专利名称：一种用于治疗肝病的果糖二磷酸钠口服液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肝功能损伤类疾病的治疗，特别是果糖二磷酸钠口服液在肝功能损伤类疾病中的应用。
意大利福斯卡玛生化制药公司曾于1992年向我国推荐FDP片剂(Esafosfina Glutammica，依福那)每片含果糖-1，6-二磷酸钙盐0.25g(相当于无水果糖二磷酸钙0.155g)，左旋谷氨酸0.02g，维生素B10.002g，维生素B60.0005g，泛酸钙盐0.001g等。经卫生部批准，于1995年进口，用于休克、心肌缺血、急性心肌梗塞及缺血性脑血管意外等疾病。国内上海海军医学研究所生产果糖二磷酸钠胶囊剂，批准文号(93)后卫字第084号。用于频发房性早搏，偶发室性早搏，病毒性心肌炎，冠心病，心绞痛等心肌疾病及肝炎，非特性胃肠道疾病。河北长天保定药业有限公司生产果糖二磷酸钙片，批准文号(98)卫药准字X-105号。适用于心肌缺血造成的冠心病、心绞痛、急性心肌梗塞等的治疗。
目前，FDP日益受到国内外许多学者的广泛关注，并进行了大量的药效和临床研究，除用于心血管疾病治疗外，还可用于病毒性肝炎，小儿病毒性心肌炎，脑卒等疾病的治疗。
根据近年来文献报道动物研究发现FDP对肝脏损伤具有保护作用。
刘惠敏等人在《中国新药与临床杂志》17卷第2期中公开了一篇题为“谷胱甘肽联合果糖二磷酸钠辅助治疗慢性重型肝炎”的文献，采用谷胱甘肽联合果糖二磷酸钠，静脉注滴辅助治疗慢性重型肝炎，取得了较好的疗效；刘进等人在Anthology of Medicine第21卷第1期中公开了一篇题为“果糖二磷酸钠治疗酒精性肝硬化疗效观察”的文献，在一般疗法的基础上加用10％果糖二磷酸钠注射剂静滴，取得了较好的效果；但以上介绍仅是一些探索性的研究，而且给药方式均采用静脉滴注的方式，给药量大，只适用于急性病人及重症肝病患者的短期治疗。但对于慢性肝病患者，一般很难在短时间内治愈，而如果长期滴注，则会带来较大的副作用，且由于受给药手段的限制而不易长期坚持。
中国专利申请94111331.0中公开了一种磷酸果糖口服液，在每100ml的磷酸果糖口服液中含有2.5～4.5g的二磷酸果糖和0.6～1g的牛磺酸。该口服液作为一种营养液，特别是一种具有调节生理功能，增强人体免疫力的口服液，没有提到具有治疗疾病的功效。
中国专利申请00100449.2公开了一种果糖二磷酸钠口服液及其制备。该口服溶液含有果糖二磷酸钠50～800克/1000毫升，用于心肌缺血辅助治疗药。然而却没有任何地方提到可用于治疗肝功能损伤类疾病或此类暗示。
本发明提供了一种用于肝功能损伤类疾病的果糖二磷酸钠口服液，其组成如下果糖二磷酸钠55～300g/1000ml；优选为60～150g/1000ml；防腐剂0.2～2.0g/1000ml；矫味剂0.2～10g/1000ml。
其中所说的防腐剂可以为苯甲酸、羟苯乙酯或山梨酸及其钾盐；所说的矫味剂可以为阿司巴坦或蛋白糖，最好是蛋白糖FTL。
所述口服液中还可选择性地加入香精，如桔子香精，加入量为2ml/1000ml。
上述口服液的制备方法，包含以下步骤(1)取蒸馏水适量，加热至40～80℃左右，加入防腐剂和矫味剂，搅拌使溶解得溶液(1)；(2)取果糖二磷酸钠适量配制成10～50％的果糖二磷酸钠溶液(2)；(3)将溶液(1)冷却到38℃以下，并将溶液(1)与溶液(2)混合，搅拌均匀，调pH值至3.8～4.0；(4)经0.22μ微孔滤膜除菌过滤即得所需的果糖二磷酸钠口服液。
在以上任何步骤中，可选择性地加入香精，如桔子香精，加入量为2ml/1000ml。
本发明口服液可用于肝功能损伤类疾病的治疗，用量为2～6g/日。
本发明用于肝功能损伤类疾病的果糖二磷酸钠口服液，具有服用方便、易于吸收的特点。而且疗效明显、副作用小、安全可长期服用，尤其能够满足治疗慢性肝病的需要。
实施例1 FDP对CCl4所致的小鼠急性肝损伤模型的实验取蒸馏水200ml，加热至70℃，加入羟苯乙酯0.5g，搅拌使溶解，再加入3g蛋白糖FTL50，搅拌使溶解得溶液(1)；取果糖二磷酸钠60g，配制成25％的果糖二磷酸钠溶液(2)；将溶液(1)冷却到28℃，加入溶液(2)中，搅拌均匀，调pH值至4.0，加入桔子香精2ml，最后加水至1000ml经0.22μ微孔滤膜除菌过滤得果糖二磷酸钠口服液1。
取北京维通利华实验动物有限公司提供的ICR系小鼠若干，体重23.4±2.1g，雄性，各组动物数9-10只。小鼠按体重随机分成7组正常对照组、模型对照组、阳性药甘利欣组、阳性药联苯双酯组、0.5、1.0、3.0g/kg/d三个剂量的FDP组。给动物连续给药5天(Bid)，共灌胃10次，第9次给药后1小时，给小鼠腹腔注射0.15％CCl4花生油溶液10ml/kg体重(0.1ml/10g)，正常组小鼠腹腔注射同体积的花生油，24小时后，由眼眶静脉丛采血，取血清，用日本岛津全自动生化分析仪测定血清ALT、T-BIL、AST，并取肝脏，称重，计算肝系数。实验结果1.小鼠给药后体重、毛色、饮食、大、小便等一般行为与模型对照组无明显差别。
2.腹腔注射CCl4后，小鼠血清中ALT、T-BIL和AST均显著升高。FDP连续5天预防灌胃给药(Bid)，1.0、3.0g/kg/d可明显降低肝损伤小鼠血清中ALT，而对T-BIL、AST影响不明显(见表1)。
表1. FDP对CCl4所致的急性肝损伤小鼠血清肝功相关生化指标的影响组别剂量动物数血清肝功相关的生化指标(g/kg/d) (只) ALT T- AST(u/L) BIL(umol/L) (u/L)正常组----9 57±12 1.9±0.2177±28模型组----10310±100##2.6±0.8#279±109#FDP 0.5 10301±203 2.5±0.6281±831.0 10184±104*2.1±0.3218±683.0 10185±91**2.5±0.8279±100甘利欣0.075 10298±112 2.8±0.9320±99联苯双酯 0.0075 10130±46##2.3±0.3236±72注与正常组相比#p＜0.05##Pp＜0.01；与模型组相比*p＜0.05**p＜0.01
从以上结果可以看出，口服FDP1.0、3.0g/kg/d可明显降低肝损伤小鼠血清中ALT，p＜0.05，p＜0.01)。口服FDP对CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
实施例2. CCl4所致的大鼠亚急性肝损伤模型取果糖二磷酸钠80g配制成35％的果糖二磷酸钠溶液(1)；取蒸馏水200ml，加热至75℃，加入羟苯乙酯1.0g，搅拌使溶解，再加入7g蛋白糖FTL50，搅拌使溶解得溶液(2)；将溶液(2)冷却到28℃，加入溶液(1)，搅拌均匀，调pH值至3.8；加水至1000ml经0.22μ微孔滤膜除菌过滤得果糖二磷酸钠口服液2。
取北京维通利华实验动物技术有限公司提供的大鼠若干，体重284±21g，性别雄性，各组动物数8-10只。大鼠按体重随机分成7组正常对照组、模型对照组、阳性药甘利欣组、阳性药联苯双酯组、0.5、1.0、2.0g/kg/d三个剂量的FDP组。除正常组外，其余各组动物于实验第1、5、9、13天皮下注射10％CCl4花生油溶液(5ml/kg体重)，正常组皮下注射花生油(5ml/kg体重)，从第2天起开始连续灌胃给药(Bid)，正常组与模型组灌胃给予同体积的去离子水。于第14天(末次给药16小时后)用15％乌拉坦麻醉(1.5g/kg)，腹主动脉采血，取血清，测定血清ALT、T-BIL、AST、γ-GT、ALP，方法同上。并取肝脏，称重，计算肝脏指数。每个肝脏称重后取相同的一叶，以10％的甲醛固定，做常规病理切片，HE染色，光镜下观察。给大鼠每隔4日皮下注射CCl4一次，共四次，造成亚急性肝损伤模型，FDP2.0g/kg/d可显著降低血清ALT(p＜0.01)的含量。病理学检查发现口服FDP 1.0、2.0g/kg/d可减轻肝细胞的炎症细胞浸润。因此，口服FDP对CCl4所致的大鼠亚急性肝损伤具有保护作用。实验结果1.大鼠给药后，体重、毛色、饮食、大小便等一般行为与模型对照组无明显差异。
2.模型组多次小量给CCl4后大鼠血清ALT和AST显著升高，其它指标，如T-BIL、ALP、γ-GT未见明显改变。FDP连续12天灌胃给药(Bid)，2.0g/kg/d可明显降低肝损伤大鼠血清中ALT，对AST无明显影响(见表2)。
表2. FDP对CCl4所致的慢性肝损伤大鼠血清生化指标的影响(n＝8，X±SD)组别剂量肝功相关的血生化指标(u/L)(g/kg/d)ALTT- ALP γ-GTASTBIL(umol/L)正常组 ----34±5 0.7±0.3 237±46 5.9±1.6 112±21模型组 ----145±55##1.8±1.6 206±47 4.5±3366±192##FDP 0.5 125±361.5±1.1 191±45 2.8±2.1 381±1401.0 107±441.7±0.9 186±49 2.3±1.3 433±1512.0 78±31**1.9±1.0 174±33 2.4±2.2 308±123甘利欣 0.075 125±601.7±1.0 183±46 1.9±1.9 413±155联苯双酯 0.0075 74±20##1.2±0.6 177±33 1.9±1.8 347±168注与正常组相比##p＜0.01 与模型组相比*p＜0.05**p＜0.01肝脏病理学检查可见，正常对照组动物肝小叶结构正常，肝细胞形态未见明显改变。模型组的肝小叶结构正常，但可见以肝小叶中央为主的肝细胞著明脂肪变性，其中可见小灶状淋巴、单核及少数嗜酸性粒细胞浸润，少数肝细胞嗜酸性变，并可见点状肝细胞坏死，甘利欣组和联苯双酯组肝小叶结构正常，可见以肝小叶中央为主的肝细胞著明脂肪变性，0.5、1.0、2.0g/kg/d三个剂量对肝细胞的脂肪变性未见明显改善，FDP1.0、2.0g/kg/d二个剂量尚可减轻肝细胞的炎症细胞浸润。
从以上结果可以看出，口服FDP 2.0g/kg/d组能明显降低肝损伤大鼠血清中的ALT(p＜0.01)。FDP1.0、2.0g/kg/d二个剂量可减轻肝细胞的炎症细胞浸润，因此，FDP对CCl4所致的大鼠亚急性肝损伤具有保护作用。
实施例3. GalN(D-氨基半乳糖)所致的小鼠急性肝损伤模型取蒸馏水200ml，加热至70℃，加入羟苯乙酯1.5g，搅拌使溶解，再加入5g蛋白糖FTL50，搅拌使溶解，得溶液(1)；取果糖二磷酸钠100g，配制成45％的果糖二磷酸钠溶液(2)；将溶液(1)冷却到28℃，加入溶液(2)中，搅拌均匀，调pH值至4.0；加水至1000ml经0.22μ微孔滤膜除菌过滤得果糖二磷酸钠口服液3。
取中国医学科学院实验动物研究所提供小鼠若干，体重19.5±1.2g，雄性，各组动物数10-13只。
小鼠按体重随机分成6组正常对照组、模型对照组、阳性药百赛诺组、1.0、2.0、4.0g/kg/d三个剂量的FDP组。动物连续灌胃(i.g.)6次(Bid)，第3次给药后1小时，给小鼠腹腔注射GalN溶液(450mg/kg体重)，正常组小鼠腹腔注射同体积生理盐水，于末次给药后1小时由眼眶静脉丛采血，取血清，测定血清ALT、T-BIL、AST，方法同上。并取肝脏、脾脏，称重并计算肝、脾系数。
以均数±标准差表示，采用t检验，p＜0.05为显著性差异。实验结果1.小鼠给药后体重、毛色、饮食、大、小便等一般行为与模型对照组无明显差别。
2.腹腔注射GalN后，小鼠血清中ALT、T-BIL和AST均显著升高。FDP连续3天灌胃给药(Bid)，1.0、2.0、4.0g/kg/d剂量均可明显降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平，对T-BIL无明显影响(见表3)。表3. FDP对GalN所致急性肝损伤小鼠血清肝功能相关生化指标的影响(X±SD)组别 剂量动物数血清肝功能相关生化指标(u/L)(g/kg/d) (只) ALTT- ASTBIL(umol/L)正常组---- 1026±101.5±0.2109±29模型组---- 13262±113##2.2±0.5##347±183##FDP 1.0 1298±113**2.1±0.9171±100##2.0 1271±38**2.0±0.9155±100**4.0 1281±67**1.9±0.5143±53**百赛诺0.15 1220±10**1.5±0.3**181±135*注与正常组相比#p＜0.05##P＜0.01与模型组相比*p＜0.0 5**p＜0.01另外，口服FDP三个剂量均可明显降低GalN引起的肝系数的增加，对脾系数的增加有降低趋势(见表4)。
表4. FDP对GalN所致的小鼠肝损伤的脏器系数的影响剂量 动物数肝系数 脾系数组别(g/kg/d)(只) (mg/g)(mg/g)正常组---- 10 38.7±1.5 2.9±0.4模型组---- 13 44.2±1.5##3.1±0.2##FDP 1.0 12 41.3±3.4*3.1±0.52.0 12 41.2±2.8**2.9±0.44.0 12 40.2±2.2**2.9±0.4百赛诺 0.15 12 46.9±1.9**3.0±0.2注与正常组相比#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组相比*p＜0.05**p＜0.01；以上结果可以看出，口服FDP1.0、2.0、4.0g/kg/d剂量组均可极显著降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平(p＜0.01)，口服FDP三个剂量均可明显降低GalN引起的肝系数的增加(p＜0.01，p＜0.05)。提示口服FDP对GalN所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用。
实施例4临床试验试验目的观察果糖二磷酸钠口服溶液作为保肝药，用于急慢性肝炎引起的肝功能损伤的临床疗效及不良反应。试验方法1、试验设计多中心、前瞻性、随机、双盲、对照试验。2、治疗方案①患者按区组随机表被随机分配至治疗组及对照组。②治疗组在使用该类疾病的常规治疗用药基础上，加用实施例3所制备的果糖二磷酸钠口服溶液60ml/日，分三次服用，28天为一疗程，同时口服安慰剂一号，外观、包装、剂型与甘利欣胶囊完全一致。对照组在使用该类疾病的常规治疗用药基础上，加用甘利欣胶囊，同时口服安慰剂二号，外观、包装、剂型与果糖二磷酸钠口服溶液完全一致，由北京华靳制药有限公司提供，用法、用量同果糖二磷酸钠口服溶液。③伴随治疗常规治疗肝炎的药物均可应用，但应将使用药物记录在CRF中，试验期间不得接受其它保肝药物治疗。3、评估①临床疗效评价观察症状变化，于治疗前、治疗期间每周一次、试验后记录。症状包括乏力、纳差、肝区疼痛、腹胀、恶心、呕吐、低热、关节疼、牙龈出血、鼻衄。观察体征变化，于治疗前、治疗后各观察记录一次，包括黄疸、肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、肝脏大小、质地、叩痛及触痛及脾脏大小、质地。②实验室指标治疗前及治疗结束分别检查血、尿常规、凝血酶原时间及肾功能(BUN、Cr)，肝功能(ALT、AST、TBil、DBil、白蛋白、球蛋白及A/G)及心电图。检查于治疗前检查，然后每1周检查一次，直至治疗结束。4、疗效评定①近期疗效评定根据治疗前后症状、体征及肝功能变化进行评定。显著进步自觉症状明显好转，ALT、AST及TBIL正常。进步自觉症状好转或稳定不变，ALT、AST及TBIL较前降低≥50％。无效达不到以上标准或病情进展者。②显著进步和进步病例总和计算总有效率。5、不良事件①详细记录治疗中出现的不良事件，不良事件发生的时间、程度和持续时间。②按与肯定与药物有关；很可能与药物有关；可能与药物有关；与药物无关及不能判定五级标准判定。6、受试者中断或终止试验下列情况将终止试验并进行适当的随访①试验期间使用其它保肝药物。②试验中出现任何临床严重不良事件，或试验过程中伴发疾病恶化或研究者认为继续参加试验对受试者不利的其它情况。③受试者决定退出试验。对中途退出的病人，必须注明原因。如因试验用药不良反应被迫停药未完成疗程者，不作疗效统计，但需纳入不良反应中统计。若因不良事件停用药物，则必须随访病人直到不良反应消失或纠正至临床允许的状况。统计分析应用t检验、配对t检验和卡方检验进行统计学分析。临床研究结果1、入选患者一般资料评估200例入选患者中男性124例，女性76例。性别试验组男性67例，女性34例；对照组男性57例，女性42例。年龄试验组63.09±11.61岁，对照组62.31±10.86岁。病史试验组21.78％，对照组21.21％。
上述资料经统计学处理无显著性差异，表明试验组和对照组在年龄、性别及伴随疾病方面无明显差异，两组资料具有可比性。2、两组治疗前后肝功能、PT比较治疗组治疗前后ALT、AST、SB下降幅度较对照组大，清蛋白(ALB)上升，PT缩短，见表5。治疗组治疗2周和4周后SB下降率分别为25％和55％；对照组分别下降10％和36％。2组治疗2周和4周后SB组间经t检验P＜0.01，治疗组SB下降幅度明显大于对照组。
表5 两组治疗前后肝功能、PT变化的比较项目组别 治疗前治疗2周 差值 治疗4周 差值治疗 281±84 210±97c-73±84o126±126f-132±115rSB(umol/L) 对照 255±86 251±62g-6±96 211±117k-34±139治疗 251±181 78±35c-100±169m57±27f-109±177pALT(IU/L) 对照 291±60 87±65i-125±189 37±51l-135±192治疗 191±93 91±27c-91±186m70±35f-116±199pAST(IU/L) 对照 209±169 105±133i-107±169 103±37l-109±16735±5 36±5b1±6m37±9e2±7p治疗 32±4 33±3g1±533±10j1±6ALB(g/L)对照 19±3 18±4b-2±4o16±3e-3±3r治疗 19±6 19±7g0.4±1.619±±6j-03±3.7PT(s) 对照治疗组治疗前与治疗2周后对比，t检验bP＜0.05，cP＜0.01。治疗组治疗前与治疗4周后比较，t检验eP＜0.05，fP＜0.01。对照组治疗前与治疗2周后对比，t检验gP＞0.05，iP＜0.01。对照组治疗前与治疗4周后比较，t检验jP＞0.05，kP＜0.01。治疗2周后两组间t检验mP＞0.05，oP＜0.01。治疗4周后两组间t检验pP＞0.05，lP＜0.01。3、两组疗效比较治疗组101例中，显效47例，占46.5％，有效35例，占34.7％，总有效率81.2％；对照组99例中，显效10例10.1％，有效20例，20.2％，总有效率30.3％。4、结论本口服溶液作为保肝药，用于急慢性肝炎引起的肝功能损伤的临床疗效可靠，有效率为81.2％。
实施例5典型病例1张某，男，42岁，住院日期2001年10月，住中日友好医院传染科。
患者主诉，于入院前三天，感觉乏力、纳差、腹胀，今日出现黄疸而入院。入院诊断为急性病毒性肝炎。入院时，患者精神萎靡、恶心、腹胀、皮肤、巩膜黄染，尿黄如茶、腹水(-)，肝脾可触及，质地韧。测肝功ALT298U/L，AST242U/L，TB112.7μmol/L。
治疗采用常规治疗肝炎用药(葡萄糖、维生素C等)的基础上加用实施例3所制备的FDP口服溶液3，每次用量为20ml，每日3次。治疗期间，每周一次，记录症状和体征及测定生化指标。经2周治疗后，患者食欲改善，腹胀减轻，黄疸开始消退。
1个月后，症状消失，黄疸降至正常，生化指标ALT下降至168U/L，AST132U/L，TB65.7μmol/L。服用FDP至2个月后，症状全部消失，ALT、AST、TB均恢复正常。
实施例6典型病例2华某，女，30岁，来院日期2002年3月6日，中日友好医院传染科门诊。
患者主诉近半个月来，感到乏力、纳差、腹胀、食欲不振，肝区痛。
经查体患者呈慢性肝病容，可见蜘蛛痣、肝脏大(在肋缘下触及1.5cm)，经肝功能检查结果患者ALT245U/L，AST189U/L，TB35.5μmol/L，A38.9g/L，G30.3g/L。，HbsAg(+)，诊断为慢性肝炎。
治疗采用常规治疗肝炎用药(口服保肝药及维生素C等)的基础上加用实施例3所制备的FDP口服溶液3，每次用量20ml，每日2次。治疗期间，每二周记录症状和体征及测定生化指标。经2周治疗后，患者食欲有所改善，腹胀和肝区疼痛减。1个月后，症状基本消失。生化指标ALT下降至128U/L，AST112U/L，TB30.8μmol/L。服用FDP至2个月后，症状全部消失，ALT、AST、TB均恢复正常，A增加至41.5g/L，G下降28.3g/L，HbsAg未阴转。
以上二例说明FDP口服溶液对急性慢性肝炎引起的肝功能损伤具有治疗作用。
权利要求
1.一种用于治疗肝病的果糖二磷酸钠口服液，其特征在于该口服液组成如下果糖二磷酸钠55～300g/1000ml；防腐剂0.2～2.0g/1000ml；矫味剂0.2～10g/1000ml。
2.按照权利要求1所述的口服液，其特征在于果糖二磷酸钠的含量为60～150g/1000ml。
3.按照权利要求1所述的口服液，其特征在于所说的防腐剂为苯甲酸、羟苯乙酯或山梨酸或其钾盐。
4.按照权利要求1所述的口服液，其特征在于所说的矫味剂为阿司巴坦或蛋白糖。
5.按照权利要求1所述的口服液，其特征在于所述口服液中含有香精，含量为2ml/1000ml。
6.一种权利要求1所述口服液的制备方法，包含以下步骤(1)取蒸馏水适量，加热至40～80℃，加入防腐剂和矫味剂，搅拌使溶解得溶液(1)；(2)取果糖二磷酸钠适量，配制成10～50％的果糖二磷酸钠溶液(2)；(3)将溶液(1)冷却到38℃以下，并将溶液(1)与溶液(2)混合，搅拌均匀，调pH值至3.8～4.0；(4)经0.22μ微孔滤膜除菌过滤即得所需的果糖二磷酸钠口服液。
7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于在以上任何步骤中，选择性地加入香精。
8.一种权利要求1所述口服液在治疗肝功能损伤类疾病中的应用，其特征在于用量为2～6g/日。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗肝功能损伤类疾病的果糖二磷酸钠口服液，含有果糖二磷酸钠55～300g/1000ml；防腐剂0.2～2.0g/1000ml；矫味剂0.2～10g/1000ml。该口服液可用于治疗肝功能损伤类疾病，用量为2～6g/日。具有服用方便、易于吸收、副作用小、安全可长期服用等特点。
文档编号A61K31/70GK1404838SQ02146509
公开日2003年3月26日 申请日期2002年10月18日 优先权日2002年10月18日
发明者宋国芳, 孙晋涛 申请人:北京华靳制药有限公司