一种灰树花全活性物质的制备方法及其产品与流程

本发明属于食品生物技术及功能保健领域，具体涉及一种灰树花全活性物质的制备方法。

背景技术：

灰树花（grifolafrondosa）隶属真菌界盖孔菌科，俗称“栗蘑”，是食、药兼用蕈菌，具有显著的保健作用和很高的药用价值。且多种营养素居各种灰树花之首，能促进儿童身体健康成长和智力发育，被誉为“灰树花王子”和“华北人参”。研究证明，灰树花具有显著的抗肿瘤、降血糖、降血脂、抑制b型肝炎dna复制、抗hiv病毒、抗氧化以及改善免疫系统功能等功效。

随着生活水平的提高和生活节奏的改变，被称为“富贵病”的“三高症”发病率越来越高，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，高血脂可以引起血管栓塞；高血压可以引起脑出血和脑血管破裂；高血糖可以引起糖尿病。全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。但目前临床上常用的口服降血糖血脂药都有副作用，均可引起消化系统的不良反应，有些还会引起麻疹、贫血、白细胞和血小板减少、头晕和乏力等。因此寻找开发具有增强机体免疫力作用的保健食品，以辅助药物治疗，在有效的控制血糖和血脂的同时降低副作用已引起人们的关注。

经检索，在灰树花降血糖血脂领域已经有蒋峰等的“一种复合真菌多糖营养剂”（专利申请号200410102983.6），将灰树花提取物与其它真菌等提取物制成一种复合营养剂，并将制成的产品用在修复胃肠粘膜、抗肿瘤、护肝上；雷红等的“一种降血糖组合食物”（专利申请号201110284448.7），将由灰树花子实体提取得到的多糖粉与传统降糖中药黄芪按特定质量比例混合制成一种降糖食物，并对由四氧嘧啶（alloxan）致病的ⅰ型糖尿病小鼠进行降血糖功能试验，发现其具有降血糖功能。

虽然灰树花有显著并且明确的降血脂降血压，以及抗癌，保肝健胃等功效，但目前在高效制备灰树花的活性成分的领域的技术上，往往存在灰树花活性物质制备不完全，制作工艺繁琐，利用率低等问题。目前，尚未见将灰树花采用顺序溶剂（极性从小到大）提取制备活性物质的方法报道，且此方法对大规模工业化的生产具有良好的开发前景。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种灰树花全活性物质的制备方法，其特征在于：以灰树花为原料，采用从小到大不同极性的溶剂提取及复合蛋白酶酶解等方法制备灰树花全活性物质，根据中医“君臣佐使”理论以及现代营养学理论，用所述方法制备的灰树花活性物质与其他具有相同功效的药食同源活性成分复配制备辅助调节血糖、血脂、血压、保肝等功效的营养功能性食品。

所述的一种灰树花全活性物质的制备方法，具体包括如下步骤：

a.灰树花子实体用粉碎机磨成细粉备用；

b.将制得的灰树花细粉先用体积分数85%-95%（v/v）乙醇为提取溶剂在45-70℃中超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得灰树花醇提液ⅰ；

c.将获得的体积分数85%-95%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用体积分数55%-65%乙醇在45-70℃进行超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得灰树花醇提液ⅱ；

d.再将得到的体积分数55%-65%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用去离子水在70-100℃进行超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得灰树花水提液；

e.最后将获得灰树花水提剩余物利用复合蛋白酶在37-65℃进行酶解0.5-3h，过滤获得灰树花的酶解物；

f.所述b-d制备得到的灰树花醇提液ⅰ、灰树花醇提液ⅱ、灰树花水提液ⅲ经减压浓缩、干燥后分别制备灰树花醇提取物ⅰ、灰树花醇提取物ⅱ、灰树花水提取物ⅲ，这三者与步骤e酶解物组成灰树花全活性物质。

其中提取溶剂与提取物料的体积重量比（l:kg）为10:1-50:1。

其中复合蛋白酶添加量为灰树花细粉重量的0.1-2%。

利用所述方法制备灰树花全活性物质的一种或几种提取物与其他具有相同功效的药食同源活性成分复配制备如口服液，胶囊，片剂，冲剂，固体饮料的不同剂型的营养、功能性食品。

本发明的有益之处

（1）本发明通过利用从小到大不同极性的溶剂提取及复合蛋白酶酶解、过滤、离心、减压浓缩、干燥制备灰树花85%-95%（v/v）乙醇提取物、灰树花55%-65%（v/v）乙醇提取物、灰树花水提取物以及酶解物。可以更全面的制备更多功能的灰树花活性物质，提高资源利用率。

（2）将本发明根据中医的“君臣佐使”以及现代营养学理论，用所述方法制备的一种或几种提取物与其他具有相同功效的药食同源活性成分复配，制备的功能性食品长期食用可起到辅助调节血糖、血脂、血压及保肝等功效。

附图说明

图1为灰树花不同极性提取物及酶解物对高脂饮食诱导肥胖大鼠血清中总胆固醇的影响；

图2为灰树花不同极性提取物及酶解物对高脂饮食诱导肥胖大鼠血清中甘油三脂的影响；

图3为灰树花不同极性提取物及酶解物对高脂饮食诱导肥胖大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的影响；

图4为灰树花不同极性提取物及酶解物对高脂饮食诱导肥胖大鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的影响。

具体实施方式

为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

灰树花活性物质的制备：

a.灰树花子实体用粉碎机磨成细粉备用；

b.将制得的灰树花细粉先用体积分数95%（v/v）乙醇为提取溶剂在50℃中超声辅助提取0.5h，过滤获得灰树花醇提液ⅰ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅰ；

c.将获得的体积分数95%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用体积分数55%（v/v）乙醇在50℃超声辅助提取0.5h，过滤获得灰树花醇提液ⅱ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅱ；

d.将上述浓缩液ⅰ和ⅱ用喷雾干燥器干燥得灰树花95%（v/v）及55%（v/v）乙醇提取物干粉。

其中提取溶剂与提取物料的体积重量比（l:kg）为10:1。

应用例1

一种辅助降血糖血脂的灰树花保健胶囊，由下述按重量份计的原料组成：

灰树花95%（v/v）乙醇提取物15份、灰树花55%（v/v）乙醇提取物10份、灵芝95%乙醇提取物1份、黑木耳水提物2份。

制备方法：

1、通过实施例1制备得到灰树花95%v/v乙醇提取物、灰树花55%v/v乙醇提取物；

2、按用料重量份比称取灰树花95%v/v乙醇提取物、灰树花55%v/v乙醇提取物、灵芝95%v/v乙醇提取物、黑木耳水提物，混合均匀，在75℃干燥3h，得到胶囊填充物；

3、将胶囊填充物经软胶囊压丸机进行制备，制得的胶囊重量为10mg/粒，塑铝包装即可。

实施例2

灰树花全活性物质的制备：

a.灰树花子实体用粉碎机磨成细粉备用；

b.将制得的灰树花细粉先用体积分数90%（v/v）乙醇为提取溶剂在60℃中超声辅助提取1h，过滤获得灰树花醇提液ⅰ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅰ；

c.将获得的体积分数90%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用体积分数60%乙醇在60℃超声辅助提取1h，过滤获得灰树花醇提液ⅱ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅱ；

d.再将得到的体积分数60%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用去离子水在100℃进行超声辅助提取1h，过滤获得灰树花水提液，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅲ；

e.最后将获得灰树花水提剩余物利用复合蛋白酶在40℃进行酶解1h，过滤获得灰树花的酶解液，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅳ；

f.将上述浓缩液ⅰ、ⅱ、ⅲ和ⅳ用喷雾干燥器干燥得灰树花90%、60%（v/v）乙醇提取物、水提取物和酶解物干粉。

其中提取溶剂与提取物料的体积重量比（l:kg）为20:1。

应用例2

一种辅助降血糖降血脂、保肝的灰树花保健口服液的制备方法的步骤为：

灰树花保健口服液，由下述按重量份计的原料组成：

灰树花90%（v/v）乙醇提取物20份、灰树花60%（v/v）乙醇提取物15份、灰树花水提取物15份、灰树花酶解物提取物15份、灵芝水提取2份、黑木耳水提物1份、绞股蓝水提物1份、甘草提取物4份。

制备方法：

1、通过实施例2制备得到灰树花90%（v/v）乙醇提取物、灰树花60%（v/v）乙醇提取物、灰树花水提取物及灰树花酶解物；

2、按配方称取灵芝水提取2份、黑木耳水提物1份、绞股蓝水提物1份、甘草提取物4份；

3、将步骤1和步骤2提取物充分混合后用10倍蒸馏水溶解，经密封管道进入封闭的灌装面中，密封灌装制成辅助降血糖降血脂、保肝的灰树花保健口服液。

实施例3

灰树花活性物质的制备：

a.灰树花子实体用粉碎机磨成细粉备用；

b.将制得的灰树花细粉先用体积分数85%（v/v）乙醇为提取溶剂在65℃中超声辅助提取1.5h，过滤获得灰树花醇提液ⅰ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅰ；

c.将获得的体积分数85%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用体积分数55%（v/v）乙醇在70℃超声辅助提取1.5h，过滤获得灰树花醇提液ⅱ，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅱ；

d.再将得到的体积分数55%（v/v）乙醇提取的灰树花剩余物利用去离子水在100℃进行超声辅助提取1.5h，过滤获得灰树花水提液，再放入到高压萃取罐中浓缩1h，得到浓缩液ⅲ；

e.将上述浓缩液ⅰ、ⅱ、ⅲ用喷雾干燥器干燥得灰树花85%、55%（v/v）乙醇提取物和水提取物干粉。

其中提取溶剂与提取物料的体积重量比（l:kg）为30:1。

应用例3

一种辅助降血糖降血脂、保肝的灰树花保健口服液的制备方法的步骤为：

灰树花保健口服液，由下述按重量份计的原料组成：

灰树花85%（v/v）乙醇提取物5份、灰树花55%（v/v）乙醇提取物5份、灰树花水提取物15份、灵芝醇提取5份、黑木耳水提物5份、枸杞提取物3份。

制备方法：

1、通过实施例3制备得到灰树花85%（v/v）乙醇提取物、灰树花55%（v/v）乙醇提取物及灰树花水提取物；

2、按配方称取灰树花85%（v/v）乙醇提取物5份、灰树花55%（v/v）乙醇提取物5份、灰树花水提取物15份、灵芝醇提取5份、黑木耳水提物5份、枸杞提取物3份，充分混合，用10倍的蒸馏水溶解后经密封管道进入封闭的灌装面中，密封灌装制成辅助降血糖降血脂、保肝的灰树花保健口服液。

药效实验

灰树花不同极性提取物及酶解物对高脂饮食诱导肥胖大鼠血脂水平的影响

实验方法：

以符合现代人类生活方式（动物性食物为主的高脂饮食习惯）的角度出发，采用高糖高脂饲料（基础饲料67%，猪油10%，蔗糖20%，胆固醇3%）建立高脂饮食诱导的糖脂代谢紊乱模型，进行为期2个月的膳食干预喂养试验。实验设7组，包括正常对照组（nfd）、高脂对照组（hfd）、灰树花95%（v/v）乙醇提取物组（gf95）、灰树花55%（v/v）乙醇提取物组（gf55）、灰树花水提取物组（gfwe）、灰树花水提取物剩余物酶解（gfem）及灰树花混合物组（gfmx）。给予受试样品60天后，麻醉已禁食wistar大鼠，在洁净工作台中，先通过心尖取血，将血液收集在采血管中，通过自动生化分析仪及试剂盒分析血清中总胆固醇(tc)、甘油三脂(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)等水平。

实验结果：如图1，实验结果表明：与正常对照组比较，高脂对照组小鼠血清中tc、tg和ldl含量不同程度地高于正常对照组，而hdl则明显低于正常对照组；灰树花95%乙醇提取物组（gf95）及灰树花活性物质混合物组（gfmx）小鼠血清中tc、tg和ldl-c含量明显低于高脂对照组，hdl-c含量则高于高脂对照组；灰树花55%（v/v）乙醇提取物组（gf55）、灰树花水提取物组（gfwe）、灰树花水提取物剩余物酶解（gfem）组小鼠血清中tg、tc和ldl-c含量虽不同程度的低于高脂对照组，但不显著，而hdl-c含量则都明显高于高脂对照组。由此可得本发明提供的灰树花全活性物质具有降血脂作用，且其中灰树花95%（v/v）乙醇提取物及灰树花活性物质混合物的效果较好。