专利名称：新的应激蛋白的制作方法
技术领域：
本发明涉及氧-调节蛋白150(ORP150)。具体地说，本发明涉及人ORP150的氨基酸序列、编码人ORP150的多核苷酸、人ORP150基因的启动子以及特异于人ORP150的抗体。
自从脑缺血损伤中70KDa热激蛋白(HSP70)的表达被首次报道以来，以HSP70为代表的多种应激蛋白已被报道在心肌缺血和动脉粥样硬化损伤以及脑缺血损伤中有所表达。在缺血损伤中发现了HSP的诱导，即针对热应激的防御机制，这一事实暗示机体对缺血性低氧的应激反应是涉及蛋白质再生的主动现象。至于经培养的细胞，可导致体内缺血症的应激状态如低血糖和缺氧显示出可诱导一组非-HSP应激蛋白，如葡萄糖-调节蛋白(GRP)和氧-调节蛋白(ORP)。
因此期望ORP可在诊断和治疗缺血性疾病中起作用。
Hori等人最近报道将经培养的大鼠星形细胞暴露于低氧环境可诱导150、94、78、33和28KDa蛋白[J.Neurochem.、66。973-979(1996)]。将除150KDa蛋白以外的这些蛋白质分别鉴定为GRP94、GRP78、血加氧酶1和HSP28，而150KDa蛋白(大鼠ORP150)仍未被鉴定。另外，人ORP150蛋白仍未见有报道。
因此，本发明的目的是提供人和大鼠的ORP150蛋白及其氨基酸序列以及编码所述蛋白质的核苷酸序列。
本发明的另一目的是提供可用作人ORP150基因启动子的核苷酸序列。
本发明的另一目的是提供抗人ORP150蛋白的抗体或其片段，它们可用于诊断和治疗缺血性疾病。
在一个实施方案中，本发明涉及一种通过在低氧状况下诱导即可得到的多肽，其序列包含(a)SEQ ID NO1或3的氨基酸序列或其片段；(b)由SEQ ID NO2或4的核苷酸序列编码的氨基酸序列或其片段；或(c)通过在SEQ ID NO1或3的氨基酸序列中缺失、增加、插入或取代一个或多个氨基酸得到的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本发明涉及编码上述实施方案之多肽的多核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明涉及能与上述多核苷酸或其片段杂交并具有启动子活性的多核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明涉及含有本发明之核苷酸序列的重组DNA。
在另一个实施方案中，本发明涉及含有本发明之重组DNA的表达载体。
在另一个实施方案中，本发明涉及与本发明之多肽特异性结合的抗体或其片段。
图1表示人ORP基因外显子-内含子结构图，黑方块表示外显子。
图2表示将人星形细胞瘤U373细胞暴露于多种类型的应激条件下之后，从中提取的ORP150 mRNA的Northern印迹的分析结果。
图3表示成人组织的ORP150 mRNA的Northern印迹分析结果。
本发明多肽的一个实施方案是含有序列表中SEQ ID NO1所示氨基酸序列的多肽，该多肽构成了通过在低氧状态下诱导即可得到的人氧-调节蛋白ORP150。本发明多肽的另一个实施方案是含有序列表中SEQID NO3所示氨基酸序列的多肽，该多肽组成了通过在低氧状态下诱导即可得到的大鼠氧-调节蛋白ORP150。本发明的多肽还包括各含有上述多肽之一部分的多肽，以及含有全部或部分上述多肽的多肽。众所周知突变会自然发生；ORP150蛋白的一些氨基酸可被替换或缺失，而其他氨基酸可被加入或插入。突变也可通过基因工程技术来诱导，因此应理解由这种一个或多个氨基酸残基的突变得到的基本上同源的多肽也包括在本发明的范围之内，只要它们通过在低氧状态下的诱导是可以得到的话。
本发明多核苷酸的一个实施方案是编码上述多肽中任一个的多核苷酸。具体地说，所说多核苷酸的例子是含有序列表中SEQ ID NO2所示核苷酸序列的多核苷酸，即，人ORP150 cDNA。含有序列表中SEQID NO4所示核苷酸序列的多核苷酸也包括在本发明范围之内，此多核苷酸是大鼠ORP150 cDNA。含有这些多核苷酸的一部分的多核苷酸，以及含有这些多核苷酸之全部或部分的多核苷酸也包括在本发明的范围之内。如上文所提及，通过突变ORP150基因的一些碱基可以被替换、缺失、加入或插入，所得的具有部分不同之核苷酸序列的多核苷酸也包括在本发明的范围之内，只要它们是基本上同源的，并编码通过在低氧状态下诱导即可得到的多肽。
本发明多核苷酸的另一个实施方案是包含或含有序列表中SEQ IDNO12所示核苷酸序列的全部或部分的多核苷酸，它是含有人ORP150基因启动子区的多核苷酸。能与此多核苷酸在常规杂交条件(如在含有0.1％SDS的0.1×SSC中，65℃)下杂交并具有启动子活性的多核苷酸也包括在本发明的范围之内。所说启动子区的成功克隆会显著推动人ORP150基因的功能性分析，并促进其用于治疗缺血性疾病。
本文所用术语“启动子”的定义为含通过位于所需基因的上游或下游来激活或抑制所说基因转录的核苷酸序列的多核苷酸。
本文所用术语“重组DNA”的定义为含有上述多核苷酸的任何DNA。
本文所用术语“表达载体”的定义为含有本发明的重组DNA并通过导入适当宿主表达所需蛋白质的任何载体。
本文所用术语“克隆”不仅仅指其中已导入所感兴趣的多核苷酸的细胞，也指所感兴趣的多核苷酸本身。
本文所用术语“在低氧状态下诱导”是指通过将细胞暴露于氧-耗尽的大气中来增加蛋白质的合成。
本发明的氨基酸序列和核苷酸序列例如可按下述方法被确定首先，从暴露于低氧状态下的大鼠星形细胞中制备poly(A)+RNA，使用随机的六聚体引物由所说的poly(A)+RNA合成cDNA之后，使用pSPORT1载体(由Life Technology制备)或类似物制备cDNA文库。
接着，使用根据上文用于制备cDNA文库的pSPORT1载体的核苷酸序列合成的寡核苷酸引物以及由纯化的大鼠ORP150的N-末端氨基酸序列推导出的简并核苷酸序列进行PCR，从而产生大量扩增的DNA片段。然后将这些DNA片段插入到PT7 Blue载体(由Novagen生产)或类似载体中用于克隆以得到其所具有的核苷酸序列可精确编码N-末端氨基酸序列的克隆。通过使用常规的蛋白质纯化法，如柱层析和电泳法及适当将其联合使用即可纯化ORP150。
另外，通过使用上述克隆中的插入片段为探针进行集落杂交以筛选上述大鼠星形细胞cDNA文库，即可得到其所具有的插入片段据认为可编码大鼠ORP150的克隆。从此克隆的5’和3’末端使其分段缺失，使用从已测定的核苷酸序列制备的寡核苷酸引物来按序测定核苷酸序列。如果由此得到的克隆不编码大鼠全长ORP150，则可以插入片段5’或3’区域的核苷酸序列为基础合成寡核苷酸探针，然后筛选含有在5’或3’方向进一步延伸之核苷酸序列的克隆，例如可使用基于使用磁性小珠之杂交的GeneTrapper cDNA Positive SelectionSystem试剂盒(由Life Technology制备)。由此可得到大鼠ORP150基因的全长cDNA。
单独进行下列步骤以得到大鼠ORP150 cDNA的人相应物。由暴露于低氧状态下的人星形细胞瘤U373制备Poly(A)+RNA，使用随机六聚体引物和一种寡(dT)引物由所说的Poly(A)+RNA合成了cDNA之后，将所说的cDNA插入pSPORT1载体的EcoRI位点以制备cDNA文库，然后使用Gene Trapper试剂盒得到人ORP150 cDNA，按与上述大鼠ORP150相同的方法测定其核苷酸序列。
由此测定的人ORP150 cDNA的核苷酸序列示于序列表中的SEQ ID NO2，根据此序列可测定人ORP150的氨基酸序列。
使用例如Ogawa等人的方法[Ogawa、S.、Gerlach、H.、Esposito、C.、Mucaulay、A.P.、Brett、J.、and Stern、D.、J.Clin.Invest.、85、1090-1098(1990)]可将星形细胞暴露于低氧状态下。
接着进行下列步骤以得到人ORP150基因组的DNA。使用购自Clontech的基因组文库(得自人体胎盘、Cat.#HL1067J])。通过使用得自大鼠cDNA克隆的由5′非翻译区的202bp和编码区的369bp组成的DNA片段以及得自人cDNA的含有终止密码子的1351bp DNA片段为探针的杂交进行筛选。分离含有ORP150基因的两个克隆，一个含有外显子1至24，另一个含有外显子16至26；完整的ORP150基因由这两个克隆联合组成。测定15851bP的人ORP150基因组DNA的核苷酸序列；从其5′末端至外显子2中的翻译起始密码子ATG之前的核苷酸序列示于序列表中的SEQ ID NO12。
如上文所提及，本发明包括含有全部或部分具有序列表中SEQ IDNO1所示氨基酸序列之多肽(人ORP150)的多肽。本发明还包括具有序列表中SEQ ID NO1所示氨基酸序列之多肽的全部或部分；例如，含有序列表中SEQ ID NO2所示核苷酸序列的全部或部分的多核苷酸也包括在本发明的范围内。本发明还包括抗本发明这些多肽的特异性抗体及其片段。本发明的多肽、编码它们的多核苷酸、抗这些多肽的特异性抗体或其片段在诊断和治疗缺血性疾病中有用，可用于开发缺血性疾病的治疗药物。
使用常规方法[Current Protocols inImmunology、Coligan、J.E.et al.eds.、2.4.1.-2.4.7、John Wiley & Sons.NewYork(1991)]可制备抗本发明多肽的抗体，所述多肽含有人或大鼠ORP150的全部或部分。具体地说，切下通过例如SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的大鼠ORP150带，并施予家兔等用于免疫接种，然后从经免疫接种的动物中收集血液以得到抗血清。如有必要可通过使用固定化蛋白质A的亲和层析等技术得到IgG级分。与ORP150的部分氨基酸序列相同的肽可被化学合成为多抗原肽(MAP)[Tam.J.P、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、85、5409-5413(1988)]，并可按与上相同的方法用于免疫接种。
也可以通过常规方法[Cell和Tissue Culture；Laboratory Procedure(Doyle、A.etal.、eds.)25A1-25C4.John Wiley &Sons.New York(1994)]，使用含有人或大鼠ORP150之全部或部分的多肽为抗原制备单克隆抗体。具体地说，通过将经所说抗原免疫接种的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系统相融合可制备杂交瘤，所得杂交瘤经培养或腹膜内移植到小鼠体内产生单克隆抗体。
将经纯化的这些抗体通过蛋白酶消化得到的片段也可用作本发明的抗体。
实施例下述实施例阐明了本发明，但不会以任何方式限制本发明。实施例1细胞培养和低氧状态的获得通过修改已述的方法[Maeda、Y.、Matsumoto、M.、Ohtsuki、T.、Kuwabara、K.、Ogawa、S.、Hori、O.、Shui、D.Y.、Kinoshita、T.、Kamada、T.、and Stern、D.、J.Exp.Med.、180、2297-2308(1994)]从新生大鼠体内得到大鼠原代星形细胞和小神经胶质细胞。简而言之，摘取出生后24小时之内的新生Sprague-Dawley大鼠的脑半球，小心除去脑膜，于37℃在经Joklik修改后含有Dispase II(3mg/ml；Boehringer-Mannheim、Germany)的最低必需培养基(MEM)(Gibco，Boston MA)中消化脑组织。离心后，在添加有胎牛血清(FCs；10％；Cell Grow、MA)的MEM中重悬并培养细胞沉淀物。
10天后，加入阿拉伯呋喃糖胞苷(10μg/ml；WakoChemicals、Osaka、Japan)经48小时以防止成纤维细胞过量生长，将培养瓶置于振荡平台上振荡。然后吸出漂浮的细胞(此为小神经胶质细胞)，通过形态学观察标准和用抗-神经胶质纤维酸性蛋白质抗体的免疫组织化学染色来鉴定附着细胞群体。用于实验的培养物是基于这些技术的＞98％的呈形细胞。
人星形细胞瘤细胞系U373得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，并在添加有10％FCS的Dulbecco氏改良的Eagle培养基(由Life Technology生产)中培养。
细胞以约5×104细胞/cm2的密度在上述培养基中铺敷，当培养物铺满时，使用一个与低氧室器(Coy Laboratory Products.Arm Arbor MI)，相连的培养箱将细胞培养物暴露于低氧状态下所述低氧室中如前所述[Ogawa、S.、Gerlach、H.、Esposito、C.、Macaulay、A.P.、Brett、J.、and Stem、D.、J.Clin.Invest.、85、1090-1098(1990)]维持有低氧张力的潮湿空气。实施例2大鼠150KDa多肽的纯化和N-末端测序收获在低氧状态下已暴露48小时的大鼠原代星形细胞(约5×108细胞)，用PBS(PH7.0)将细胞洗三次，用含NP-40(1％)、PMSF(1mM)、和EDTA(5mM)的PBS抽提蛋白质。然后将提取物过滤(0.45μm硝酸纤维素膜)，或者流经还原性的SDS-PAGE(7.5％，约25μg)，或者用50ml含NP-40(0.05％)和EDTA(5mM)的PBS(PH7.0)稀释2-3mg蛋白质并用于FPLC Mono Q(床体积为5ml，PharmaciaSweden)。
用0.2M NaCl洗柱，用上行盐梯度(0.2-1.8M NaCl)洗脱，每份级分(0.5ml)的10μl和分子量标记物(Biorad)一起被用于还原性的SDS-PAGE(7.5％)。通过银染，肉眼可见凝胶中的蛋白质。合并从FPLC Mono Q上洗脱的含有150KDa多肽的级分(#7-8)，通过超滤(Amicon)浓缩50倍，将约200μg蛋白质用于制备性的还原SDS-PAGE(7.5％)。电泳后，将凝胶中的蛋白质电泳转移(2A/cm2)到聚偏二氟乙烯(PVDF)纸(Millipore、Tokyo)上，将纸干燥，用考马斯亮蓝染色，切下对应于150KDa蛋白质(OPR150)的带以使用自动化肽测序系统(Applied Biosystems、Perkin-Elmer)进行N-末端测序，从而测定了N-末端的31个氨基酸序列(SEQ IDNO5)。实施例3大鼠星形细胞cDNA文库的制备通过酸胍-苯酚-氯仿法[Chomczynski、P.andSacchi.N.、Anal.Biochem.、162、156-159(1987)]由大鼠原代呈形细胞(1.1×108细胞)制备总RNA，所述细胞中ORP150已在低氧状态下被诱导。使用所得的300μg总RNA，根据使用寡(dT)-磁性珠(由PerceptiveDiagnostics制备)的Poly(A)+RNA纯化方案进行两次纯化可产生poly(A)+RNA。然后根据SuperscriptChoiceSystem(由Life Technology制备)的方案，使用随机的六聚体引物合成双链cDNA，并插入pSPORT1载体的EcoRI位点以制备由5.4×105个独立克隆组成的cDNA文库。实施例4大鼠ORP150 cDNA的克隆按下述克隆大鼠的ORP150 cDNA首先，为了得到集落杂交的探针，可使cDNA文库进行PCR，所述PCR使用一个20碱基的引物5′-AATACG ACTCACTATAGGGA-3′(SEQ IDNO6)和20碱基的混合引物5′-AARCCIGGIGTNCCNATGGA-3′(SEQ ID NO8)，前者相当于pSPORT1载体中T7启动子区的反义链，后者含有肌苷残基和简并的多核苷酸，并以由N-末端氨基酸序列(LAVMSVDLGSESMKVAIVKPGVPMEIVLNKE)(SEQ ID NO5)内的部分序列(KPGVPME)(SEQ ID NO7)推导出的寡核苷酸序列为基础制备；将所得的长约为480bp的PCR产物插入pT7 Blue质粒载体。使用自动化核苷酸测序仪(由Perkin-Elmer Applied Biosystems生产)测定含有预期大小(480bp)的相当于PCR产物之插入片段的克隆的核苷酸序列，由此得到一个克隆，它含有一39核苷酸序列，所述序列编码的肽与插入片段中大鼠ORP150-特异性氨基酸序列KPGVPMEIVLNKE(SEQ ID NO9)相同。
使用上述克隆中的插入片段作为探针，使得自经培养的大鼠呈形细胞的RNA进行Northern印迹；结果表明长度约为4kb的mRNA是经低氧处理诱导的。随即，通过使用α-[32P]dCTP的随机引物标记法(Ready TOGO.由Pharmacia制备)标记上述克隆中的插入片段以产生探针。使用此探针，通过集落杂交筛选cDNA文库的1.2×104个克隆以得到含有一个2800bp插入片段的克隆。通过使用千序列缺失试剂盒(由Takara Shuzo生产)制备缺失突变体以测定此克隆插入片段的核苷酸序列。
由于此克隆不含ORP150编码序列的3′区，应以上述插入片段3′末端附近特异性核苷酸序列为基础制备下列两个20碱基的寡核苷酸以得到全长序列。
5′-GCACCCTTGAGGAAAATGCT-3′(SEQ ID NO10)5′-CCCAGAAGCCCAATGAGAAG-3′(SEQ ID NO11)使用这两个寡核苷酸，根据Gene Trapper cDNAPositive Selection System(由LifeTechnology制备)的方案从大鼠呈形细胞cDN文库中选择含有完整编码区的克隆并测定其核苷酸序列。
由此测定的大鼠ORP150 cDNA的核苷酸序列示于序列表中的SEQ ID NO4。根据此核苷酸序列测定的大鼠ORP150的氨基酸序列示于序列表中的SEQ ID NO3。实施例5人U373 cDNA文库的制备按与实施例3中所述相同的方法，从U373细胞(1×108细胞)中纯化poly(A)′RNA，所述细胞中ORP150已在低氧状态下被诱导。然后根据Super-script Choice System(由Life Technology制备)的方案，使用随机六聚体引物和寡(dT)引物的1∶1混合物合成双链cDNA。将此cDNA插入pSPORT1载体的EcoRI位点以制备由2×105个独立克隆组成的cDNA文库。
具体地说，按下述制备文库按实施例3中所述Ogawa等人的方法[Ogawa、S.、Gerlach、H.、Esposito、C.、Mucaulay、A.P.、Brett、J.、and Stern、D、J.Clin.Invest.、85、1090-1098(1990)]将培养于10个塑料培养皿(直径为150mm)中的人U373细胞(1×107细胞/皿)在低氧状态下处理48小时，然后通过酸胍-苯酚-氯仿法[Chomczynski、P.and Sacchi、N.、Anal.Biochem.、162、156-159(1987)]制备总RNA。使用所得的500μg总RNA，根据使用寡(dT)磁性珠(由Perceptive Diagnostics制备)的poly(A)′RNA纯化进行两次纯化可产生poly(A)′RNA。然后根据Superscript Choice System(由LifeTechnology制备)的方案，使用5μg poly(A)′RNA和随机六聚体引物与寡(dT)引物的1∶1混合物合成双链cDNA，并插入pSPORT1载体的EcoRI位点以制备由2×105个独立克隆组成的人U373 cDNA文库。实施例6人ORP150 cDNA的克隆使用根据上述大鼠ORP150 cDNA特异序列制备的两个引物(SEQ ID NO10和SEQ ID NO11)，根据GeneTrapper DNA Positive SelectionSystem(由Life Technology制备)的方案从人U373 cDNA文库中选择含有完整编码区的克隆并测定其核苷酸序列。由此测定的人ORP150 cDNA的核苷酸序列示于序列表中的SEQID NO2。
具体地说，根据Gene Trapper cDNA PositiveSelection System(由Life Technology制备)的方案扩增人U373 cDNA文库的2×104个克隆。用试剂盒中包括的Gene II和Exo III核酸酶处理纯化自扩增克隆的5微克质粒以得到单链DNA。将根据上述大鼠URP150 cDNA-特异性序列制备的寡核苷酸(SEQ ID NO10)生物素酰基化，随后于37℃与上述单链DNA杂交1小时。通过使用链霉抗生物素蛋白-磁性珠可选择性地回收与衍生自大鼠ORP150 cDNA的寡核苷酸杂交的单链DNA，使用序列表中SEQ ID NO10所示寡核苷酸为引物，用试剂盒中包括的修复酶处理上述单链DNA，从而产生双链质粒DNA。
然后根据Gene Trapper cDNA PositiveSelection System的方案将双链质粒DNA导入Electro Max DH10B细胞(由Life Techology制备)，再根据相同方案，使用根据大鼠ORP150 cDMA-特异性序列制备的两个引物(SEQ ID NO10和SEQ ID NO11)进行集落PCR以选择可产生约为550bp PCR产物的克隆。这些克隆中最长插入片段的核苷酸序列，即相当于人ORP150 cDNA被测定为序列表中的SEQ ID NO2。
根据此核苷酸序列测定的人ORP150的氨基酸序列示于序列表中的SEQ ID NO1。
用纯化的大鼠ORP150得到的N-末端氨基酸序列(SEQ IDNO5)相当于由人和大鼠cDNA推导出的氨基酸33-63，这表明最先的32个残基代表分泌的信号肽。C-末端的KNDEL序列与KDEL序列(保留ER中存在蛋白质的信号)[Pelham、H.R.B.、TrendsBiochem.Sci.15、483-486(1990)]类似，可行使ER-保留信号功能。N-末端信号肽和C-末端ER-保留信号一样序列的存在暗示ER中的ORP150残基与Kuwabara等人报道的免疫细胞化学分析结果一致[Kuwabara、K.、Matsumoto、M.、Ikeda、J.、Hori、O.、Ogawa、S.、Maeda、Y.、Kitagawa、K.、Imuta、N.、Kinoshita、T.、Stern、D.M.、Yanagi、H.、and Kamada、T.、J.Biol.Chem.271.5025-5032(1996)]。
用BLAST程序分析蛋白质基本数据[Altschul、S.F.、Gish、W.、Miller、W.、Myers、E.W.、andLipman、D.J.、J.Mol.、Biol.215、403-410(1990)]表明ORP150N-末端的一半与许多HSP70家族序列的ATPase区县有中等程度的相似性。以配对的方式排列以进一步分析[Pearson、W.R.、and Lipman、D.J.、Proc.Natl.Acad.Sci.WSA 85、2444-2448(1988)]揭示出人ORP150的氨基酸33-426与可诱导的人HSP70.1[Hunt、C.、and Morimoto、R.I.、Proc.Natl.Acad.Sci.WSA 82、6455-6459(1985)]和组成型的牛HSC70[Deluca-Flaherty、C.、andMckay、D.B.、Nucleic Acids Res.18、5569(1990)]的氨基酸1-380有32％相同，人HSP70.1和牛HSC70是HSP70家族典型的成员。与属于大HSP70一样蛋白质新亚族的HSP70RY和仓鼠HSP110类似的际加区域[Lee-Yoon、D.、Easton、D.、Murawski、M.、Burd、R.、and Subjeck、J.R.、J.Biol.chem。270、15725-15733(1995)]进一步延伸？残基487。用PROSITE探查蛋白质序列基元[Bairoch、A.、and Bucher、P.、Nucleic Acids Res、22、3583-3589(1994)]表明ORP150含有3个HSP70蛋白质家族特征中的2个FYDMGSGSTVCTIV(氨基酸230-243、SEQID NO1)和VILVGGATRVPRVQE(氨基酸380-394、SEQ ID NO1)，它们分别与HSP70特征2和3完全匹配，以及VDLG(氨基酸38-41，SEQ ID NO1)，它与特征1的前4个氨基酸匹配。另外，ORP150的N-末端区含有推导的ATP-结合位点，该位点由相当于Bork等人特定描述[Bork、P.、Sander、C.、and Valencia、A.、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89、7290-7294(1992)]的5个基元的区域(氨基酸36-53、197-214、229-243、378-400和411-425、SEQ ID NO1)组成。尽管HSP70家族的C-末端推导的肽结合区一般较不保守[Rippmann、F.、Taylor、W.R.、Rothbard、J.B.、andGreen、N.M.、EMBO J.10、1053-1059(1991)]、侧翼为氨基酸701和898的C-末端区(SEQ ID NO1)与HSP110共有可估计剂的相似性(氨基酸595-793，SEQID NO1；29％相同)。实施例7人ORP150基因组DNA的克隆使用购自Clontech的人基因组文库(得自人胎盘，Cat.#HL1067J.Lot #1221、2.5×106个独立的克隆)。由得自大鼠cDNA克隆的202bp的5′非翻译区、369bp的编码区以及出自人cDNA的含有终止密码子的1351bp DNA片段组成的DNA片段被用作噬斑杂交的探针。
将已经被1×106pfu人基因组文库感染的大肠杆菌LE392涂布于10个直径为15cm的培养皿中以形成噬斑。将噬菌体DNA转移到尼龙膜(Hybond-N*、Amersham)上并用氢氧化钠变性，然后通过紫外光照射来固定。使用DNA标记试剂盒(Ready To Go、Pharmacia)标记大鼠cDNA探针，并与Rapidhyb缓冲液(Amersham)中的膜杂交。于65℃保温2小时之后，用0.2×SSC-0.1％SDS洗尼龙膜，在显像底片(Fuji PhotoFilm)上检测阳性克隆。由于分离出的克隆仅含外显子1至24，可用相同方法使用人cDNA探针再次筛选相同文库的1.5×106个克隆，最终分离出1个克隆。发现此克隆含有外显子16至26，它与上述克隆的3′区有重叠。通过联合这两个克隆从而克隆出ORP150基因的完整区域。
用BamHI裂解这两个克隆并亚克隆到pBluescript IISK(Stratagene)中，随后测定完整的15851bp的人ORP150基因组DNA的核苷酸序列，从5′末端至外显子2中翻译起始密码子ATG之前的核苷酸序列示于序列表中的SEQ ID NO12。
另外，将15851bp的人ORP150基因组DNA的核苷酸序列与序列表中SEQ ID NO2所示的人ORP150 cDNA的核苷酸序理相比较，结果表明外显子在以下所示的位置处存在。外显子位置的示意图示于1中。
(SEQ ID2中的碱基位置)外显子1 1908-2002 (1-95)外显子2 2855-2952 (96-193)外显子3 3179-3272 (194-287)外显子4 3451-3529 (288-366)外显子5 3683-3837 (367-521)外显子6 3962-4038 (522-598)外显子7 4347-4528 (599-780)外显子8 4786-4901 (781-896)外显子9 6193-6385 (897-1089)外显子10 6593-6727 (1090-1224)外显子11 6850-6932 (1225-1307)外显子12 7071-7203 (1308-1440)外显子13 7397-7584 (1441-1628)外显子14 7849-7987 (1629-1767)外显子15 9176-9236 (1768-1828)
外显子16 9378-9457 (1829-1908)外显子17 9810-9995 (1909-2094)外显子18 10127-10299(2095-2267)外显子19 10450-10537(2268-2355)外显子20 10643-10765(2356-2478)外显子21 10933-11066(2479-2612)外显子22 11195-11279(2613-2697)外显子23 12211-12451(2698-2938)外显子24 12546-12596(2939-2989)外显子25 13181-13231(2990-3040)外显子26 13358-14823(3041-4503)实施例8Northern印迹分析通过使用DNA标记试剂盒(Pharmacia)用[α-32P]dCTP(3,000Ci/mmol；Amersham Corp.、Arlington Heights、IL)标记人ORP150 cDNA的4.5-Kb EcoRI片段以用作杂交探针。将20μg由暴露于不同应激条件下的U373细胞制备的总RNA电泳并转移到Hybond N+膜上(Amersham Corp.)。从Clontech购买MultipleTissue Northern Blot，其中每个泳道含有2μg得自所需成人组织的poly(A)′RNA。于65℃，在Rapid-hyb缓冲液(Amersham Corp.)中使滤膜与各自经[α-32P]dCTP标记的人ORP150、GRP78、Hsp70、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)和β-肌动蛋白cDNA杂交，于65℃用含0.1％SDS的0.1×SSC洗涤，随后进行放射自显影。
如图2所示，通过在低氧状态下暴露24-48小时可大大增强ORP150 mRNA的水平，在平行实验中，用2-脱氧葡萄糖(25mM、24小时)或霉素(5μg/ml，24小时)处理可将ORP150mRNA的水平增强到可与经低氧状态下诱导的水平相当。诱导水平也与典型的葡萄糖调节蛋白GRP78的mRNA水平相当。热激处理不能显著增强ORP150 mRNA。
已发现ORP150 mRNA在肝脏和胰腺中高度表达，而在肾脏和脑中仅观察到很少的表达(图3)。另外，ORP150表达的组织特异性与GRP78的十分类似。在含有发育良好之ER并合成大量分泌型蛋白质的组织中观察到的较高水平的表达与ORP150位于ER中这一发现一致(Kuwabara、K.、Matsumoto、M.、Ikeda、J.、Hori、O.、Ogawa、S.、Maeda、Y.、Kitagawa、K.、Imuta、N.、Kinoshita、T.、Stern、D.M.、Yanagi、H.、and Kamada、T.、J.Biol.Chem.271、5025-5032(1996))。
总之，特征性的一级蛋白质结构和已发现的与GRP78在应激诱导能力和组织特异性上的相似性暗示ORP150在蛋白质折叠和ER中的分泌起到重要作用，可能作为分子伴侣与其他GRP协同作用以处理环境中的应激刺激。
本领域技术人员仅使用常规实现会认知或能确定本文特定描述的本发明特殊实施方案的很多等同方案，这种等同方案欲包括在下述权利要求的范围之内。
序列表(1)一般资料(iii)序列数12(2)序列数SEQ ID NO1的资料(i)序列特征(A)长度999个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线形(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Met Ala Asp Lys Val Arg Arg Gln Arg Pro Arg Arg Arg Val Cys Trp5 10 15Ala Leu Val Ala Val Leu Leu Ala Asp Leu Leu Ala Leu Ser Asp Thr20 25 30Leu Ala Val Met Ser Val Asp Leu Gly Ser Glu Ser Met Lys Val Ala35 40 45Ile Val Lys Pro Gly Val Pro Met Glu Ile Val Leu Asn Lys Glu Ser50 55 60Arg Arg Lys Thr Pro Val Ile Val Thr Leu Lys Glu Asn Glu Arg Phe65 70 75 80Phe Gly Asp Ser Ala Ala Ser Met Ala Ile Lys Asn Pro Lys Ala Thr85 90 95Leu Arg Tyr Phe Gln His Leu Leu Gly Lys Gln Ala Asp Asn Pro His100 105 110Val Ala Leu Tyr Gln Ala Arg Phe Pro Glu His Glu Leu Thr Phe Asp115 120 125Pro Gln Arg Gln Thr Val His Phe Gln Ile Ser Ser Gln Leu Gln Phe130 135 140Ser Pro Glu Glu Val Leu Gly Met Val Leu Asn Tyr Ser Arg Ser Leu145 150 155 160Ala Glu Asp Phe Ala Glu Gln Pro Ile Lys Asp Ala Val Ile Thr Val165 170 175Pro Val Phe Phe Asn Gln Ala Glu Arg Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala180 185 190Arg Met Ala Gly Leu Lys Val Leu Gln Leu Ile Asn Asp Asn Thr Ala195 200 205Thr Ala Leu Ser Tyr Gly Val Phe Arg Arg Lys Asp Ile Asn Thr Thr210 215 220Ala Gln Asn Ile Met Phe Tyr Asp Met Gly Ser Gly Ser Thr Val Cys225 230 235 240Thr Ile Val Thr Tyr Gln Met Val Lys Thr Lys Glu Ala Gly Met Gln245 250 255Pro Gln Leu Gln Ile Arg Gly Val Gly Phe Asp Arg Thr Leu Gly Gly260 265 270Leu Glu Met Glu Leu Arg Leu Arg Glu Arg Leu Ala Gly Leu Phe Asn275 280 285Glu Gln Arg Lys Gly Gln Arg Ala Lys Asp Val Arg Glu Asn Pro Arg290 295 300Ala Met Ala Lys Leu Leu Arg Glu Ala Asn Arg Leu Lys Thr Val Leu305 310 315 320Ser Ala Asn Ala Asp His Met Ala Gln Ile Glu Gly Leu Met Asp Asp325 330 335Val Asp Phe Lys Ala Lys Val Thr Arg Val Glu Phe Glu Glu Leu Cys340 345 350Ala Asp Leu Phe Glu Arg Val Pro Gly Pro Val Gln Gln Ala Leu Gln355 360 365Ser Ala Glu Met Ser Leu Asp Glu Ile Glu Gln Val Ile Leu Val Gly370 375 380Gly Ala Thr Arg Val Pro Arg Val Gln Glu Val Leu Leu Lys Ala Val385 390 395 400Gly Lys Glu Glu Leu Gly Lys Asn Ile Asn Ala Asp Glu Ala Ala Ala405 410 415Met Gly Ala Val Tyr Gln Ala Ala Ala Leu Ser Lys Ala Phe Lys Val420 425 430Lys Pro Phe Val Val Arg Asp Ala Val Val Tyr Pro Ile Leu Val Glu435 440 445Phe Thr Arg Glu Val Glu Glu Glu Pro Gly Ile His Ser Leu Lys His450 455 460Asn Lys Arg Val Leu Phe Ser Arg Met Gly Pro Tyr Pro Gln Arg Lys465 470 475 480Val Ile Thr Phe Asn Arg Tyr Ser His Asp Phe Asn Phe His Ile Asn485 490 495Tyr Gly Asp Leu Gly Phe Leu Gly Pro Glu Asp Leu Arg Val Phe Gly500 505 510Ser Gln Asn Leu Thr Thr Val Lys Leu Lys Gly Val Gly Asp Ser Phe515 520 525Lys Lys Tyr Pro Asp Tyr Glu Ser Lys Gly Ile Lys Ala His Phe Asn530 535 540Leu Asp Glu Ser Gly Val Leu Ser Leu Asp Arg Val Glu Ser Val Phe545 550 555 560Glu Thr Leu Val Glu Asp Ser Ala Glu Glu Glu Ser Thr Leu Thr Lys565 570 575Leu Gly Asn Thr Ile Ser Ser Leu Phe Gly Gly Gly Thr Thr Pro Asp580 585 590Ala Lys Glu Asn Gly Thr Asp Thr Val Gln Glu Glu Glu Glu Ser Pro595 600 605Ala Glu Gly Ser Lys Asp Glu Pro Gly Glu Gln Val Glu Leu Lys Glu610 615 620Glu Ala Glu Ala Pro Val Glu Asp Gly Ser Gln Pro Pro Pro Pro Glu625 630 635 640Pro Lys Gly Asp Ala Thr Pro Glu Gly Glu Lys Ala Thr Glu Lys Glu645 650 655Asn Gly Asp Lys Ser Glu Ala Gln Lys Pro Ser Glu Lys Ala Glu Ala660 665 670Gly Pro Glu Gly Val Ala Pro Ala Pro Glu Gly Glu Lys Lys Gln Lys675 680 685Pro Ala Arg Lys Arg Arg Met Val Glu Glu Ile Gly Val Glu Leu Val690 695 700Val Leu Asp Leu Pro Asp Leu Pro Glu Asp Lys Leu Ala Gln Ser Val705 710 715 720Gln Lys Leu Gln Asp Leu Thr Leu Arg Asp Leu Glu Lys Gln Glu Arg725 730 735Glu Lys Ala Ala Asn Ser Leu Glu Ala Phe Ile Phe Glu Thr Gln Asp740 745 750Lys Leu Tyr Gln Pro Glu Tyr Gln Glu Val Ser Thr Glu Glu Gln Arg755 760 765Glu Glu Ile Ser Gly Lys Leu Ser Ala Ala Ser Thr Trp Leu Glu Asp770 775 780Glu Gly Val Gly Ala Thr Thr Val Met Leu Lys Glu Lys Leu Ala Glu785 790 795 800Leu Arg Lys Leu Cys Gln Gly Leu Phe Phe Arg Val Glu Glu Arg Lys805 810 815Lys Trp Pro Glu Arg Leu Ser Ala Leu Asp Asn Leu Leu Asn His Ser820 825 830Ser Met Phe Leu Lys Gly Ala Arg Leu Ile Pro Glu Met Asp Gln Ile835 840 845Phe Thr Glu Val Glu Met Thr Thr Leu Glu Lys Val Ile Asn Glu Thr850 855 860Trp Ala Trp Lys Asn Ala Thr Leu Ala Glu Gln Ala Lys Leu Pro Ala865 870 875 880Thr Glu Lys Pro Val Leu Leu Ser Lys Asp Ile Glu Ala Lys Met Met885 890 895Ala Leu Asp Arg Glu Val Gln Tyr Leu Leu Asn Lys Ala Lys Phe Thr900 905 910Lys Pro Arg Pro Arg Pro Lys Asp Lys Asn Gly Thr Arg Ala Glu Pro915 920 925Pro Leu Asn Ala Ser Ala Ser Asp Gln Gly Glu Lys Val Ile Pro Pro930 935 940Ala Gly Gln Thr Glu Asp Ala Glu Pro Ile Ser Glu Pro Glu Lys Val945 950 955 960Glu Thr Gly Ser Glu Pro Gly Asp Thr Glu Pro Leu Glu Leu Gly Gly965 970 975Pro Gly Ala Glu Pro Glu Gln Lys Glu Gln Ser Thr Gly Gln Lys Arg980 985 990Pro Leu Lys Asn Asp Glu Leu995(2)SEQ ID NO2的资料(i)序列特征(A)长度4503个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型cDNA(ix)特征(A)名称/关键词CDS(B)鉴定方法E(xi)序列描述SEQ ID NO2TTGTGAAGGG CGCGGGTGGG GGGCGCTGCC GGCCTCGTGG GTACGTTCGT GCCGCGTCTG60TCCCAGAGCT GGGGCCGCAG GAGCGGAGGC AAGAGGGGCA CTATGGCAGA CAAAGTTAGG 120AGGCAGAGGC CGAGGAGGCG AGTCTGTTGG GCCTTGGTGG CTGTGCTCTT GGCAGACCTG 180TTGGCACTGA GTGATACACT GGCAGTGATG TCTGTGGACC TGGGCAGTGA GTCCATGAAG 240GTGGCCATTG TCAAACCTGG AGTGCCCATG GAAATTGTCT TGAATAAGGA ATCTCGGAGG 300AAAACACCGG TGATCGTGAC CCTGAAAGAA AATGAAAGAT TCTTTGGAGA CAGTGCAGCA 360AGCATGGCGA TTAAGAATCC AAAGGCTACG CTACGTTACT TCCAGCACCT CCTGGGGAAG 420CAGGCAGATA ACCCCCATGT AGCTCTTTAC CAGGCCCGCT TCCCGGAGCA CGAGCTGACT 480TTCGACCCAC AGAGGCAGAC TGTGCACTTT CAGATCAGCT CGCAGCTGCA GTTCTCACCT 540GAGGAAGTGT TGGGCATGGT TCTCAATTAT TCTCGTTCTC TAGCTGAAGA TTTTGCAGAG 600CAGCCCATCA AGGATGCAGT GATCACCGTG CCAGTCTTCT TCAACCAGGC CGAGCGCCGA 660GCTGTGCTGC AGGCTGCTCG TATGGCTGGC CTCAAAGTGC TGCAGCTCAT CAATGACAAC 720ACCGCCACTG CCCTCAGCTA TGGTGTCTTC CGCCGGAAAG ATATTAACAC CACTGCCCAG 780AATATCATGT TCTATGACAT GGGCTCAGGC AGCACCGTAT GCACCATTGT GACCTACCAG 840ATGGTGAAGA CTAAGGAAGC TGGGATGCAG CCACAGCTGC AGATCCGGGG AGTAGGATTT 900GACCGTACCC TGGGGGGCCT GGAGATGGAG CTCCGGCTTC GAGAACGCCT GGCTGGGCTT 960TTCAATGAGC AGCGCAAGGG TCAGAGAGCA AAGGATGTGC GGGAGAACCC GCGTGCCATG 1020GCCAAGCTGC TGCGTGAGGC TAATCGGCTC AAAACCGTCC TCAGTGCCAA CGCTGACCAC 1080ATGGCACAGA TTGAAGGCCT GATGGATGAT GTGGACTTCA AGGCAAAAGT GACTCGTGTG 1140GAATTTGAGG AGTTGTGTGC AGACTTGTTT GAGCGGGTGC CTGGGCCTGT ACAGCAGGCC 1200CTCCAGAGTG CCGAAATGAG TCTGGATGAG ATTGAGCAGG TGATCCTGGT GGGTGGGGCC 1260ACTCGGGTCC CCAGAGTTCA GGAGGTGCTG CTGAAGGCCG TGGGCAAGGA GGAGCTGGGG 1320AAGAACATCA ATGCAGATGA AGCAGCCGCC ATGGGGGCAG TGTACCAGGC AGCTGCGCTC 1380AGCAAAGCCT TTAAAGTGAA GCCATTTGTC GTCCGAGATG CAGTGGTCTA CCCCATCCTG 1440GTGGAGTTCA CGAGGGAGGT GGAGGAGGAG CCTGGGATTC ACAGCCTGAA GCACAATAAA 1500CGGGTACTCT TCTCTCGGAT GGGGCCCTAC CCTCAACGCA AAGTCATCAC CTTTAACCGC 1560TACAGCCATG ATTTCAACTT CCACATCAAC TACGGCGACC TGGGCTTCCT GGGGCCTGAA 1620GATCTTCGGG TATTTGGCTC CCAGAATCTG ACCACAGTGA AGCTAAAAGG GGTGGGTGAC 1680AGCTTCAAGA AGTATCCTGA CTACGAGTCC AAGGGCATCA AGGCTCACTT CAACCTGGAT 1740GAGAGTGGCG TGCTCAGTCT AGACAGGGTG GAGTCTGTAT TTGAGACACT GGTAGAGGAC 1800AGCGCAGAAG AGGAATCTAC TCTCACCAAA CTTGGCAACA CCATTTCCAG CCTGTTTGGA 1860GGCGGTACCA CACCAGATGC CAAGGAGAAT GGTACTGATA CTGTCCAGGA GGAAGAGGAG 1920AGCCCTGCAG AGGGGAGCAA GGACGAGCCT GGGGAGCAGG TGGAGCTCAA GGAGGAAGCT 1980GAGGCCCCAG TGGAGGATGG CTCTCAGCCC CCACCCCCTG AACCTAAGGG AGATGCAACC 2040CCTGAGGGAG AAAAGGCCAC AGAAAAAGAA AATGGGGACA AGTCTGAGGC CCAGAAACCA 2100AGTGAGAAGG CAGAGGCAGG GCCTGAGGGC GTCGCTCCAG CCCCAGAGGG AGAGAAGAAG 2160CAGAAGCCCG CCAGGAAGCG GCGAATGGTA GAGGAGATCG GGGTGGAGCT GGTTGTTCTG 2220GACCTGCCTG ACTTGCCAGA GGATAAGCTG GCTCAGTCGG TGCAGAAACT TCAGGACTTG 2280ACACTCCGAG ACCTGGAGAA GCAGGAACGG GAAAAAGCTG CCAACAGCTT GGAAGCGTTC 2340ATATTTGAGA CCCAGGACAA GCTGTACCAG CCCGAGTACC AGGAAGTGTC CACAGAGGAG 2400CAGCGTGAGG AGATCTCTGG GAAGCTCAGC GCCGCATCCA CCTGGCTGGA GGATGAGGGT 2460GTTGGAGCCA CCACAGTGAT GTTGAAGGAG AAGCTGGCTG AGCTGAGGAA GCTGTGCCAA 2520GGGCTGTTTT TTCGGGTAGA GGAGCGCAAG AAGTGGCCCG AACGGCTGTC TGCCCTCGAT 2580AATCTCCTCA ACCATTCCAG CATGTTCCTC AAGGGGGCCC GGCTCATCCC AGAGATGGAC 2640CAGATCTTCA CTGAGGTGGA GATGACAACG TTAGAGAAAG TCATCAATGA GACCTGGGCC 2700TGGAAGAATG CAACTCTGGC CGAGCAGGCT AAGCTGCCCG CCACAGAGAA GCCTGTGTTG 2760CTCTCAAAAG ACATTGAAGC TAAGATGATG GCCCTGGACC GAGAGGTGCA GTATCTGCTC 2820AATAAGGCCA AGTTTACCAA GCCCCGGCCC CGGCCTAAGG ACAAGAATGG GACCCGGGCA 2880GAGCCACCCC TCAATGCCAG TGCCAGTGAC CAGGGGGAGA AGGTCATCCC TCCAGCAGGC 2940CAGACTGAAG ATGCAGAGCC CATTTCAGAA CCTGAGAAAG TAGAGACTGG ATCCGAGCCA 3000GGAGACACTG AGCCTTTGGA GTTAGGAGGT CCTGGAGCAG AACCTGAACA GAAAGAACAA 3060TCGACAGGAC AGAAGCGGCC TTTGAAGAAC GACGAACTAT AACCCCCACC TCTGTTTTCC 3120CCATTCATCT CCACCCCCTT CCCCCACCAC TTCTATTTAT TTAACATCGA GGGTTGGGGG 3180AGGGGTTGGT CCTGCCCTCG GCTGGAGTTC CTTTCTCACC CCTGTGATTT GGAGGTGTGG 3240AGAAGGGGAA GGGAGGGACA GCTCACTGGT TCCTTCTGCA GTACCTCTGT GGTTAAAAAT 3300GGAAACTGTT CTCCTCCCCA GCCCCACTCC CTGTTCCCTA CCCATATAGG CCCTAAATTT 3360GGGAAAAATC ACTATTAATT TCTGAATCCT TTGCCTGTGG GTAGGAAGAG AATGGCTGCC 3420AGTGGCTGAT GGGTCCCGGT GATGGGAAGG GTATCAGGTT GCTGGGGAGT TTCCACTCTT 3480CTCTGGTGAT TGTTCCTTCC CTCCCTTCCT CTCCCACCAT GCGATGAGCA TCCTTTCAGG 3540CCAGTGTCTG CAGAGCCTCA GTTACCAGGT TTGGTTTCTG AGTGCCTATC TGTGCTCTTT 3600CCTCCCTCTG CGGGCTTCTC TTGCTCTGAG CCTCCCTTCC CCATTCCCAT GCAGCTCCTT 3660TCCCCCTGGG TTTCCTTGGC TTCCTGCAGC AAATTGGGCA GTTCTCTGCC CCTTGCCTAA 3720AAGCCTGTAC CTCTGGATTG GCGGAAGTAA ATCTGGAAGG ATTCTCACTC GTATTTCCCA 3780CCCCTAGTGG CCAGAGGAGG GAGGGGCACA GTGAAGAAGG GAGCCCACCA CCTCTCCGAA 3840GAGGAAAGCC ACGTAGAGTG GTTGGCATGG GGTGCCAGCA TCGTGCAAGC TCTGTCATAA 3900TCTGCATCTT CCCAGCAGCC TGGTACCCCA GGTTCCTGTA ACTCCCTGCC TCCTCCTCTC 3960TTCTGCTGTT CTGCTCCTCC CAGACAGAGC CTTTCCCTCA CCCCCTGACC CCCTGGGCTG 4020ACCAAAATGT GCTTTCTACT GTGAGTCCCT ATCCCAAGAT CCTGGGGAAA GGAGAGACCA 4080TGGTGTGAAT GTAGAGATGC CACCTCCCTC TCTCTGAGGC AGGCCTGTGG ATGAAGGAGG 4140AGGGTCAGGG CTGGCCTTCC TCTGTGCATC ACTCTGCTAG GTTGGGGGCC CCCGACCCAC 4200CATACCTACG CCTAGGGAGC CCGTCCTCCA GTATTCCGTC TGTAGCAGGA GCTAGGGCTG 4260CTGCCTCAGC TCCAAGACAA GAATGAACCT GGCTGTTGCA GTCATTTTGT CTTTTCCTTT 4320TTTTTTTTTT GCCACATTGG CAGAGATGGG ACCTAAGGGT CCCACCCCTC ACCCCACCCC 4380CACCTCTTCT GTATGTTTGA ATTCTTTCAG TAGCTGTTGA TGCTGGTTGG ACAGGTTTGA 4440GTCAAATTGT ACTTTGCTCC ATTGTTAATT GAGAAACTGT TTCAATAAAA TATTCTTTTC 4500TAC 4503(2)SEQ ID NO3的资料(i)序列特征(A)长度999个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线形(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO3Met Ala Ala Thr Val Arg Arg Gln Arg Pro Arg Arg Leu Leu Cys Trp5 10 15Ala Leu Val Ala Val Leu Leu Ala Asp Leu Leu Ala Leu Ser Asp Thr20 25 30Leu Ala Val Met Ser Val Asp Leu Gly Ser Glu Ser Met Lys Val Ala35 40 45Ile Val Lys Pro Gly Val Pro Met Glu Ile Val Leu Asn Lys Glu Ser50 55 60Arg Arg Lys Thr Pro Val Thr Val Thr Leu Lys Glu Asn Glu Arg Phe65 70 75 80Leu Gly Asp Ser Ala Ala Gly Met Ala Ile Lys Asn Pro Lys Ala Thr85 90 95Leu Arg Tyr Phe Gln His Leu Leu Gly Lys Gln Ala Asp Asn Pro His100 105 110Val Ala Leu Tyr Arg Ser Arg Phe Pro Glu His Glu Leu Asn Val Asp115 120 125Pro Gln Arg Gln Thr Val Arg Phe Gln Ile Ser Pro Gln Leu Gln Phe130 135 140Ser Pro Glu Glu Val Leu Gly Met Val Leu Asn Tyr Ser Arg Ser Leu145 150 155 160Ala Glu Asp Phe Ala Glu Gln Pro Ile Lys Asp Ala Val Ile Thr Val165 170 175Pro Ala Phe Phe Asn Gln Ala Glu Arg Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala180 185 190Arg Met Ala Gly Leu Lys Val Leu Gln Leu Ile Asn Asp Asn Thr Ala195 200 205Thr Ala Leu Ser Tyr Gly Val Phe Arg Arg Lys Asp Ile Asn Ser Thr210 215 220Ala Gln Asn Ile Met Phe Tyr Asp Met Gly Ser Gly Ser Thr Val Cys225 230 235 240Thr Ile Val Thr Tyr Gln Thr Val Lys Thr Lys Glu Ala Gly Thr Gln245 250 255Pro Gln Leu Gln Ile Arg Gly Val Gly Phe Asp Arg Thr Leu Gly Gly260 265 270Leu Glu Met Glu Leu Arg Leu Arg Glu His Leu Ala Lys Leu Phe Asn275 280 285Glu Gln Arg Lys Gly Gln Lys Ala Lys Asp Val Arg Glu Asn Pro Arg290 295 300Ala Met Ala Lys Leu Leu Arg Glu Ala Asn Arg Leu Lys Thr Val Leu305 310 315 320Ser Ala Asn Ala Asp His Met Ala Gln Ile Glu Gly Leu Met Asp Asp325 330 335Val Asp Phe Lys Ala Lys Val Thr Arg Val Glu Phe Glu Glu Leu Cys340 345 350Ala Asp Leu Phe Asp Arg Val Pro Gly Pro Val Gln Gln Ala Leu Gln355 360 365Ser Ala Glu Met Ser Leu Asp Gln Ile Glu Gln Val Ile Leu Val Gly370 375 380Gly Pro Thr Arg Val Pro Lys Val Gln Glu Val Leu Leu Lys Pro Val385 390 395 400Gly Lys Glu Glu Leu Gly Lys Asn Ile Asn Ala Asp Glu Ala Ala Ala405 410 415Met Gly Ala Val Tyr Gln Ala Ala Ala Leu Ser Lys Ala Phe Lys Val420 425 430Lys Pro Phe Val Val Arg Asp Ala Val Ile Tyr Pro Ile Leu Val Glu435 440 445Phe Thr Arg Glu Val Glu Glu Glu Pro Gly Leu Arg Ser Leu Lys His450 455 460Asn Lys Arg Val Leu Phe Ser Arg Met Gly Pro Tyr Pro Gln Arg Lys465 470 475 480Val Ile Thr Phe Asn Arg Tyr Ser His Asp Phe Asn Phe His Ile Asn485 490 495Tyr Gly Asp Leu Gly Phe Leu Gly Pro Glu Asp Leu Arg Val Phe Gly500 505 510Ser Gln Asn Leu Thr Thr Val Lys Leu Lys Gly Val Gly Glu Ser Phe515 520 525Lys Lys Tyr Pro Asp Tyr Glu Ser Lys Gly Ile Lys Ala His Phe Asn530 535 540Leu Asp Glu Ser Gly Val Leu Ser Leu Asp Arg Val Glu Ser Val Phe545 550 555 560Glu Thr Leu Val Glu Asp Ser Pro Glu Glu Glu Ser Thr Leu Thr Lys565 570 575Leu Gly Asn Thr Ile Ser Ser Leu Phe Gly Gly Gly Thr Ser Ser Asp580 585 590Ala Lys Glu Asn Gly Thr Asp Ala Val Gln Glu Glu Glu Glu Ser Pro595 600 605Ala Glu Gly Ser Lys Asp Glu Pro Ala Glu Gln Gly Glu Leu Lys Glu610 615620Glu Ala Glu Ala Pro Met Glu Asp Thr Ser Gln Pro Pro Pro Ser Glu625 630 635 640Pro Lys Gly Asp Ala Ala Arg Glu Gly Glu Thr Pro Asp Glu Lys Glu645 650 655Ser Gly Asp Lys Ser Glu Ala Gln Lys Pro Asn Glu Lys Gly Gln Ala660 665 670Gly Pro Glu Gly Val Pro Pro Ala Pro Glu Glu Glu Lys Lys Gln Lys675 680 685Pro Ala Arg Lys Gln Lys Met Val Glu Glu Ile Gly Val Glu Leu Ala690 695 700Val Leu Asp Leu Pro Asp Leu Pro Glu Asp Glu Leu Ala His Ser Val705 710 715 720Gln Lys Leu Glu Asp Leu Thr Leu Arg Asp Leu Glu Lys Gln Glu Arg725 730 735Glu Lys Ala Ala Asn Ser Leu Glu Ala Phe Ile Phe Glu Thr Gln Asp740 745 750Lys Leu Tyr Gln Pro Glu Tyr Gln Glu Val Ser Thr Glu Glu Gln Arg755 760 765Glu Glu Ile Ser Gly Lys Leu Ser Ala Thr Ser Thr Trp Leu Glu Asp770 775 780Glu Gly Phe Gly Ala Thr Thr Val Met Leu Lys Asp Lys Leu Ala Glu785 790 795 800Leu Arg Lys Leu Cys Gln Gly Leu Phe Phe Arg Val Glu Glu Arg Arg805 810 815Lys Trp Pro Glu Arg Leu Ser Ala Leu Asp Asn Leu Leu Asn His Ser820 825 830Ser Ile Phe Leu Lys Gly Ala Arg Leu Ile Pro Glu Met Asp Gln Ile835 840 845Phe Thr Asp Val Glu Met Thr Thr Leu Glu Lys Val Ile Asn Asp Thr850 855 860Trp Thr Trp Lys Asn Ala Thr Leu Ala Glu Gln Ala Lys Leu Pro Ala865 870 875 880Thr Glu Lys Pro Val Leu Leu Ser Lys Asp Ile Glu Ala Lys Met Met885 890 895Ala Leu Asp Arg Glu Val Gln Tyr Leu Leu Asn Lys Ala Lys Phe Thr900 905 910Lys Pro Arg Pro Arg Pro Lys Asp Lys Asn Gly Thr Arg Thr Glu Pro915 920 925Pro Leu Asn Ala Ser Ala Gly Asp Gln Glu Glu Lys Val Ile Pro Pro930 935 940Thr Gly Gln Thr Glu Glu Ala Lys Ala Ile Leu Glu Pro Asp Lys Glu945 950 955 960Gly Leu Gly Thr Glu Ala Ala Asp Ser Glu Pro Leu Glu Leu Gly Gly965 970 975Pro Gly Ala Glu Ser Glu Gln Ala Glu Gln Thr Ala Gly Gln Lys Arg980 985 990(2)SEQ ID NO4的资料(i)序列特征(A)长度3252个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型cDNA(ix)特征(A)名称/关键词CDS(B)鉴定方法E
(xi)序列描述SEQ ID NO4TGAGGATGGA GCAGCGGTCG GGCCGCGGCT CCTAGGGGAG GCAGCGTGCT AGCTTCGGGG60GCGGGCCAGT AGCGGGAGCG AGGGCCGTAC GGACACCGGT CCCTTCGGCC TTGAAGTTCA 120GGCGCTGAGC TGCCCCCTCG CGCTCGGGGT GGGCCGGAAT CCATTTCTGG GAGTGGGATC 180TTCCACCTTC ATCAGGGTCA CAATGGCAGC TACAGTAAGG AGGCAGAGGC CAAGGAGGCT 240ACTCTGTTGG GCCTTGGTGG CTGTCCTCTT GGCAGACCTG TTGGCACTGA GTGACACACT 300GGCTGTGATG TCTGTGGACC TGGGCAGTGA ATCCATGAAG GTGGCCATTG TCAAGCCTGG 360AGTGCCCATG GAGATTGTAT TGAACAAGGA ATCTCGGAGG AAAACTCCGG TGACTGTGAC 420CTTGAAGGAA AACGAAAGGT TTCTAGGTGA CAGTGCAGCT GGCATGGCCA TCAAGAACCC 480AAAGGCTACG CTCCGTTATT TCCAGCACCT CCTTGGAAAG CAGGCAGATA ACCCTCATGT 540GGCTCTTTAC CGGTCCCGTT TCCCAGAACA TGAGCTCAAT GTTGACCCAC AGAGGCAGAC 600TGTGCGCTTC CAGATCAGTC CGCAGCTGCA GTTCTCTCCC GAGGAGGTGC TGGGCATGGT 660TCTCAACTAC TCCCGTTCCC TGGCTGAAGA TTTTGCAGAA CAACCTATTA AGGATGCAGT 720GATCACCGTG CCAGCCTTTT TCAACCAGGC CGAGCGCCGA GCTGTGCTGC AGGCTGCTCG 780TATGGCTGGC CTCAAGGTGC TGCAGCTCAT CAATGACAAC ACTGCCACAG CCCTCAGCTA 840TGGTGTCTTC CGCCGGAAAG ATATCAATTC CACTGCACAG AATATCATGT TCTATGACAT 900GGGCTCGGGC AGCACTGTGT GTACCATCGT GACCTACCAA ACGGTGAAGA CTAAGGAGGC 960TGGGACGCAG CCACAGCTAC AGATCCGGGG CGTGGGATTT GACCGCACCC TGGGTGGCCT 1020GGAGATGGAG CTTCGGCTGC GAGAGCACCT GGCTAAGCTC TTCAATGAGC AGCGCAAGGG 1080CCAGAAAGCC AAGGATGTTC GGGAAAACCC CCGAGCCATG GCCAAACTGC TTCGGGAAGC 1140CAATCGGCTT AAAACCGTCC TGAGTGCCAA TGCTGATCAC ATGGCACAGA TTGAAGGCTT 1200GATGGACGAT GTGGACTTCA AGGCAAAAGT AACTCGAGTG GAGTTTGAGG AGCTGTGTGC 1260AGATTTGTTT GATCGAGTGC CTGGGCCTGT ACAGCAGGCC CTGCAGAGTG CTGAGATGAG 1320CCTGGATCAA ATTGAGCAGG TGATCCTGGT GGGTGGGCCC ACTCGTGTTC CCAAAGTTCA 1380AGAGGTGCTG CTGAAGCCTG TGGGCAAGGA GGAACTAGGA AAGAACATCA ATGCCGATGA 1440AGCAGCTGCC ATGGGGGCCG TGTACCAGGC AGCGGCACTG AGCAAAGCCT TCAAAGTGAA 1500GCCATTTGTT GTGCGTGATG CTGTTATTTA CCCCATCCTG GTGGAGTTCA CAAGGGAGGT 1560GGAGGAGGAG CCTGGGCTTC GAAGCCTGAA GCACAATAAA CGTGTGCTCT TCTCCCGAAT 1620GGGGCCCTAC CCTCAGCGCA AAGTCATCAC CTTTAACCGA TACAGCCATG ATTTCAACTT 1680TCACATCAAC TACGGTGACC TGGGCTTCCT GGGGCCTGAG GATCTTCGGG TATTTGGCTC 1740CCAGAATCTG ACCACAGTGA AACTAAAAGG TGTGGGAGAG AGCTTCAAGA AATATCCTGA 1800CTATGAGTCC AAAGGCATCA AGGCCCACTT TAACCTAGAC GAGAGTGGAG TGCTCAGTTT 1860AGACAGGGTG GAGTCCGTAT TCGAGACCCT GGTGGAGGAC AGCCCAGAGG AAGAGTCTAC 1920TCTTACCAAA CTTGGCAACA CCATTTCCAG CCTGTTTGGC GGTGGTACCT CATCAGATGC 1980CAAAGAGAAT GGTACTGATG CTGTACAGGA GGAGGAGGAG AGCCCTGCTG AGGGGAGCAA 2040GGATGAGCCT GCAGAACAGG GGGAACTCAA GGAGGAAGCT GAAGCCCCAA TGGAGGATAC 2100CTCCCAGCCT CCACCCTCTG AGCCTAAGGG GGATGCAGCC CGTGAGGGAG AAACACCTGA 2160TGAAAAAGAA AGTGGGGACA AGTCTGAGGC CCAGAAGCCC AATGAGAAGG GGCAGGCAGG 2220GCCTGAGGGT GTCCCTCCAG CTCCCGAGGA AGAAAAAAAG CAGAAACCTG CCCGGAAGCA 2280GAAAATGGTG GAGGAGATAG GTGTGGAACT GGCTGTCTTG GACCTGCCAG ACTTGCCAGA 2340GGATGAGCTG GCCCATTCCG TGCAGAAACT TGAGGACTTG ACCCTGCGAG ACCTTGAAAA 2400GCAGGAGAGG GAGAAAGCTG CCAACAGCTT AGAAGCTTTT ATCTTTGAGA CCCAGGACAA 2460ACTGTACCAA CCTGAGTACC AGGAAGTGTC CACTGAGGAA CAACGGGAGG AGATCTCTGG 2520AAAACTCAGT GCCACTTCTA CCTGGCTGGA GGATGAGGGA TTTGGAGCCA CCACTGTGAT 2580GTTGAAGGAC AAGCTGGCTG AGCTGAGAAA GCTGTGCCAA GGGCTGTTTT TTCGGGTGGA 2640AGAGCGCAGG AAATGGCCAG AGCGGCTTTC AGCTCTGGAT AATCTCCTCA ATCACTCCAG 2700CATTTTCCTC AAGGGTGCCC GACTCATCCC AGAGATGGAC CAGATCTTCA CTGACGTGGA 2760GATGACAACG TTGGAGAAAG TCATCAATGA CACCTGGACC TGGAAGAATG CAACCCTGGC 2820CGAGCAGGCC AAGCTTCCTG CCACAGAGAA ACCCGTGCTG CTTTCAAAAG ACATCGAGGC 2880CAAAATGATG GCCCTGGACC GGGAGGTGCA GTATCTACTC AATAAGGCCA AGTTTACTAA 2940ACCCCGGCCA CGGCCCAAGG ACAAGAATGG CACCCGGACA GAGCCTCCCC TCAATGCCAG 3000TGCTGGTGAC CAAGAGGAAA AGGTCATTCC ACCTACAGGC CAGACTGAAG AGGCGAAGGC 3060CATCTTAGAA CCTGACAAAG AAGGGCTTGG TACAGAGGCA GCAGACTCTG AGCCTCTGGA 3120ATTAGGAGGT CCTGGTGCAG AATCTGAACA GGCAGAGCAG ACAGCAGGGC AGAAGCGGCC 3180TTTGAAGAAT GATGAGCTGT GACCCCGCGC CTCCGCTCCA CTTGCCTCCA GCCCCTTCTC 3240CTACCACCTC TA 3252(2)SEQ ID NO5的资料(i)序列特征(A)长度31个碱基对(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线形(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO5Leu Ala Val Met Ser Val Asp Leu5Gly Ser Glu Ser Met Lys Val Ala10 15Ile Val Lys Pro Gly Val Pro Met20Glu Ile Val Leu Asn Lys Glu25 30(2)SEQ ID NO6的资料(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型其他核酸、合成的核酸(xi)序列描述SEQ ID NO6AATACGACTC ACTATAGGGA(2)SEQ ID NO7的资料(i)序列特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线形(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO7Lys Pro Gly Val Pro Met Glu5(2)SEQ ID NO8的资料(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型其他核酸，合成的核酸(xi)序列描述SEQ ID NO8AARCCiGGiG TNCCNATGGA 20
(2)SEQ ID NO9的资料(i)序列特征(A)长度13个碱基对(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线形(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO9Lys Pro Gly Val Pro Met Glu Ile5Val Leu Asn Lys Glu10(2)SEQ ID NO10的资料(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型其他核酸，合成的核酸(xi)序列描述SEQ ID NO10GCACCCTTGA GGAAAATGCT 20(2)SEQ ID NO11的资料(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型其他核酸，合成的核酸(xi)序列描述SEQ ID NO11CCCAGAAGCC CAATGAGAAG 20(2)SEQ ID NO12的资料(i)序列特征(A)长度2861个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型基因组DNA(xi)序列描述SEQ ID NO12GAAAGAAGTA GACATGGGAG ACTTCATTTT GTTCTGTACT AAGAAAAATT CTTCTGCCTT 60GGGATGCTGT TGATCTATGA CCTTACCCCC AACCCTGTGC TCTCTGAAAC ATGTGCTGTG 120TCCACTCAGG GTTAAATGGA TTAAGGGCGG TGCAAGATGT GCTTTGTTAA ACAGATGCTT 180GAAGGCAGCA TGCTCGTTAG GAGTCATCAC CACTCCCTAA TCTCAAGTAC CCAGGGACAC 240AAACACTGCG GAAGGCCACA GGGTCCTCTG CCTAGGAAAG CCAGAGACCT TTGTTCACTT 300GTTTATCTGC TGACCTTCCC TCCACTATTG TCCTATGACC CTGCCAAATC CCCCTCTGCC 360AGAAACACCC AAGAATGATC AATAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAGGAAG AATAGACTCT 420CTCTGGGACT GCCAATAATT TTTCCTTCTA AGCATAGACA CCGGACCACT CTCCACCTAA 480GCATCACGAA AAATGTAGAG AAAGGAAGAG CTAAGAGCTC CTTAAACAAG TTCAGGCTTG 540ACACAACCCT GGCCCTGACA GCCAGGGTCT TCAAGCGGGC CTTTCTGTGA AGGGTGGCCA 600GGCATCAACT TAGTAGGAGA GAAAACAGAT GACTTATTTC CATCCACACT TAAGGAAAAT 660GCAGTCTCCA AGGACTGCGT ACATTTCTTT TTCGAGAAGG AGTCTCGCTG TTGTCGCCCA 720GGCTGGAGTG CAGTGGCGCA GTCTGGGCTC ACAGCAACCT CTGCCTCCCG GATTCAAGCA 780ATTCTCCTGC CTCAGCCTCG TGAGTAGCTG GGATTACAGG CACCCGCCAC CACGCCTGGC 840TAATTTTTGT AGTTTTGGTA GAGACGGGGT TTCACCATGT TGGCCAGGCT GGTCTCGAAC 900TCCTGACCTC CAGTGATTCG CCCGCCTTGG CCTCCCAAAA TGCTGGGATT ACAGGCGTGA 960GCCACCGCGC CCGGGCGACT GCGCACATTT CTATGGAGCT GTAAGTTAAA AGAGAAGGCA 1020GTGAGGTGCT TCTGTCATTC TATGACAGAA ACAGCTAAAG AGTAGAGAAA TGTTCACAAG 1080ATTTAATAGA ACAGAAATAG GAGAAGGTGC ACACAAGCTC AACCAACTAT AGCCTCACAA 1140ATAAAAGTGT CTTTTGTGTG TAGTACTTAA GTTTGGAATA TTCTTTCTTA TACAAATGAG 1200TGGGGCTTAA CCTAAGAAAT CCTGGCCAGA TTCTGCGACG AATGCATCGG TTATCTCTGA 1260CCCATCAGCA AACATCTTTT TCTGTGGCTT CAGTTTCCTC AGTAAAACAG AGGGGGTTGC 1320GACGGACTCA GTCCGAGGCA CAGCCATTCT CCAACGTCTA TCCAAAGCCT AGGGCACCTC 1380AATACTAACC GGCAGGCCAG CGCCCCCTCC GCGGGGCTGC GGACAGGACG CCTGTTATTC 1440CATTCCTCGG CCGGGCTCTA CAGGTGACCG GAAGAAGAGC CCCGAGTGCG GGACTGCAGT 1500GCGCCCGACC TGCTCTAGGC GCAGGTCACT CCCGAACCCC GGCAGCAAAG CATCCAGCGC 1560CGGAAAAGGT CCCGCGGTCG CCCCGGGGCC GGCGCTGGGG AGGAAGGAGT GGAGCGCGCT 1620GGCCCCGTGA CGTGGTCCAA TCCCAGGCCG ACGCCGGCTG CTTCTGCCCA ACCGGTGGCT 1680GGTCCCCTCC GCCGCCCCCA TTACAAGGCT GGCAAAGGGA GGGGGCGGGG CCTGGGACGT 1740GGTCCAATGA GTACGCGCGC CGGGGCGGCG GGGGCGGGGC CGGGCGCGCA GCGCAGGGCC 1800GGGCGGCCGA GGCTCCAATG AGCGCCCGCC GCGTCCGGGG CCGGCTGGTG CGCGAGACGC 1860CGCCGAGAGG TTGGTGGCTA ATGTAACAGT TTGCAAACCG AGAGGAGTTG TGAAGGGCGC 1920GGGTGGGGGG CGCTGCCGGC CTCGTGGGTA CGTTCGTGCC GCGTCTGTCC CAGAGCTGGG 1980GCCGCAGGAG CGGAGGCAAG AGGTAGCGGG GGTGGATGGA GGTGCGGGCC GGCCACCCCT 2040CCTAGGGGAG ACAGCGTGCG AGCTCCGGGG GCGGGTCGGG AGCGCAAGGG AGGGCCGCGC 2100GGACGCCGGG CGCTCGGCCT CGCACCGGGG GGCACGCAGC TCGGCCCCCG GTCTGTCCCC 2160ACTTGCTGGG GCGGGCCGGG ATCCGTTTCC GGGAGTGGGA GCCGCCGCCT TCGTCAGGTG 2220GGGTTTAGGT GAACACCGGG TAACGGCTAC CCGCCGGGCG GGGAACCTTA CCGCCCCTGG 2280CACTGCGTCT GTGGGCACAG CGGGGCCGGG GAGTGAGCTG GGAAAGGGGA GGGGGCGGGA 2340CAACCCGCAG GGATGCCGAG GAGGAGATAG GCCTTTCCTT CATCCTAGCT ACCCCCAACG 2400TCATTACCTT TCTCTTCCCG TCCAGGCCCA GCTGGCTTTC CCCGTCAGCG GGGGAGCTCC 2460AGGTGTGGGG AGGTGGTTGA GCCCTGGGCG GGGATCCCTG GCCGCACCCC AGGTGTCTGA 2520CAACAGGCAC AGTGCTGCGG TGCGCCACTC ACTGCCTGTG TGGTGGACAA AAGGCTCGGG 2580TCTCCTTTCT CTTGTCCTGT TAGCTTCTCT GTTTAGGGAT GTGGCAAAGC CGAGGACCCA 2640TGCTCTTTCA CTTGGGCCTT TGTGTGGGCG CTGCTGGGAT GATTAGAGAA TGGTTTGTAC 2700CCATCAGGAG GGAGAAGGGG AGAAGTAGGC TGATCTGCCC TGGGTAAGAA TGAAGTAGAT 2760ATGAATCTTA CAGCCTCTCC GTTCTGGGAT GTGATTCTGT CTCCTTCACT CCGGGTATCC 2820AGTTTTAAGT GTTTTCTTTC TTCGCCTCCC CCAGGGGCAC T 286权利要求
1.通过在低氧状态下诱导即可得到的多肽，其具有的序列包含(a)SEQ ID NO1或3的氨基酸序列或其片段；(b)由SEQ ID NO2或4的核苷酸序列编码的氨基酸序列或其片段；或(c)由SEQ ID NO1或3的氨基酸序列中缺失、加入、插入或取代一个或多个氨基酸所得的氨基酸序列。
2.含有权利要求1的多肽的多肽。
3.编码权利要求1多肽的多核苷酸。
4.具有SEQ ID NO2或4的核苷酸序列的多核苷酸或其片段。
5.能与权利要求3或4的多核苷酸杂交并编码通过在低氧状态下诱导可得到之多肽的多核苷酸。
6.具有SEQ ID NO12之核苷酸序列的多核苷酸或其片段。
7.权利要求6的多核苷酸，其中所说的多核苷酸具有启动子活性。
8.能与权利要求7的多核苷酸杂交并具有启动子活性的多核苷酸。
9.含有权利要求3至8中任一项之核苷酸序列的重组DNA。
10.含有权利要求9的重组DNA的表达载体。
11.与权利要求1或2之多肽特异性结合的抗体或其片段。
全文摘要
通过在低氧状态下诱导即可得到的多肽，其具有的序列包含(a)SEQ ID NO1或3的氨基酸序列或其片段；(b)由SEQ ID NO2或4的核苷酸序列编码的氨基酸序列或其片段；或(c)由SEQ ID NO1或3的氨基酸序列中缺失、加入、插入或取代一个或多个氨基酸所得的氨基酸序列；对于通过生物工程技术生产上述多肽有用的编码上述多肽的多核苷酸或其片段；与上述多肽特异性结合的抗体或其片段。
文档编号C12N15/12GK1158896SQ9612383
公开日1997年9月10日 申请日期1996年12月20日 优先权日1995年12月20日
发明者池田纯, 金田澄子, 柳秀树, 松本昌康, 由良隆 申请人:株式会社Hsp研究所