专利名称：用免疫效应化合物对感染性疾病和其它疾病的预防和治疗处理的制作方法
背景技术：
先天免疫系统通过一种经受体在自我和非自我途径之间辨别的体系协调对病原体的炎症反应，所述受体识别唯一地由微生物合成的分子种类。这些种类有时称作病原体相关的分子模式(PAMPs)并包括，例如，脂多糖(LPS)，肽聚糖，lipotechoic acids，和细菌脂蛋白(BLPs)。
LPS被天生免疫系统所认别，它是一种来自革兰氏阴性细菌的大量的外细胞壁成分。尽管LPS的化学结构已被认识一段时间，但目前才开始阐明血清蛋白质和/或细胞识别LPS的分子基础。在一系列最近的报道中，一类称作Toll样受体(Toll-like receptors)(TLRs)的受体家族已经涉及对LPS和其它微生物组分的强力先天免疫反应。TLR是具有单个跨膜域的膜蛋白质。细胞质域是约200个氨基酸并且与IL-1受体的细胞质域类似。细胞外域相对大(约550-980个氨基酸)和可包含多个配体-结合位点。
TLRs在LPS免疫反应中的重要性已经在至少两种Toll样受体，Tlr2和Tlr4中具体地表现。例如，对胚肾细胞的转染研究表明，人Tlr2足以提供对LPS的响应(Yang等，Nature 395284-288(1998)；Kirschning等J.Exp Med.112091-97(1998))。强LPS反应似乎需要LPS-结合蛋白质(LBP)和以高亲和性连接LPS的CD14两者。LPS与Tlr2的直接结合在相对低的亲和性下观察到，这表明附带蛋白质可有助于Tlr2被LPS体内结合和/或活化。
Tlr4在LPS免疫反应中的重要性与在lps突变鼠株的定位克隆一起被证明。鼠lps基因的两种突变等位基因已被确认，出现在C3H/HeJ株中的半显性同位基因和存在于C57BL/10ScN和C57BL/10ScCr株中的第二隐性等位基因。对lps突变等位基因纯合的鼠对革兰氏阴性细菌的感染敏感和耐受LPS-诱导的脓毒性休克。来自这些种的lps基因座被克隆并表明，该突变在这两种情况下改变鼠Tlr4基因(Portorak等，科学2822085-2088(1998)；Qureshi等，J Exp Med 4615-625(1999))。从这些报道可以推断，Tlr4是LPS反应所需的。
LPS的生物活性内毒素亚结构部分是脂类-A，一种磷酰基化的多重脂肪酸酰基化葡糖胺二糖，用于在革兰氏阴性细菌的外膜中固定整个结构。我们从前报道，脂类A的有毒作用可通过脂类A的选择性的化学修饰得到单磷酰基脂类A化合物而改善(MPL免疫刺激剂；Corixa公司；Seattle，WA)。已经描述了制备和使用用于疫苗佐剂和其它场合的MPL免疫刺激剂，和结构上类似的化合物的方法(参见，例如，U.S.专利No.4,436,727；4,877,611；4,866,034和4,912,094；4,987,237；Johnson等，J Med Chem 424640-4649(1999)；Ulrich和Myers，疫苗设计亚基和佐剂途径；Powell和Newman，编辑；PlehumNew York，495-524，1995)。尤其是，这些和其它参考文件表明，MPL免疫刺激剂和相关化合物具有明显的用于增加对抗原的体液和/或细胞介导的免疫性的佐剂活性，如果用于具有蛋白质和碳水化合物抗原的疫苗配方。
已经描述了结构上类似于MPL免疫刺激剂的称作氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGPs)的合成单-和二糖分子，参见例如，U.S.专利No.6,113,918，U.S.专利No.6,303,347，和WO 98/50399(1998年10月12日出版)。这些化合物在与抗原一起配制在疫苗组合物中时保持明显的佐剂特性和与单磷酰基脂类A相比具有类似的或改进的毒性分布。这些化合物已被描述为与抗原结合在疫苗配方中(U.S.专利No.6,113,918)和在不存在抗原的情况下用作单一治疗剂，WO 01/90129(2001年11月29日出版)。
环状氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯或″环状AGPs″已在PCT专利申请No.PCT/US01/24284中描述。这些环状AGPs是有效的免疫效应分子，增加对疫苗抗原的体液和细胞介导的免疫反应。这里所用的术语″环状AGP″是指氮杂环烷基或(氮杂环烷基)烷基氨基葡糖苷磷酸酯，其中2-脱氧-2-氨基-b-D-吡喃葡萄糖(葡糖胺)经糖苷键连接到氮杂环烷基或(氮杂环烷基)烷基(糖苷配基)基团上。
本发明提供在不存在外来抗原的情况下配制和给药的单一治疗剂(monotherapies)，用于植物和动物疾病和症状的预防和/或治疗处理，如感染性疾病，自体免疫性和过敏反应。
本发明的单一治疗剂包含一种或多种环状AGPs。本发明的这些和其它方面根据以下详细描述和附图
变得显然。
本发明的综述在一个方面，本发明提供了通过给药有效量的具有式(I)的化合物和其药物可接受盐用于治疗，改善或基本上防止动物的疾病或症状的方法 其中X是-O-或-NH-和Y是-O-或-S-；R1，R2，和R3分别独立地为(C2-C20)酰基基团，包括饱和，不饱和和支化的酰基基团；R4是-H或-PO3R7R8，其中R7和R8分别独立地为H或(C1-C4)脂族基团；R5是-H，-CH3或-PO3R9R10，其中R9和R10分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R6独立地选自H，OH，(C1-C4)氧基脂族基团，-PO3R11R12，-OPO3R11R12，-SO3R11，-OSO3R11，-NR11R12，-SR11，-CN，-NO2，-CHO，-CO2R11，和-CONR11R12，其中R11和R12分别独立地选自H和(C1-C4)脂族基团；前提是R4和R5之一是含磷的基团且如果R4是-PO3R7R8，R5不是-PO3R9R10，其中″*1-3″和″**″表示手性中心；其中下标n，m，p和q分别独立地是整数0-6，前提是p和m的总和是0-6。
在一些实施方案中，本发明化合物在X和Y上包含-O-，R4是PO3R7R8，R5和R6是H，和下标n，m，p，和q是整数0-3。在更优选的实施方案中，R7和R8是-H。在一个实施方案中，下标n是1，下标m是2，且下标p和q是0。在其它实施方案中，R1，R2，和R3是(C6-C14)酰基，(C6-C12)，或(C6-C8)酰基基团，在特殊实施方案中，提供(C6-C12)酰基基团。另一实施方案提供，*1-3处于R构型，Y处于平伏位(equatorial position)，和**是S构型。
说明性的实施方案包括(N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷和其药物可接受盐；式(II)， N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷和其药物可接受盐；式(III)，
和N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷和其药物可接受盐；式(IV)。
在本发明的某些说明性的方面，以上方法用于治疗，改善或基本上防止感染疾病，自身免疫疾病和过敏反应。
在其它方面，本发明提供在合适的赋形剂中包含一种或多种上述化合物，在不存在外来抗原的情况下配制和/或给药的药物组合物。
发明示范实施方案说明举例说明性的预防和治疗用途本发明广义上涉及通过给药有效量的一种或多种本文所述的化合物或包含一种或多种这些化合物的药物组合物而治疗某些疾病和其它医学症状的预防和治疗方法。尽管某些环状AGP化合物已被描述为与外来给药抗原在疫苗配方中结合用作佐剂，和用于某些其它场合，本发明提供优选在单治疗应用中，即，在不存在外来给药抗原的情况下采用这些化合物的新型治疗方法。
在一个方面，本发明提供了治疗，改善和/或基本上防止真核生物主体，尤其是动物，优选人的感染性疾病的方法。假定TLR介导的信号传导在对微生物攻击的先天免疫反应中的重要性，有选择地和以极小毒性刺激这些途径的能力提供了一种针对各种各样的感染剂用于预防和/或治疗性处理方式的有效方案。
本文所述的方法适用于基本上任何种类的感染物，包括细菌、病毒、寄生虫、和真菌。说明性地，本发明可用于预防和/或治疗性处理来自假单胞细菌属、埃希氏杆菌属、克雷伯氏菌属、肠杆菌属、变形菌属、沙雷氏菌属、假丝酵母属、葡萄球菌、链球菌、衣原体属，枝原体属、芽孢杆菌属、和多种其它菌属的种类的细菌感染。可按照本发明治疗的说明性的病毒症状包括例如由流感病毒、腺病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒(RSVs)、疱疹病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒、如、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒，及其它引起的那些。说明性的真菌包括，例如，曲霉菌、白色假丝酵母、新型隐球酵母、粗球孢菌(Coccidioides immitus)及其它。
在一个说明性的实施方案中，本发明提供了用于处理已患有或有可能致患感染，如医院细菌和病毒感染的主体，尤其免疫缺损主体的方法。每年4千万个位院个体中的约2百万个在其住院期间出现医院感染，而且其中的约1％，或约400,000个患者出现医院肺炎，超过7000人死亡。这使得医院肺炎成为医院获得性感染的主要死亡原因。因此，该实施方案满足了对处理医院感染的有效预防途径的明显需求。
在相关实施方案中，本发明提供了对已经产生或可能产生来自机会性感染或来自受抑或隐性感染再激活的肺炎的免疫缺损患者，如HIV-阳性患者的预防性处理。1992年，仅美国就报道了约20,000病例的AIDS患者的卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)感染。另外，所有AIDS患者中的60-70％有时在其疾病期间患上卡氏肺孢子虫。因此，本发明在该实施方案中提供了用于该危险人群的有效的预防方法。
在另一相关实施方案中，本发明方法用于处理其它免疫缺损和/或可能致患感染疾病的患者群，包括，例如，具有囊性纤维化、慢性阻塞性肺病和其它免疫缺损的和/或长期住院治疗的患者。
在本发明的另一方面，本文所述的化合物用于处理，改善或基本上防止过敏病症和症状，如窦炎、慢性鼻窦炎、哮喘、特应性皮炎和银屑病的方法。该方案至少部分基于这些化合物活化由靶细胞产生细胞因子的能力，可与特征在于IL-4产生或对IL-4活性的超响应性的定型化过敏型细胞因子反应竞争。本文公开的某些化合物的给药导致从抗原加工和呈递细胞，以及其它细胞的IFN-γ和IL-12表达，导致与过敏反应有关的细胞因子如IL-4，5，6，10和13的下调。
在本发明的另一方面，这些化合物用于处理自身免疫疾病和症状的方法中。用于该实施方案的化合物通常选自能够拮抗，抑制或以其它方式消极地调节一种或多种Toll样受体，尤其Tlr2和/或Tlr4，使得与给定症状有关的自体免疫反应被改善或基本上防止的那些。说明性地，该实施方案所提供的方法可用于处理症状如炎症性肠病、类风湿性关节炎、慢性关节炎、多发性硬化和银屑病。
尽管不愿局限于理论，据信上述预防和治疗用途的效力至少部分基于这些化合物在Toll样受体活性调节中的参与。尤其是，Toll样受体Tlr2、Tlr4等据信通过非毒性LPS衍生物和本文公开的模拟物而被特异性活化，竞争性抑制或以其它方式受影响。因此，本发明方法提供一种用于调节动物的先天免疫反应途径的有效的和有选择性的径路，而没有产生常常与通常刺激这些径路的天然细菌组分有关的毒性。
示范性的环状AGP化合物用于以上预防和治疗用途的说明性的化合物包括具有式I的化合物 和其药物可接受盐，其中X是-O-或-NH-和Y是-O-或-S-；R1，R2，和R3分别独立地为(C2-C20)酰基基团，包括饱和、不饱和和支化的酰基基团；R4是-H或-PO3R7R8，其中R7和R8分别独立地为H或(C1-C4)脂族基团；R5是-H、-CH3或-PO3R9R10，其中R9和R10分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R6独立地选自H、OH、(C1-C4)氧基脂族基团、-PO3R11R12、-OPO3R11R12、-SO3R11、-OSO3R11、-NR11R12、-SR11、-CN、-NO2、-CHO、-CO2R11、和-CONR11R12，其中R11和R12分别独立地选自H和(C1-C4)脂族基团；前提是R4和R5之一是含磷的基团且当R4是-PO3R7R8时，R5不是-PO3R9R10，其中″*1-3″和″**″表示手性中心；其中下标n、m、p和q分别独立地是整数0-6，前提是p和m的总和是0-6。
尽管式I中的吡喃己糖苷以葡萄糖构型给出，其它苷也在本发明的范围内。例如吡喃葡萄糖苷，包括其它吡喃己糖苷(如，阿洛糖苷、阿卓糖苷、甘露糖苷、古洛糖苷、艾杜糖苷、半乳糖苷、塔罗糖苷)，在本发明的范围内。
在以上的通式中，标为″*1″，″*2″和″*3″的其上连接有正常脂肪酰基残基的3′-立体中心(stereogenic centers)的构型是R或S，但优选R。其上直接或间接连接R6和葡糖胺单元的环状糖苷配基单元的碳原子(标为″**″)的绝对立体化学可以是R或S。在以上通式中，Y可以是水平或轴向位置，但优选为水平的。所有的立体异构体、对映异构体、非对映体和其混合物被认为在本发明的范围内。
在本发明的说明性的实施方案中，X和Y是-O-，R4是膦酰基，R5和R6是H，且下标n、m、p、和q是整数0-3，和更优选0-2。在示例性实施方案中，整数n是1，整数m是2，且整数p和q是0。在该实施方案中，本发明的化合物是具有通式(V)的2-吡咯烷基甲基β-D-氨基葡糖苷4-磷酸酯 在本发明另一说明性的实施方案中，式(III)的R1，R2，和R3是十四酰基残基且它们所连接的3′-立体中心的构型(“*1-3”)是R，Y是处于水平位，且吡咯烷立体中心(″**″)的绝对立体化学是S。
其它示例性实施方案包括N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷，和其药物可接受盐，式(II) N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷和其药物可接受盐；式III，
和N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷和其药物可接受盐；式IV。
本发明化合物可使用描述于Johnson等，Bioorg.Med.Chem.Lett.92273(1999)和PCT/WO98/50399和其中参考文件的方法而制备。一般来说，描述于上述参考文件的合成方法可广泛用于制备具有不同的酰基基团和小类的化合物。例如，可用于本发明的某些化合物描述于U.S.临时申请No.60/223,056和国际申请PCT/US01/24284。一般来说，描述于本文上述参考文件的合成方法和另外为本领域熟知的其它合成方法可广泛用于制备这些化合物。例如，在制造具有不同的酰基基团和取代基的化合物时，本领域熟练技术人员可以理解，其中描述的各种方法可改变以使用替代的酰基化剂，或可用连接有合适酰基基团的市售物质开始。
术语″酰基″是指通过去除酸的羟基部分而衍生自脂族有机酸的那些基团。因此，酰基意味着包括，例如，乙酰基、丙酰基、丁酰基、癸酰基、和新戊酰。
″(C2-C20)酰基″是具有2-2 0碳的酰基基团。类似地，(C6-C14)、(C6-C12)、(C9-C12)、和(C6-C8)酰基是分别具有6-14个碳、6-12个碳、9-12个碳、和6-8个碳的酰基基团。术语″酰基″还包括具有典型的取代基如羟基、酮等的这些基团。
除非说明所指，术语″脂族″本身或作为另一取代基的一部分是指直或支化链或环状的烃部分，包括包含环状和链成分两者的部分，它可以是完全饱和或单-或多不饱和的，具有规定的碳原子数(即C1-C4是指1-4个碳)。饱和烃基团的例子包括基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环丙基、环丙基甲基、亚甲基、亚乙基、和正亚丁基。不饱和烷基基团是具有一个或多个双键和/或三键的基团。不饱和烷基基团的例子包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、1-丙炔基和2-(丁间二烯基)。
术语″氧基脂族″是指具有通过氧原子连接到分子的其余部分上的脂族基团的那些基团。
以上术语(如，″脂族″，″酰基″)分别意味着包括所指部分的取代的和未取代的形式两者。以下给出用于每种基团的优选取代基。
用于脂族基团的取代基可以是各种基团，选自-OR′、＝O、＝S、＝NR′、＝N-OR′、-NR′R″、-SR′、-卤素、-SiR′R″R、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-CONR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR′-C(O)NR″R、-NR″C(O)2R′、-NH-C(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、-CN和-NO2，数目为零至(2m′+1)，其中m′是这些基团中的碳原子的总数。R′、R ″和R分别独立地是指氢和未取代的(C1-C8)脂族基团。如果R′和R″连接到相同的氮原子上，它们可与氮原子结合以形成5-、6-、或7-元环。例如，-NR′R″意味着包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。根据以上对取代基的讨论，本领域熟练技术人员可以理解，术语″脂族″意味着包括例如卤代烷基(如，-CF3和-CH2CF3)之类的基团和类似物。
除非另有所指，术语″卤代″或″卤素″本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴、或碘原子。在具有卤素取代基的化合物中，卤素可以是相同或不同的。
术语″药物可接受盐″意味着包括使用相对非毒性酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于本文所述化合物上的特定取代基。如果本发明化合物包含相对酸性的官能度，碱加成盐可通过纯净地或在合适的惰性溶剂中加入所需碱而得到。药物可接受的碱加成盐的例子包括钠，钾，钙，铵，有机氨基，或镁盐，或类似盐。如果本发明化合物包含相对碱性的官能度，酸加成盐可通过纯净地或在合适的惰性溶剂中加入所需酸而得到。药物可接受的酸加成盐的例子包括衍生自无机酸如氢氯酸，氢溴酸，硝酸，碳酸，一氢碳酸，磷酸，一氢磷酸，二氢磷酸，硫酸，一氢硫酸，氢碘酸，或亚磷酸和类似物的那些，以及衍生自相对非毒性有机酸如乙酸，丙酸，异丁酸，草酸，马来酸，丙二酸，苯甲酸，琥珀酸，辛二酸，富马酸，扁桃酸，邻苯二甲酸，苯磺酸，对甲苯基磺酸，柠檬酸，酒石酸，甲烷磺酸，和类似物的盐。还包括氨基酸的盐如精氨酸盐和类似物，和有机酸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸的盐和类似物(参见，例如，Berge，S.M.等，″药物盐″，药物科学杂志(Journal of Pharmaceutical Science)，1977，66，1-19)。本发明某些特定化合物包含碱性和酸性官能度两者，使得该化合物能够转化成碱或酸加成盐。
这些化合物的中性形式可通过使该盐与碱或酸接触和以常规方式分离母化合物而再生。化合物的母型在某些物理性能，如在极性溶剂中的溶解度方面不同于各种盐形式，但在其它方面这些盐等同于用于本发明目的的化合物的母型。
除了盐形式，本发明提供前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下容易经历化学改变以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可通过化学或生化方法在来自离体环境中转化成本发明化合物。例如，前药可在放入透皮贴储器(transdermal patchreservoir)中时被合适的酶或化学试剂慢慢转化成本发明化合物。
本发明某些化合物可以未溶剂化形式以及溶剂化形式(包括水合形式)存在。一般来说，溶剂化形式相当于未溶剂化形式并被包括在本发明范围内。本发明某些化合物可以多个结晶或非晶体形式存在。一般来说，所有的物理形式对于本发明所涉及的用途是等同的且被包括在本发明范围内。
本发明某些化合物具有非对称的碳原子(光学中心)或双键；消旋体，非对映体，几何异构体和各个异构体都被包括在本发明范围内。
本发明化合物也可在构成这些化合物的一个或多个原子上包含异常比例的原子同位素。例如，化合物可被放射性同位素，例如氚(3H)，碘-125(125I)或碳-14(14C)进行放射性标记。本发明化合物的所有的同位素变型无论是否具有放射性都被确定为包括在本发明范围内。
说明性的药物组合物和其送递在另一实施方案中，本发明涉及在不存在外来抗原的情况下配制和给药的，即，与药物-可接受的载体或赋形剂结合用于单治疗应用中的包含一种或多种本发明化合物的药物组合物。这些药物组合物可单独，或与一种或多种其它治疗方案相结合用于向细胞，组织，动物或植物给药。在许多这些实施方案中，本发明药物组合物包含一种或多种本文所述的化合物。
词语″药物可接受的″是指在向人给药时不产生过敏或类似不良反应的分子体和组合物。本文所用的″载体″或″赋形剂″包括任何和所有的溶剂，分散介质，载体，包被，稀释剂，抗细菌和抗真菌剂，等渗剂和吸收延迟剂，缓冲剂，载体溶液，悬浮液，胶体，和类似物。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非与活性成分不相容，可以考虑任何常规介质或试剂在治疗组合物中的使用。
用于配制药物组合物的说明性的载体包括，例如，油包水或水包油乳剂，包括或不包括适用于静脉内(IV)使用的有机共溶剂的含水组合物，脂质体或含表面活性剂的囊，微球，微珠和微粒体，粉末，片剂，胶囊，栓剂，含水悬浮液，气溶胶，和本领域普通技术人员显而易见的其它载体。
在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种缓冲剂(如，中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水)，碳水化合物(如，葡萄糖，甘露糖，蔗糖或右旋糖酐)，甘露糖醇，蛋白质，多肽或氨基酸如甘氨酸，抗氧化剂，抑菌药，螯合剂如EDTA或谷胱甘肽，佐剂(如，氢氧化铝)，使得配方与受者的血液等渗，低渗，或弱高渗的溶质，悬浮剂，增稠剂和/或防腐剂。
对于某些场合，含水配方是优选的，尤其包含有效量的一种或多种表面活性剂的那些。例如，组合物可以是包含至少一种合适的表面活性剂，如，磷脂类表面活性剂的胶束分散体的形式。磷脂类的说明性的例子包括二酰基磷脂酰甘油，如二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(DPMG)，二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)，和二硬脂酰基磷脂酰甘油(DSPG)，二酰基磷脂酰胆碱，如二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DPMC)，二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)，和二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)；二酰基磷脂酸，如二肉豆蔻酰基磷脂酸(DPMA)，二棕榈酰基磷脂酸(DPPA)，和二硬脂酰基磷脂酸(DSPA)；和二酰基磷脂酰乙醇胺如二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DPME)，二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)。通常，含水配方中的表面活性剂单-/二糖摩尔比是约10∶1-约1∶10，更通常约5∶1-约1∶5，但任何有效量的表面活性剂可用于含水配方以最佳地适应所关心的特定目标。
本文所用的″有效量″是表现出高于载体或阴性对照物的反应的量。正如以上的讨论，向患者给药的本发明化合物的精确剂量取决于给药途径，药物组合物，和患者。
本发明的化合物和药物组合物可配制用于基本上任何给药途径，如，注射，通过口服或鼻内途径吸入，直肠，阴道或气管内滴注，摄入，或经皮或经粘膜途径，等等。这样，本发明方法和组合物可得到的治疗作用可以是，例如，全身，局部，组织-特异性的，等，这取决于本发明给定场合的特定要求。
说明性的配方可被制成和胃肠外，即，腹膜内，皮下，肌内或静脉内给药。用于静脉内使用的载体的一个说明性例子包括10％USP乙醇，40％USP丙二醇或聚乙二醇600和用于注射(WFI)的余量USP水的混合物。其它说明性的载体包括10％USP乙醇和USP WFI；0.01-0.1％在USP WFI中的三乙醇胺；或0.01-0.2％在USP WFI中的二棕榈酰基二磷脂酰胆碱；和1-10％角鲨烯或非肠道水包植物油乳剂。药物可接受的不经肠溶剂一般选择使得它们提供可通过0.22微米过滤器过滤而没有去除活性成分的溶液或分散剂。
用于皮下或肌内使用的载体的说明性例子包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液，5％葡萄糖(在WFI中)和0.01-0.1％三乙醇胺(在5％葡萄糖中)或0.9％氯化钠(在USP WFI中)，或10％USP乙醇，40％丙二醇和余量的可接受的等渗溶液如5％葡萄糖或0.9％氯化钠的1-2或1-4混合物；或0.01-0.2％二棕榈酰基二磷脂酰胆碱(在USP WFI中)和1-10％角鲨烯或非肠道水包植物油乳剂。
通过粘膜表面给药所用的载体的例子取决于特殊途径，如，口服，舌下，鼻内，等。如果口服给药，说明性的例子包括药物级的甘露糖醇，淀粉，乳糖，硬脂酸镁，糖精钠(Sodium saccharide)，纤维素，碳酸镁和其类似物，其中甘露糖醇是优选的。如果鼻内给药，说明性的例子包括聚乙二醇，磷脂类，二醇和糖脂，蔗糖，和/或甲基纤维素，有或没有膨胀剂如乳糖和防腐剂如benzalkonium chloride，EDTA的粉末悬浮液。在尤其说明性的实施方案中，磷脂类1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷胆碱(DPPC)用作约0.01-0.2％的等渗含水载体用于鼻内给药浓度约0.1-3.0mg/ml的本发明化合物。
如果吸入给药，说明性的载体包括聚乙二醇或二醇，DPPC，甲基纤维素，粉状分散剂，和防腐剂，其中聚乙二醇和DPPC是优选的。在许多情况下，该化合物在通过吸入给药时优选是雾化形式。说明性地，送递可通过使用一次性送递设备，喷雾器，呼吸活化粉末吸入器，气溶胶计量吸入器(MDI)或任何其它本领域可得的许多喷雾器送递设备。另外，也可使用合剂塞条(mist tent)或通过气管内的管直接给药。通过气管内或鼻咽模式送递对于某些情况是有效的。
本领域熟练技术人员可以认识到，以上描述是说明性的而非穷举的。确实，许多其它的配方技术和药物可接受的赋形剂和载体溶液是本领域熟练技术人员熟知的，就象研究在各种处理方案中使用本文所述特殊组合物所用的合适的剂量给药和处理方案一样。
该化合物可按照包括本文所述在内的各种分析形式评估以确认和选择具有最适用于本发明给定场合的特性的那些。例如，动物模型可用于确认和评估在环状AGP化合物给药之后在体循环中的细胞因子释放分布。另外，存在各种体外和体内模型用于检查对不同抗原组分的免疫反应在一个或多个方面的变化，这样确认最适用于引起所关心的特定免疫反应的化合物。例如，化合物可与靶细胞，如巨噬细胞，树突细胞或郎格罕氏细胞(Langerhans cells)体外接触，并可测定所产生的细胞因子。另外，基因表达陈列可用于确认被所关心的特殊环状AGP活化或抑制的特定途径。
可以理解，如果需要，本文所公开的化合物可与其它治疗方案，如抗微生物，抗病毒和抗真菌化合物或治疗剂，各种基于DNA的治疗剂，基于RNA的治疗剂，基于多肽的治疗剂，和/或与其它免疫效应物结合给药。实际上，也可包括基本上任何其它组分，只要所述其它的组分在与靶细胞或宿主组织接触时不引起明显副作用。该组合物可因此根据所要实施的本发明特定实施方案的需要或所需与各种其它试剂一起送递。
说明性地，本发明药物组合物可包括编码一种或多种治疗性蛋白质的DNA，反义RNAs，核酶或类似物，或与它们结合使用。DNA可存在于任何的本领域普通技术人员已知的各种送递体系中包括核酸表达体系，细菌和病毒表达体系。许多基因递送技术是本领域熟知的，如Rolland，Crit.Rev.Therap.Drug Carriers Systems 15143-198，1998，和其中引用的参考文件所述的那些。合适的核酸表达体系包含用于患者中表达所需的DNA序列(如合适的启动子和终止信号)。在一优选实施方案中，DNA可以使用病毒表达体系(如，痘苗或其它痘病毒，反转录病毒，或腺病毒)被引入，通常包括使用非病原性(缺陷性)复制缺陷病毒。合适的体系例如公开于Fisher-Hoch等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86317-321，1989；Flexner等，Ann.N.Y.Acad.Sci.56986-103，1989；Flexner等，疫苗817-21，1990；U.S.专利No.4,603,112，4,769,330，和5,017,487；WO 89/01973；U.S.专利No.4,777,127；GB 2,200,651；EP0,345,242；WO 91/02805；Berkner，生物技术6616-627，1988；Rosenfeld等，科学252431-434，1991；Kolls等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91215-219，1994；Kass-Eisler等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9011498-11502，1993；Guzman等，循环882838-2848，1993；和Guzman等，Cir.Res.731202-1207，1993.用于将DNA掺入到这些表达系统的技术是本领域普通技术人员熟知的。
DNA也可以是″裸露的，″例如由Ulmer等，科学2591745-1749，1993描述和由Cohen，科学2591691-1692，1993评述。对裸DNA的吸收可通过将DNA涂覆到被有效送递至细胞中的可生物降解的珠粒上而增加。显然，本发明的药物组合物可包含多聚核苷酸和蛋白质组分两者。
任何各种其它的免疫刺激剂可被包括在本发明组合物中。例如，细胞因子，如GM-CSF，干扰素或白细胞介素进一步调节所关心的免疫反应。例如，在某些实施方案中，其它的组分可被包括在组合物中进一步增加诱导高水平的Thl-型细胞因子(如，IFN-γ，TNFα，IL-2和IL-12)。另外，或在此之上，高水平的Th2-型细胞因子(如，IL-4，IL-5，IL-6和IL-10)可能是某些治疗场合所需的。这些细胞因子的水平可容易地使用标准分析而评估。有关细胞因子家族的综述，参见Mosmann和Coffman，Ann.Rev.Immunol.7145-173，1989。
用于诱导Th1-型细胞因子的说明性组合物包括，例如描述于WO96/02555，WO 99/33488和U.S.专利No.6,008,200和5,856,462的含CpG的低聚核苷酸(其中CpG二核苷酸是未甲基化的)的组合。免疫刺激性DNA序列还描述于，例如，Sato等，科学273352，1996。其它合适的免疫刺激剂包含皂苷，如QS21(Aquila BiopharmaceuticalsInc.，Framingham，MA)，GPI-100(Marciani等，疫苗183141，2000，U.S.专利No.6,080,725)和相关皂苷衍生物和其模拟物。
可与本发明结合使用的其它说明性免疫刺激剂包括Montanide ISA720(Seppic，France)，SAF(Chiron，California，美国)，ISCOMS(CSL)，MF-59(Chiron)，SBAS系列佐剂(如，SBAS-2或SBAS-4，得自Smith KlineBeecham，Rixensart，比利时)，和EnhanzynTM免疫刺激剂(Corixa，Hamilton，MT)。聚氧乙烯醚免疫刺激剂描述于WO99/52549A1。
本发明通过以下非限定性例子进一步说明。
实施例实施例1制备N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐具有式(II)的化合物的三乙基铵盐(1a)向2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡萄糖基溴(1.05g，0.81mmol)在无水1，2-二氯乙烷(10mL)中的溶液加入4分子筛(0.5g)，无水CaSO4(2.2g，16mmol)，和N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷甲醇(0.40g，0.75mmol)。所得混合物在室温下搅拌1h，用Hg(CN)2(1.02g，4.05mmol)处理，和在黑暗中加热回流16h。将冷却的反应混合物用CH2Cl2稀释并过滤。滤液用1N aq KI洗涤，干燥(Na2SO4)，和浓缩。在硅胶(梯度洗脱，15→20％EtOAc/己烷)上急骤色谱处理，得到0.605g(43％)N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种无定形固体。
(1b)将在以上(1a)中制备的化合物(0.50g，0.29mmol)在AcOH(10mL)中的溶液在60℃下用锌粉(0.98g，15mmol)分三个相等的部分在1-h内处理。将冷却的反应混合物超声处理，通过Celite垫过滤，和浓缩。所得残余物在CH2Cl2和饱和aq NaHCO3之间分配，并分层。将有机层干燥(Na2SO4)和浓缩。所得粗氨基醇和(R)-3-十四酰基氧基十四酸(0.155g，0.34mmol)在CH2Cl2(3.5mL)中的溶液与粉状4分子筛(0.25g)一起搅拌0.5h并随后用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(0.11g，0.44mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌8h，通过Celite过滤，和浓缩。在硅胶上使用50％EtOAc/己烷进行急骤色谱处理，得到0.355g(68％)N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种无色糖浆。
(1c)将在以上(1b)中制成的化合物(0.300g，0.166mmol)在AcOH(1mL)和四氢呋喃(9mL)的混合物中的溶液在PtO2(0.15g)的存在下在室温和70psig下氢化18h。反应混合物用2∶1CHCl3-MeOH(50mL)稀释并简单超声处理。收集催化剂并用2∶1CHCl3-MeOH洗涤，然后将合并的滤液和洗涤物浓缩。在硅胶上使用CHCl3-MeOH-H2O-Et3N(90∶10∶0.5∶0.5)进行急骤色谱，得到部分纯化产物，然后将它溶解在冰冷2∶1CHCl3-MeOH(30mL)中并用冰冷0.1N aq HCl(12mL)洗涤。有机相被过滤并从2％aq Et3N(5mL，无热原)中冻干，得到0.228g(79％)N-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐，一种无色粉末mp 67-70℃；IR(膜)3306，2955，2923，2853，1736，1732，1644，1548，1466，1378，1245，1177，1110，1053，844cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ 0.88(m，18H)，1.0-1.2.05(mH)，2.20-2.70(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-325(mH)，4.52(d，1H，J＝8Hz)，5.05-5.28(m，4H)，7.44(d，1H，J＝9Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.3，173.0，170.3，169.6，168.6，101.8，100.4，75.8，72.5，72.4，70.9，70.8，70.3，70.2，69.9，69.3，67.9，66.6，56.5，56.3，54.5，47.4，45.8，44.6，41.4，41.0，39.7，39.2，39.0，34.5，34.3，34.1，32.0，29.7，29.4，28.1，27.3，25.7，25.3，25.2，25.1，24.0，22.7，21.6，14.1，8.6。
分析计算C101H194N3O17P·H2OC，68.47；H，11.15；N，2.37；P，1.75。
实测C，68.79；H，11.00；N，2.24；P，1.97。
实施例2制备N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐)；式(III)的三乙基铵盐。
(2a)向2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡萄糖基溴(1.60g，1.27mmol)在无水1，2-二氯乙烷(3.2mL)中的溶液加入4分子筛(0.6g)，无水CaSO4(1.0g，7.3mmol)，和N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷甲醇(0.58g，1.14mmol)。所得混合物在室温下搅拌1h，用Hg(CN)2(0.58g，2.3mmol)处理，和在黑暗中加热回流6h。将冷却的反应混合物用CH2Cl2稀释和经celite床滤过。滤液用1N aq KI洗涤，干燥(Na2SO4)，和浓缩。在硅胶上急骤色谱(梯度洗脱，25→35％EtOAc/己烷)处理得到1.72g(82％)N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种无色油。
(2b)将在以上(2a)中制成的化合物(1.58g，0.806mmol)在AcOH(40mL)中的溶液在60℃下用锌粉(2.6g，40mmol)分三个相等的部分在1小时内进行处理。将冷却的反应混合物超声处理，经Celite垫滤过，和浓缩。所得残余物在EtOAc和饱和aq NaHCO3之间分配并分层。有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，和浓缩得到1.3g白色固体。所得的粗氨基醇和(R)-3-十二酰基氧基十四酸(0.45g，1.05mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(0.30g，1.21mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌18h和浓缩。在硅胶上用40→50％EtOAc/己烷进行急骤色谱处理，得到0.89g(56％)N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种白色泡沫材料。
(2c)在以上(2b)中制成的化合物(0.75g，0.44mmol)在AcOH(4.5mL)和四氢呋喃(45mL)的混合物中的溶液在PtO2(0.45g)的存在下在室温和70psig下氢化18h。反应混合物用2∶1CHCl3-MeOH(35mL)稀释和简单地超声处理。收集催化剂并用2∶1CHCl3-MeOH洗涤，然后将合并的滤液和洗涤物浓缩。在硅胶上用CHCl3-MeOH-H2O-Et3N(梯度洗脱；96∶4∶0.3∶0.3→90∶10∶0.5∶0.5)进行急骤色谱处理，得到部分纯化产物(0.51g)，将它溶解在冰冷2∶1 CHCl3-MeOH(50mL)中并用冰冷0.1Naq HCl(20mL)洗涤。有机相被过滤和浓缩。将所得白色蜡从2％aqEt3N(70mL，无热原)中冻干，得到0.54g(78％)N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐，一种白色粉末mp 146-151℃；IR(膜)3292，3100，2958，2922，2852，1739，1731，1659，1651，1644，1562，1555，1468，1455，1433，1377，1339，1310，1253，1238，1183，1160，1107，1080，1047，960，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-2.10(mH)，2.20-2.75(m，12H)，3.04(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-4.3(mH)，4.45(d，1H，J＝8.5Hz)，5.0-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.4，173.2，170.6，170.1，169.2，101.4，75.5，74.0，70.8，70.7，70.2，68.5，60.5，56.6，53.6，47.4，45.6，40.9，39.6，38.8，34.5，34.3，34.2，34.1，31.9，29.7，29.6，29.5，29.4，29.4，29.3，29.2，27.3，25.2，25.0，23.6，22.7，21.6，14.0，8.3。
MALDI-MS计算值[M+Na]+1590.1900，实测1590.1866；分析计算值C95H182N3O17P·3H2OC，66.20；H，10.99；N，2.44.实测值C，66.36；H，10.69；N，2.15。
实施例3制备N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐；式(IV)的三乙基铵盐。
(3a)向2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡萄糖基溴(1.70g，1.38mmol)在无水1，2-二氯乙烷(3.5mL)中的溶液加入4分子筛(0.6g)，元水CaSO4(1.2g，8.8mmol)，和N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷甲醇(0.60g，1.24mmol)。所得混合物在室温下搅拌1h，用Hg(CN)2(0.63g，2.5mmol)处理，和在黑暗中加热回流6h。将冷却的反应混合物用CH2Cl2稀释和经celite床滤过。滤液用1N aq KI洗涤，干燥(Na2SO4)，和浓缩。在硅胶(梯度洗脱，25→40％EtOAc/己烷)上进行急骤色谱处理，得到1.82g(80％)N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种无色油。
(3b)将在以上(3a)中制备的化合物(1.67g，1.02mmol)在AcOH(50mL)中的溶液在60℃下用锌粉(3.33g，51mmol)分三个相等的部分在1h内处理。将冷却的反应混合物超声处理，通过Celite垫过滤，和浓缩。所得残余物在EtOAc和饱和aq NaHCO3之间分配并分层。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，和浓缩得到1.25g白色固体。将所得粗氨基醇和(R)-3-癸酰基氧基十四酸(0.53g，1.33mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(0.38g，1.53mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌18h和浓缩。在硅胶上用40→50％EtOAc/己烷进行急骤色谱处理，得到1.23g(74％)N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷，一种白色泡沫材料。
(3c)将在以上(3b)中制成的化合物(1.07g，0.654mmol)在AcOH(6.5mL)和四氢呋喃(65mL)的混合物中的溶液在PtO2(0.66g)的存在下在室温和70psig下氢化18h。反应混合物用2∶1CHCl3-MeOH(50mL)稀释并简单地超声处理。收集催化剂并用2∶1CHCl3-MeOH洗涤，然后将合并的滤液和洗涤物浓缩。将所得所得蜡状固体从2％aq三乙基胺中冻干，得到约1g粗三乙基铵盐，一种白色粉末。在硅胶上用CHCl3-MeOH-H2O-Et3N(梯度洗脱；96∶4∶0.3∶0.3→88∶12∶1∶0.6)进行急骤色谱处理，得到部分纯化产物(0.84g)，将它溶解在冰冷2∶1CHCl3-MeOH(168mL)中并用冰冷0.1N aq HCl(67mL)洗涤。有机相被过滤和浓缩。所得白色蜡(约0.7g)从2％aq Et3N(70mL，无热原)中冻干，得到0.79g(79％)N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷三乙基铵盐，一种白色粉末mp 121-122℃；IR(膜)3287，3093，2961，2913，2850，1745，1738，1732，1716，1666，1660，1651，1644，1635，1565，1556，1538，1470，1455，1434，1416，1378，1337，1311，1248，1184，1104，1081，1021，964，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-2.05(mH)，2.20-2.75(m，12H)，3.04(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-4.3(mH)，4.45(d，1H，J＝8.5Hz)，5.0-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.4，173.2，170.5，170.1，169.1，101.4，75.6，74.0，70.8，70.2，68.7，60.4，56.6，53.8，47.4，45.6，41.0，39.6，38.9，34.5，34.3，34.2，34.1，31.9，29.7，29.6，29.5，29.4，29.4，29.3，29.2，27.3，25.3，25.0，23.7，22.7，21.6，14.1，8.4。
MALDI-MS计算值[M+Na]+1506.0961，实测值1506.1008；分析计算值C89H170N3O17PC，67.43；H，10.81；N，2.65.实测值C，67.26；H，10.85；N，2.47。
实施例4单核细胞增生利斯特氏菌攻击鼠模型该实施例提供实验以评估用实施例1，2和3中制备的化合物进行单核细胞增生利斯特氏菌攻击鼠模型时对非特异抗性的诱导作用。小鼠(5个/组)用溶解在0.2％三乙醇胺(TEOA)中的1μg环状AGP或MPL静脉内处理。两天后，小鼠用约105单核细胞增生利斯特菌10403血清型(JoryBaldridge，华盛顿州立大学，Pullman，WA.提供的原种培养物)静脉内攻击。在攻击两天之后，鼠被处死并通过在胰胨豆胨琼脂培养板上涂覆10-倍系列稀释的脾匀浆而测定各个鼠的脾中的菌落形成单位(CFUs)数量。给定AGP或MPL所提供的保护度通过将用给定化合物处理的鼠组中的细菌/脾(log10值)的平均值，从在用单核细胞增生利斯特菌攻击之前用载体(0.2％TEOA)″假″处理的对照组中的细菌/脾(log10值)的平均值减去而计算。
在所测试的化合物中，实施例3的化合物活性最高，诱导出相当于MPL的保护水平(约0.9个log10单位)。实施例2的化合物诱导稍低的保护水平，且实施例1的化合物最不具保护性(分别0.7和0.2个log单位)。
实施例5通过环状AGPs的预防性给药而防止致死性流行性感冒攻击该实施例提供实验以评估环状AGP-处理鼠针对致死性流感攻击的保护作用。BALB/c小鼠(10个小鼠/组)用20μg实施例1，2和3的化合物，或用MPL在流感A/HK/68(5LD50)的致死性鼻内攻击之前48小时时鼻内处理。保护作用通过攻击之后21天的存活率，临床症状(毛皮皱褶，弓起的体态和呼吸困难)的观察结果，和体重减轻预防作用而评估。
如同从李斯特菌模型看到的一样，实施例2和3的化合物与载体对照物相比提供增强的保护作用。用实施例3化合物处理的小鼠具有60％存活率；用实施例2的化合物处理的具有40％存活率，用MPL处理的具有30％存活率。用实施例1的化合物处理的小鼠没有存活。这些数据表明，实施例3的化合物提供优异的保护作用，其次是实施例2和1的化合物。
在该说明书中引用的所有的出版物和专利申请以其全部在此作为参考并入本发明。尽管前述的本发明已为了说明和为了清楚地理解而进行一些详细描述，但本领域普通技术人员根据本发明的教导可以看出，某些改变和变化可在不背离所附权利要求的主旨或范围的情况下做出。
权利要求
1.一种用于在受试主体中改善或基本上预防感染性疾病，自身免疫疾病或过敏症状的方法，包括将该受试主体与有效量的一种或多种具有以下式的化合物和其药物可接受盐接触 其中X选自-O-和-NH-；Y选自-O-和-S-；R1，R2，和R3分别独立地为(C2-C20)酰基基团；R4选自-H和-PO3R7R8，其中R7和R8分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R5选自-H，-CH3和-PO3R9R10，其中R9和R10分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R6选自H，OH，(C1-C4)氧基脂族基团，-PO3R11R12，-OPO3R11R12，-SO3R11，-OSO3R11，-NR11R12，-SR11，-CN，-NO2，-CHO，-CO2R11，和-CONR11R12，其中R11和R12分别独立地选自H和(C1-C4)脂族基团，前提是R4和R5之一是含磷的基团且当R4是-PO3R7R8时，R5不是-PO3R9R10；其中″*1″，″*2″，″*3″和″**″表示手性中心；其中n，m，p和q分别独立地是整数0-6，前提是p和m的总和是0-6。
2.权利要求1的方法，其中X和Y是-O-，R4是PO3R7R8，R5和R6是H，且n、m、p和q是整数0-3。
3.权利要求2的方法，其中R7和R8是-H。
4.权利要求2的方法，其中n，m，p，和q是0-2。
5.权利要求2的方法，其中n是1，m是2，且p和q是0。
6.权利要求1的方法，其中R1，R2和R3分别为C6-C14酰基。
7.权利要求1的方法，其中R1，R2，和R3分别为C6-C12酰基。
8.权利要求5的方法，其中R1，R2，和R3分别为癸酰基残基。
9.权利要求5的方法，其中R1，R2，和R3分别为十二酰基残基。
10.权利要求5的方法，其中R1，R2，和R3分别为十四酰基残基。
11.权利要求5的方法，其中*1、*2和*3是R构型。
12.权利要求5的方法，其中Y处于平伏位置。
13.权利要求5的方法，其中**是S构型。
14.权利要求5的方法，其中*1、*2和*3是R构型，其中Y处于平伏位置，且其中**是S构型。
15.权利要求1的方法，其中感染性疾病由细菌、病毒、寄生虫或真菌引起。
16.权利要求15的方法，其中所述细菌是革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。
17.权利要求15的方法，其中感染性疾病由选自假单胞菌属，埃希氏菌属，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，变形菌属，沙雷氏菌属，假丝酵母属，芽孢杆菌属，和葡萄球菌属的细菌引起。
18.权利要求17的方法，其中感染性疾病是肺炎。
19.权利要求18的方法，其中所述肺炎是医源性肺炎。
20.权利要求19的方法，其中所述肺炎是在HIV阳性患者体内。
21.权利要求1的方法，其中所述感染性疾病是慢性感染。
22.权利要求21的方法，其中所述慢性感染包括慢性肝炎，人乳头瘤病毒，口或阴道念珠菌病，牙周病或由于真菌定居而引起的慢性鼻窦炎。
23.权利要求1的方法，其中所述过敏症状选自哮喘，特应性皮炎，季节性过敏症和慢性鼻窦炎。
24.权利要求1的方法，其中所述自身免疫疾病选自炎症性肠病，类风湿性关节炎，慢性关节炎，多发性硬化和银屑病。
25.权利要求1的方法，其中所述化合物通过选自肠胃外，口服，静脉内，输注，鼻内，吸入，经皮和经粘膜的途径向所述动物给药。
26.一种用于预防性处理受试主体的细菌性或病毒性感染的方法，包括使主体接触有效量的一种或多种下式化合物和其药物可接受盐 其中X选自-O-和-NH-；Y选自-O-和-S-；R1，R2和R3分别独立地选自(C2-C20)酰基；R4选自-H和-PO3R7R8，其中R7和R8分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R5选自-H，-CH3和-PO3R9R10，其中R9和R10分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R6选自H，OH，(C1-C4)氧基脂族基团，-PO3R11R12，-OPO3R11R12，-SO3R11，-OSO3R11，-NR11R12，-SR11，-CN，-NO2，-CHO，-CO2R11，和-CONR11R12，其中R11和R12分别独立地选自H和(C1-C4)脂族基团，前提是R4和R5之一是含磷的基团且当R4是-PO3R7R8时，R5不是-PO3R9R10；其中″*1″，″*2″，″*3″，和″**″表示手性中心；其中n，m，p和q分别独立地是整数0-6，前提是p和m的总和是0-6。
27.权利要求26的方法，其中X和Y是-O-，R4是PO3R7R8，R5和R6是H，且n，m，p，和q是整数0-3。
28.权利要求27的方法，其中R7和R8是-H。
29.权利要求27的方法，其中n，m，p，和q是0-2。
30.权利要求28的方法，其中n是1，m是2，且p和q是0。
31.权利要求26的方法，其中R1，R2和R3分别为C6-C14酰基。
32.权利要求26的方法，其中R1，R2；和R3分别为C6-C12酰基。
33.权利要求30的方法，其中R1，R2，和R3分别为癸酰基残基。
34.权利要求30的方法，其中R1，R2，和R2分别为十二酰基残基。
35.权利要求30的方法，其中R1，R2，和R3分别为十四酰基残基。
36.权利要求30的方法，其中*1、*2和*3是R构型。
37.权利要求30的方法，其中Y处于平伏位置。
38.权利要求30的方法，其中**是S构型。
39.权利要求30的方法，其中*1，*2，和*3是R构型，其中Y处于平伏位置，和其中**是S构型。
40.权利要求26的方法，其中感染性疾病由细菌，病毒，寄生虫，或真菌引起。
41.权利要求40的方法，其中所述细菌是革兰氏阴性细菌，或革兰氏阳性细菌。
42.权利要求40的方法，其中感染性疾病由选自假单胞菌属，埃希氏菌属，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，变形菌属，沙雷氏菌属，假丝酵母属，芽孢杆菌属，和葡萄球菌属的细菌引起。
43.权利要求42的方法，其中感染性疾病是肺炎。
44.权利要求43的方法，其中所述肺炎是医源性肺炎。
45.一种在不存在外来抗原的情况下配制和给药的组合物，包含与药物可接受的载体结合的一种或多种具有下式的化合物和其药物可接受盐 其中X选自-O-和-NH-；Y选自-O-和-S-；R1，R2和R3分别独立地选自(C2-C20)酰基；R4选自-H和-PO3R7R8，其中R7和R8分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R5选自-H，-CH3和-PO3R9R10，其中R9和R10分别独立地选自-H和(C1-C4)脂族基团；R6选自H，OH，(C1-C4)氧基脂族基团，-PO3R11R12，-OPO3R11R12，-SO3R11，-OSO3R11，-NR11R12，-SR11，-CN，-NO2，-CHO，-CO2R11，和-CONR11R12，其中R11和R12分别独立地选自H和(C1-C4)脂族基团，前提是R4和R5之一是含磷的基团且当R4是-PO3R7R8时，R5不是-PO3R9R10；其中″*1″，″*2″，″*3″，和″**″表示手性中心；其中n，m，p和q分别独立地是整数0-6，前提是p和m的总和是0-6。
46.权利要求45的药物组合物，其中X和Y是-O-，R4是PO3R7R8，R5和R6是H，且n，m，p，和q是整数0-3。
47.权利要求46的药物组合物，其中R7和R8是-H。
48.权利要求46的药物组合物，其中n，m，p，和q是0-2。
49.权利要求47的药物组合物，其中n是1，m是2，且p和q是0。
50.权利要求45的药物组合物，其中R1，R2和R3分别为C6-C14酰基。
51.权利要求45的药物组合物，其中R1，R2和R3分别为C6-C12酰基。
52.权利要求49的药物组合物，其中R1，R2，和R3分别为癸酰基残基。
53.权利要求49的药物组合物，其中R1，R2，和R3分别为十二酰基残基。
54.权利要求49的药物组合物，其中R1，R2，和R3分别为十四酰基残基。
55.权利要求49的药物组合物，其中*1、*2和*3是R构型。
56.权利要求49的药物组合物，其中Y处于平伏位置。
57.权利要求49的药物组合物，其中**是S构型。
58.权利要求49的药物组合物，其中*1，*2，和*3是R构型，其中Y处于平伏位置，且其中**是S构型。
59.权利要求45的药物组合物，进一步包含一种或多种表面活性剂。
60.权利要求59的药物组合物，其中所述一种或多种表面活性剂选自二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(DPMG)，二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)，二硬脂酰基磷脂酰甘油(DSPG)，二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DPMC)，二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)，二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)；二肉豆蔻酰基磷脂酸(DPMA)，二棕榈酰基磷脂酸(DPPA)，二硬脂酰基磷脂酸(DSPA)；二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DPME)，二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)。
62.一种用于在受试主体中改善或基本上预防感染性疾病，自身免疫疾病或过敏症状的方法，包括使受试主体与有效量的环状AGP接触。
63.权利要求62的方法，其中所述环状AGP是N-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰基氧基-十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷或其药物可接受盐。
64.权利要求62的方法，其中所述环状AGP是N-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-(S)-2-吡咯烷基甲基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰基氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷或其药物可接受盐。
全文摘要
本发明提供了用于处理或改善疾病和其它症状，如感染性疾病，自身免疫疾病和过敏反应的方法和组合物。该方法采用环状AGPs用于选择性地刺激动物和植物的免疫反应。
文档编号A61P31/04GK1622812SQ02828435
公开日2005年6月1日 申请日期2002年2月4日 优先权日2002年2月4日
发明者J·R·鲍德里奇, D·A·约翰逊, C·W·克拉夫 申请人:科里克萨有限公司