基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括：制备检测液，制备钙黄绿素和CTMAB原溶液；按照体积比为1：2的比例混合得到检测液；采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；在层析完全后，在距离滴入点最远处滴入步骤S1所制得的检测液；将硅胶板置于暗室中用紫外光照射，观察滴检测液处是否有明显的黄绿色荧光产生，若有荧光产生则残留过量。CTMAB结合乐果的能力强于钙黄绿素，检测液接触乐果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能够明显观察到有黄绿色荧光产生。利用这样的间接荧光检测原理，通过肉眼观察荧光即可完成判断，快速、便捷地实现了乐果残留的检测。
【专利说明】
基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法。
【背景技术】
[0002]新世纪以来，中国经历着翻天覆地的变化，经济、军事、科技、文化教育水平都在向着世界强国迈进，但近年来层出不穷的食品安全问题值得人深思。2006年的苏丹红事件，08年的三鹿奶粉事件，11年的“皮革奶”、瘦肉精、塑化液，15年的“僵尸肉”以及一直存在的地沟油，这些都还只是冰山一角，食品安全问题迫在眉睫。另一方面，对于安全的蔬菜水果，我们仍要担心其农药种类是否规范，量是否超标，可以说这是相对而言管理难度较大的区域。而乐果又是一种开始使用时间早，使用范围广的常用农药，其纯品为白色针状结晶;微溶于水，易溶于酒精；比水重，溶于水后呈现乳白色;有刺鼻的味道;在酸性条件下稳定，碱性条件下易分解，遇明火高温可燃，释放出磷、硫的剧毒氧化物；易被植物吸收并传导至整株植物，具有杀虫杀螨的作用。人体接触过量的乐果后，会抑制体内胆碱酯酶活性，造成生理功能紊乱。
[0003]实验室能较为准确得测得农药残留的含量、种类，可让百姓家里放一套硕大的检测仪器并不现实，市面上急需一种快速、便捷的乐果残留检测手段。
[0004]由于农药残留的量基数比较小，且有一部分农药易被植物吸收，使得蔬菜表面残存的农药量比较少，且并不能代表农药的总量，故设计了一种层析法来富集植株中残留的农药。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，利用乐果的不亲水性(层析完全后会离滴入点最远)，在距离滴入点最远处以及无层析处滴入检测液，利用间接荧光检测原理，观察两处的颜色差异，肉眼即可完成判断，快速、便捷地实现乐果残留的检测。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括以下步骤:
SI:制备检测液，包括以下子步骤:
SlOl:制备原溶液:
(I)取钙黄绿素粉末，溶于第一溶剂中，配置成浓度不小于0.05 mol/L的钙黄绿素溶液;钙黄绿素(Calcein)，分子式为C30H26N2013，用于络合指示剂荧光指示剂等领域;钙黄绿素为亮黄色粉末，溶于乙醇和碱，微溶于水，其钠盐为橙红色结晶，溶于水，呈黄色而有绿色荧光，不溶于无水乙醇和乙醚，熔点大于300°C。
[0007](2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于第二溶剂中，配置成浓度不小于
0.025moI/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液;CTMAB的分子式为C16H33(CH3)3NBr，呈白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水，震荡时产生大量泡沫，能与阳离子、非离子、两性表面活性剂有良好的配伍性。具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。分析化学中常用的一种表面活性剂，在物质的测定中加入CTMAB可以增加分析的准确度和灵敏度。
[0008]S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液；
S2:比色检测，包括以下子步骤:
S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；
S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处滴入步骤SI所制得的检测液；
S203:将硅胶板置于暗室中用紫外光照射，观察滴检测液处是否有明显的黄绿色荧光产生，若有明显的黄绿色荧光产生则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
[0009]所述钙黄绿素溶液的浓度为lmol/L，所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的浓度为
0.5mol/L。
[0010]所述钙黄绿素溶液与所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的体积比为1:2。
[0011]所述的第一溶剂为水。
[0012]所述的第二溶剂为去离子水。
[0013]基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括以下步骤:
SI:制备检测液，包括以下子步骤:
SlOl:制备原溶液:
(1)取钙黄绿素粉末，溶于第一溶剂中，配置成浓度不小于0.05mol/L的钙黄绿素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于第二溶剂中，配置成浓度不小于0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液；
S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液；
S2:比色检测，包括以下子步骤:
S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；
S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处以及无层析处分别滴入步骤SI所制得的检测液；
S203:观察上述两处是否有明显的颜色差异，若有明显的颜色差异则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
[0014]十六烷基三甲基溴化铵CTMAB既能与钙黄绿素反应，又能和乐果反应，它能与钙黄绿素络合，降低钙黄绿素的荧光强度，并使得荧光红移，CTMAB结合乐果的能力强于钙黄绿素，检测液接触乐果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能够明显观察到有黄绿色荧光产生。
[0015]干燥处理方法为避光自然风干或高温烘干或低温干燥。
[0016]所述钙黄绿素溶液的浓度为lmol/L，所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的浓度为
0.5mol/L。
[0017]所述钙黄绿素溶液与所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的体积比为1:2。
[0018]所述的第一溶剂为水。
[0019]所述的第二溶剂为去离子水。
[0020]本发明的有益效果是:
I)十六烷基三甲基溴化铵CTMAB既能与钙黄绿素反应，又能和乐果反应，它能与钙黄绿素络合，降低钙黄绿素的荧光强度，并使得荧光红移，CTMAB结合乐果的能力强于钙黄绿素，检测液接触乐果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能够明显观察到有黄绿色荧光产生。利用这样的间接荧光检测原理，通过肉眼观察荧光即可完成判断，快速、便捷地实现了乐果残留的检测。
[0021 ] 2)荧光染色法相较于其他颜色反应法具有以下优势:
其一，颜色法较难寻找一种合适的化学物质。化学颜色法多数为无机化合物的性质反应，主要包括分解反应、化合反应、复分解反应以及置换反应。想要通过颜色变化去获得存在一种物质的可能性需要通过上述的基本反应方式来找寻一种颜色变化明显、反应精度高的物质，这难度是很大的，而有机物的反应方式种类更多，且更难控制其反应进程与反应结果，所以，普通的颜色反应是很难用来检测一种物质的残留的。
[0022]其二，普通化学反应的干扰性较大。化学反应主要是以离子间的反应，基团、官能团之间的反应为主的，这就导致了相似离子、基团、官能团的影响是很致命的，譬如银离子的反应，若使用的不是去离子水，如果水中的氯离子含量较高的话，也容易产生浑浊的现象，所以仅仅通过肉眼观察很难准确地确定被检测到的确实是我们所想要的物质，而使用荧光法只是利用到了物质的物理性质，主要反应为吸附以及络合，其他物质的干扰性较低。
[0023]其三，荧光法结果明显。一般颜色反应在浓度极低的时候较难直接判断，譬如，三价铁的颜色变化，其从浅黄色变成了淡黄色，仔细观察确实能发现有所变化，倘若脱离了实验室的主观想法，客观地去评价一种物质颜色的时候，浅黄色和淡黄色就很难分辨了。而荧光法在观察上具有天然的优势，有无荧光只需要在暗室中用紫外灯照射即能判断，而且，即使化合物浓度较低使得荧光强度较低，也能明显比对出有和无的差别。
[0024]综上所述，显然荧光法作为检测乐果残留的有效方法显得颇有优势，无论是从方式、干扰、结果上去分析，都要优于一般的颜色法，而且荧光法不仅能检测乐果的存在，还能利用实验室的仪器，通过荧光强度的变化，准确测得乐果的含量。
[0025]3)考虑到乐果实际的残留会受分解、水洗等因素的影响，使得其比例小于1:1000，在实验室使用1:1500、1:3000的比例进行试纸实验，在该比例下仍能分辨出乐果确实存在残留。不过由于国家(GB 8978—1996)允许的乐果残留在水中为，二级:1.0mg/L三级:2.0mg/L，在果蔬上(GB 5127—85)为1.0mg/kg，若使用1:1000的乐果溶液喷洒，在7天后其浓度就能达到果蔬国标水平，废水二级水平，所以，检测精度能达到实际要求。
[0026]4)硅胶板层析法可以有效富集待测植株中残留的农药，解决了农药残留量基数小，且有一部分农药易被植物吸收，使得蔬菜表面残存的农药量比较少、并不能代表农药的总量，检测结果不准确的问题。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
[0028]乐果的一般性质:乐果的分子式为C5H12N03PS2，这意味着乐果分子含有一个硫代磷酸根，使得其中的硫容易在水中电解出硫离子，使得其能与硝酸银反应，生成黄色沉淀；与氯化钯反应，生成黄色物质。
[0029]乐果的还原性:硫离子有较强的还原性，因此可以还原一些有氧化性的化学品，例如Fe3+、高锰酸钾等。
[0030]乐果的水解性:乐果在中性条件下会水解出甲胺，与2，4_二硝基氯苯反应，产生黄色沉淀。在碱性条件下，可以与亚硝酰铁氰化钠反应，产生红褐色沉淀。
[0031]荧光法:由于乐果本身不带有荧光，本发明尝试了FITC、水杨基荧光酮二聚体、二碘荧光素、钙黄绿素等实验室常用荧光染剂的荧光染色法，旨在找出一种较为合理的检测手段。
[0032]1.1普通化学法:
在试验初期，明确实验目标后，开始从乐果最基本的化学性质着手，希望能从常见的有颜色变化的化学反应中找出一种精度较高的试剂。
[0033]1.1.1直接反应法
1.1.1.1乐果的基本化学性质
初期，最先尝试硝酸银这种物质。取市场上买到的百分之四十乐果乳液，以瓶标签上标明的1:1000稀释比例稀释在水中。由于乐果微溶于水，稀释后乐果乳液会以小液滴的形式沉在烧杯底部，故采取超声震荡的方法并静置IH，把乐果乳液扩散到整个溶液体系中，使其浓度均匀，也大大缩短了溶解的时间。取实验室0.5毫升lmol/L的硝酸银溶液于小试管中，加入配好的乐果水溶液0.5毫升，轻轻震荡，静置lOmin。未观察到有黄色沉淀，但是溶液变得浑浊。分析:一、由于溶液只是呈现出浑浊而并没有明显的黄色沉淀，故通过此方法并不能用肉眼明显观察到结果。二、由于硝酸银是一种很贵的盐溶液，若把它作为一种大批量使用的检测法，不符合惠民的特点，成本过高。所以该方法失败。
[0034]再者，又尝试了氯化钯这种化学物质，方法同硝酸银。静置后，观察到明显的黄色沉淀，且能肉眼清晰分辨出溶液的颜色变化。故考虑进一步以滤纸为媒介，采用滤纸比色法。但经过查询，发现钯是一种贵金属，在许多高新领域有着不可或缺的作用，而且钯元素产量不高，成本很高，故不适用于批量使用。
[0035]在这之后，本发明对于新尝试的化学方法增加了一个化学品常用且廉价的前提。
[0036]在连续几次的失败之后，考虑到磷酸根不稳定，有强还原性的性质，加之磷酸根的其中一个氧离子被硫离子替代的事实，联想到了利用有颜色变化的氧化还原反应来检测乐果分子的方法。
[0037]1.1.1.2乐果的氧化还原反应
I)三价铁离子的水溶液呈现出黄色，其被还原后的离子颜色褪去。取氯化铁粉末
0.1625g，溶于10毫升水中，形成0.lmol/L的氯化铁水溶液，静置30Min。取之前配比的0.5毫升乐果水溶液于小试管中，加入0.5毫升氯化铁溶液，震荡。观察，黄色溶液并没有明显变化，超声震荡15MIN后，黄色略微褪去，但观察并不明显。故此方案失败。
[0038]2)高锰酸钾是一种强氧化剂，且其本身带有强烈的红色，若发生氧化还原反应，产生无色的二价锰离子，将会是比较容易观察的。取实验室配比好的lmol/L的高锰酸钾溶液I毫升，加入1:1000的乐果水溶液I毫升，轻轻震荡，发现红色明显褪去，但产生了一股刺鼻的气体，起初没有在意，并且已经开始将滤纸浸泡在高锰酸钾溶液中准备下一步实验，但之后经过查找资料后发现，若是误食乐果后，不能用高锰酸钾洗胃，因为两者会反应生成一种毒性更强烈的物质。故此方案有悖“测毒”的预期，方案失败。
[0039]1.1.2间接反应法
在考虑到间接反应法之前，本发明还尝试了许多不同的化学物质，但基本上都以精度不够高，视觉效果不够明显等问题被排除。于是，就考虑到乐果水解产物的化学性质是否有较为实用的检测法。
[0040]1.1.2.1 中性条件
乐果在酸性条件下较为稳定，基本不发生水解，而在中性条件下，生成甲胺和2，4_ 二硝基氯苯反应可生成黄色产物。取乐果水溶液30毫升，使用碱性将乐果水溶液的PH值调整至8.00左右。方法:校准PH计，取乐果水溶液30毫升，将PH计的探头深入液面，同时放入磁石并让其在搅拌台上工作，使用移液枪取得0.lmol/L的氢氧化钠溶液，逐滴缓慢加入到乐果溶液中，观察PH计的数值变化，直到稳定在8.00左右，调节完成。
[0041]将调节好PH的乐果溶液静置2H，取静置后的乐果溶液2毫升，加入2毫升配比好的2，4_ 二硝基氯苯。观察得，溶液从无色透明逐渐变成了淡黄色，但由于淡黄色并不能用肉眼明确分辨，方案失败。
[0042]1.1.2.2 碱性条件
乐果在碱性条件下极易水解成硫代磷酸和硫醇，硫化物和亚硝酰铁氰化钠反应生成洋红色化合物。取乐果水溶液30毫升，用3.1.2.1的PH调节方法，将溶液PH调节到10.00左右，静置20min，取静置后的乐果溶液2毫升，加入lmol/L的亚硝酰铁氰化钠溶液2毫升。观察得，由于亚硝酰铁氰化钠本身自带黄绿色，加入到乐果溶液后，立刻从黄绿色变成了砖红色，颜色变化极其明显。观察得，这种物质有可能作为试纸法的染色剂，但当准备做第二次对比实验的时候，发现刚配比的亚硝酰铁氰化钠溶液在杯壁上出现了蓝色附着物，并且黄绿色明显转换为淡蓝色，后通过资料得知，亚硝酰铁氰化钠的水溶液是一种极不稳定的物质，在室温条件下就会快速分解，方案失败。
[0043]1.2荧光法
经过上述的多次实验，颜色化学品的直接反应法似乎并达不到检测所需要的精度。
[0044]1.2.1直接染色法
基于荧光染色法，本发明尝试了多种荧光物质的染色试验。
[0045]1.2.1水杨基荧光酮
水杨基荧光酮是一种阴离子试剂，在中性条件下具有很强的荧光性，其可以和许多阴性离子结合，从而降低荧光强度。利用这一特点，本发明尝试使用其直接对乐果经行染色，由于乐果在水中会电离出阴离子根，理论上，在染色结束后，其荧光强度应该会下降。
[0046]方法:
取百分之四十乐果溶液，按照1:1000的比例稀释，配置成50毫升的乐果水溶液待用。取实验室水杨基荧光酮粉末，用分析天平称量，按照瓶上标定的分子量，配置成0.5mol/L的溶液待用。取配置好的水杨基荧光酮2毫升于试管中，加入2毫升乐果溶液，放置在恒温水浴加热炉反应，时长约为2H。
[0047]结果观察:
水杨基荧光酮本身呈现黄绿色，加入乐果溶液后黄色变淡，将等量的酮用去离子水稀释后，观察得与含有乐果的溶液差距不大，故可判断，初期两者并未发生剧烈的化学反应。待水浴加热2H后，原黄绿色溶液经对比后发现有略微的红色出现，但不明显，透过暗室的紫外灯，发现荧光强度减弱。
[0048]分析:
I.水杨基荧光酮确实能跟乐果发生反应，使其荧光褪去。
[0049]2.其与乐果反应的条件较为繁琐，而且需要消耗的时间过长。
[0050]3.通过上述实验，因为反应时间过长，并不能完全断定是乐果造成了酮的荧光减弱，也有可能是本身的分解造成荧光变化的假象。所以方案不通过。
[0051 ] 1.2.2间接荧光检测法
基于上述实验的过程思考，本发明所考虑的方法基本都是“xxxxx与乐果反应，生成XXXXX，导致颜色或荧光强度改变”，显然，这种思维方式在一定上局限了对寻找一种合适化学物质的方向。面对很多未知的事物，人们经常会选择用面对面的方式去解决，当然这在大部分的情况下还是成立的，但对于某些事物，某些领域，寻找一种中间体来解决矛盾双方会更行之有效，比如，太空探索、深海探索、药物实验、建筑模拟等。这些通过借助硬件、软件等间接探索未知领域的方法，使得人类在19世纪以来进入了前所未有的知识爆炸时代，我们可以用程序代替我们的眼睛，用机械代替我们的力量，完成许多人体所不能完成或不能实现的领域中，这种通过第三者的研究方式，开拓者我们的新世界。
[0052]受到这些新兴科技探索发现的过程，联想到乐果实验的阻碍，于是就考虑到本发明是否能用一种第三者介入的方式，把两者的化学性质更有效得连接起来。
[0053]探究得到，钙黄绿素这种荧光物质在水溶液中极其稳定，它主要用来滴定钙元素，也可用于测定锶、钡、铜、锰、钴、镍、钼、铬等。它对于某些金属阳离子有着强大的引力，而且显然，与这些金属离子结合后，其荧光强度会明显减弱，溶液本身的黄绿色也会褪去。由于可以用于滴定，这种荧光物质的灵敏性以及精度理论上是能达到实验要求的。
[0054]由于乐果溶液在碱性环境下不稳定，在酸性条件下稳定，可以得到乐果分子本身的阳性较强，于是本发明经行过将钙黄绿素和乐果溶液直接结合的方式，但效果差强人意。
[0055]摆在眼前的问题有:
I)能否找到一种物质，使得“妈黄绿素一一XXXX这种物质一一乐果溶液”这种反应方式产生明显的结果。
[0056]2)这种物质能与钙黄绿素反应，同时又能和乐果反应。
[0057]3)反应产生的结果能有较高的精度和灵敏性。
[0058]带着这三个问题，最先从能与钙黄绿素反应的物质入手。
[0059]首先，那些阳性离子得到排除，显然，这些阳性离子并不会与乐果发成强烈的化学反应。
[0060]再者，那些与钙黄绿素发生化学结构变化的物质也得到排除，因为，如果是这种化学物质导致了荧光物质的消失，若乐果仍会和其反应，理论上不能判断到底是乐果产生了结果还是这种反应物质产生了结果。
[0061]最后，本发明从表面活性剂出发，研究是否存在一种活性剂，都可以与钙黄绿素和乐果结合，但与乐果的结合更为紧密并且强烈。
[0062]【实施例1】基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括以下步骤: SI:制备检测液，包括以下子步骤:
SlOl:制备原溶液:
(1)取钙黄绿素粉末0.429克，溶于50毫升水中，配置成浓度为lmol/L的钙黄绿素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末0.247克，溶于50毫升去离子水中，配置成浓度为
0.5mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液；
S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液；
S2:比色检测，包括以下子步骤:
S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；
S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处滴入步骤SI所制得的检测液；
S203:将硅胶板置于暗室中用紫外光照射，观察滴检测液处是否有明显的黄绿色荧光产生，若有明显的黄绿色荧光产生则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
[0063]【实施例2】基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括以下步骤:
SI:制备检测液，包括以下子步骤:
SlOl:制备原溶液:
(1)取钙黄绿素粉末，溶于水中，配置成浓度为0.05mol/L的钙黄绿素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于去离子水中，配置成浓度为0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液；
S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液；
S2:比色检测，包括以下子步骤:
S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；
S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处以及无层析处分别滴入步骤SI所制得的检测液；
S203:观察上述两处是否有明显的颜色差异，若有明显的颜色差异则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
[0064]【实施例3】基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，包括以下步骤:
SI:制备检测液，包括以下子步骤:
SlOl:制备原溶液:
(1)取钙黄绿素粉末，溶于水中，配置成浓度为0.lmol/L的钙黄绿素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于去离子水中，配置成浓度为0.lmol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液；
S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液；
S2:比色检测，包括以下子步骤:
S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析；
S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处滴入步骤SI所制得的检测液；
S203:将硅胶板置于暗室中用紫外光照射，观察滴检测液处是否有明显的黄绿色荧光产生，若有明显的黄绿色荧光产生则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
[0065]实验室结果
间接荧光法的核心思路是:通过“一种荧光物质一一某种中间介质一一乐果残留”这种方式来检测乐果残留的存在。配置化合物的浓度丐黄绿素(0.lmol/L)、CTMAB(0.lmol/L)、乐果洛液(I: 1000稀释)。
[0066]实验为了更具合理性得探索得到的结果，旨在找出更为合理的浓度配比。
[0067]I)钙黄绿素过量
取配置好的I丐黄绿素溶液Iml于5个试管中，分别加入0.lmol/L、0.05mol/L、0.025mol/L、0.0125mol/L、0.00625mol/L的CTMAB溶液lml，观察荧光强度的变化，观察得，在
0.025mol/L的量级后，荧光强度无明显变化，故取0.025mol/L为零界值，将0.025mol/L与0.lmol/L做比对，得到0.lmol/L的效果优于0.025mol/L。
[0068]2)CTMAB 过量
取配置好的CTMAB溶液Iml于5个试管中，分别加入0.1mol/L、0.05mol/L、0.025mol/L、0.0125mOl/L、0.00625mOl/L的钙黄绿素溶液lml，观察荧光强度的变化，观察得，在
0.05mol/L的量级后，荧光强度无明显变化，故取0.05mol/L为零界值，将0.05mol/L与0.lmol/L做对比，得到0.lmol/L的效果优于0.05mol/L。
[0069]因此，钙黄绿素与CTMAB的比例大约是I比I的时候效果最好。
[0070]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
【主权项】
1.基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤: S1:制备检测液，包括以下子步骤: SlOl:制备原溶液: (1)取钙黄绿素粉末，溶于第一溶剂中，配置成浓度不小于0.05mol/L的钙黄绿素溶液； (2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于第二溶剂中，配置成浓度不小于0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液； S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液； S2:比色检测，包括以下子步骤: S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析； S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处滴入步骤SI所制得的检测液； S203:将硅胶板置于暗室中用紫外光照射，观察滴检测液处是否有明显的黄绿色荧光产生，若有明显的黄绿色荧光产生则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。2.根据权利要求1所述的基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于:所述钙黄绿素溶液的浓度为lmol/L，所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的浓度为0.5mol/L03.根据权利要求2所述的基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于:所述钙黄绿素溶液与所述十六烷基三甲基溴化铵溶液的体积比为1:2。4.根据权利要求1所述的基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于:所述的第一溶剂为水。5.根据权利要求1所述的基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于:所述的第二溶剂为去离子水。6.基于硅胶板层析的有机磷农药乐果残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤: S1:制备检测液，包括以下子步骤: SlOl:制备原溶液: (1)取钙黄绿素粉末，溶于第一溶剂中，配置成浓度不小于0.05mol/L的钙黄绿素溶液； (2)取十六烷基三甲基溴化铵粉末，溶于第二溶剂中，配置成浓度不小于0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液； S102:按照体积比为1:2的比例，将配置好的钙黄绿素溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，轻轻震荡得到检测液； S2:比色检测，包括以下子步骤: S201:采用薄层层析硅胶板，在其一端滴入待测目标捣碎液进行层析； S202:在层析完全后，在距离滴入点最远处以及无层析处分别滴入步骤SI所制得的检测液； S203:观察上述两处是否有明显的颜色差异，若有明显的颜色差异则有过量有机磷农药乐果残留，反之则没有过量有机磷农药乐果残留。
【文档编号】G01N21/64GK105866320SQ201610386110
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年6月3日
【发明人】李达, 郑庭辉
【申请人】四川大学