专利名称:一种层析用硅胶及其制法和用途的制作方法
本发明涉及一种层析用硅胶及其制法；本发明还涉及超氧化物歧化酶(SOD)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的提纯方法。
超氧化物歧化酶SOD(superoxide dismutase)是存在于备注血液中的一种酶，能歧化分解超氧自由基O2以保护机体，目前已作为系列化药物，用于防治癌、辐射病及抗衰老，一些高级护肤品中也加入SOD，SOD可由牛血、猪血和人血的红细胞提取。人绒毛促性腺激素，HCG(human chorionic gonadotrophin)是存在于孕妇尿中的一种激素，用于孕妇和某些肿瘤的诊断，不孕妇的治疗和避孕等。HCG可从孕妇尿中提取。
目前SOD和HCG的提取国内都采用DEAE纤维素(DEAE-Cellulose 32)，一般均用进口产品，价格昂贵，须回收反复使用，因此SOD和HCG的生产流程长，生产成本高。市售的层析硅胶都不能代替DEAE纤维素，用于SOD和HCG的分离提纯。
本发明的目的在于提供一种能替代DEAE纤维素用作SOD、HCG分离提纯吸附剂的，成本较低的层析用硅胶。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明的层析硅胶是在硅酸溶液中加入尿素和甲醛溶液，加碱在油状有机介质中悬浮聚合得到硅胶与聚脲醛的“共聚物”，冲洗除去有机介质后，灼烧除去聚脲醛，得到孔径为55-90的均匀球状颗粒硅胶。
本发明的层析硅胶的制法是在硅酸水溶液中，加入尿素，溶解后加入甲醛溶液，搅拌均匀，加入碱溶液，混匀后将此溶液立即倒入高速搅拌的、溶有非离子型表面活性剂的油状有机介质中，进行悬浮聚合，沉淀出球状颗粒硅胶，冲洗除去有机介质，低温烘干，高温灼烧，得到具有规则层状微晶结构的、孔径为55-90的层析用硅胶。
硅酸溶液与尿素和甲醛溶液用量的比例是150ml硅酸溶液(比重1.05-1.07)加入1-6克尿素，1.68-10.1ml 36％甲醛溶液。
悬浮聚合，优选的油状有机介质是石蜡油。所用的非离子型表面活性剂，可以是甘油单硬脂酸酯，span60，丙二醇油酸酯等。
沉淀出的球状颗粒硅胶，用水冲洗，除去有机介质，在50-80℃烘干，然后在600-700℃灼烧1.5-3小时。
本发明的层析用硅胶，可替代DEAE纤维素提纯SOD和HCG。即将本发明的层析用硅胶装柱，SOD或HCG经柱层析，由于杂蛋白被较强地吸附在层析硅胶上，而SOD或HCG先被洗脱下来达到纯化的目的，活力回收率分别达到90％以上和80％以上。
本发明的层析用硅胶制作比较简易，与DEAE纤维素相比成本比较低，因此用于提纯SOD或HCG可以不需要回收，减少了提纯SOD或HCG的工艺流程，降低了SOD和HCG的成本。
以下通过实施例进一步说明本发明。
实施例1.用水玻璃制取硅酸水溶液工业水玻璃加水，使其比重为1.07，每升此溶液加工业浓氨水30ml，搅拌5分钟以上，然后放置2天以上，这时水玻璃中的泥沙、重金属杂质等逐渐沉淀下来，倾泌出上层清液。
将阳离子交换树脂用水洗多次后，装入离入交换柱，用1.5M H2SO4淋洗，等流出液PH为2左右为止，此时树脂已转化为H+型，再用水洗至中性。
取上述净化过的水玻璃溶液流过H+型阳离子交换柱，等流出液的PH＜5时开始收集，直至PH＝3为止，即得硅酸水溶液，其比重为1.05-1.07。
实施例2.本发明的层析用硅胶的制取取实施例1的方法得到的硅酸水溶液150毫升，加入工业尿素2.85克，溶解后再加入36％甲醛水溶液4.8毫升，搅拌30分钟后，加入10％碳酸氢铵(化学纯)水溶液30毫升，混合后将此溶液迅速倒入高速搅拌的200毫升石蜡油中(石蜡油中溶有甘油单硬酯酸酯400毫克)，继续搅拌40分钟，此时沉淀出圆珠形小颗粒状的硅胶，滤出硅胶，洗去石蜡油，在60℃烘干，然后在600℃灼烧1.5小时，得到本发明的层析用硅胶，其孔径为60-70。
实施例3.本发明的层析用硅胶的制取取实施例1的方法得到硅酸水溶液150毫升，加入工业尿素5.7克，溶解后再加入36％甲醛水溶液9.6毫升，其它步骤同实施例2制得本发明的层析用硅胶，其孔径为55-65。
实施例4.本发明的层析用硅胶的制取取实施例1的方法得到的硅酸水溶液150毫升，加入工业尿素1.42克，溶解后再加入36％甲醛水溶液2.4毫升，其它步骤同实施例2，但石蜡油中含丙二醇油酸酯450毫克作为表面活性剂，制得本发明的层析用硅胶，其孔径为55-65。
实施例5.本发明的层析用硅胶的制取步骤用量同实施例2但最后在80℃烘干，700℃灼烧3小时，制得本发明的层析用硅胶，其孔径为70-90。
实施例6.用本发明的层析用硅胶纯化SOD将实施例2所得本发明的层析用硅胶用蒸馏水洗涤，再用磷酸盐缓冲液洗涤后装入5毫升玻璃层析管中。将透析后的粗SOD溶液通过层析柱，分部接收，每管约3毫升，第一管接收通过层析柱的SOD原液，然后用磷酸盐缓冲液淋洗，最后用浓度为0-200mmol/L的氯化钠溶液梯度洗脱，每管接收液分别取出适当体积以测活力和蛋白量，其结果见表1。
用实施例2-4制得的层析用硅胶提纯SOD，分部接收液的活力回收率和蛋白回收率见表2。
实施例7.用本发明的层析用硅胶纯化HCG将孕妇尿用尼龙网纱过滤，每升孕妇尿加入苯甲酸钠25-30克，完全溶解后加入冰醋酸约15毫升，当PH达4.5-4.0时，尿内蛋白质(包括HCG)附着在苯甲酸上一起沉淀析出，继续搅拌15分钟后静置2小时，抽滤、压干，将滤饼加到100-150毫升预冷的丙酮中，使苯甲酸溶解而蛋白质呈絮状沉淀，离心或过滤，用丙酮洗涤后干燥，一般每升孕妇尿得干品0.4-0.5克。
将此粗HCG用0.004M磷酸盐缓冲液溶解(PH＝7.0)，将本发明的层析用硅胶用水洗后装柱，装柱量为2克，用0.005M磷酸盐缓冲液淋洗达平衡后，将含HCG80000单位的HCG粗品溶液缓缓通过吸附柱，孕蛋白被吸附，HCD通过，流出液用截留分子量30000的超滤膜超滤，至体积为1/3，以除去磷酸盐并提高HCG浓度，用2倍体积-20℃无水乙醇沉淀，离心分出沉淀，真空干燥，得HCG纯品。用放射免疫测定法(radioimmunoassay RIA)分析，其结果列于表3。表1
粗SOD溶液3.00ml，蛋白总重量11.760mg，总活力92.40(1000U)，比活7.857(1000U/mg)表2层析硅胶纯化SOD时分部接收液的活力回收率和蛋白回收率
表3用层析硅胶纯化HCG的结果
权利要求
1.一种层析硅胶，具有规则的层状微晶结构，其特征是它由在硅酸溶液中加入尿素和甲醛溶液，加碱在油状有机介质中悬浮聚合，然后灼烧除去聚脲醛，得到的孔径为55-90的均匀球状颗粒硅胶的方法制备。
2.一种权利要求
1所述的层析用硅胶的制法，其特征是在硅酸水溶液中，加入尿素，溶解后加入甲醛溶液，搅拌均匀，加入碱溶液，将此溶液立即倒入高速搅拌的、溶有非离子型表面活性剂的油状有机介质中，进行悬浮聚合，沉淀出球状颗粒硅胶，冲洗除去有机介质，低温烘干，高温灼烧，得到具有规则层状微晶结构的、孔径为55-90的层析用硅胶。
3.根据权利要求
2所述的层析用硅胶的制法，其特征是有机介质是石蜡油，非离子型表面活性剂是甘油单硬脂酸酯，span60，或丙二醇油酸酯。
4.根据权利要求
2所述的层析用硅胶的制法，其特征是在50-80℃烘干，在600-700℃灼烧。
5.一种权利要求
1所述的层析用硅胶的用途，其特征是用于分离提纯氧化物歧化酶。
6.一种权利要求
1所述的层析用硅胶的用途，其特征是用于分离提纯人绒毛促性腺激素。
专利摘要
一种层析用硅胶，它是在硅酸溶液中加入尿素和甲醛溶液，加碱在油状有机介质中悬浮聚合得到硅胶与聚脲醛的“共聚物”，冲洗除去有机介质后，灼烧除去聚腺醛，得到孔径为55-90的均匀球状颗粒硅胶。此硅胶可替代DEAE纤维素提纯超氧化物歧化酶和人绒毛促性腺激素，有很好的提纯效果和活力回收率。
文档编号B01J20/10GKCN1079951SQ96116910
公开日2002年2月27日 申请日期1996年4月30日
发明者罗勤慧, 沈孟长 申请人:南京大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan