专利名称：一种用于通便、减肥、降胆固醇、降血脂的生物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及保健生物制剂，具体地说是一种用于通便、减肥、降胆固醇、降血脂的生物制剂。
背景技术：
心血管疾病是目前中国人群死因之首，约占总死亡人口的34％-40％，心脏病患者超过3000万人，其中全国每年死于冠心病人数多达110万人，1988年至1997年的十年间城市居民因血管疾病死亡年上升达25％；而血清中胆固醇、血脂水平高是引起心肌梗塞的主要原因。中老年人尤为居多，近来青年人高胆固醇症群也在日益增多；另则，中老年胃肠功能的减弱或手术后活动量减少或由于社会工作节奏的改变，人体的紧张和工作压力增加，造成的便秘症群增多。
国外已有用天然的卵叶车前子种子和壳的粉作为降低胆固醇、通便的产品(文献1Park et al Cereal Chemistry 1997，74207-211；文献2Aygustinand Dwyer Topics in Clinical Nutrations 1999，101-13；文献3Jensen et al J.of the Am.Col of Nutrations 1993，12147-154；文献4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文献5Rezaeipoor et al J Ethnopharmacol.2000Sep；72(1-2)283-6.)；因为该产品富集大量天然多糖、寡聚糖、水溶性纤维素和多种氨基酸、微量活性植物蛋白质及微量元素，据美国FDA要求，通便、降胆固醇的功能食品中可加这一食用纤维素(成人摄入量10克/天，如果是声明降胆固醇的功能食品)。但是市场上该产品的主要缺点是其高度亲水性和胶化性，使得该品很难在常见食品和饮料的配方中使用；除高度吸水性和胶化性之外，产品口感极差，始终伴有污秽粘土的味道；加之服用时因摄水不足导致食道或胃肠道梗塞的例子，所以急需要求改进这一不良反应。
发明内容
本发明的目的在于提供一种口感好、应用范围广的用于通便、减肥、降胆固醇、降血脂的生物制剂。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为以卵叶车前子生物酶促反应产品为活性成份。
所述生物酶促反应是以卵叶车前子的籽或壳的干粉为原料，经液相或固相酶促反应生产改良卵叶车前子的生物制剂；具体操作过程为车前子粉碎，烘干，在乙酸钠、柠檬酸钠或富马酸钠缓冲试剂(浓度为10～50mM，0.1～0.5ml/克)存在下进行生物酶促反应，淬灭酶失活，得产品；酶促反应中所用的酶是以红曲霉与纤维素修饰酶单用或合用，可以加入其他的纤维素修饰的单酶或复合酶(降纤酶)，多聚半乳糖全酸内切酶、戊糖聚酶、或真菌戊糖聚酶果胶酶等；酶促反应条件PH为5.0；温度23～50℃，反应2～7天，湿度50～80％；反应中较佳的酶用量为1～20活性单位/克干粉(约为0.05～0.5克/克干粉)；干粉与缓冲液重量比为1∶5～1∶10；酶促反应在液相条件下操作时卵叶车前子的重量百分含量为10～50％；固相酶促反应经干燥、粉碎进一步得到干粉；液相酶促反应所得酶促反应的产品直接用于饮料的制备；所述的车前子最好为纤维素含量高的藏车前子或欧车前子；粉碎可采用粉碎机或纳米粉碎机，粉碎的目数可以为40目；60目；80目；100目；200目及小于400纳米的颗粒；所述淬灭酶失活是指高温80～110℃，0.5～3小时灭活或用微波1～10分钟取得；固相酶促反应还可采用75％～95％食品级/药品级乙醇1-20ml/g使干粉终止酶促反应；本发明中的固相酶促反应可以是上述单酶或复合酶；其中红曲霉与真菌降纤酶连用为佳；戊糖降纤酶和红曲霉连用也可取得较好效果，但所得干粉的硬度仍然较大；干粉溶胀率均不小于50ml/g，给细目下的干粉可与1∶5～1∶10的柠檬酸钠缓冲液溶解(胀)；加入酶20～50℃下，搅拌8～100h，酶的加入量以干粉中量计约为0.05～0.5g/g。
所述的生物制剂可以在药品、功能食品、饮料、绿色食品、糕点中的应用。
本发明具有如下优点1.本发明通过生物技术手段修饰了车前子属的天然植物产品的理化性质和口感，消除现有市售产品的缺点；改良后的卵叶车前子产品主要含有降解的天然多糖、寡聚糖、水溶性纤维素、食用色素；并且比原药的硬度降低66％～69％，粘度降低69％，吸水性降低～50％(测定方法参见文献13Paraskevopoulou et al J.of Food Science 1997，62208-211)。
2.作为食品添加剂或功能食品，成人每天摄入10克左右本发明的产品，无任何可观察毒性，长期服用没有副作用及不良反应，安全可靠。
3.本发明把生物工程技术运用于中(西)草药的开发，通过固相(半固相)或液相的方法改造中草药的理化性质，同时从中药中生产具有天然降血脂、降胆固醇的洛伐他汀，含量可达3.5％；改良后的产品，具有优良的通便、减肥、降胆固醇、降血脂作用；动物体内实验证明，每次摄入20～100毫克/公斤含有本品的口服制剂，每日三次，一个疗程降胆固醇作用达24～30％，降血脂作用达50％；大大改进天然产品。
4.本发明提供了一种由卵叶车前子的种子或壳，经酶促反应(固或液相)的生产方法，其可以实现规模化工业生产。
图1为车钱子原料电镜图片。
图2为红曲霉改良后的产品电镜图片。
具体实施例方式
下面通过实例详述本发明实施例1红曲霉和降纤酶连用试验卵叶车前子80目(5公斤，98％纯度)置于50升的常规发酵罐中，红曲霉(100克)和真菌降纤酶(1升，500000FUX)加入醋酸钠缓冲液(50毫尔，15升)，反应5～7天。其后，用95％的食品级酒精(20升)处理，过滤、使酶灭活。出料，热空气干燥或真空干燥过夜或至衡重。所得干粉粉碎后过80目筛。根据需要，也可进一步粉碎至100目、150目和200目不等。
实施例2 真菌降纤酶单用试验方法同实施例1同。唯独不同条件是单独使用真菌降纤酶(1升)。反应5～7天后，酶促反应在90℃加热半小时灭活。热空气干燥直至衡重。粉碎过筛(80～200目)得所需干粉。
卵叶车前子80目(5公斤，98％纯度)至于50升的常规发酵罐中，真菌降纤酶(1升，500000FUX)加入柠檬酸钠缓冲液(50毫尔，15升)，反应5～7天。用95％的食品级酒精(20升)处理，过滤、使酶灭活。出料，热空气干燥或真空干燥过夜或至衡重。所得干粉粉碎后过80目筛。根据需要，也可进一步粉碎至100目、150目和200目不等。
实施例3红曲霉与戊糖聚合酶连用试验方法同实施例1。在红曲霉之外再加戊糖聚合酶(500克)。
卵叶车前子80目(5公斤，98％纯度)至于50升的常规发酵罐中，真菌降纤酶(1升，500000FUX)加入柠檬酸钠缓冲液(50毫尔，15升)，反应5～7天。其后，用95％的食品级酒精(20升)处理，过滤、使酶灭活。出料后，热空气干燥或真空干燥过夜或至衡重。所得干粉粉碎后过80目筛。根据需要，也可进一步粉碎至100目、150目和200目不等。
实施例4红曲霉单用方法同实施例1。卵叶车前子80目(5公斤，98％纯度)至于50升的常规发酵罐中，红曲霉(200克)，加入柠檬酸钠缓冲液(50毫尔，15升)，反应5～7天。其后，用95％的食品级酒精(100升)处理，过滤、使酶灭活。出料，热空气干燥或真空干燥过夜或至衡重。所得干粉粉碎后过80目筛。根据需要，也可进一步粉碎至100目、150目和200目不等。
应用例查尔斯河鼠(每组10只老鼠)，两组分别在3～4周内喂50～100克/公斤的实例1中所得产品的糊剂，水份占50％，一组服用100克/公斤5％的纤维素，和100克麦麸，10％烘炒的麦麸，克分别测定相应组别中老鼠血液中的胆固醇和甘油三脂。
1.小鼠动物实验，与空白试验对照，结果表明每天服用该品的小鼠(50～100毫克/公斤)，总胆固醇下降为7.87％，LDL下降为12.6％，由此可见，该品可降低导致动脉硬化的功用。
2.动物试验表明，该品对降低血清中的胆固醇和血脂均有良好的效果；三-四周内可以降低胆固醇24-30％，降血脂30-50％。
3.急毒试验和长毒试验均显示该品无明显副作用，安全性可靠；每天服用(100-200毫克/公斤)未见任何副作用，安全可靠。
4.本发明所得干粉与对照组药物(洛法他汀，26％)相比，其具有保护肠内壁不受微生物的侵害，调节肠道蠕动活动，降低胆酸对营养成分的亲和力的是葡萄糖(92％)；果胶(79％)，该品(53％)；这表明该品产生挥发性脂肪酸的可能性最小，而且其中寡糖、多糖、单糖为非天然糖份，从而减少油脂和胆固醇的产生；由于对肠内壁有保护作用，具有抑制亚硝基化合物的形成和蓄积所至的肠道癌症。
应用结论分析本发明所得产品具有降低胆固醇，通过调节胆酸池大小和组份及钠粒子依赖性胆酸转运，增加胆固醇7-羟基酶(CYPTA)的mRNA的水平(10-15％)，减少肠肝循环中的单酸疏水性，引起粪便胆酸水平增加从而消除过盛的胆固醇和甘油酸三脂的含量；此外，所形成的干粉还有增加胰岛素的敏感性及骨骼肌中Glut-4蛋白质的表达，在30-60分钟内起到降低血糖浓度。服用由该产品干粉所制成的冲剂，可以减少胆结石的作用(文献4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文献5Rezaeipoor et al JEthnopharmacol.2000 Sep；72(1-2)283-6.；文献6Fernandez et al J PharmacolExp Ther.1998 Aug；286(2)870-4.；文献7Anderson et al Am J Clin Nutr2000 Feb；71(2)472-9；文献8Cohen etal J Natl Cancer Inst 1996 Jul3；88(13)899-907；文献9Schwesinger et al Am J Surg 1999Apr；177(4)307-10；文献10Daggy et al J Lipid Res 1997Mar；38(3)491-502)。
本发明的产品含有有效成分在体内通过脱乙酰化后(文献14Tomodaet al Chem Pharm Bull(Tokyo)1991 Aug；39(8)2068-71)使得网状上皮组织和碱性磷酸酶的活性增加；但对胃肠道各种有益蛋白酶的活性不产生负面影响；抑制淋巴细胞对抗原的抵抗力从而不易被破坏。
电镜研究表明未改良的车前子表面较粗造，改良后的表面光滑均匀。
该品的异质染色体缺乏交叉，与正常营养成分有本质的差别。本发明除可以用于新药生产外(片剂和散剂)；还可以用于功能食品，诸如通便冲剂(文献11Diaz；et al US Pat.5,891,441(1999)；文献12Pellar US Pat.5,73,232(1998))，降脂冲剂，减肥冲剂，降胆固醇冲剂，也可制成饼干、桃酥、花生糊、芝麻糊、豆奶冲饮。
饮料瓶装或听装；含本发明原料3～5克，每天两瓶，可达到清除体内毒素和垃圾、控制体重、增进肠道蠕动、防止便秘的作用；同时可与人体常用的必须营养物质为伍，补充必须的维生素和矿物质；其按口味可以添加到苹果、香蕉、大枣汁、草莓、樱桃、桔汁等饮料中。
权利要求
1.一种用于通便、减肥、降胆固醇、降血脂的生物制剂，其特征在于以卵叶车前子生物酶促反应产品为活性成份。
2.一种权利要求1所述的生物制剂的制备方法，其特征在于卵叶车前子粉碎，烘干，在乙酸钠、柠檬酸钠或富马酸钠缓冲试剂存在下进行生物酶促反应，淬灭酶失活，得产品。
3.按照权利要求2所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述酶是指红曲霉和/或纤维素修饰酶。
4.按照权利要求2所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述酶是指红曲霉与真菌降纤酶或戊糖降纤酶与红曲霉。
5.按照权利要求2所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述酶促反应条件为，PH为5.0，温度23～50℃，反应2～7天，湿度50～80％。
6.按照权利要求2所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述反应中酶的加入量为1～20活性单位/克干粉；干粉与缓冲液重量比为1∶5～1∶10；酶促反应在液相条件下操作时卵叶车前子的重量百分含量为10～50％。
7.按照权利要求6所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述缓冲液为乙酸钠、柠檬酸钠或富马酸钠缓冲试剂，其浓度为10～50mM。
8.按照权利要求2所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述的车前子为纤维素含量高的藏车前子或欧车前子。
9.按照权利要求1所述的生物制剂的制备方法，其特征在于所述淬灭酶失活是指高温80～110℃，0.5～3小时灭活或用微波1～10分钟取得；固相酶促反应还可采用75％～95％食品级/药品级乙醇1～20ml/g干粉终止酶促反应。
10.按照权利要求1所述的生物制剂在药品、功能食品、饮料、绿色食品、糕点中的应用。
全文摘要
一种用于通便、减肥、降胆固醇、降血脂的生物制剂，该生物制剂以卵叶车前子生物酶促反应产品为活性成分；由卵叶车前子的种子或壳为原料，以红曲霉、多聚半乳糖全酸内切酶、果胶酶、或其复合物固(液)相酶解修饰，产生可供食用的草药原料。该法在半固相中进行酶促反应，通过原料干燥、粉粹、配制的降解酶在pH缓冲溶液下反应；调节反应温度和时间，经加热终止酶促反应、反应湿基烘干、再经超细粉碎等步骤所获得的改良草药。该发明的生物制剂可用于降胆固醇、降血脂、通便、减肥，具有优于天然未改造的植物药的作用，降低胶化60％，吸水性降低50％，改造后原料容易作为多种药物制剂，食品添加剂，制备饮料，冲剂，散剂。
文档编号A61P3/00GK1517111SQ03110848
公开日2004年8月4日 申请日期2003年1月13日 优先权日2003年1月13日
发明者梅晓丹 申请人:大连百奥科技发展有限公司