酶颗粒的制作方法
【专利说明】酶颗粒
[0001] 本发明是基于申请日为2005年9月27日，申请号为"200580038839. 3"(国际申 请号为PCT/DK2005/000610)，发明名称为"酶颗粒"的专利申请的分案申请。 发明领域 阳002] 本发明设及含有盐涂敷颗粒（saltcoatedgranules)的蒸汽处理的粒状饲料组 合物（pelletizedfeedcompositions)。本发明进一步设及盐涂敷颗粒用于蒸汽处理的粒 状饲料组合物的应用。 阳00引发明背景
[0004] 在设及动物饲料的领域中，饲料造粒的迫切需要是众所周知的事实，因为饲料造 粒增加了尤其是饲料淀粉级分（starch化action)的可消化性。此外，饲料造粒减少了粉 尘（化St)问题。使得饲料更易于为鸟类所摄食，并且可W在饲料中渗入少量成分并"锁住" 饲料混合物。在生产饲料颗粒的过程中，被认为是需要蒸汽处理饲料颗粒W便杀死沙口氏 菌（Salomonella)，如果存在的话，在此约80°C的蒸汽处理是合适的。在该高溫下，存在于 饲料颗粒中的活性物质例如酶是不稳定的，因此，不得不使用过量的酶，或者在含有酶的渺 浆或溶液涂敷在蒸汽处理的颗粒上之后，造粒并蒸汽处理无酶饲料组分。然而，该涂敷十分 麻烦且常常不适合于现有设备。试图获得用于饲料的改良的酶颗粒的努力见W0 92/12645。 W0 92/12645描述了T-颗粒，其涂敷有脂肪或蜡，饲料组分蒸汽处理并随后造粒。依据该发 明，可W加热处理包含酶的颗粒并避免在热处理后用酶涂敷的麻烦。使用涂敷有蜡的T-颗 粒在该领域中是一种显著的进步，因为可W在蒸汽造粒过程中保持可接受的酶活性。但是 工业上在蒸汽造粒后仍然需要改良的酶活性。此外，对于肉用仔鸡化rollerchickens)饲 料生产，需要在造粒后也包含有效量（significant)的活性酶的小的酶颗粒。如果使用小 的酶颗粒，就更易于控制饲料颗粒中酶的量。肉用仔鸡每天只食用很少的颗粒，并且相信如 果在饲料颗粒生产中使用小的酶颗粒，就能得到更多的均质酶的摄入。与使用现今市售的 已知酶颗粒相比，使用本发明的颗粒更易于解决该需要。 阳0化]通过在蒸汽造粒前用盐涂敷含有酶的颗粒，本发明解决了所述需要。已显示可W蒸汽处理盐涂敷的包含活性物质的颗粒，并保持有效量的活性。
[0006] 在酶造粒中使用盐涂层知晓于W0 00/01793,发现盐涂层改善了用于洗涂剂 (detergent)的酶颗粒的储藏稳定性。
[0007] 发明概述
[0008] 本发明的一个目的是提供带有有效量（significant)的活性的蒸汽处理的粒状 饲料组合物。本发明的另一个目的是提供即使蒸汽造粒也包含保持有效量的活性的活性物 质的颗粒。
[0009] 业已令人惊奇地发现包含如酶的活性物质的颗粒，当用盐涂敷时，在蒸汽处理的 粒状饲料生产中是特别令人满意的，因为即使蒸汽处理它们也保持有效量的活性。已进一 步显示甚至小的颗粒尺寸，也可W保持可接受量的活性。
[0010] 因此，在第一方面，本发明提供了一种包含含有忍（core)和涂层的颗粒的蒸汽处 理的粒状饲料组合物，其中忍包含活性物质，涂层包含盐。
[0011] 在第二方面，本发明提供了包括包含活性物质（compound)的忍和包含盐的涂层 的颗粒用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的应用。
[0012] 在第=方面，本发明提供了一种包含忍和涂层的颗粒，其中忍包含活性物质，涂层 包含盐，并且其中颗粒包含在蒸汽造粒后具有保留活性的至少75%的活性物质，其中颗粒 特征在于进一步具有选自如下的一种或多种特性：
[0013] i.颗粒的粒度（particle size)低于400 y m，
[0014] ii.盐涂层的厚度至少是8ym，
[0015] iii.活性物质是不耐热的，
[0016] iv.颗粒进一步包含蜡涂层，
[0017] V.颗粒进一步包含乳酸源，和
[0018] Vi.颗粒的忍中的活性物质是酶。
[0019] 发明详述 W20] 定义 阳〇2U 溶液：
[0022] 溶液规定为两种或更多种物质的均匀混合物。 阳〇2引悬浮液； 阳024] 悬浮液规定为悬浮在液体中的微粒（fineparticles)。
[00巧]粒度（particle size):
[00%] 颗粒的粒度意思是颗粒的颗粒平均直径（massmeandiameter)。
[0027] %RH：
[0028] 在本发明上下文中，术语"％RH"应理解为空气的相对湿度。100%RH是在固定溫 度下空气为水气（watermois化re)所饱和，因此％RH反映了空气的水气饱和百分数。
[0029] 恒定湿度：
[0030] 化合物（compound)或物质的术语"恒定湿度"（在本发明上下文中有时缩写为 CH)应理解为与所述化合物饱和水溶液（aqueoussolution)相平衡的大气的％RH，其中 所述化合物的饱和水溶液和所述化合物的固相接触（incontactwith),在给定溫度下 全都限制在封闭空间的范围内。该定义与"Han化ookofchemistryand地ysics"CRC Press，Inc.，Cleveland，USA,第 58版，pE46，1977-1978 的一致。因此，对于化合物，CH20.C =50%意味着在20°C下具有50%湿度的空气应与化合物的饱和水溶液相平衡。因此，术语 恒定湿度是化合物吸湿性化ygroscopicp;rope;rties)的量度。
[0031] 引言
[0032] 我们已惊奇地发现，在蒸汽造粒过程中，通过在蒸汽处理前将盐涂层涂敷在颗粒 上可W增加包含在颗粒中的活性物质的稳定性。运意味着我们能改善包含在饲料组合物中 的活性物质的稳定性，所述饲料组合物在造粒过程中暴露于蒸汽处理。
[0033] 此外，我们还发现可W制备包含活性物质的小的颗粒，通过用盐涂敷即使蒸汽处 理其仍保留可接受的活性水平。 W34]除运些令人惊奇的优点之外，业已显示盐涂层提供了良好的起尘值（化St values),与已知的蜡涂敷的颗粒相比还增加了饲料颗粒的储藏稳定性。此外，盐涂层可作 为溶解度调节剂。 W对颗粒
[0036] 当指本发明的颗粒时，其可W是单个颗粒或几个颗粒。
[0037] 特别适合于蒸汽造粒并作为蒸汽处理的粒状饲料组合物一部分的本发明的颗粒 包含忍和至少一涂层。忍包含活性物质，涂层包含盐。
[0038] 要在粒状饲料中使用的颗粒的粒度通常大于700ym，更特别的是700-1000ym。 本发明的颗粒合适的粒度被认为是50-2000ym，更特别的是100-1000ym。我们发现对 于造粒，通过用盐涂层涂敷颗粒可W制备特别小的饲料颗粒。在一个特定的实施方案中， 本发明的颗粒可具有低于700ym的粒度。在本发明另一个特定的实施方案中，加工过的 颗粒的粒度是100-600ym。在本发明一个更特别的实施方案中，加工过的颗粒的粒度是 200-400ym。在本发明一个还特别的实施方案中，所述粒度是210-390ym。在本发明一个 最特别的实施方案中，加工过的颗粒的粒度低于400ym。在另一个最特别的实施方案中，本 发明的颗粒的粒度高于250ym，但低于350ym。
[0039] 在本发明一个特定的实施方案中，本发明颗粒的粒度低于400 ym。
[0040] 在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒具有低于 400ym的粒度。
[0041] 在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒具 有低于400ym的粒度。
[0042] 在本发明一个特定的实施方案中，本发明颗粒的粒度在210和390ym之间。
[0043] 在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物颗粒的粒度在210 和390ym之间。
[0044] 在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的 粒度在210和390ym之间。
[0045] 忍
[0046] 忍包含W浓缩的干物质形式存在的活性物质。
[0047] 忍可W是
[0048]1.活性物质的均质混合物化lend),
[0049]或
[0050] 2.活性物质施用于上的惰性颗粒， W川 或
[0052] 3.活性物质和任选的作为粘合剂的物质的均质混合物，所述粘合剂为活性物质所 包被。
[0053] 在一个特定的实施方案中，本发明忍颗粒是20-800ym。在本发明一个更特别 的实施方案中，忍粒度是50-500ym。在本发明一个甚至更特别的实施方案中，忍粒度是 100-300ym。在本发明一个最特别的实施方案中，忍粒度是150-250ym。
[0054] 惰性颗粒：
[0055] 惰性颗粒可W是水溶性的或水不溶性的，如淀粉，如W木馨或小麦的形式存在的； 或糖（例如薦糖或乳糖），或盐（例如氯化钢或硫酸钢）。适合的本发明的惰性颗粒物质包 括无机盐、糖、糖醇、诸如有机酸或盐的小的有机分子、诸如粘±或娃酸盐的矿物质或运些 物质两种或更多种的组合。 阳056] 可使用多种造粒技术生产惰性颗粒，包括：结晶、沉淀、锅包衣（pan-coating)、 流化床包衣、流化床附聚（agglomeration)、旋转雾化、挤出、喷射造粒（prilling)、滚圆 (spheronization)、粉碎法（sizereduction)、牵专宣支造粒（drumgranulation)和 / 或高剪 切造粒。
[0057] 活性物质：
[0058] 存在于忍中的本发明的活性物质（active compound)可W是任何活性物质或活性 物质的混合物，其得益于与颗粒周围的环境所分离。术语"活性"意在包括在过程如消化中 刚一施用本发明的颗粒，就从颗粒上释放，适合于改善该过程目的的所有化合物。所述活性 物质可W是天然无机物或天然有机物。特别地，活性物质是通常对周围环境十分敏感的活 性生物化合物，例如可获得自微生物的化合物。更特别地，活性物质是肤或多肤或蛋白质。 最特别地，活性物质是诸如酶的蛋白质。更多适合的活性物质是生长促进剂、抗生素、要被 用作为疫苗的抗原决定簇、被工程化W具有增加的必需氨基酸含量的多肤、激素和其他治 疗蛋白质。
[0059] 在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒的忍中的活性物质是酶。
[0060] 在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物颗粒的忍中的活性 物质是酶。
[0061] 在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒中 的活性物质是酶。
[0062] 在本发明上下文中，酶可W是任何酶或不同酶的组合。因此，当提及"酶"时，通常 应理解为包括一种酶或酶的组合。
[0063] 应当理解的是酶变体（例如通过重组技术产生的）包括在术语"酶"的含义中。 运样的酶变体的例子披露于如EP251, 446 (Genenco;r)、W0 91/00345(NovoNordisk)、EP 525, 610 (Solvay)和WO94/02618 (Gist-BrocadesNV)中。 W64] 酶可基于来自NC-IUBMB的酶命名手册，1992进行分类，也参见在因特网上 的ENZYME站点：http://www.expasv.ch/enzvme/〇ENZYME是与酶命名有关的信息储 存库。其主要是W国际生物化学和分子生物学联合会（IUB-MB)命名委员会的建议为 基础，描述了其EC(酶学委员会）号已提供的每种已鉴定的酶度airochA.化eENZYME dat油ase, 2000,NucleicAcidsRes28:304-305)。该lUB-MB酶命名法是W它们的底物特 异性W及偶尔W它们的分子机制为基础的；运样的分类不能反映运些酶的结构特征。 阳0化]几年前，已提出另一种基于氨基酸序列相似性W家族进行的某些糖巧水解酶， 例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和a-半乳糖巧酶 的分类。它们目前分为90个不同的家族：参见CA巧(ModO)因特网站点（Coutinho,P. M. &Hen;rissat,B. (1999)Carbohy化ate-ActiveEnzymes服务器，在抓L:
[0066]http://afmb.cnrs-mrs.fr/ ~cazv/CAZY/index.html(相应 的文件：Coutinho,P.M.feHenrissat,B. (1999)Carbohydrate-activeenzymes:anintegrated databaseapproach.在"RecentAdvancesinCarbohydrateBioengineering"中，比 J.Gi化ert'G.Davies,B.Henrissat和B.Svensson编辑，TheRoyalSocietyof Chemistry,Cambridge,pp. 3-12 ;Coutinho,P.M.feHenrissat,B. (1999)Themodular structureofcellulasesandothercarbohydrate-activeenzymes:anintegrated databaseapproach.在"Genetics,BiochemistryandEcologyofCellulose Degradation"中.，K.Ohmiya,K.Hayashi,K.Sakka,Y.Kobayashi,S.Karita和T.Kimura编 牵茸，UniPublishersCo.，Tokyo,pp. 15-23)。
[0067] 可惨入本发明颗粒中的酶的类型包括氧化还原酶巧C 1.转移酶巧C 2. 水解酶巧C3.裂解酶巧C4.异构酶巧C5.和连接酶巧C 6. -。
[0068] 在本发明上下文中优选的氧化还原酶是过氧化物酶巧C1.11. 1)、漆酶巧C 1.10. 3. 2)和葡萄糖氧化酶巧C1.1. 3. 4)]。市售氧化还原酶巧C1.的例子是 Gluzyme? (可获得自NovozymesA/S的酶）。更多的氧化还原酶可获得自其他供应商。优 选的转移酶是在任何如下亚类中的转移酶：
[0069] a转移一个碳基团的转移酶巧C2. 1);
[0070] b转移醒或酬残基的转移酶巧C2. 2);酷基转移酶巧C2. 3);
[0071] C糖基转移酶巧C2. 4);
[0072]d转移非甲基的烷基或芳基的转移酶巧C2.5);和
[0073]e转移含氮基团（nitrogenous)的转移酶巧C 2. 6)。
[0074] 在本发明上下文中，最优选的转移酶的类型是谷氨酷胺转移酶（蛋白质-谷氨酷 胺丫-谷氨酷转移酶；EC2. 3. 2. 13).
[00"75] 更多的适合的谷氨酷胺转移酶的例子描述于W0 96/06931(NovoNordiskA/S)。
[0076] 在本发明上下文中优选的水解酶是：簇酸醋水解酶巧C3. 1. 1.-)例如脂肪酶巧C 3. 1. 1. 3);肌醇六憐酸酶巧C3. 1. 3.-)，如3-肌醇六憐酸酶巧C3. 1. 3. 8)和6-肌醇六 憐酸酶巧C3. 1. 3. 26);糖巧酶巧C3. 2,其落入在此称为"糖酶"的组中），例如，a-淀 粉酶巧C3.2. 1.1)