专利名称：采用层析及膜技术从乌龙茶中精取表没食子儿茶素没食子酸酯的方法
技术领域：
本发明涉及一种从乌龙茶中精取表没食子儿茶素没食子酸酯(以下简称EGCG)的 方法，具体来说是一种采用层析及膜分离方法从乌龙茶中分离纯化表没食子儿茶素没食子 酸酯的方法。
背景技术：
茶多酚是从茶叶中提取的一种天然多酚类活性物质，其为主要成份及最有效成份 EGCG，具有清除自由基、抗氧化、防辐射、抗肿瘤、抗病毒、降血脂和胆固醇、抗菌、延缓衰老 等多种保健和药理作用。目前，EGCG单体已被列为一种可代替紫杉醇的抗癌新药。由于茶 叶中主要有效成份为茶多酚，时下，EGCG大都由茶叶提取而制得，对此，如专利局公开号为 CN101381359A的专利文献就公开了“一种从绿茶中提取高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯 的方法”，通过将液相萃取法和闪烁硅胶柱色谱法联用，制得表没食子儿茶素没食子酸酯单 体，该方法虽可制得高纯度EGCG单体，但一方面由于存在操作复杂、投资大、得率低、损耗 大、有毒有机溶剂(如氯仿)残留、金属残留等问题，使产品难为保健品和医药等行业所接 受；另一方面，研究表明，乌龙茶的茶叶中有效成份茶多酚、儿茶素单体物表没食子儿茶素 没食子酸酯(EGCG)比绿茶高了近十个百分点，因此，从绿茶中提取EGCG相比乌龙茶并不具 有更理想的资源优势。
发明内容
本发明的目的是要提供一种新的EGCG单体的提取方法，即采用层析及膜技术从 乌龙茶中进行提取纯化EGCG而达到高得率、高纯度且无残留并适用于产业化的目的。为实现上述目的，本发明采用的技术方案主要是利用乌龙茶的茶多酚类及其它杂 质在溶剂中溶解度的不同，分别用膜过滤、膜浓缩去杂得到多酚类粗制品，再利用层析分离 技术精制出茶多酚，回收有机溶剂，最后利用膜分离技术从茶多酚类中分离出儿茶素EGCG 单体，并通过结晶和冷冻干燥可得单体儿茶素EGCG产品。实施该方案的方法包括如下步 骤(1)提取，将乌龙茶叶通过水提得茶液。(2)膜过滤膜浓缩，常温下，采用有机高分子卷式膜进行除杂去色，再连续萃取去 除茶多糖，得较纯茶多酚样液。(3)层析分离，选用体积为2500cm3，高为70 IOOcm柱子，填入极性树脂；平均粒 度在50目左右，再将样液填入柱子，利用树脂吸附儿茶素组份，去除咖啡因、色素等杂质， 流速为1 2BV/h ；流出液由深红色变浅；加入1 2BV量的水清洗，流速不变，至流出液为 无色；用1 2BV、浓度为70 80%的乙醇溶液进行解吸，流速不变，收集有颜色的流出液， 该流出液为儿茶素溶液。(4)膜分离，常温下，将儿茶素溶液泵入膜分离设备中，采用高分子膜进行分离，分离后的收集液为EGCG溶液。(5)结晶，将EGCG溶液进行真空浓缩，温度为50°C 70°C，使其固含量提高至 25-45%后将EGCG浓缩液置于5 10°C环境下结晶，等结晶完全后，漂洗得EGCG晶体。(6)冷冻干燥，将EGCG晶体冷冻干燥得白色固体EGCG产品。上述步骤(4)所述的高分子膜为陶瓷膜，截流分子量是450 460。上述步骤(5)中所述将EGCG溶液进行真空浓缩，优选温度为60°C，优选固含量提 高至30%。本发明采用上述技术方案与现有技术相比，具有以下优点第一，采用膜过滤和低 温膜浓缩技术除去提取液中纤维、蛋白质、果胶等杂质，有效地解决了传统工艺中纤维、蛋 白质、果胶等难以除去问题。第二，利用膜分离技术动态分离茶多酚中的其它组分，较好地 解决了产品在传统工艺因高温造成的容易氧化的问题，克服高能耗、高耗时、产品损耗高的 缺陷，生产成本低、得率高、产品纯度达98%以上，易于产业化推广。第三，不使用含氯等有 毒有机溶剂，具有无残留的优点；而且也不使用酸碱，更具环保。第四，工艺设计流程科学合 理，操作简易，制备的EGCG单体含量达到98%以上，产品符合食品安全要求。
具体实施例方式实施例1 1)提取，将乌龙茶叶用水液进行水提并得到茶液。2)膜过滤膜浓缩，常温下，采用有机高分子卷式膜进行除杂去色，再连续萃取去除 茶多糖，得较纯茶多酚样液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)层析分离将IOOml茶多酚样液，其茶多酚组份约为10g，在常温常压下，将茶 多酚溶液泵入树脂吸附柱中，树脂柱体积250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 选用极性大孔树脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，颜色由深变浅，吸附 完毕；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液为无色；用2BV的70%的乙醇溶液解吸，流速在 lBV/h，收集有颜色的流出液(儿茶素溶液)；4)膜分离，将流出液在常温下，泵入膜分离设备中，选用高分子陶瓷膜进行分离， 收集液为EGCG溶液；5)结晶，将EGCG溶液在50°C真空浓缩，至固含量在25%左右，并置于5 10°C环 境下结晶，结晶完成后，用水漂洗，得白色EGCG晶体；6)将EGCG晶体冷冻干燥得白色固态EGCG产品2. 13g，纯度为98. 2 %，得率为 42. 6%。实施例2:1)提取，将乌龙茶叶用水液进行水提并得到茶液。2)膜过滤膜浓缩，常温下，采用有机高分子卷式膜进行除杂去色，再连续萃取去除 茶多糖，得较纯茶多酚样液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)层析分离将120ml茶多酚样液，其茶多酚组份约为12g，在常温常压下，将茶 多酚溶液泵入树脂吸附柱中，树脂柱体积250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 选用极性大孔树脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，颜色由深变浅，吸附 完毕；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液为无色；用2BV的75%的乙醇溶液解吸，流速在
4lBV/h，收集有颜色的流出液(儿茶素溶液)；4)膜分离，将流出液在常温下，泵入膜分离设备中，选用高分子陶瓷膜进行分离， 收集液为EGCG溶液；5)结晶，将EGCG溶液在60°C真空浓缩，至固含量在30%，并置于5 10°C环境下 结晶，结晶完成后，用水漂洗，得白色E G CG晶体；6)将EGCG晶体冷冻干燥得白色固态EGCG产品2. 52g，纯度为98. 2 %，得率为
42.0%。实施例3 1)提取，将乌龙茶叶用水液进行水提并得到茶液。2)膜过滤膜浓缩，常温下，采用有机高分子卷式膜进行除杂去色，再连续萃取去除 茶多糖，得较纯茶多酚样液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)层析分离将200ml茶多酚样液，其茶多酚组份约为20g，在常温常压下，将茶 多酚溶液泵入树脂吸附柱中，树脂柱体积250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 选用极性大孔树脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，颜色由深变浅，吸附 完毕；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液为无色；用2BV的80%的乙醇溶液解吸，流速在 lBV/h，收集有颜色的流出液(儿茶素溶液)；4)膜分离，将流出液在常温下，泵入膜分离设备中，选用高分子陶瓷膜进行分离， 收集液为EGCG溶液；5)结晶，将EGCG溶液在70°C真空浓缩，至固含量在45%，并置于5 10°C环境下 结晶，结晶完成后，用水漂洗，得白色E G CG晶体；6)将EGCG晶体冷冻干燥得白色固态EGCG产品4. 31g，纯度为98. 2 %，得率为
43.1%。
权利要求
一种采用层析及膜技术从乌龙茶中精取表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取，将乌龙茶叶通过水提得茶液；(2)膜过滤膜浓缩，常温下，采用有机高分子卷式膜进行除杂去色，再连续萃取去除茶多糖，得较纯茶多酚样液；(3)层析分离，选用体积为2500cm3，高为70～100cm柱子，填入极性树脂；平均粒度在50目左右，再将样液填入柱子，利用树脂吸附儿茶素组份，去除咖啡因、色素等杂质，流速为1～2BV/h；流出液由深红色变浅；加入1～2BV量的水清洗，流速不变，至流出液为无色；用1～2BV、浓度为70～80％的乙醇溶液进行解吸，流速不变，收集有颜色的流出液，该流出液为儿茶素溶液；(4)膜分离，常温下，将儿茶素溶液泵入膜分离设备中，采用高分子膜进行分离，分离后的收集液为EGCG溶液；(5)结晶，将EGCG溶液进行真空浓缩，温度为50℃～70℃，使其固含量提高至25 45％后将EGCG浓缩液置于5～10℃环境下结晶，等结晶完全后，漂洗得EGCG晶体；(6)冷冻干燥，将EGCG晶体冷冻干燥得白色固体EGCG产品。
2.根据权利要求1所述的一种采用层析及膜技术从乌龙茶中精取表没食子儿茶素没 食子酸酯的方法，其特征在于上述步骤(4)所述的高分子膜为陶瓷膜，截流分子量是450 460。
3.根据权利要求1所述的一种采用层析及膜技术从乌龙茶中精取表没食子儿茶素没 食子酸酯的方法，其特征在于上述步骤(5)中所述将EGCG溶液进行真空浓缩，优选温度为 60 0C，优选固含量提高至30 %。
全文摘要
一种采用层析及膜分离方法从乌龙茶中分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括如下步骤(1)提取，将乌龙茶叶通过水提得茶液；(2)膜过滤膜浓缩，进行除杂去色得较纯茶多酚样液；(3)层析分离，从茶多酚中分离儿茶素溶液；(4)膜分离，常温下采用高分子膜进行分离，得EGCG溶液；(5)结晶，将EGCG溶液进行真空浓缩并结晶得EGCG晶体；(6)冷冻干燥，将EGCG晶体冷冻干燥得白色固体EGCG产品。具有生产成本低、得率高、产品纯度达98％以上且无残留等优点，易于产业化推广。
文档编号C07D311/62GK101921253SQ20101017825
公开日2010年12月22日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者丁明浩, 冯文辉, 林立武, 陈伟强, 陈森全, 陈燕珊 申请人:陈森全