国广西壮族(チアン族)自治区桂林周围的特产之一的葫芦科多年生药用植物罗汉果(学名：siraitiagrosvenorii)的提取物，自古作为中国民间药被广泛使用。它的药效如下多种：改进了喉部皲裂和疼痛，改善支气管炎或扁桃体炎，止咳，祛痰，解热，促进胃肠功能，消除压力，利尿，以及改善便秘等。近年来，还已知罗汉果提取物除高血压、糖尿病和防衰老之外还具有自由基清除和抗过氧化作用(非专利文献1)。
此外，通过使由罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果糖苷总量达到总体的33重量％以上而纯化的罗汉果提取物(其也被称为“高纯度罗汉果糖苷”)针对作为甜味基本性能的“令人一直想要的(後引き)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，爽快的感觉(すっきり感)，醇厚(まろやかさ)，浓郁(こく)，苦味(苦み)”的任一项的评价，均具有非常接近糖的甜味品质(非专利文献2)。
由于人工甜味剂是通过化学合成制备的，一般品质稳定性高，几乎没有残留农药的可能性，但是衍生自植物的天然甜味剂在植物育种、栽培工序，生育、成长工序，和收获工序中，受到农药污染的可能性很大，存在从收获的产品中除去农药不充分的情况。
在农场栽培时，存在对罗汉果使用农药的情况。针对农药残留问题，即使在栽培过程中进行农药管理，也受到由农药在长期栽培过程中、附近农场使用的农药导致的污染，因此，仅通过栽培时的对策难以解决农药残留问题。此外，在从收获的罗汉果制造罗汉果提取物时的纯化和浓缩工序中，不仅浓缩了如罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-不罗汉果苷v和赛门苷i等的罗汉果糖苷，也浓缩了农药，因此，收获时无法检测出的农药有时从纯化的罗汉果提取物中提取出来。这种罗汉果提取物有时在保持原样的情况下被用作甜味剂，但是更多的情况是，这种罗汉果提取物进一步被纯化和浓缩，制成含有33％以上的包括罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的罗汉果糖苷的“高纯度罗汉果糖苷”。然而，往往是从市售的”高纯度罗汉果糖苷”检测出农药残留，这意味着，通过常规的纯化方法，难以完全分离所述罗汉果糖苷和农药，从罗汉果提取物中有选择地和有效地除去农药、同时以高收率回收罗汉果糖苷是困难的。另外，罗汉果提取物是指从罗汉果果实通过水、任意有机溶剂或其混合物进行提取处理而提取的产物。
以往，作为将残留农药植物提取物中除去的方法，已知有使植物提取物与由苯乙烯和二乙烯基苯的三维共聚物构成的多孔吸附树脂接触以将残留农药吸附至吸附树脂的方法(专利文献1)。然而，该方法的问题在于可以除去的农药类型限于有机氯化合物类。
此外，作为除去从植物中收集的精油(エッセンシャルオイル)(精油)中所含的残留农药等的污染物质的方法，也已知的是使用活性炭的方法(专利文献2)。作为用于高效地除去残留农药的方法，也已被提出的是，使超临界或亚临界状态的二氧化碳流体接触植物提取物的方法(专利文献3)。然而，为了实施该方法，需要二氧化碳超临界处理装置，不能容易地实施。
另外，在专利文献4中记载了，使罗汉果提取物接触活性炭以及大孔聚合物吸附树脂(高分子吸附树脂)和离子交换树脂中的至少一个来纯化罗汉果提取物的方法。
[现有技术文献]
非专利文献
[非专利文献1]“基礎と臨床”27(8),3159-3166(1993)
非专利文献2]“羅漢果配糖体の甘味特性およびその改善”日本食品科学工学会誌第53巻第10号,2006.10、527-533
专利文献
专利文献1：日本特开2000-072790号公报
专利文献2：日本特开2010-116434号公报
专利文献3：日本特开2006-089414号公报
专利文献4：日本特表2014-506783的公报
技术实现要素：
然而，随着污染物质的除去率增加，存在作为纯化对象的香味成分的产率也降低的问题。
本发明的课题是解决上述现有技术的问题，具体而言，是提供一种有选择地和有效地从罗汉果提取物除去农药，制备不含农药的高安全性罗汉果提取物。更具体而言，本发明的课题是提供制备罗汉果提取物的方法，其有选择地和有效地从罗汉果提取物中除去农药，同时以高收率回收用作甜味剂成分的罗汉果糖苷。此外，本发明的课题还在于，提供一种不含农药的、且具有接近于糖的甜味品质、高品质、安全性高的罗汉果提取物，以及含有所述罗汉果提取物的甜味剂组合物。
具体实施方式
本发明人为了解决上述课题深入研究，结果发现，通过使用使用具有特定性质(物质性质，物理性质)的活性炭处理含农药的罗汉果提取物，从含农药的罗汉果提取物，可以以高收率回收用作甜味剂成分的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和/或赛门苷i)、并且可以有选择地且高效率地除去罗汉果提取物中残留的农药。
基于该发现完成了本发明，并且本发明具有以下实施方式。
(i)不含农药的罗汉果提取物的制备方法
(i-1)制备不含农药的罗汉果提取物的方法，其具有对含有农药的罗汉果提取物进行活性炭处理、除去农药的工序，
在上述活性碳处理中使用的活性炭是选自由以下组成的组的任何至少一种活性炭：碘吸附量为至少1500mg/g的活性炭和焦糖脱色能力为至少85％的活性碳，
通过上述活性炭处理的包括罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的罗汉果糖苷的回收率至少为70％，或通过上述活性炭处理的由罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果糖苷的回收率至少为70％。
(i-2)(i-1)中记载的制备方法，其中，在不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的总量，为相对于所述不含农药的罗汉果提取物100重量％的至少33重量％。
(i-3)(i-1)或(i-2)中记载的制备方法，其中，农药为选自由以下组成的组中的至少1种，优选为选自由以下组成的组中的2种以上，更优选为选自由以下组成的组中的6种：烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵。
此外，本发明可以以上述(i-1)所述的独立项目的形式为如下所述。“制备不含有农药的罗汉果提取物(不含农药的罗汉果提取物)的方法，其具有对含有农药的罗汉果提取物(含农药的罗汉果提取物)进行活性炭处理、除去所述农药的工序，
在活性碳处理中使用的活性炭是选自由以下组成的组的任何至少一种活性炭：碘吸附量为至少1500mg/g的活性炭和焦糖脱色能力为至少85％的活性碳，
上述农药是选自由以下组成的组中的至少1种，优选为选自由以下组成的组中的2种以上，更优选为选自由以下组成的组中的6种：烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵，
通过所述活性炭处理的包括罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的罗汉果糖苷的回收率至少为70％，或通过上述活性炭处理的由罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果糖苷的回收率至少为70％。”
(i-4)
[hplc条件]
柱：kaseisorblcods2000((东京化成工业株式会社制造)((株)東京化成工業製))移动相(150mm×4.6mmi.d.)：乙腈和水的混合液0分钟→10分钟(等度)：乙腈20体积％，
10分钟→50分钟(线性梯度)：乙腈20体积％→55体积％流速：1ml/分钟
柱温度：40℃
检测器：uv203nm。
(ii)不含农药的罗汉果提取物
(ii-1)不含有农药的罗汉果提取物(不含农药的罗汉果提取物)
所述不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的总量是相对于不含农药的罗汉果提取物100重量％的至少33重量％，
上述不含农药的罗汉果提取物在下述条件的hplc分析的保留时间16分钟附近检测出的峰的面积是所有峰的总面积的3％以下：
[hplc条件]柱：kaseisorblcods2000(150mm×4.6mmi.d.)((东京化成工业株式会社制造)((株)東京化成工業製))移动相：乙腈和水的混合液
0分钟→10分钟(等度)：乙腈20体积％，
10分钟→50分钟(线性梯度)：乙腈20体积％→55体积％流速：1ml/分钟
柱温度：40℃
检测器：uv203nm。
(ii-2)(ii-1)中所述的不含农药的罗汉果提取物，其中在上述hplc分析中的保留时间16分钟附近检测出的峰是分子量为358道尔顿的化合物的峰。
(ii-3)如(ii-1)或(ii-2)中所述的不含农药的罗汉果提取物，其中上述农药为烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵。本发明可以以上述(ii-1)所述的独立项目的形式为如下所述。
“不含有农药的罗汉果提取物(不含农药的罗汉果提取物)
所述不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的总量是相对于所述不含农药的罗汉果提取物100重量％的至少33重量％，
所述农药至少是烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵，
上述不含农药的罗汉果提取物在下述条件的hplc分析的保留时间16分钟附近检测出的峰的面积是所有峰的总面积的3％以下：
[hplc条件]
柱：kaseisorblcods2000(150mm×4.6mmi.d.)((东京化成工业株式会社制造)((株)東京化成工業製))移动相：乙腈和水的混合液
0分钟→10分钟(等度)：乙腈20体积％，
10分钟→50分钟(线性梯度)：乙腈20体积％→55体积％流速：1ml/分钟
柱温度：40℃
检测器：uv203nm。
(ii-4)
(iii)甜味剂组合物和含有它的制品
(iii-1)甜味剂组合物，其由
(iii-2)(iii-1)所述的含有甜味剂组合物，其中所述辅助甜味成分是选自单糖类、二糖类、寡糖类、糖醇类、非糖甜味剂和食物纤维类中的至少一种。
(iii-3)含有(iii-1)或(iii-2)所述的甜味剂组合物的食品、饮料、准药物、化妆品或药物制品。
本发明效果
根据本发明的制备方法中，从罗汉果，可以以高收率回收作为甜味剂成分的有用的包含罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的罗汉果糖苷类(罗汉果糖苷)、或由罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果糖苷类(罗汉果糖苷)，并且有选择地有效地清除农药，获得不含农药的罗汉果提取物。
附图简单说明
图1显示活性炭未处理物(原料罗汉果提取物)的hplc色谱图(实验例4)。由箭头a表示的线是在制备型hplc中27分钟的保留时间以后洗脱的活性炭未处理物级分(后)的色谱图，由箭头b表示的线是在制备型hplc中27分钟的保留时间之前洗脱的活性炭未处理物级分(前)的色谱图。
图2显示活性炭处理物(实施例4)的hplc色谱图(实验例4)由箭头c表示的线是在制备型hplc中27分钟的保留时间以后洗脱的活性炭未处理物级分(后)的色谱图，由箭头d表示的线是在制备型hplc中27分钟的保留时间之前洗脱的活性炭未处理物级分(前)的色谱图。
[图3]显示了针对活性炭未处理物(原料罗汉果提取物)、活性炭未处理物(后)、和活性炭处理物的级份(后)的甜味从八个项目(苦味(苦み)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，爽快的感觉(すっきり)，醇厚(まろやかさ)，浓郁(コク))的观点来评估而得的雷达图(实验例4)。
具体实施方式
(i)不含农药的罗汉果提取物的制备方法
本发明是用于制备不含农药的罗汉果提取物的方法，其特征在于具有将含农药的罗汉果提取物(含有农药的罗汉果提取物)进行活性炭处理、除去农药的工序。
在该方法中，用作起始材料的含有农药的罗汉果提取物是罗汉果果实的提取物，是含有选自由以下组成的组的至少一种罗汉果糖苷：由下列化学式1和表1表示的罗汉果苷iv，罗汉果苷v，赛门苷i，和11-氧代-罗汉果苷v。作为含有农药的罗汉果提取物，优选含有全部以下的罗汉果提取物：罗汉果苷iv，罗汉果苷v，赛门苷i和11-氧代-罗汉果苷v。
[化学式1]
【表1】
glc；β-d-葡萄糖吡喃基
用于上述提取的罗汉果果实可能是生的(新鲜的)或可能处于干燥状态。从提取效率来看，优选干燥的果罗汉果果实。此外提取可以以罗汉果果实(新鲜或干燥物)保持原样的形式来进行，但是，在提取时，也可以预先切碎(細断)，破碎，或粉碎。
用于提取的溶剂，只要是能够从罗汉果果实提取上述罗汉果糖苷的溶剂即可，例如，可以使用选自以下的溶剂：水；甲醇，乙醇，丁醇，丙醇等的低级醇；甘油，和丙二醇等的多元醇；丙酮，乙基甲基酮，乙酸乙酯，乙酸甲酯，二乙醚，环己烷，二氯甲烷，1,1,1,2-四氟乙烷，1,1,2-三氯乙烯，丁烷，丙烷，以及己烷等的有机溶剂；水和这些有机溶剂的混合溶液。此外，食用油脂也可用作上述有机溶剂。提取溶剂优选为水，低级醇，特别是乙醇，或前述这些的混合物，更优选为水。提取可以根据常规方法来进行，无论是冷浸渍还是温浸渍，也无论是静置还是搅拌。
另外，作为提取方法、使用超临界提取法或亚临界提取法时，作为提取溶剂，可以列举二氧化碳和一氧化二氮。
另外，用作起始材料的含有农药的罗汉果提取物，可以是含有农药、并且含有上述罗汉果糖苷的罗汉果提取物，也可以是除了上述提取处理之外、还施加了过滤和离心分离等的固液分离、吸附、分离、浓缩和干燥等的各种处理的的罗汉果提取物。
此处作为对象的农药，是成为罗汉果提取物中残留问题的，选自由以下组成的组的至少一种：烯酰吗啉(ジメトモルフ)(casno.110488-70-5)，三唑醇(casno.55219-65-3)，戊唑醇(casno.107534-96-3)，苯醚甲环唑(casno.119446-68-3)，甲霜灵(casno.57837-19-1)和精甲霜灵(casno.70630-17-0)。换言之，作为本发明对象的含有农药的罗汉果提取物可以是包含选自由上述六种类型组成的组中的至少一种农药的罗汉果提取物。所述含有农药的罗汉果提取物可以是具有这六种农药中的两种以上、多种的罗汉果提取物，也可以是含有所有六种的罗汉果提取物。
所有这些农药都是具有1.71以上分配系数(logpow)的化合物。此处，分配系数具体表示1-辛醇/水分配系数(logpowow)。更具体地说，在1-辛醇和水2种溶剂相中(20-25℃)添加为对象的化合物而达到平衡状态时，是指这2相中的化合物浓度比(1-辛醇/水)。所述分配系数可以通过烧瓶法或hplc法测定。所述分配系数是表示化合物的疏水性(对脂质的溶解的容易程度)的物理化学指标，较高的疏水性意味着较高的疏水性。此外，已知的是，疏水性越高在体内的积蓄性约高，毒性也变强，因此，可以说，分配系数高的是毒性强的农药。
此外，作为参考，如下示出了上述六种中的烯酰吗啉(ジメトモルフ)，戊唑醇(テブコナゾール)，苯醚甲环唑(ジフェノコナゾール)，甲霜灵和精甲霜灵的logpow值。
[表2]
独立行政机构国家农林水产消费安全技术中心(独立行政法人農林水産消費安全技術センター)的主页
“i.农药抄录和评价书”(https://www.acis.famic.go.jp/syouroku/index.htm)
此外，考虑到的是，三唑醇的logpow值为通过由段落[0064]((c)农药分析栏)中描述的条件下的lc/ms的保留时间与和三唑醇同样具有三唑结构的戊唑醇和苯醚甲环唑的logpow值进行计算而求得的约2.96。根据这些事实，根据本发明的方法，认为可以除去具有1.71以上的logpow值
在上述六种类中，三唑醇、戊唑醇和苯醚甲环唑这三种是具有三唑结构、具体是1,2,4-三唑结构的化合物，并且分布系数(logpow)为2.9以上。
含有农药的罗汉果提取物中农药含量为作为上述各个农药量的0.01ppm以上。
本发明中用于活性炭处理的活性炭是选自由以下组成的组中的至少一种：碘吸附量为至少1500mg/g的活性炭和焦糖脱色能为至少85％的活性炭。作为碘吸附量，优选为1600mg/g以上。此外，作为焦糖脱色能力，优选为90％以上，更优选为95％以上。活性炭可以使用具有这样的碘吸附量的活性炭和具有焦糖脱色能力的活性炭中的单独一种，也可以将2种以上任意组合使用。
此处，碘吸附量是每活性炭单位质量(1g)吸附的碘的量(mg)(分子直径约为
作为测定活性炭的碘吸附量的方法，可以列举“jisk1474：2014活性炭试验方法”的“7.1吸附性能”“7.1.2.2碘吸附性能”中规定的方法。
[碘吸附量的测定]
将25.0g碘化钾溶解于30ml蒸馏水中，向其中加入约13g碘并使其溶解，用蒸馏水制备0.05mol/l碘溶液，其为1000ml。将1.0g受试样品(活性炭)放入具有塞子的三角烧瓶中，加入50ml制备的碘溶液，并用铝箔包裹。在室温
碘残留浓度(g/l)由下式计算。
[数学式1]
in＝k×f×12.69×1/10
in：残留碘浓度(g/l)
k：用于滴定的0.1mol/l硫代硫酸钠溶液的量(ml)
f：0.1mol/l硫代硫酸钠溶液的因子
12.69：0.1mol/l硫代硫酸钠溶液1ml的碘当量(mg/ml)
10：收集的上清液量(ml)
通过下式计算样品每单位质量的碘吸附量(mg/g)。
[数学式2]
a1＝[(10×f’-k×f)×12.69×5]/s
a1：每样品单位质量的碘吸附量(mg/g)
s：样品质量(g)
f'：0.05mol/l碘溶液的因子
k：用于滴定的0.1mol/l硫代硫酸钠溶液的量(ml)
f：0.1mol/l硫代硫酸钠溶液的因子
12.69：0.1mol/l硫代硫酸钠溶液1ml的碘当量(mg/ml)
作为活性炭的焦糖脱色性能的测定方法，可以列举“jisk1474：2014活性炭试验方法”的“7.2焦糖脱色性能”中规定的方法。
[焦糖脱色性能的测定]
向预先在115±5℃的恒温干燥器中干燥3小时、并在干燥器中放置冷却至室温的150mg受试样品(活性炭)中，加入50ml焦糖试验溶液，并在室温
此外，此处，焦糖试验溶液使用通过以下方法制备的焦糖试验溶液。
(焦糖试验溶液的制备)
将60g在干燥器中干燥24小时以上的蔗糖放入500ml容量三角烧瓶中。向其中加入240ml水，并将其在室温
以这种方式制备的焦糖原液用水稀释至1:20的体积比并放置30分钟，然后使用光度计测量波长为430nm的吸光度。调整稀释比，使之符合以下色度标准溶液的吸光度，将制备的溶液用作焦糖试验溶液。
[色度标准溶液]
将重铬酸钾在玛瑙研钵中粉碎，并在调节至105±5℃的恒温干燥器中干燥3至4小时，在干燥器中放冷后，将其称取0.310g，通过加水溶解。将其转移到全容量烧瓶中，加入水直到标记线，使其成为色度标准溶液。使用光度计测量这种溶液的波长为430nm的吸光度。
受试样品(活性炭)的焦糖脱色性能(％)通过下式计算，四舍五入小数点后的第二位，使其为小数点后一位。
[数学式3]
d＝1-(e'/e)×100(％)
d：焦糖脱色性能(％)
e'：通过样品脱色的液体(滤液)的吸光度
e：空白试验(焦糖试验溶液)的吸光度
在本发明中使用的活性炭没有特别限定的形状和大小，粉末状活性炭，粒状活性炭(破碎炭(破砕炭)，颗粒炭(顆粒炭)，形成颗粒炭(造粒炭))，球状活性炭和纤维状活性炭中的任何一种都可以使用。其中，粉末状活性炭和粒状活性炭从罗汉果提取物中除去残留农药的效果高，并且处理性、吸附效率、经济性等优异，由前述方面出发，可以适合地使用。优选的是，选自由以下组成的组的活性炭：碘吸附量为至少1500mg/g的粒状活性炭和焦糖脱色能力是至少85％的粉末状活性炭。
此处，粒状活性炭通常是指直径或长轴为0.15mm以上大小的粒状的活性炭，包括破碎炭(破砕炭)，颗粒炭(顆粒炭)，形成颗粒炭(造粒炭)。优选的是，通过粉碎椰壳炭或木质材料(锯屑(おが屑)，木屑(木材チップ)等)制备的破碎炭(破砕炭)，尽管是粒状的，但是其形状和大小是不规则的。此外，粉末状活性炭是指通常具有小于0.15mm的直径或长轴的粉末状活性炭。优选为直径为0.10mm以下的粉末状活性炭。
此外，根据材料，粒度分布有时会超过0.15mm(例如，0.13至0.16mm等)。在这种情况下，所述活性炭的形状可以通过每重量的粒度分布是否为50％以上来判断。例如，每0.15mm以上大小的活性炭重量的粒度分布为50％以上时可以说为“粒状活性炭”，相反的是，每小于0.15mm大小的活性炭的重量的粒度分布为50％以上时，可以说是“粉状活性炭”。
另外，本发明中使用的活性炭的来源没有特别的限制，可以举出例如，将椰子壳、木质材料(锯屑，木屑等)、煤和石油中的任一个作为原料而制造的活性炭。其中将椰子壳和木质材料(锯屑，木屑等)作为原料的活性炭，从安全性和防止环境污染的方面考虑，在可以用作食用甜味剂组合物的罗汉果提取物的制备中可以适宜使用。
没有限制，但是，作为在本发明中使用的活性炭，可以列举例如，作为碘吸附量为至少1500mg/g的粒状活性炭的日本エンバイロケミカルズ(株)制造的fg-3；作为焦糖脱色能力为至少85％的粉末状活性炭的エンバイロケミカルズ(株)制造的fp-1，fp-3，和fp-6，以及(株)クラレケミカル制造的クラレコールpk－d。
作为针对含有农药的罗汉果提取物的活性炭处理，可以采用以下例如，向含有农药的罗汉果提取物中加入上述活性炭、搅拌、在活性炭上吸附提取物中的农药后、分离所述活性炭的方法(分批法(バッチ法))，以及使含有农药的罗汉果提取物通过填充有上述活性炭的柱、使所述提取物中的农药吸附在所述柱中的活性炭、回收滤液的方法(柱法)等。此处，可以供于活性炭处理的含有农药的罗汉果提取物，为了获得工作效率和更高的效果，优选为液体物质，根据需要也可以将含有农药的罗汉果提取物通过水稀释。
当通过柱方法从含有农药的罗汉果提取物除去所述农药时，对应于含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷的种类及其量、含有农药的罗汉果提取物中包含的农药的种类及其量等，可以适当地选择和调整使用的活性炭的种类，填充在柱中的活性炭的量，以及针对活性炭填充柱的含有农药的罗汉果提取物的下落速度(流下速度)等。例如，期望的是，使用粒状活性炭作为活性炭时，以相对于含有农药的罗汉果提取物的干燥重量100重量份的
当使用粒状活性炭作为活性炭时，通过作为一个例子的以下的方法，可以从含有农药的罗汉果提取物除去农药，制备不含所述农药的罗汉果提取物。
(1)向柱中填充必要量的粒状活性炭，使去离子水从柱顶流动至底部，冲洗活性炭细粉等。
(2)向通过上述制备的粒状活性炭填充柱中，注入通过预先加入水而调节至
(3)将去离子水注入上述柱中，分离(分画)流出的含有罗汉果提取物的溶液。(4)对于通过上述分离(分画)的各个溶液，用薄层色谱法或hplc等，确认罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和和赛门苷i的有无，含有这些罗汉果糖苷的级份各自分别被回收。
(5)将回收的含有各个罗汉果糖苷的级份放在一起，制备不含农药的罗汉果糖苷。
顺便提及，上述罗汉果糖苷的罗汉果苷v，例如，可以通过下面(a)中描述的hplc装置和条件进行分析(定性和定量)，此外，罗汉果苷v以外的罗汉果糖苷(罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v或赛门苷i)可以根据例如以下(b)中描述的hplc装置和条件进行分析(定性和定量)。
(a)罗汉果苷v分析
·hplc装置：prominencelc-20ad((株)島津製作所制)
·lc柱：使用shodexasahipaknh2-504e(250mm×4.6mmi.d.、(株)昭和電工制)
·lc条件
注射体积(注入量)：20μl
柱温度：40℃
流动相：74体积％乙腈/26体积％水
流速：1.0ml/分钟
检测波长：uv203nm。
(b)罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v或赛门苷i的分析·hplc装置：prominencelc-20ad((株)島津製作所制)
·lc柱：kaseisorblcods2000(150mm×4.6mmi.d.、(株)東京化成工業制)
·lc条件
注射体积(注入量)：20μl
柱温度：40℃
流动相：a相：水，b相：乙腈
0→10分钟(等度)：80体积％的相a，20体积％的相b，
10→50分钟(线性梯度)：“a相80体积％，b相20体积％”→“a相45体积％，b相55体积％”
流速：1.0ml/分钟
检测波长：uv203nm。
另外，在上述中，从柱流出的级份中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和/或赛门苷i)的确认也通过以下来进行：使用示差折射率(折射率)检测器，基于柱流出液的成分组成的变化来检测出通过检测光折射率的变化。
当通过分批方法从含有农药的罗汉果提取物除去农药时，对应于含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷的种类及其量、含有农药的罗汉果提取物中包含的农药的种类及其量等，可以适当选择和调整使用的活性炭的种类及其量，搅拌时间等。例如，当使用粒状活性炭作为活性炭时，期望的是，以相对于含有农药的罗汉果提取物的干燥重量100重量份的
通过上述方法，可以从含有农药的罗汉果提取物除去农药，制备不含有所述农药的罗汉果提取物(不含有农药的罗汉果提取物)。
另外，本发明中的“不含有农药的罗汉果提取物”是指，在罗汉果提取物中含有农药(选自由以下组成的组中的至少一种：烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的各自的量(残留浓度)以干燥物(干物质)换算、小于0.01ppm。“0.01ppm”是这些农药的检测出界限值。
此外，本发明中，“从含有农药的罗汉果提取物除去农药”意味着，从包含选自由烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵组成组中的至少一种农药的罗汉果提取物(含有农药的罗汉果提取物)除去所述农药，罗汉果提取物中包含所述的农药的各个量(残留浓度)以干燥物(干物质)换算、小于0.01ppm。
顺便提及，在罗汉果提取物中包含的这些农药的分析(定性和定量)可以通过例如(c)中所述液相色谱法/质谱法(lc/ms)来进行。
(c)农药的分析
·lc/ms装置：lcms-2010ev((株)島津製作所制)
·lc柱：inertsilods-3(250mm×4.6mm,i.d.5μm、(株)ジーエルサイエンス制)
·lc条件
注射体积(注入量)：30微升
柱温度：40℃
流动相：80体积％乙腈/20体积％水
流速：1.0ml/分钟
·ms条件
电离法：apci方法，正模式
喷雾器气体(ネブライズガス)流量：2.5升/分钟
apci界面温度：350℃
cdl温度：200℃
热块(ヒートブロック)温度：300℃
通过上述本发明的方法制备的上述不含农药的罗汉果提取物，如上所述，在所述提取物中包含的农药(选自由烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵组成组中的至少一种农药)的各个量(残留浓度)以干燥物(干物质)换算、小于0.01ppm，此外，具有选自下述(a)、(b)和(c)的至少1个特征，优选2个特征，更优选所有特征。
(a)本发明罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和/或赛门苷i)的回收率是70％以上。
(b)不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷物(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的总量相对于不含农药的罗汉果提取物100重量％，为至少33重量％。
如在背景部分中所描述，已知的是，由罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果糖苷的总量全体即达到33重量％以上的合计的不含农药的罗汉果提取物而纯化的罗汉果提取物(高纯度罗汉果糖苷)具有甜味的基本性能，针对“令人一直想要的(後引き)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，爽快的感觉(すっきり感)，醇厚(まろやかさ)，浓郁(こく)，苦味(苦み)”的任一项的评价，均具有非常接近糖的甜味品质。
通过这种本发明方法制备的不含农药的罗汉果提取物也优选，所述提取物100重量％的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的总量为33重量％以上。此外，本发明所述不含农药的罗汉果提取物100重量％中包含的罗汉果糖苷的比例是以干燥重量换算的值(干燥重量换算值)。
作为使不含农药的罗汉果提取物中的罗汉果糖苷的比例达到如上所述33重量％以上的方法，可以列举以下制备方法：将供于活性炭处理的前述含有农药的罗汉果提取物，预提取，过滤，浓缩，分离和干燥等的1个或2个以上的常规纯化处理，除去罗汉果糖苷以外的成分，使得含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷的比例，达到更多、优选33重量％以上。
此外，顺便提及的是，不含农药的罗汉果提取物罗100重量％中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的比例(总量)可通过如下所述hplc分析来确定。具体而言，通过由hplc分析将不含农药的罗汉果提取物中包含的各罗汉果糖苷的峰面积，与已知浓度各罗汉果糖苷体(标准物质)的峰面积进行比较，能够求出不含农药的罗汉果提取物中各罗汉果糖苷的量。
(c)hplc分析中保留时间16分钟附近检测出的峰面积是所有峰的总面积的3％以下。
如后述实验例3中所示，通过本发明方法制备的不含农药的罗汉果提取物特征为，当供于下述条件的hplc时，在所述hplc分析中检测出的保留时间16分钟附近的峰(在下文中，称为“p16”)的面积为所有峰的总面积的3％以下。
[hplc条件]
柱：kaseisorblcods2000(150mm×4.6mmi.d.)((东京化成工业株式会社制造)((株)東京化成工業製))移动相：乙腈和水的混合液
0分钟→10分钟(等度)：乙腈20体积％，
10分钟→50分钟(线性梯度)：乙腈20体积％→55体积％流速：1ml/分钟
柱温度：40℃
检测器：uv203nm。
也就是说，根据本发明的方法，可以将作为所述峰而被检测出的化合物(p16成分)显著除去减少，其结果是，能够获得将p16成分显著除去减少的不含农药的罗汉果提取物。正如在实验例3中所示，p16成分是分子量358道尔顿的化合物，并且如实施例4所示，是与罗汉果提取物甜味减少(杂味(不愉快味道))密切相关的化合物。因此，根据本发明的方法，不仅可以从含有农药的罗汉果提取物有效地除去减少残量农药，还可以有效地除去减少与甜味的减少(杂味(不愉快味道))相关的化合物(p16成分)。
(ii)不含农药的罗汉果提取物
此处成为本发明对象的罗汉果提取物为具有下述(b)和(c)的特征的不含农药的罗汉果提取物(不含有农药的罗汉果提取物)。
(b)不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果苷v、罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的总量是相对于不含农药的罗汉果提取物100重量％的至少33重量％。
(c)在下述条件的hplc分析中的保留时间16分钟附近检测出的峰的面积是所有峰的总面积的3％以下：
在此处，没有限制，但是，保留时间16分钟附近表示，例如存在于保留时间15分钟至17分钟之间。峰面积，例如，可以通过使用分析软件labsolution((株)島津製作所)来求出。
[hplc条件]
柱：kaseisorblcods2000(150mm×4.6mmi.d.)(東京化成工業株式会社制)：乙腈和水的混合液
0分钟→10分钟(等度)：乙腈20体积％，
10分钟→50分钟(线性梯度)：乙腈20体积％→55体积％流速：1ml/分钟
柱温度：40℃
检测器：uv203nm。
上述(b)和(c)的特征如(i)所描述的，此处引用上述(i)中的说明。
成为本发明对象的不含农药的罗汉果提取物中成为对象的农药是，烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵。换句话说，本发明的不含农药的罗汉果提取物特征为，不包含作为农药的选自由烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵组成的组中的至少一种以上。优选的是不含有，上述六种类中，例如，三唑醇、戊唑醇、和苯醚甲环唑的三种中的任意一种以上、或前述的所有这三种。可替代地，本发明的不含农药的罗汉果提取物特征在于不包含，作为农药的烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵的全部。
在此处，”不含有(不含)”意指，在本发明的不含农药的罗汉果提取物中包含的农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的各个量(残留浓度)以干燥物(干物质)换算、小于0.01ppm。换句话说，本发明的不含农药的罗汉果提取物是，这些特定的农药的各个量(残留浓度)以干燥物(干物质)换算、小于0.01ppm。
本发明的不含农药的罗汉果提取物，没有限制，但是，优选的是，更优选的是，那些不含有以下列出的农药中的至少1种以上的罗汉果提取物。在此处，”不含有(不含)”是指以下列举的各个农药的含量以干燥物(干物质)换算、少于0.01ppm。
1,1-二氯-2,2-双(4-乙基苯基)乙烷，1-萘乙酸，2-(1-萘基)乙酰胺，2，2-dpa(2,2-二氯-丙酸)，2，4，5-t(2,4,5-三氯苯氧基乙酸)，2,4-d(2,4-二氯苯氧基乙酸)，2,4-db(4-(2,4-二氯苯氧基)丁酸)，4-氯苯氧基乙酸，bhc(六六六)，dbedc(十二烷基苯磺酸二乙二胺铜络合盐[ii])，dcip(2,6-二氯吲哚酚)，ddt(二氯二苯基三氯乙烷)，epn(乙基对-硝基苯基硫代苯磺酸酯)，eptc(二丙基硫代氨基甲酸s-乙基酯)，mcpa(2-(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸)，mcpb(4-(2-甲基-4-氯苯氧基)丁酸)，仲丁胺，tcmtb([(苯并噻唑-2-基硫基)甲基]硫氰酸酯)，xmc(甲基氨基甲酸-3,5-二甲基苯基)，γ-bhc(γ-六氯化苯)，碘苯腈(アイオキシニル)，氟丙菊酯(アクリナトリン)，戊环唑(アザコナゾール)，唑啶炔草(アザフェニジン)，甲基吡啶磷(アザメチホス)，三氟羧草醚(アシフルオルフェン)，阿拉酸式苯-s-甲基(アシベンゾラル-s-メチル)，azimsulfuron(アジムスルフロン)，黄草灵(アシュラム)，谷硫磷，灭螨醌(アセキノシル)，啶虫脒(アセタミプリド)，乙草胺(アセトクロール)，乙酰甲胺磷，嘧菌酯(アゾキシストロビン)，三唑锡(アゾシクロチン)，三环锡(シヘキサチン)，莠去津(阿特拉嗪)，敌菌灵，莎稗磷(アニロホス)，阿维菌素(アバメクチン)，阿米曲士(アミトラズ)，杀草强(氨唑)(アミトロール)，莠灭净，甲草胺，棉铃威(アラニカルブ)，阿拉明(杀螨特)，涕灭威，aldoxicarb(アルドキシカルブ)，艾氏剂(アルドリン)，狄氏剂，碘甲磺隆(イオドスルフロンメチル)，氯唑磷(イサゾホス)，isouron(イソウロン)，isokarubohosu(イソカルボホス)，乙二酮二甲双胍(イソキサジフェンエチル)，异噁唑磷，异氟草(异噁唑草酮)(イソキサフルトール)，异柳磷(isophenphos)(イソフェンホス)，异丙威(イソプロカルブ)，稻瘟灵，抗倒胺(イナベンフィド)，异菌脲，异丙菌胺(イプロバリカルブ)，异稻瘟净(イプロベンホス)，灭草喹(イマザキン)，咪草酸(依马甲基甲基酯)(イマザメタベンズメチルエステル)，抑霉唑(イマザリル)，咪唑磺隆(イマゾスルフロン)，imishiahosu(イミシアホス)，吡虫啉(イミダクロプリド)，双胍辛胺(イミノクタジン)，亚胺唑(イミベンコナゾール)，茚草酮(インダノファン)，茚虫威(インドキサカルブ)，烯效唑p(ウニコナゾールp)，esprocarb(エスプロカルブ)，etame藤氟利昂甲基(エタメツルフロンメチル)，etarufururarin(エタルフルラリン)，乙硫苯威(エチオフェンカルブ)，乙硫磷，ethychlozate(エチクロゼート)，乙虫腈(エチプロール)，艾迪芬酯(エディフェンホス)，乙烯利(エテホン)，乙螨唑(エトキサゾール)，乙氧嘧磺隆(ethoxysulfuron)(エトキシスルフロン)，醚菊酯(エトフェンプロックス)，乙氧呋草黄(エトフメセート)，灭线磷(エトプロホス)，etobenzanid(エトベンザニド)，土菌灵(エトリジアゾール)，etrimfos(エトリムホス)，氟环唑(エポキシコナゾール)，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(エマメクチン安息香酸塩)，硫丹，异狄氏剂，噁二唑酮(オキサジアゾン)，恶霜灵(オキサジキシル)，oxaziclomefone(オキサジクロメホン)，解草腈(オキサベトリニル)，草氨酰(オキサミル)，氧化萎锈灵(オキシカルボキシン)，土霉素，砜吸磷，乙氧氟草醚(オキシフルオルフェン)，恶咪唑富马酸盐(オキスポコナゾールフマル酸塩)，恶喹酸(オキソリニック酸)，氧乐果(オメトエート)，肟醚菌胺(オリサストロビン)，安磺灵(オリザリン)，邻苯基苯酚(オルトフェニルフェノール)，硫线磷(カズサホス)，唑草胺(カフェンストロール)，敌菌丹(カプタホール)，杀螟丹(カルタップ)，杀虫环(チオシクラム)，杀虫磺(ベンスルタップ)，胺甲萘(甲萘威)，氟酮唑草(カルフェントラゾンエチル)，氯环丙酰胺(カルプロパミド)，草长灭(カルベタミド)，多菌灵(カルベンダジム)，甲基托布津(チオファネート)，甲基托布津(チオファネートメチル)，苯菌灵，萎锈灵(カルボキシン)，丁硫克百威(カルボスルファン)，克百威(カルボフラン)，精喹禾灵乙基(キザロホップエチル)，喹硫磷(キナルホス)，喹氧灵(キノキシフェン)，quinoclamine(キノクラミン)，kinomechionato(キノメチオナート)，克菌丹(キャプタン)，五氯硝基苯(キントゼン)，蝇毒磷(クマホス)，苄草隆(クミルロン)，草甘膦，草铵膦(グルホシネート)，醚菌酯(クレソキシムメチル)，烯草酮(クレトジム)，解草酯(喹氧乙酸)(クロキントセットメキシル)，炔草酯(クロジナホッププロパルギル)，炔草酯酸(クロジナホップ酸)，乙菌利(クロゾリネート)，噻虫胺(クロチアニジン)，二氯吡啶酸(クロピラリド)，巴氯芬组(クロフェンセット)，四螨嗪(クロフェンテジン)，黑支柱(クロプロップ)，异恶草酮(クロマゾン)，环虫酰肼(クロマフェノジド)，氯甲酰草胺(クロメプロップ)，cloransulam甲基(クロランスラムメチル)，氯虫苯甲酰胺(クロラントラニリプロール)，氯草(クロリダゾン)，黑边罗恩乙基(クロリムロンエチル)，氯丁基酯(クロルエトキシホス)，氯磺隆(クロルスルフロン)，氯二甲基焦油(クロルタールジメチル)，氯丹，毒死蜱，甲基毒死蜱(クロルピリホスメチル)，溴虫腈(クロルフェナピル)，氯芬子(クロルフェンソン)，毒虫畏(クロルフェンビンホス)，kurorubufamu(クロルブファム)，kurorufuruazu罗恩(クロルフルアズロン)，氯苯胺灵(クロルプロファム)，kurorubenshido(クロルベンシド)，矮壮素(クロルメコート)，kurorokusuron(クロロクスロン)，百菌清，地茂(クロロネブ)，乙酯杀螨醇(クロロベンジレート)，氰霜唑(シアゾファミド)，草净津(氨基氰)(シアナジン)，杀螟腈(シアノホス)，丁醚脲(ジアフェンチウロン)，敌草隆，乙霉威(ジエトフェンカルブ)，shienopirafen(シエノピラフェン)，dioxathion(ジオキサチオン)，麦草畏(ジカンバ)，环丙酸酰胺(シクラニリド)，shikuroeto(シクロエート)，噻草酮(シクロキシジム)，双氯氰菌胺(ジクロシメット)，diclosulam(ジクロスラム)，环烷基硫酸盐范罗恩(环扎范罗恩)(シクロスルファムロン)，百治磷(ジクロトホス)，jikurofenchion(ジクロフェンチオン)，抑菌灵，乙氰菊酯(シクロプロトリン)，敌草腈，禾草灵(ジクロホップメチル)，jikuromejin(ジクロメジン)，二氯硝基苯(ジクロラン)，滴丙酸(ジクロルプロップ)，敌敌畏，二溴磷(ナレド)，敌草快(ジクワット)，三氯杀螨醇(ジコホール)，乙拌磷，二噻农(ジチアノン)，氟硫草定，烯唑醇(ジニコナゾール)，乙基吲哚酮(シニドンエチル)，敌螨普(ジノカップ)，醚磺隆(シノスルフロン)，呋虫胺(ジノテフラン)，氯氟氰菊酯(シハロトリン)，氰氟草酯(シハロホップブチル)，双氢链霉素(ジヒドロストレプトマイシン)，链霉素(ストレプトマイシン)，草乃敌(双苯胺)(ジフェナミド)，二苯基(ジフェニル)，二苯基胺(ジフェニルアミン)，苯醚甲环(ジフェノコナゾール)，野燕枯(ジフェンゾコート)，氟氯氰菊酯(シフルトリン)，环氟菌胺(シフルフェナミド)，普草克(吡氟酰草胺)，除虫脲(ジフルベンズロン)，环唑醇(シプロコナゾール)，嘧菌环胺(シプロジニル)，氯氰菊酯(シペルメトリン)，赤霉素，西玛津，硅氟唑(シメコナゾール)，dimethametryn(ジメタメトリン)，jimechipin(ジメチピン)，dimethirimol(ジメチリモール)，二甲基瓶磷酸酯(ジメチルビンホス)，噻吩草胺(ジメテナミド)，乐果，烯酰吗啉(ジメトモルフ)，西草净(シメトリン)，哌草丹(ジメピペレート)，霜脲氰(シモキサニル)，氟硅菊酯(シラフルオフェン)，灭蝇胺(シロマジン)，cinmethylin(シンメチリン)，多杀菌素(スピノサド)，螺环菌胺(スピロキサミン)，螺螨酯(スピロジクロフェン)，甲磺草胺(スルフェントラゾン)，sulprofos(スルプロホス)，磺酰磺隆(スルホスルフロン)，治螟磷(スルホテップ)，稀禾定(セトキシジム)，苯酰菌胺(ゾキサミド)，特草定(ターバシル)，二嗪磷(二嗪农)(ダイアジノン)，迪亚率(ダイアレート)，杀草隆(ダイムロン)，棉隆(ダゾメット)，威百亩(メタム)，甲基异硫氰酸酯(メチルイソチオシアネート)，丁酰肼(ダミノジッド)，噻虫啉(チアクロプリド)，吖嗪基(チアジニル)，噻唑烟酸(チアゾピル)，噻菌灵(チアベンダゾール)，噻虫嗪(チアメトキサム)，硫双威(チオジカルブ)，灭多威(メソミル)，禾草丹(チオベンカルブ)，甲基乙拌(チオメトン)，噻苯隆(チジアズロン)，噻吩磺隆(チフェンスルフロンメチル)，溴氟唑菌(チフルザミド)，tekunazen(テクナゼン)，杀虫畏瓶磷酸酯(デスメディファム)，四氟醚唑(テトラクロルビンホス)，氟醚唑(テトラコナゾール)，三氯杀螨砜(テトラジホン)，tenyl氯(甲氧噻)(テニルクロール)，戊唑醇(テブコナゾール)，丁唑隆(テブチウロン)，tebupirimfos(テブピリムホス)，虫酰肼(テブフェノジド)，吡螨胺(テブフェンピラド)，吡喃草酮(テプラロキシジム)，七氟菊酯(テフルトリン)，伏虫隆(テフルベンズロン)，内吸磷-s-甲基(デメトン-s-メチル)，溴氰菊酯(デルタメトリン)，四溴菊酯(トラロメトリン)，特丁净(テルブトリン)，特丁硫磷(テルブホス)，对苯二甲酸铜(テレフタル酸銅)，三甲苯草酮(トラルコキシジム)，三唑醇(トリアジメノール)，三唑酮(トリアジメホン)，醚苯磺隆(トリアスルフロン)，三唑磷(トリアゾホス)，氧化钍率(トリアレート)，水杨(トリクラミド)，绿草定(トリクロピル)，敌百虫(トリクロルホン)，三环唑(トリシクラゾール)，灭菌(trichikonazoru)(トリチコナゾール)，十三吗啉(トリデモルフ)，抗倒酯(トリネキサパックエチル)，tribufos(トリブホス)，甲磺酸氟嘧磺隆(トリフルスルフロンメチル)，氟菌唑(トリフルミゾール)，杀虫隆(トリフルムロン)，氟乐灵(トリフルラリン)，肟菌酯(トリフロキシストロビン)，三氟啶磺隆(トリフロキシスルフロン)，苯磺隆(トリベヌロンメチル)，对甲抑菌灵(トリルフルアニド)，甲基立枯磷(トルクロホスメチル)，唑虫酰胺(トルフェンピラド)，萘草胺(ナプタラム)，萘丙胺(ナプロアニリド)，敌草胺(ナプロパミド)，烟嘧磺隆(ニコスルフロン)，尼古丁(ニコチン)，烯啶虫胺(ニテンピラム)，nitrapyrin(ニトラピリン)，硝基焦油异丙基(ニトロタールイソプロピル)，双苯氟脲(ノバルロン)，氟草敏(ノルフルラゾン)，巴班(バーバン)，多效唑(パクロブトラゾール)，蚜灭多(バミドチオン)，百草枯(パラコート)，对硫磷(パラチオン)，甲基对硫磷(パラチオンメチル)，有效霉素(バリダマイシン)，菊酯(ハルフェンプロックス)，吡氟氯禾灵(ハロキシホップ)，氯吡嘧甲基(ハロスルフロンメチル)，生物苄呋菊酯(ビオレスメトリン)，picolinafen(ピコリナフェン)，双嘧苯甲酸钠的盐(ビスピリバックナトリウム塩)，双苯三唑醇(ビテルタノール)，联苯肼酯(ビフェナゼート)，甲羧除草醚(ビフェノックス)，联苯菊酯(ビフェントリン)，胡椒基丁醚(ピペロニルブトキシド)，哌(ピペロホス)，恶霉灵(ヒメキサゾール)，吡蚜酮(ピメトロジン)，唑菌胺酯(ピラクロストロビン)，双唑草腈(ピラクロニル)，吡唑硫磷(ピラクロホス)，苄草唑(ピラゾキシフェン)，吡嘧磺隆(吡嘧磺隆乙酯)(ピラゾスルフロンエチル)，吡(ピラゾホス)，pirazorineto(ピラゾリネート)，吡草醚乙基(ピラフルフェンエチル)，哒嗪硫磷(ピリダフェンチオン)，哒螨灵(ピリダベン)，pyridalyl(ピリダリル)，哒草特(ピリデート)，啶斑肟(ピリフェノックス)环酯草醚，(ピリフタリド)，稗草畏(ピリブチカルブ)，吡丙醚(ピリプロキシフェン)，抗蚜威(ピリミカーブ)，嘧甲基(ピリミジフェン)，pyrimino甲基(ピリミノバックメチル)，甲基嘧啶磷(ピリミホスメチル)，嘧霉胺(ピリメタニル)，除虫菊酯(ピレトリン)，咯喹酮(ピロキロン)，乙烯菌核利(ビンクロゾリン)，famufuru(ファムフール)，噁唑菌酮(ファモキサドン)，氟虫腈(フィプロニル)，苯线磷(フェナミホス)，氯苯嘧啶醇(フェナリモル)，杀螟硫磷(フェニトロチオン)，氰菌胺(フェノキサニル)，噁唑禾草灵-乙基(フェノキサプロップエチル)，苯氧威(フェノキシカルブ)，fenothiocarb(フェノチオカルブ)，醚菊酯(フェノトリン)，仲丁威(フェノブカルブ)，嘧菌腙(フェリムゾン)，咪唑菌酮(フェンアミドン)，芬chlorophosphazenes(フェンクロルホス)，丰索磷(フェンスルホチオン)，倍硫磷(フェンチオン)，三苯基(フェンチン)，稻丰散(フェントエート)，fentrazamide(フェントラザミド)，氰戊菊酯(フェンバレレート)，唑螨酯(霸螨灵)(フェンピロキシメート)，腈苯唑(フェンブコナゾール)，甲氰菊酯(フェンプロパトリン)，丁苯(フェンプロピモルフ)，环酰菌胺(フェンヘキサミド)，芬媒体范(フェンメディファム)，四氯苯酞(フサライド)，丁草胺(ブタクロール)，butafenacil(ブタフェナシル)，去草胺(ブタミホス)，丁酸(ブチレート)，butorokishijimu(ブトロキシジム)，嘧酚磺酸酯(ブピリメート)，噻嗪酮(ブプロフェジン)，啶嘧磺隆(フラザスルフロン)，呋线威(フラチオカルブ)，丙富勒姆甲基(フラムプロップメチル)，呋吡菌胺(フラメトピル)，氟嘧磺隆(プリミスルフロンメチル)，解草噁唑(フリラゾール)，嘧螨酯(フルアクリピリム)，氟啶胺(フルアジナム)，吡氟禾草灵(フルアジホップ)，氟吡菌胺(フルオピコリド)，氟草隆(フルオメツロン)，氟喹唑(フルキンコナゾール)，咯菌腈(フルジオキソニル)，氟氰戊菊酯(フルシトリネート)，氟硅唑(フルシラゾール)，磺菌胺(フルスルファミド)，furuchiattomechiru(フルチアセットメチル)，氟酰胺(フルトラニル)，粉唑醇(フルトリアホール)，氟胺氰菊酯(フルバリネート)，氟噻草胺(フルフェナセット)，氟虫脲(フルフェノクスロン)，flufenpyr乙基(フルフェンピルエチル)，氟虫双酰胺(フルベンジアミド)，氟嗪酮(フルミオキサジン)，酰亚胺苯氧乙酸戊基(フルミクロラックペンチル)，阔草清(フルメツラム)，氟啶酮(フルリドン)，氟草烟(フルロキシピル)，丙草胺(プレチラクロール)，咪鲜胺(プロクロラズ)，腐霉利(プロシミドン)，氟磺隆(プロスルフロン)，丙硫磷(プロチオホス)，氟啶虫酰胺(フロニカミド)，托kizza跳(プロパキザホップ)，托爬行(プロパクロール)，扑灭津(プロパジン)，敌稗(プロパニル)，虫磷(プロパホス)，霜霉威(プロパモカルブ)，克螨特(プロパルギット)，丙环唑(プロピコナゾール)，propyzamide(プロピザミド)，亲水茉莉酮(プロヒドロジャスモン)，苯胺灵(プロファム)，丙溴磷(プロフェノホス)，调环酸钙盐(プロヘキサジオンカルシウム塩)，强敌(プロペタンホス)，卡巴丙(プロポキシカルバゾン)，残杀威(プロポキスル)，除草定(ブロマシル)，扑草净(プロメトリン)，溴苯腈(ブロモキシニル)，溴丁(ブロモブチド)，溴螨酯(ブロモプロピレート)，buromohosu溴亚磷酸酯乙基(ブロモホス)，氟磺草胺(ブロモホスエチル)，六氯苯(フロラスラム)，己唑醇(ヘキサクロロベンゼン)，环嗪酮(ヘキサコナゾール)，氟铃脲(ヘキサジノン)，噻螨酮(ヘキサフルムロン)，苯霜灵(ヘキシチアゾクス)，解草嗪(ベナラキシル)，penoxsulam(ベノキサコール)，penoxsulam(ペノキススラム)，(ヘプタクロル)，氯菊酯(ペルメトリン)，戊菌唑(ペンコナゾール)，戊菌隆(ペンシクロン)，地散磷(ベンスリド)，苄嘧磺隆甲基(ベンスルフロンメチル)，双环磺草酮(ベンゾビシクロン)，benzofenap(ベンゾフェナップ)，恶虫威(ベンダイオカルブ)，苯达松(ベンタゾン)，苯噻菌胺-异丙基(ベンチアバリカルブイソプロピル)，二甲戊乐灵(ペンディメタリン)，pentoxazone(ペントキサゾン)，丙硫克百威(ベンフラカルブ)，乙丁氟灵(ベンフルラリン)，呋草黄(ベンフレセート)，辛硫磷(ホキシム)，伏杀硫磷(ホサロン)，啶酰菌胺(ボスカリド)，噻唑磷(ホスチアゼート)，磷胺(ホスファミドン)，亚胺硫磷(ホスメット)，三乙膦酸(ホセチル)，氟磺胺草醚(ホメサフェン)，甲酰胺磺隆(ホラムスルフロン)，氯吡脲(ホルクロルフェニュロン)，灭菌丹(ホルペット)，安果(ホルモチオン)，甲拌磷(ホレート)，马拉硫磷(マラチオン)，马来酰肼(マレイン酸ヒドラジド)，双炔酰菌(マンジプロパミド)，腈菌唑(ミクロブタニル)，米尔(ミルベメクチン)，灭蚜磷(メカルバム)，氯丙酸(メコプロップ)，氯磺隆介甲酯(mesosulfuronmethyl)(メソスルフロンメチル)，四聚乙醛(メタアルデヒド)，metakurihosu(メタクリホス)，冬播宁(甲基苯噻隆,噻唑隆)(メタベンズチアズロン)，甲胺磷(メタミドホス)，苯嗪草酮(メタミトロン)，甲霜灵(メタラキシル)和精甲霜灵的和，灭虫(メチオカルブ)，杀扑磷(メチダチオン)，甲氧氯(メトキシクロール)，甲氧虫酰肼(メトキシフェノジド)，叶菌唑(メトコナゾール)，磺草唑胺(メトスラム)，methosulfuronmethyl(メトスルフロンメチル)，烯虫酯(メトプレン)，苯氧菌胺(メトミノストロビン)，异丙甲草胺(メトラクロール)，嗪草酮(メトリブジン)，嘧菌胺(メパニピリム)，缩节胺(メピコートクロリド)，速灭磷(メビンホス)，苯噻草胺(メフェナセット)，吡咯二酸二乙酯(メフェンピルジエチル)，灭锈胺(メプロニル)，久效磷(モノクロトホス)，绿谷(モノリニュロン)，草达灭(禾大壮)(モリネート)，乳氟禾草灵(ラクトフェン)，利谷隆(リニュロン)，砜嘧磺隆(リムスルフロン)，氟丙氧脲(ルフェヌロン)，苄呋菊酯(レスメトリン)，环草定(レナシル)，氧化的fenbutatus(酸化フェンブタスズ)，环氧丙烷(酸化プロピレン)和二溴乙烯(二臭化エチレン)。
不含所述农药的罗汉果提取物可以通过以下来制备：将含有选自烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵中的至少一种的农药的含有农药的罗汉果提取物作为材料，使用前述(i)记载的制备方法，除去所述农药。
本发明的不含农药的罗汉果提取物是高度安全的，因为它至少不含有农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)。此外，因为具备上述(b)和(c)的特征，可以用没有甜味品质降低(杂味(不愉快味道))的，在甜味的基本性能的8个项目(令人一直想要的(後引き)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，爽快的感觉(すっきり感)，醇厚(まろやかさ)，浓郁(こく)，苦味(苦み))中具有良好的甜味品质，具有接近于糖的甜味品质的甜味剂组合物。
(iii)甜味剂组合物和含有它的制品
本发明的甜味剂组合物是由前述不含农药的罗汉果提取物组成，或除了所述不含农药的罗汉果提取物之外还含有辅助甜味成分。
此处，作为辅助甜味成分，意味着具有甜味或调整甜味剂的甜味强度和甜味品质的成分，可以列举例如单糖，二糖，寡糖，以及糖醇等的糖类甜味剂；非糖甜味剂；和食物纤维。
糖类甜味剂中，作为单糖，可以列举果糖，葡萄糖，木糖，山梨糖，半乳糖，和异构化糖等。作为二糖，可以列举麦芽糖，乳糖，海藻糖，蔗糖，异构化乳糖和帕拉金糖(パラチノース)等。作为寡糖，可以列举低聚木糖，低聚果糖，大豆糖(ダイズオリゴ糖)，异麦芽寡糖(イソマルトオリゴ糖)，乳蔗糖(ラクトスクロース)，低聚半乳糖，乳果糖(ラクチュロース)，帕拉金糖寡糖(パラチノースオリゴ糖)，蔗糖寡糖，茶低聚糖(テアンオリゴ糖)和海藻寡糖等。作为糖醇，可以列举麦芽糖醇，木糖醇，山梨糖醇，甘露糖醇，和帕拉金糖醇等。此外，非糖甜味剂中，作为合成甜味剂，可以列举阿斯巴甜，advantame(アドバンテーム)，安赛蜜k，三氯蔗糖，和纽甜(ネオテーム)等。另外，非糖甜味剂中，作为天然甜味剂，可以列举甘草提取物，甜叶菊提取物，和奇异果甜蛋白(ソーマチン)提取物等。
作为食物纤维，可以列举果胶，瓜尔豆酶分解物，葡甘露聚糖，β-葡聚糖，聚葡萄糖，菊粉，琼脂糖，藻酸钠，角叉菜胶，岩藻依聚糖，紫菜，海带，和难消化性糊精等的水溶性食物纤维；和如纤维素，半纤维素，木质素，壳多糖和壳聚糖等的不溶性食物纤维。优选的是水溶性食物纤维。
本发明的甜味剂组合物，在除了含有不含农药的罗汉果提取物之外还含有辅助甜味剂成分的情况下，作为甜味剂组合物100重量％中包含的不含农药的罗汉果提取物的比例，可以列举
本发明的甜味剂组合物是，如上文所述，由本发明的不含农药的罗汉果提取物组成，或者除了所述不含农药的罗汉果提取物之外还含有辅助甜味剂成分的甜味剂组合物，不仅安全性高，而且没有甜味品质降低(杂味(不愉快味道))，具有接近糖的优良甜味品质。因此，它可以适合用作饮料和食品，准药物，药物或化妆品的甜味剂。此外，此处，作为化妆品，可以举出例如口红、唇膏等施用于唇部的化妆品。
本发明的甜味剂组合物，在其由本发明的不含农药的罗汉果提取物组成的情况下，其甜度是糖(蔗糖)的200-400倍。可以通过在不含农药的罗汉果提取物中混合(配合)辅助甜味成分来适当调节这种甜度。
通过由本发明方法制备的罗汉果提取物、本发明的罗汉果提取物和本发明的甜味剂组合物，可以以更加安全的形式提供低能量(低热量(低卡路里))或零能量(零热量(零卡路里))的甜味剂组合物。这种低能量或零能量的甜味剂组合非常适用于肥胖症或糖尿病患者这样能量摄入受限的人或必需或者希望节食的人的甜味剂组合物。
(iv)除去杂味(不愉快味道)的罗汉果提取物
根据通过本发明的方法制备的罗汉果提取物或本发明的罗汉果提取物，不仅可以以高收率回收由罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i组成的罗汉果苷类(罗汉果糖苷)，将农药选择性和有效地除去，还可以除去和减少罗汉果提取物中含有的特定杂味(不愉快味道)成分。因此，与通过现有方法制备的罗汉果提取物相比，可以获得具有良好的甜味品质的罗汉果提取物。
因此，通过本发明的活性炭的处理方法也可以应用于采用不使用农药或农药使用少的栽培方法等而获得的罗汉果。即，在提取罗汉果过程期间增加通过本发明的活性炭处理，或者将已经用现有以方法提取的罗汉果提取物进一步进行活性炭处理，由此能够除去减少特定杂味(不愉快味道)成分。因此，无论如何，与通过现有方法制备的罗汉果提取物相比，可以获得具有良好甜味品质的罗汉果提取物。
[实施例]
以下，通过实验例，实施例和比较例等对本发明进行详细说明。然而，这些实验例等旨在是说明性的，并不限制本发明的范围。在本发明的范围内的其它方面、优点和修改对于本发明所属领域的技术人员将是明确的。
参考例1罗汉胡糖苷的定量方法
罗汉果提取物中包含的罗汉果苷v和其他罗汉果糖苷(罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的定量使用高效液相色谱法(hplc)进行。使用的装置和条件如下。
(1)用于罗汉果苷v的定量的装置和条件
·hplc装置：prominencelc-20ad((株)島津製作所制)
·lc柱：shodexasahipaknh2-504e(250mm×4.6mmi.d.、(株)昭和電工制)
·lc条件
注射体积(注入量)：20微升
柱温度：40℃
流动相：74体积％乙腈/26体积％的水
流速：1.0ml/分钟
检测波长：uv203nm
(2)被用于其它罗汉果糖苷的定量的装置和条件
·hplc装置：prominencelc-20ad((株)島津製作所制)
·lc柱：kaseisorblcods2000(150×4.6mmi.d.，株()東京化成工産制)
·lc条件
注射体积(注入量)：20μl
柱温度：40℃
流动相：a相：水，b相：乙腈
0→10分钟(等度)：80体积％的a相，20体积％的b相，
10→50分钟(线性梯度)：“a相80体积％，b相20体积％”→“a相45体积％，b相55体积％”
流速：1.0ml/分钟
检测波长：uv203nm。
参考例2农药含量的测定
(1)预处理
在通过液相色谱/质谱(lc/ms)量化罗汉果提取物中含包含的农药量之前，将罗汉果提取物按照以下工序进行预处理，所得处理物质作为“ls/ms测定用样品”。
称取2g罗汉果提取物放入200ml容量的量瓶中，加水充分溶解后，再加入水，定容至200ml，使其成为“定容液1”。使用20ml容量的全量吸液管(ホールピペット)，取出20ml等分试样的定容溶液1，并将其加入到含有含有氯化钠10g的已经加入水200ml的500ml容量的分液漏斗中。向其中加入乙酸乙酯/正己烷＝(1:3)50ml，振荡1分钟，静置约30分钟，然后分离出有机层。该操作再重复两次，合并有机层。向分离的有机层中加入20g硫酸钠，使其静置30分钟以上，干燥。从干燥的有机层中，使用滤纸(5a，125mm，由(株)アドバンテック東洋制造)过滤硫酸钠，回收滤液。用20ml乙酸乙酯/正己烷＝(1:3)洗涤使用的硫酸钠和滤纸，并将洗涤液合并至上述滤液。将这种滤液在旋转蒸发仪上浓缩至干。将浓缩物溶解在少量丙酮中，转移到50ml容量的量瓶中并浓缩至干。用甲醇溶解该干燥物并转移到2ml容量的量瓶中。进一步用少量甲醇洗涤上述50ml容量的量瓶，将洗涤液转移到上述2ml容量的量瓶中，加入甲醇至定容至2ml，使其成为“定容液2”。用エキクロディスク3((株)日本ジェネティクス制)过滤该定容溶液2并回收滤液。使如此制备的滤液成为“ls/ms测量用样品”。
(2)罗汉果提取物中所含农药的测定
在罗汉果提取物中所含的农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的定量是通过液相色谱法/质谱测定进行(lc/ms)。使用的设备和条件如下。此外，通过所述方法而得的各种农药的定量限值均为0.01ppm。
(2-1)用于农药定量的设备和条件
·lc/ms装置：lcms-2010ev((株)島津製作所制造)
·lc柱：inertsilods-3(250mm×4.6mm,i.d.5μm、(株)ジーエルサイエンス制)
·lc条件
注射体积(注入量)：30μl
柱温度：40℃
流动相：80体积％乙腈/20体积％水
流速：1.0ml/分钟
·ms条件
电离法：apci法，正模式
雾化器气体流量：2.5l/分钟
apci界面温度：350℃
cdl温度：200℃
热块(ヒートブロック)温度：300℃
(2-2)农药除去率的计算方法
通过农药除去处理而得的农药除去率可以从下式(1)得到。
[数学式4]
农药除去率(％)＝{(a0-a1)/a0}×100(1)
a0：农药处理前罗汉果提取物中的农药含量(ppm)
a1：农药处理后罗汉果提取物中的农药含量(ppm)
参考例3罗汉果提取物中包含的农药和罗汉果糖苷的比例
由桂林莱茵生物科技股▲分▼有限公司获得的罗汉果提取物(罗汉果糖苷(luohanguoglucoside)40％黄色型)(以下也称为“原料罗汉果提取物”)中含有的罗汉果糖苷(罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的含量和农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的含量按照上述参考例1和2中记载的方法求出。
结果示于表3和表4。此外，各表中记载的值均是原料罗汉果提取物(干燥物(干物质))中所含的各成分的干燥物(干物质)换算值。
[表3]
【表4】
实验例1使用活性炭制备不含农药的罗汉果提取物
(1)将原料罗汉果提取物(由桂林莱茵生物科技股▲分▼有限公司获得的罗汉果提取物(罗汉果糖苷(luohanguoglucoside)40％黄色型)5g在含有25体积％乙醇的水溶液中溶解，定容至500毫升。将这种定容溶液通过使用泵以流速3.3ml/分钟注入，填充有先前用25体积％乙醇/75％体积水溶胀过夜的活性炭(粒状)(实施例1，比较例1-3)的40毫升柱(柱内径：15mm，长度：300mm)。
[活性炭]
实施例1：碘吸附能力1610mg/g(fg－3：(株)日本エンバイロケミカルズ制)
比较例1：碘吸附能力990mg/g(ブロコールcm：(株)太平化学産産制)
比较例2：碘吸附能力≧1000mg/g，和<1500mg/g(クラレコールkl：(株)クラレケミカル制)
比较例3：碘吸附能力>1000mg/g，和<1500mg/g(gcn1240puls：(株)キャボット·ノリットジャパン制造)。
在此，通过40毫升溶胀的活性炭的重量，对于fp-3是13.84克，ブロコールcm是17.46g，对于クラレコールkl是18.04克，对于gcn1240puls是20.67克。
(2)向柱中注入罗汉果提取物溶液总量(500毫升)、回收洗脱液后，将25体积％乙醇/75体积％水200毫升以3.3ml/分钟的流速注入、洗涤活性炭，回收洗涤液。使对回收的洗脱液和洗涤液进行混合而得的回收液进行减压浓缩，除去乙醇后，通过冷冻干燥机vd-800r(タイテック)得到粒状活性炭处理物。
所有上述操作均在室温下进行。
(3)对于由上述(2)得到的活性炭处理物(0.2w/w％水溶液),根据参考例1中描述的方法、对各个活性炭处理物(实施例1，比较例
然后，所测定的各个含量、求出由各个活性炭处理得到的罗汉果糖苷回收率(％)及残留农药除去率(％)。这些如表5和6所示。
[表5]
【表6】
在实施例1的活性炭处理物中包含的农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的量均小于检测限(检测界限)(小于0.002ppm)，已经确认，这些农药的任何一种都已经被除去。
如可以从上面的结果可以看出的，可以确认，通过使用碘吸附能力为至少1500mg/g以上的活性碳、优选1600mg/g的上述活性炭，可以100％除去在罗汉果提取物中包含的残留农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)。这些残留农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的分配系数(logpow)为1.71以上。由此可以认为，至少分配系数(logpow)为1.71以上的化合物，可以通过使用碘吸附能力1500mg/g以上的活性炭、优选1600mg/g以上的活性炭的处理被除去。
此外，确认的是，通过上述活性炭的处理，活性碳处理前在含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i的总和)可以70％以上的收率收回。此外，活性碳处理之后所述不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v、和赛门苷i)的总量为相对于不含农药的罗汉果提取物100重量％的33重量％以上。
实验例2使用活性炭制备不含农药的罗汉果提取物
(1)将原料罗汉果提取物(由桂林莱茵生物科技股▲分▼有限公司获得，(罗汉果糖苷(luohanguoglucoside)40％黄色型)5g溶于水50毫升，定容。将这种定容液全量转移到烧杯中，向其中加入1g活性炭(粉末状)(实施例
[粉末状活性炭]
实施例2：焦糖脱色能力86.2％(クラレコールpk-d：(株)クラレケミカル制)，粒度75微米(μm)以下86微米(μm)以上
实施例3：焦糖脱色能力94.6％(fp-1：(株)日本エンバイロケミカルズ制)实施例4：焦糖脱色能力95.7％(fp-6：(株)日本エンバイロケミカルズ制)比较例4：焦糖脱色能力73.1％(fp-4：(株)日本エンバイロケミカルズ制)比较例5：焦糖脱色能力17.6％(fp-8：(株)日本エンバイロケミカルズ制)比较例6：焦糖脱色能力70.9％(fp-4：(株)日本エンバイロケミカルズ制)比较例7：焦糖脱色能力80％(brocholb标记活性炭(ブロコールb印活性炭)：(株)太平化学産業制)
(2)针对上述(1)中得到的活性炭处理物，根据参考例1中记载的方法、对各个活性炭处理物(实施例2-4，比较例4-7)中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v，罗汉果苷iv，11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的量进行测定。此外，在根据参考例2(1)中记载的方法进行预处理，根据(2)所述的方法对各个活性炭处理物(实施例2-4，比较例4-7)中包含的农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)的量进行测定。然后，由所测定的各个含量，求出通过各个活性炭处理所得罗汉果糖苷回收率(％)、残留农药的检出量(ppm)和残留农药除去率(％)。这些如表7至9中所示。
[表7]
【表8】
【表9】
如可以从上面的结果可以看出，确定的是，通过使用焦糖脱色能力为至少85％的活性炭，可以100％除去在罗汉果提取物中包含的残留农药(烯酰吗啉、三唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、甲霜灵和精甲霜灵)(小于检测限[0.002ppm])。此外，针对实施例4的活性碳处理物，测定所本说明书段落[0078]中描述的农药的残留量，所述活性碳处理物都低于定量界限[0.01ppm]，不包含这些农药中的任一种。
此外，确认的是，通过上述活性炭处理，可以以活性碳处理之前的含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)的总量的至少85重量％、优选90重量％的高收率而进行回收。因此，明确的是，通过使用焦糖脱色能力为至少85％的活性炭，可以以高收率回收用作甜味剂成分的罗汉果糖苷，同时可以有选择地和有效地除去残留农药。
此外，确认的是，通过上述活性炭处理，可以将活性碳处理前的含有农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v和赛门苷i)以70％以上、具体的是80％以上、更具体地是85％以上的收率进行回收。此外，活性碳处理后的不含农药的罗汉果提取物中包含的罗汉果糖苷(罗汉果苷v、罗汉果苷iv、11-氧代-罗汉果苷v、和赛门苷i)的总量为相对于所述不含农药的罗汉果提取物100重量％的33重量％以上。
实验例3不含农药的罗汉果提取物的成分分析和甜味品质评价
(1)成分分析
将活性炭未处理物(原料罗汉果提取物)和活性碳处理(实施例3和4，比较例7)，供于具有在参考例1(罗汉果糖苷的定量法)(2)中记载的hplc装置和条件的高效液相色谱法。对所得活性炭未处理物的色谱图和活性炭处理物的色谱图进行比较，保留时间16分钟附近检测出的峰(在下文中，此峰也被称为“p16”)的面积(下文称为“p16面积”)通过活性炭处理显著减少。
此外，在活性炭处理中，证实了，实施例4和3的p16面积，比比较例7的p16面积显著更小，通过用焦糖脱色能力为至少85％，优选90％以上的活性炭的处理，可以从罗汉果提取物中有效除去和减少p16成分。
表8中示出了，p16面积与在上述条件的hplc过检测出的所有峰的总面积的比例(％)。如下图所示，活性炭处理物(实施例3和4)中的任一种p16面积与所有峰的总面积比例(％)均为3％以下，特别为2.5％以下。
此处，对于面积，通过labsolutions(㈱島津製作所)求出各个峰的面积值。p16面积的比例(％)以所有峰面积总计值的比例而算出。此处，保留时间16分钟附近、此处保留时间15分钟到17分钟之间的峰成为占所有峰面积的比例。
[表10]
另外，在实验例1中，确认的是，针对通过碘吸附能力为1500mg/g以上的活性炭处理的罗汉果提取物(活性炭处理物：实施例1)，同样地通过所述活性炭处理，从原料罗汉果提取物中除去减少p16成分。
[表11]
(2)鉴定p16成分
分取上述p16成分，将其供于参考例2(2)(2-1)中描述的条件的lc/ms分析，证实了，该成分是分子量为358道尔顿的化合物。
(3)甜味品质评估
将通过上述(1)制备的活性炭处理物(实施例3和4，比较例7)制备成0.1w/v％水溶液(受试样品)，针对15名感官(官能)测验专门小组成员进行感官(官能)试验。
具体地说，使每位专门小组成员品尝各受试样品，针对3个受试样品，以甜味品质的杂味(不愉快味道)(苦味(苦み)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，没有爽快的感觉(すっきり)(令人一直想要的(後引き))，没有醇厚(まろやかさ)和浓郁(こく))减少的顺序，给予从1到3的名次，求出了名次的合计值。结果示于表12。
[表12]
将此结果由克莱默检验(クレーマー検定)(样本数k＝3，受试者数n＝15：p<0.05，a-b＝23-37)评价的结果，比较例7在三个受试样品中不能显著有利(好まれず)(对于实施例3和4杂味多的方面存在显著差异)，实施例4在3种类中显著有利(对于比较例7和实施例3杂味少的方面存在显著差异)。
实验例4不含农药的罗汉果提取物的甜味品质评价
在感官(官能)试验中，将熟练的专家小组成员5人作为对象，活性炭未处理物(原料罗汉果提取物)和活性碳处理物(实施例4)的甜味品质进行感官(官能)试验(第8项)。
(1)样品的制备
(1-1)预制备
将活性炭未处理物(原料罗汉果提取物)和活性炭处理物(实施例4)分别供于下述条件的hplc，将保留时间27分钟前洗脱的级份(以下称为“级份(前)”)和保留时间27分钟以后洗脱的级份(以下称为“级份(后)”)分别分离取出，用旋转蒸发器减压浓缩，冷冻干燥。此处，在分离取出时，是5w/w％的水溶液。另外，在下面的色谱图中时，是0.2％的水溶液。
[hplc条件]
·hplc装置：lc-10advp((株)島津製作所制)
·lc柱：nucleosil100-5c18(250mm×20mmi.d.、(株)glサイエンス制)
·lc条件
注射体积(注入量)：1毫升
柱温度：40℃
流动相：a相：水，b相：乙腈
0→10分钟(等度)：80体积％的a相，20体积％的b相，
10→50分钟(线性梯度)：“a相80体积％，b相20体积％”→“a相45体积％，b相55体积％”
流速：9.999ml/分钟
检测波长：uv203nm。
将活性炭未处理物的级分(前)和级份(后)，和活性炭处理物的级分(前)和级份(后)分别供于实验例3中所描述的条件的hplc，获得色谱图(图1：活性炭未处理物，图2：活性炭处理物)。如可从各个级分(后)的色谱图(图1和2)的比较中可以看出的，已证实，通过活性炭处理，保留时间16分钟附近的峰成分被除去减少。
(1-2)样品制备
将通过上述制备的活性炭未处理物、活性炭未处理物的级份(后)，和活性碳处理的级分(后)分别称取0.05g，加入25克水，使其成为甜味品质评价样品。
(2)甜味品质评价
使健康受试者5成为对象，将罗汉果提取物和由实施例4得到的活性炭未处理物，活性炭未处理物的级分(后)，和活性炭处理的级分(后)溶解在水中，制备0.2％的水溶液。在绝对评价该水溶液中，对甜味品质(8项：苦味(苦み)，持久(しつこさ)，难以改变的状态(くせ)，涩味，刺激，爽快的感觉(すっきり)，醇厚(まろやかさ)，浓郁(こく))通过视觉模拟评分(視覚的アナログ尺度)(视觉模拟量表(visualanaloguescale)：vas)方法进行评价。vas是将感觉作为在一条直线上的点而评价的方法，已经被广泛应用于甜味等的基本味道筛查检查(例如，「高齢者における主観的健康感アセスメント法の検討」、psychologicalresearch2004,no.3，89－98：「4基本味における味覚機能のスクリーニング検査法の構築」、顎機能誌20；115-129,2014)。在这个实验中，vas显示为100mm的直线，在左端显示“苦味弱”，向在右端显示“苦味强”，针对对象者记入在线上的点。例如，如果所述被记入的点在从左端算起50mm处被记入，则该受试者为感到50点的苦味(图3)。即，各个苦味的数值越大则不好的苦味越强，相反数值越小苦味弱甜味品质良好。顺便提及，将试验液随机地交给受试者。在每个项目中，测定从vas线左端到点的距离，并将其平均值绘制在轴上，以创建雷达图。
结果示于图3。
如图3所示，几乎没有观察到在活性炭未处理物和活性炭未处理物的级份(后)的甜味品质之间的差别。由此可以确认，罗汉果提取物的级份(前)几乎不涉及甜味品质。在另一方面，确定的是，与活性炭处理物的级份(后)相比，在苦味(苦み)、难以改变的状态(くせ)、刺激、爽快的感觉(すっきり)和浓郁(こく)的项目中，评价合计点降低，具有良好的甜味品质。
此外，如示于图1和2所示，活性炭未处理物的级份(后)和活性炭处理物的级分(后)的区别在于分子量358道尔顿的p16成分的有无。由此可以看出，可以认为，这种p16成分与罗汉果提取物甜味品质的降低(杂味)密切相关。由此可知，根据本发明的活性炭处理，从罗汉果提取物，不仅能够有效地除去减少残留农药，而且还能够有效地除去减少与甜味品质下降(杂味)有关的p16成分，因此，可以用于制备安全且甜味品质良好的甜味剂组合物的方法。
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