提高果浆酸奶冻干 片的活菌含量，同样条件下，经冷干燥后试验组活菌含量是对照组的近13倍，是空白组的 36倍，活菌损失率与对照组、空白组相比分别降低83%和88%，具有非常好抗冷冻效果。
[0151] 需要说明的是：本发明实施例3-6同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上 述实验效果差异性不大。
[0152] 实施例8本发明益生菌片剂的感官品评试验
[0153] 邀请24名人员对本发明实施例2制备的益生菌片剂与市售两种同类相同生产日 期的益生菌片剂进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中 年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外 观（20分）、质地（25分）、风味（30分）、口感（25分）四个方面，打分人员独立进行，互不 影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表 2 ：
[0154] 表2感官品评统计结果
[0155]
[0156] 注：同一行内标不同小写字母表示差异显著（P< 0.05)，标不同大写字母表示差 异极显著（P< 〇. 01)，标有相同字母表示差异不显著（P> 〇. 05)。
[0157] 以上结果表明，本发明制备的益生菌片剂从外观、质地、风味和口感任何一方面都 要明显优于市售益生菌片剂，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同 消费层次的消费者食用。
[0158] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的益生菌片剂同样具有上述实验效果，各 实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0159] 实施例9果蔬浆感官、卫生、理化质量指标及酶活性对比试验
[0160] 以西瓜为原料，以本发明实施例2步骤2)方法制得的西瓜原汁为试验组，以采用 现有的热力护色、钝酶工艺制备的西瓜汁为对照组，分别对试验组和对照组的西瓜汁进行 感官、理化及卫生指标（按果蔬汁饮料卫生标准GB19297-2003中低温复原果蔬汁检测菌落 总数、大肠杆菌、致病菌、霉菌、酵母、残留农药、重金属等卫生指标，）、多酚氧化酶酶活性下 降率进行检测，结果如表3 :
[0161] 表 3
[0162]
[0163] 以上结果表明：本发明制备的西瓜原汁（试验组）与现有技术（对照组）相比可最 大限度地保留西瓜天然色泽和风味，与西瓜的天然色泽、口感和风味基本接近，不添加任何 香精和色素，可溶性固形物含量较高，具有较高的榨汁率；本发明制备的西瓜原汁污染杂菌 种类少，含量低，过程污染风险小，对照组菌落总数和大肠菌群虽然合格，但微生物种类多、 含量较高，如不热力杀菌，存在后期益生菌发酵失败的风险；本发明果蔬浆制备过程对原料 采用了超声清洗，有效降低了农残、毒素及重金属离子的含量，现有技术制备的西瓜原汁虽 然合格，但存在较大的食品安全隐患，长期食用会对人体造成积累性严重危害；本发明制备 的西瓜原汁多酚氧化酶活性低，有效防止了后序加工过程的酶促褐变。
[0164] 经检测，本发明实施例3-6制备的果蔬浆与实施例2感官、理化及卫生指标、酶活 性下降率检测结果无显著性差异，同样具有优良的食品安全性、非生物稳定性和微生物稳 定性。
[0165] 实施例10本发明益生菌片剂益生性试验
[0166] 将本发明实施例2制备的益生菌片剂，用无菌水制备成活菌数为2X101(lCFU/mL的 益生菌溶液，于4°C保存备用；
[0167] 1、取保存好的IOmL益生菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至KT8,取ImL 稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45°C的MRS琼脂培养基倾注在平板（灭菌）上，迅速摇 匀。再将装有IOmL益生菌溶液的试管2置于80-90°C水浴锅中加热15-25min，取加热后的 益生菌溶液进行十倍逐级稀释至1〇_8,取ImL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45°C的MRS 琼脂培养基倾注在平板（灭菌）上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35°C条 件下培养24h，计算加热前后的数量。
[0168] 结果表明，活菌存活率达到了 88%以上。
[0169] 2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16. 4mL加蒸馏水稀释，使pH值 分别为I. 5、2. 5和3. 5,取IOOmL稀盐酸溶液，分别加入Ig胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟 胃液，微孔滤膜除菌（0. 22ym)备用。取磷酸二氢钾6. 8g，加水500mL使溶解，用0.ImoL/ L氢氧化钠溶液调节pH值至6. 8 ;另取胰蛋白酶10g，加水IOOmL使溶解，将两液混合后， 加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌（0.22ym)备用。取ImL保存好的益生菌 溶液加入到9mL的模拟胃液中（即十倍逐级稀释），并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于 30-45°C静置培养2-4h。分别在lh、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与 原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98%。然后取在人工胃液中消化不同时间的培 养液各lmL，分别接种于9mLpH值为6. 8的人工肠液中，置于30-45°C静置培养2-4h，并分 别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99%。
[0170] 3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0. 8%的猪 胆盐，用10%的NaOH调整pH为8. 0,然后用0. 45ym微滤膜过滤并除菌。将0. 5mL保存好 的益生菌溶液接种到4. 5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培 养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至1〇_8,并用MRS倾注，然后置于35°C静置培养24h。 结果表明活菌存活率为99%。
[0171] 以上试验结果表明，本发明益生菌片剂中的益生菌益生性（耐热性、耐pH性、耐胆 盐）较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。
[0172] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的益生菌片剂同样具有上述实验效果，各 实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0173] 实施例11本发明益生菌片剂小鼠肠道性能试验
[0174] 将本发明实施例2制备的益生菌片剂，用无菌水制备成活菌数为2X101(lCFU/mL的 益生菌溶液，于4°C保存备用；
[0175] 选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18_20g，常规词养。从中随机挑选40只，每 天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0. 2mL(20mg) /只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量 灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死 亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小 鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的益生菌溶液0. 5ml(2XIOltlCfu/ ml) /只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试 验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对益生菌片剂治疗组和自然恢 复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表4 ;每5天测各组小鼠粪便大肠 杆菌数量，计算平均数，结果如表5。取小鼠粪便约0.lg，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠 (以〇.Ig粪样加〇. 5mL稀释液），稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆 菌数。
[0181] 益生菌片剂治疗组小鼠体重平均增长率（67.96 %)显著高于自然恢复组 (32. 14% );饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低97. 07%，显著低于自然恢复组 (24. 78% )，表明本发明益生菌片剂中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群， 并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。
[0182] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的益生菌片剂同样具有上述实验效果，各 实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0183] 实施例12本发明益生菌片剂对机体免疫力的影响
[0184] 1实验目的
[0185] 通过运动耐力测试（小鼠游泳试验），验证本发明益生菌片剂的提高免疫力、抗疲 劳作用。
[0186] 2实验材料与试剂
[0187] 2.1供试药物：
[0188] 市售益生菌片剂（Gl);市售益生菌片剂（G2);本发明实施例2-6制备的益生菌片 剂 〇；3-G7)。
[0189] 2. 2 试剂：
[0190] 肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研宄所；浓硫酸（AR)，南京化学试剂有 限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。
[0191] 3?实验动物
[0192] ICR小鼠，S，清洁级，体重18_22g，由北京医科大学比较医学中心提供，实验期间 小鼠自由饮食。
[0193] 4?主要仪器
[0194] 错制游泳箱（50cmX50cmX40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公 司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司； 秒表，温度计
[0195] 5?实验分组
[0196] 5. 1剂量分组及受试样品给予时间：随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第 7组分别给Gl~G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1 次，灌胃体积为〇. 2ml/10g，连续给予受试样品30天。
[0197] 5. 2样品配制：第1组至第7组：称取2. 25g药物样品，用蒸馏水配至150ml;空白 对照组（第8组）：双蒸水150ml。
[0198] 6?实验方法
[0199] 6. 1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温 25±1°C，鼠尾根部负荷5%体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时 间。
[0200] 6. 2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30 °C的水中不负重游泳 90min，休息60min后摘眼球采血0. 5mL(不加抗凝剂），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/ min离心15min，取血清送北京医科大学附属医院检验科检测。
[0201] 6. 3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25 ±I°C的水中不负重游泳90min， 颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏l〇〇mg，肝糖原检 测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。
[0202] 6. 4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30°C的水中游泳 IOmin后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20yL 加入40yL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。（血乳酸曲线下面积=5X(游 泳前血乳酸值+3X游泳后Omin的血乳酸值+2X游泳后20min的血乳酸值）
[0203] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0204] 8.统计方法实验数据用表示，采用t检验进行组间比较
[0205] 9?实验结果
[0206] 9. 1本发明益生菌片剂对小鼠体重的影响
[0207] 各组小鼠在给予Gl~G7药物后，前、中，后期体重分别见下表所示，各组小鼠的 初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异（P> 0. 05)，表明Gl~G7药物均无明 显的毒性。实验结果详见表6。
[0208] 表6负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重（)
[0209]
[0211] 9. 2本发明益生菌片剂对小鼠负重游泳时间的影响
[0212] 经口给予小鼠Gl~G7药物后，Gl~G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小 鼠负重游泳时间，具有显著性差异（P< 0. 05)，本发明益生菌片剂G3~G7药物与空白对照 组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异（P< 0. 01)，且明显优于Gl~ G2药物。结果详见表7。
[0213] 表7益生菌片剂对小鼠负重游泳时间的影响（^土^ )
[0214]
[0215] "*''p〈0. 05vs空白对照；
[0216] "**"p〈0.Olvs空白对照；
[0217] 9. 3本发明益生菌片剂对小鼠运动前后血乳酸的影响
[0218] 经口给予小鼠本发明的益生菌片剂后，本发明益生菌片剂G3~G7药物对小鼠运 动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异（P< 0. 05)，Gl~G2药物组小鼠血乳 酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异（P> 0. 05)。结果见表8。
[0219] 表8本发明益生菌片剂对小鼠运动前后血乳酸水平的影响)
[0220]
[0222] "*''p〈0. 05vs空白对照；