;肤酶巧C3. 4,也称为蛋白酶）；和其他的幾基水解酶。市售肌醇六憐 酸酶的例子包括Bio-Feed?肌醇六憐酸酶（Novozymes)、Ronozyme?P值SMNutritional Products)、化化地os?(BASF)、Finase?(ABEnzymes)和F*hyzyme? 产品系列值anisco)。其 他优选的肌醇六憐酸酶包括描述于W0 98/28408、W0 00/43503和W0 03/066847中的那些。
[0077] 在本发明上下文中，术语"糖酶"不仅被用于指能分解碳水化合物链（如淀粉或纤 维素）特别是五或六元环结构（即糖巧酶，EC3.2)的酶，也被用于指能异构化碳水化合物 的酶，如将六元环结构例如D-葡萄糖异构化为五元环结构例如D-果糖。
[007引有关的糖酶包括如下（EC号在括号中）： 阳0巧]a-淀粉酶巧C3. 2. 1. 1)、P-淀粉酶巧C3. 2. 1. 2)、葡聚糖1，4-a-葡糖巧酶 巧C3. 2. 1. 3)、内切-1，4-P-葡聚糖酶（纤维素酶、EC3. 2. 1. 4)、内切-1，3 (4) -P-葡聚 糖酶巧C3. 2. 1.6)、内切-1,4-6 -木聚糖酶巧C3. 2. 1.8)、葡聚糖酶巧C3. 2. 1.11)、几 下质酶巧C3. 2. 1. 14)、多聚半乳糖醒酸酶巧C3. 2. 1. 15)、溶菌酶巧C3. 2. 1. 17)、P-葡 糖巧酶巧C3. 2. 1. 21)、a-半乳糖巧酶巧C3. 2. 1. 22)、P-半乳糖巧酶巧C3. 2. 1. 23)、 淀粉-1,6-葡糖巧酶巧C3. 2. 1.33)、木聚糖1,4-6-木糖巧酶巧C3. 2. 1.37)、葡聚糖内 切-1,3-6-D-葡糖巧酶巧C3. 2. 1.39)、a-糊精内切-1,6-a-葡糖巧酶巧C3. 2. 1.41)、 薦糖a-葡糖巧酶巧C3.2. 1.48)、葡聚糖内切-1,3-a-葡糖巧酶巧C3.2. 1.59)、葡聚 糖1,4-6-葡糖巧酶巧C3. 2. 1.74)、葡聚糖内切-1,6-6 -葡糖巧酶巧C3. 2. 1.75)、半乳 聚糖酶巧C3. 2. 1. 89)、阿拉伯聚糖内切-1，5-aA-阿拉伯糖巧酶巧c3. 2. 1. 99)、乳糖 酶巧C3. 2. 1. 108)、脱乙酷几下质酶（chitosanases)(EC3. 2. 1. 132)和木糖异构酶巧C 5. 3. 1.巧。
[0080] 在本发明上下文中，肌醇六憐酸酶是一种催化肌醇六憐酸（肌醇六憐酸盐 (myo-inositolhexakisphoshpate))水解为（1)肌醇和 / 或（2)其单、二、S、四和 / 或五 憐酸盐和（3)无机憐酸盐的酶。
[0081] 根据上述提及的ENZYME站点，已知不同类型的肌醇六憐酸酶：一种所谓的3-肌醇 六憐酸酶（肌醇六憐酸盐3-憐酸水解酶，EC3. 1. 3. 8)和一种所谓的6-肌醇六憐酸酶（肌 醇六憐酸盐6-憐酸水解酶，EC3. 1. 3. 26)。对本发明来说，两种类型都包括在肌醇六憐酸 酶的定义中。
[0082] 对本发明来说，肌醇六憐酸酶活性可W，优选WFYT单位测定，一FYT是在下列条 件下神5. 5 ;溫度37°C;底物：0. 0050mol/l浓度的肌醇六憐酸钢似恥24?6化12)，每分钟 释放出1微摩尔无机正憐酸的酶的量。适合的肌醇六憐酸酶测定法描述于W0 00/20569的 实施例1中。FTU用于测定饲料和预混合料（premix)中的肌醇六憐酸酶活性。或者，依据 实施例1中所描述的相同的抽提原理，如用于内切葡聚糖酶和木聚糖酶测定的，可用于测 定饲料和预混合料中肌醇六憐酸酶活性。
[0083] 肌醇六憐酸酶的例子披露于W0 99/49022 (肌醇六憐酸酶变体）、W0 99/48380、W0 00/43503 (共有肌醇六憐酸酶）、EP0897010 (修饰的肌醇六憐酸酶）、EP0897985 (共有肌 醇六憐酸酶）。
[0084] 肌醇六憐酸酶还可获得自如下：
[00化]i.子囊菌纲（Ascomycetes)，例如描述于EP684313或US6139902中的那些； 泡盛曲霉（Aspergillusawamori)PHYA(SWISSPR0TP34753,Gene133:55-62(1993));黑 曲霉（Aspergillusniger)(ficuum)PHYA(SWISSPROTP34752，Genel27:87-94(1993)，EP 420358);泡盛曲霉PHYB(SWISSPR0TP：M755，Genel33:55-62 (1993));黑曲霉 PHYB(SWISSPR0TP；34754,Biochem.Biophys.Res.Commun. 195:53-57(1993));血ericella nidulansPHYB(SWISSPR0T000093，Biochim.Biophys.Acta1353:217-223(1997));
[0086]ii.嗜热霉属（Thermomyces)或腐质霉属化umicola)，例如披露于WO97/35017 的细毛嗜热霉（Thermomyceslanuginosus)肌醇六憐酸酶；
[0087]iii.担子菌纲度asidiomycetes)，例如隔抱伏革菌属（Penio地ora) (W0 98/28408 和WO98/28409);
[00蝴 iv.其他真菌肌醇六憐酸酶，例如披露于JP11000164(青霉菌（Penicillium)肌 醇六憐酸酶）或W098/13480(亚克红曲霉（Monas州Sanka)肌醇六憐酸酶）中的那些；
[0089] V.芽抱杆菌属度acillus)，例如枯草芽抱杆菌度acillussubtilis) PHYC(SWISSPR0T031097,Appl.Environ.Microbiol. 64:2079-2085(1998));芽抱杆菌 度acillussp).PHYT(SWISSPR0T066037，FEMSMicrobiol.Lett. 162:185-191(1998);枯 草芽抱杆菌PHYT_(SWISSPROTP42094,J.Bacteriol. 177:6263-6275 (1995));披露于AU 724094或WO97/33976中的肌醇六憐酸酶；
[0090]vi.大肠杆菌巧scherichiacoli)扣8 6110719);
[0091]vii.西方许旺氏酵母（Schwanniomycesoccidentalis) 〇JS5830732);
[0092] viii.具有与（i)-(vii)的肌醇六麟酸酶的（成熟）氨基酸序列至少75%同一性 的氨基酸序列的肌醇六麟酸酶；或
[0093] ix.在化严格条件下，与相应于（i)-(vii)的肌醇六麟酸酶的基因的成熟肌醇六 石葬酸酶编码部分杂交的核酸序列编码的肌醇六麟酸酶；
[0094] X.包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入的（i)-(vii)的肌醇六麟酸酶的 变体；
[00巧]xi. (i)-(vi;L)的等位变体；
[0096] xii.具有肌醇六麟酸酶活性的（i)、（ii)、（iii)、（iv)、（Vi)或（vii)的片段；或
[0097] xiii.基于（i)-(vii)设计的并具有肌醇六麟酸酶活性的合成多版。
[0098] 其他的根据本发明使用的有关的肌醇六麟酸酶是隔抱伏革菌巧eniophora lycii)肌醇六麟酸酶的不同变体（相应于沈QIDNO: 15的氨基酸31-225的成熟版）。这 些变体披露于W0 2003 66847。
[0099] 市售蛋白酶（版酶）的例子包括KannaseTM、EverlaseTM、EsperaseTM、 Alcalase?、NeutraseTM、Durazym?、SavinaseTM、Ovozyme?、PyraseTM、PancreaticTrypsin NOVO(PTN)、Bio-Feecf?Pro和Clear-LensTMPro(所有的都可获得自NovozymesA/ S，Bagsvaerd，Denmark)。其他优选的蛋白酶包括描述于WO01/58275和WO01/58276中的 那些。
[0100] 其他市售蛋白酶包括RonozymeTMF?r〇、MaxataseTM、Maxacal?、Maxapem?、 Opticlean?、PropeaseTM、PurafectTM^〇PurafectOx? (nj^GenencorInternational Inc.,Gist-Brocades,BASF,或DSMNutritionalProducts)〇
[0101] 市售脂肪酶的例子包括Lipex?、LipoprimeTM、Lipopan?、LipolaseTM、LipolaseTM Ultra、Lipozyme?、Palatase?、Resinase?、Novozym?435和LecitaseTM(所有的都可获得自 NovozymesA/S)〇
[010引 其他市售脂肪酶包括LumafastTM(来自GenencorInternationalInc?的口多萨 假单胞菌巧seudomonasmendocina)脂肪酶）；Lipomax?(来自Gist-Brocades/Genencor Int.Inc.的类产碱假单胞菌巧s.Pseudoalcaligenes)脂肪酶）；和来自Solvayenzymes 的芽抱杆菌化acillussp.)脂肪酶。更多的脂肪酶可获得自其他供应商。
[010引 市售糖酶的例子包括Alpha-GalTM、Bio-FeecTAlpha、Bio-FeecTBeta、Bi0-Feed?Plus>Bi0-Feed?Wheat>Bi0-Feed?Z>Novozyme?188,Carezyme?^Celluclast?^ Cellusoft?、CelluzymeTM、CeremylTM、Citrozym?、DenimaxTM、DezymeTM、DextrozymeTM、 Duramyl?、Energex?、FinizymTM、Fungamyl?、Gamanase?、Glucanex?、Lactozym?、Liquezyme?>Maltogena-se?>Natalase?>Pentopan?>Pectinex?>Promozyme?>Pulpzyme?> Novamyl?^Termamyl?^AMG?(AmyloglucosidaseNovo)、MaltogenaseTw、SweetzymeTw和 Aquazym?(所有的都可获得自NovozymesA/S)。更多的糖酶可获得自其他供应商，例如 RoxazymeTM和Ronozyme TM产品系列化SMNutritional Products)，Avizyme TM、PorzymeTM和GrindazymeTM产品系列（；Danisco, Finnfeeds)，及Na化grain tm(BASF)、Purastar?和 Purastar?0xAm (Genencor)0
[0104] 其他市售酶类包括MannawayTM、Pectaway?、StainzymeTM和RenozymeTM。
[0105] 在本发明一个特定的实施方案中，所述酶选自内切葡聚糖酶、内切-1，3(4)-P-葡 聚糖酶、蛋白酶、肌醇六憐酸酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和a-半乳糖巧酶，W及WO2003/062409中所提到的酶，其在此并入作为参考。
[0106] 特别适合的饲料酶类包括：淀粉酶，憐酸酶，例如肌醇六憐酸酶，和/或酸性憐酸 酶；糖酶，例如淀粉分解酶和/或植物细胞壁降解酶，包括纤维素酶，例如P-葡聚糖酶和 /或半纤维素酶，如木聚糖酶或半乳聚糖酶；蛋白酶或肤酶，例如溶菌酶；半乳糖巧酶、果胶 酶、醋酶，特别是憐脂酶，例如哺乳动物膜憐脂酶A2和葡萄糖氧化酶。特别是具有中性和/ 或酸性最适pH的饲料酶类。
[0107] 在本发明一个特定的实施方案中，所述酶选自淀粉酶、蛋白酶、P-葡聚糖酶、肌醇 六憐酸酶、木聚糖酶、憐脂酶和葡糖氧化酶。
[0108] 本发明特别适合于诸如酶的不耐热的（thermo1油ile)活性物质。在上下文某些 活性物质中应用的术语不耐热的指在抑5. 5下使用差示扫描量热法值SC)测定的烙解溫 度Tm。对于不耐热的活性物质，Tm小于100°C。在特定的实施方案中，Tm小于90。例如小 于80°C、小于70°C、甚至小于60°C。在不同的PH-值下使用来自MicroCal的VP-DSC，通 过DSC测定Tm。W1. 5°C/min的恒定的扫描速率从20到90°C进行扫描。在运行DSC之 前，使用在适当的缓冲液（如0. 2M甘氨酸-HCl，pH2. 5或3. 0 ;0. 1M乙酸钢，pH5. 5 ;0. 1M Tris-HCl，抑7.0)中平衡的NAP-5柱（Pharmacia)对肌醇六憐酸酶脱盐。可使用MicroCal 化igin软件进行数据处理。如WO2003/66847所述进行DSC测量，其在此并入作为参考。 阳109] 在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒的活性物质是不耐热的。
[0110] 在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的活性物质 是不耐热的。 阳111] 在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的 活性物质是不耐热的。
[0112] 业已发现通过用盐涂层涂敷本发明的颗粒，在100°C蒸汽造粒60秒之后，可W保 留大于50%的存在于忍中的活性物质的活性、大于60%、例如大于70%W及甚至大于75% 的活性。
[0113] 在本发明一个特定的实施方案中，所保留的存在于蒸汽处理的粒状饲料组合物 的颗粒的忍中的活性物质的活性是在蒸汽造粒之前颗粒的忍中的活性物质的活性的至少 75%。
[0114] 在本发明一个特定的实施方案中，所保留的存在于要被用于蒸汽处理的粒状饲料 组合物的颗粒的忍中的活性物质的活性是在蒸汽造粒之前颗粒的忍中的活性物质的活性 的至少75%。
[0115]在本发明一个特定的实施方案中，所述活性物质的活性是在组合物蒸汽处理和造 粒之前存在于颗粒的忍中的活性物质的初始活性的至少75%。
[0116] 在本发明一个特定的实施方案中，所述颗粒包含忍和涂层，其中忍包含活性物质， 涂层包含盐，并且其中当在蒸汽造粒过程中渗入时，颗粒能保留至少75%的初始酶活性，W 及颗粒进一步包含如下一种或多种：
[0117] i.颗粒的粒度低于400ym，
[0118] ii.盐涂层的厚度至少是8ym，
[0119] iii.活性物质是不耐热的，
[0120]iv.颗粒进一步包含蜡涂层， 阳121]V.颗粒进一步包含乳酸源，和 阳122]Vi.颗粒的忍中的活性物质是酶。 阳123] 肌醇六憐酸酶活性分析：
[0124] 方法：肌醇六憐酸酶将肌醇六憐酸分解为憐酸盐，释放的憐酸盐与饥和钢 (molydenium)氧化物反应，生成有色（黄色）络合物在415皿处测定吸光度。 阳12引单位：1FTU=在标准条件下（如下所给出的），每分钟释放相当于1iiM憐酸盐的 憐酸盐（phosphate)的酶的量。 阳126] 缓冲液：
[0127] 抽提缓冲液：0. 01 %Tween20(聚氧乙締山梨糖醇酢单月桂酸醋(polyoxyethylene sorbitan monola