专利名称：蛇葡萄素在制备降血糖药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域。
文献Walter Karrerr，Birkhauser，Verlag，Bassel undstuttgart(1958)，P.652，NO1640公开了蛇葡萄素的结构式， 但是没有对蛇葡萄素的活性进行充分的研究。
本发明人令人惊奇地发现蛇葡萄素在医药领域具有广泛的用途。
本发明人令人惊奇地发现蛇葡萄素具有降血糖和降血脂作用，可以制备成降血糖药和降血脂药。蛇葡萄素可以直接用作药物，还可以与药学可接受载体或赋形剂混合制成药物组合物。其中优选含有2％至98％重量比的蛇葡萄素，加入药学可接受载体或赋形剂至100％重量比。还可以与现有技术中与蛇葡萄素相配伍的药物活性成分一起配制成药物组合物，其中所述相配伍的药物活性成分优选是黄酮类药物，所述黄酮类药物优选是杨梅素。组合物中黄酮类药物含量与蛇葡萄素含量重量比可以是2-80∶20-98。本发明组合物可以制备成片剂，颗粒剂，胶囊，外用药。优选活性成分对人施用的剂量是0.01-5克/千克体重/天，但是也可以根据具体情况而定，不局限于此范围。
片剂的普通配方可以是蛇葡萄素10％-90％重量比，乳糖90％-10％重量比，任选地加适量羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁，50％乙醇适量。冲剂的普通配方可以是蛇葡萄素5-100％重量比，(蔗糖+糊精)95-0％重量比，蔗糖∶糊精＝2∶1，任选地加适量其它助剂，总量为100％。胶囊的普通配方可以是蛇葡萄素10-100％重量比，淀粉90-0％重量比，任选地加适量其它助剂，总量为100％。但是本领域技术人员也可以根据需要用本领域公知的技术和载体配制成其它剂型。
蛇葡萄素可以从蛇葡萄属植物中提取，也可以用上述文献公开的方法制备。所述蛇葡萄属植物包括粤蛇葡萄，栋叶玉葡萄，显齿蛇葡萄，大叶蛇葡萄，白蔹，东北蛇葡萄和山葡萄。所述提取方法可以是通过各种溶剂(水和/或有机溶剂)煎煮葡萄科植物，煎煮一次或多次，煎煮液经浓缩冷却，静置过夜，检测沉淀与上清的药效成分，取具有活性的沉淀，经色谱分离后得到本发明蛇葡萄素物。煎煮所用的溶剂优选水，醇类，酯类，酮类，醚类和强极性有机溶剂，更优选低级链烷醇，低级脂肪酸酯，具有3-12个碳原子的酮和醚和/或水，最优选甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，正丁醇，异丁醇，仲丁醇，叔丁醇，乙酸乙酯，乙酸甲酯，甲酸乙酯，丙酮，甲基乙基酮，乙醚，甲基乙基醚，甲基叔丁基醚，二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺和/或水等等。色谱分离填料可以是聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附树脂，阳离子交换树脂，阴离子交换树脂，优选聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附树脂，更优选聚酰胺。
本发明的原理是通过建立药理筛选模型追踪蛇葡萄素的药效活性，找到其药用用途。试验证明蛇葡萄素具有降血糖和降血脂作用。
蛇葡萄素可以通过药物领域常规配制技术和载体，配制成药物组合物。本发明组合物可以制备成片剂，颗粒剂，胶囊，外用药。但是本领域技术人员也可以根据需要用本领域公知的技术和载体配制成其它剂型。
通过下面的实施例详细说明本发明。但是应该理解这些实施例只是说明本发明，而不是在任何方面限制本发明的范围。实施例1片剂蛇葡萄素25g，乳糖53g，羧甲基纤维素钠1.5g，硬脂酸镁0.5g，50％乙醇5ml上述组分在混合机中混合后压制成片。
上述组分混合均匀后，装入胶囊。
四氧嘧啶(Alloxan)Sigma公司；50％葡萄糖注射液盐城新曹制药厂。
SUPER GLUCOCARD II GT-1640型超级血糖测定仪日本京者第一科学株式会社生产GLUCOCARD血糖试纸日本京者第一科学株式会社生产。1.5.实验方法1.5.1.正常动物禁食5小时后，取小鼠测血糖。筛检空腹血糖在正常范围内的小鼠40只，按血糖水平随机分为四组，每组10只，分别为正常对照组和样品各剂量组(组间差不大于1.1mmol/L)》1.5.2.高血糖模型动物严格禁食24小时后，小鼠尾静脉注射四氧嘧啶50mg/kgBW，6天后禁食5小时，测血糖。筛检空腹血糖值＞10mmol/L的小鼠40办，按血糖水平随机分为四组，每组10只，分别为模型对照组和样品各剂量组(组间差不大于1.1mmol/L)。1.5.3.空腹血糖和糖耐量的测定按设计剂量对小鼠连续灌胃给受试物30天，然后禁食5小时，给予葡萄糖1.5g/kgBW灌胃，于0、0.5、2.0小时三时相分别测定血糖值。1.6.统计方法全部实验数据采用SPSS/PC软件包(单因素方差分析)在微机上处理。2.结果2.1.蛇葡萄素对正常小鼠体重的影响表1 各组正常小鼠的初始体重、中期体重、结束体重组别 初始体重 中期体重 结束体重动物数体重(g) 动物数 体重(g)动物数体重(g)正常对照 1023.4±1.010 30.5±1.5 1032.4±1.6受0.25g/kg 1023.6±1.110 31.2±1.2 1033.1±1.6试0.50g/kg 1023.7±1.210 30.9±1.6 1032.3±1.9物1.50g/kg 1023.5±1.210 31.1±1.2 1033.5±1.5F值0.1130.4780.369P值0.9520.6980.790注受试物各剂量组小鼠体重在各试验期和正常对照组比较，差异均无显著意义(方差分析，P＞0.05)2.2.蛇葡萄素对正常小鼠空腹血糖的影响表2 蛇葡萄素对正常小鼠空腹血糖的影响
注受试物各剂量组空腹血糖值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.3.蛇葡萄素对正常小鼠餐后血糖的影响表3 蛇葡萄素对正常小鼠餐后血糖的影响组别 动物数葡萄糖0h血糖值(mmol/L)(只) (g/kBW) 0.5h2h正常对照 101.5 4.6±0.7 10.4±1.2 5.5±0.7受0.25g/kg101.5 4.4±0.9 10.7±1.1 5.1±1.1试0.50g/kg101.5 4.5±0.8 10.6±1.7 5.1±1.0物1.50g/kg101.5 4.5±0.9 10.4±1.4 5.2±1.7F值 0.311 0.221 0.518P值 0.823 0.865 0.664注受试物各剂量组餐后血糖值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.4.蛇葡萄素对正常小鼠糖耐量的影响表4 蛇葡萄素对正常小鼠糖耐量的影响组别 动物数 血糖升高及降低幅度(mmol/L)(只) 0.5h-0h0.5h-2h正常对照 10 5.8±0.9 4.8±0.9受0.25g/kg10 6.4±0.5 5.6±1.1试0.50g/kg10 6.0±1.1 5.6±1.1物1.50g/kg10 6.0±1.3 5.4±1.2F值0.995 1.015P值0.406 0.393注受试物各剂量组糖耐量值和正常对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.5.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠体重的影响表5 各组高血糖模型小鼠的初始体重、中期体重、结束体重组别初始体重 中期体重 结束体重动物数体重(g)动物数 体重(g)动物数体重(g)正常对照1024.3±1.3 10 30.7±2.0 1031.2±1.9受0.25g/kg 1024.4±2.5 10 31.7±2.1 1032.5±2.3试0.50g/kg 1024.2±1.3 10 31.6±2.5 1032.2±2.8物1.50g/kg 1024.2±1.4 10 31.1±1.8 1031.5±1.5F值 0.273 0.5691.423P值 0.845 0.6280.250注受试物各剂量组各阶段体重和模型对照组比较，差异均无显著性意义(方差分析，P＞0.05)。2.6.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠空腹血糖的影响表6 蛇葡萄素对高血糖模型小鼠空腹血糖的影响
注与模型对照组比较，*P＞0.05(q检验)受试物低剂量组试验后空腹血糖值及前后空腹血糖差值与模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。2.7.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠餐后血糖的影响表7 蛇葡萄素对高血糖型小鼠餐后血糖的影响组别 动物数 葡萄糖0h 血糖值(mmol/L)(只)(g/kgBW) 0.5h2h正常对照 10 1.5 20.4±5.131.2±2.7 24.7±3.7受0.25g/kg 10 1.5 13.4±4.1* 26.9±4.6 16.8±6.9*试0.50g/kg 10 1.5 15.2±6.027.9±5.6 17.5±7.9*物1.50g/kg 10 1.5 17.6±6.128.6±4.8 20.7±7.8F值3.1322.415 3.689P值0.0430.079 0.032注受试物低剂组餐后0h血糖值和低中剂量组餐后2h血糖值与模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。
2.8.蛇葡萄素对引起的高血糖小鼠糖耐量的影响表8 蛇葡萄素对高血糖模型小鼠糖耐量的影响组别动物数血糖升高及降低幅度(mmol/L)(只)0.5h-0h0.5h-2h正常对照 10 10.8±3.2 6.5±2.9受0.25g/kg10 13.9±1.6 10.1±2.9试0.50g/kg10 12.0±3.3 9.1±3.9物1.50g/kg10 11.4±2.7 8.7±4.5F值 1.311 2.278P值 0.265 0.120注受试物各剂量组糖耐量值和模型对照组比较，差异均有显著(方差分析，P＞0.05)。
实验结果表明，蛇葡萄素具有调节血糖作用。实施例8蛇葡萄素降血脂的试验将动物随机分为4组，正常对照组、阳性对照组、模型对照组、提取液组。每组10只小鼠，一日一次，连续给药10天，正常对照组不给任何药。其余各组小鼠均给高脂乳剂0.5ml/只，形成实验性高血脂，于10天用药后禁食过夜，次日从小鼠眼眶取静脉血，按酶法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果表明，模型对照组血清TC、TG值明显升高，HDL-C值下降，与模型对照比较，蛇葡萄素组能明显降低血清TC、TG值，还使HDL-C略有升高，说明此提取物能抑制高脂乳剂引起的小鼠血脂升高，具有降脂作用。1.材料和方法1.1.受试物含有蛇葡萄素的原料(其中蛇葡萄素的含量为65％)，将受试物用蒸馏水配制成所需浓度的浑浊液供试验用。1.2.实验动物SPF级Wistar大鼠，体重170-190g，雌性，共55只(5只备用)。实验温度23-25℃，相对湿度65-70％。1.3.饲料1.3.1.普通基础饲料Wistar纯鼠料。1.4.剂量分组实验分为五个组，即正常对照组、高脂模型对照组和受试物低、中、高三个剂量组，剂量分别为0.5、1.0、1.5g/kg.bw，相当于推荐人体日摄入量3g/60kg.bw的10、20、30倍。1.5.实验方法大鼠适应性饲养3天后开始实验。取大鼠尾血，测定血清总胆固醇(TC0)、甘油三脂(TG0)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c0)基础值。根据TC0水平，将大鼠随机分成五组，每组10只动物，即低、中、高剂量组，正常对照组和高脂模型对照组。除正常对照组给予基础饲料外，其余各组均给予高脂饲料。三个受试物剂量组按1.0ml/100g.bw的容量经口灌胃给予，正常对照组和高脂模型对照组自由饮水进食。连续给予30天，于灌胃第30天检测TC、TG、HDL-C值。1.6.主要仪器与试剂SABA-18型全自动生化分析仪(意大利产)，标准质控血清及相应试剂盒均由上海复星长征医学科学有限公司生产。1.7.数据处理采用STATA统计软件进行统计分析2.结果2.1.蛇葡萄素对高脂模型动物体重的影响从表9可见，与模型对照组比较，低、中、高剂量组在第四周时大鼠体重均低于模型对照组，低、中、高剂量组与模型对照组比较差异有显著性(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。与正常对照组比较，低、中、高剂量组第四周体重均高于正常对照组，但经统计学分析，差异无显著性。2.2.蛇葡萄素对高血脂模型大鼠体重的影响由表9可知，和对照组相比，蛇葡萄素对大鼠体重无明显影响。
表9蛇葡萄素对高血脂模型大鼠体重的影响(g，x±s)剂量 动物数体重g/kg.bw (只)始重 第一周第二周第三周终重正常对照 10 181.4±2.8202.2±6.2219.6±4.7226.2±3.7230.7±4.0**模型对照 10 181.7±3.5208.7±2.6224.5±4.4231.4±3.5237.6±3.70.5 10 181.5±3.90 207.9±3.2220.79±3.2 226.9±3.4232.1±2.8**1.0 10 181.6±2.5208.6±3.1222.40±2.3 228.2±3.0233.9±2.2**1.5 10 184.2±2.3207.9±3.2221.5±3.1226.5±3.0232.0±3.0****与模型对照组比较P＜0.012.3.蛇葡萄素对大鼠总胆固醇含量的影响从表10可见，与模型对照组比较，实验结束时中、高剂量组总胆固醇含量在实验期间下降明显，经统计学分析，差异有显著性(p＜0.05、P＜0.01)。
表10 蛇葡萄素对大鼠总胆固醇含量的影响(mmol/L，x±s)
*与模型对照组比较P＜0.05，**与模型对照组比较P＜0.012.4.蛇葡萄素对大鼠甘油三酯含量的影响从表11可见，与模型对照组比较，试验结束时低、中、高剂量组甘油三酯含量下降明显，经统计学分析，差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)。
表11 蛇葡萄素对大鼠甘油三酯含量的影响(mmol/L，x±s)
*与模型对照组比较P＜0.05，**与模型对照组比较P＜0.012.5.蛇葡萄素对大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量的影响从表12可见，与模型对照组比较，低、中、高剂量组对高密度脂蛋白胆固醇有升高作用，经统计学分析，差异有显著性(P＜0.05)。
表12 蛇葡萄素对大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量的影响(mmol/L，x±s)
模型对照 101.12±0.18 -0.84±0.11 -0.5 101.10±0.07 0.6560.97±0.09* 0.0261.0 101.14±0.08 0.8590.94±0.07* 0.0411.5 101.14±0.07 0.7980.95±0.08* 0.016*与模型对照组比较P＜0.052.6.蛇葡萄素对大鼠血脂水平的影响本实验方法为高脂饲料与受试物同时给予，属预防性，故TG、TC下降及HDL-c上升值均与高脂模型对照组比较。由表13可见，中、高剂量组总胆固醇含量下降幅度分别为15.8％、20.2％，低、中、高剂量组甘油三酯含量下降幅度分别为15.9％、17.3％、18.0％，低、中、高剂量组高密度脂蛋白胆固醇含量升高值为4.48、4.98、4.35mg/dl。
表13 蛇葡萄素对大鼠血脂水平的影响剂量 动物数TC TG HDL-Cg/kg.bw(只) (％) (％) (mg/dl)0.51010.1 15.9 4.481.01015.8 17.3 4.981.51020.2 18.0 4.35判断标准 下降＞10％ 下降＞15％ 升高4mg/dl注HDL-c升高值(mg/dl)是mmol/L×38.7＝mg/dl换算结果实施例9蛇葡萄素增强免疫力功能的试验1.蛇葡萄素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响1.1实验目的观察蛇葡萄素对小鼠吞噬功能的影响。
1.2受试药物名称蛇葡萄素溶剂热双蒸水用量0.5ml/20g小鼠1.3对照样品联苯双酯；上海天平制药厂，沪卫药准字(1995)第3765号-0111.4动物小鼠，昆明种，雄性，19～21g。
鸡红细胞5％浓度1.5方法昆明种小鼠，随机分为5组，即对照组、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、联苯双酯150mg/kg，对照组给予生理盐水，给药组均口服给药，每日1次，共6次，末次给药同时腹腔注射0.5％水解乳蛋白1.5ml/只，24小时后腹腔注射5％鸡红细胞0.1ml，30分钟后断头放血，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔巨噬细胞37℃孵育半小时，离心，沉淀物涂片，染色，油镜下计数细胞，以下列公式计算，并与对照组比较。
1.6结果结果见表13，蛇葡萄素低、中、高剂量均能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞及增加吞噬指数，联苯双酯150mg/kg剂量组也能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。
表13.蛇葡萄素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(±SD)
**P＜0.01与模型对照组比较2.蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响2.1实验目的观察蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。
2.2受试药物名称蛇葡萄素溶剂热双蒸水用量0.5ml/20g小鼠2.3对照样品联苯双酯；上海天平制药厂，沪卫药准字(1995)第3765号-0112.4动物小鼠，C57BL/6，♂，19～21g。
2.5其他材料刀豆球蛋白(ConA)Sigma产品，50μg/ml浓度3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml培养基RPMI-1640，内含15％小牛血清、巯基乙醇、Hepes等2.6方法C57BL/6小鼠，随机分为5组，即正常对照组、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、联苯双酯150mg/kg，每天口服给药1次，连续7天，给药结束后，处死动物无菌条件下取脾，计数脾细胞，并调整细胞浓度为1×107/ml，在96孔细胞培养板上每孔加细胞悬液100μl，ConA 50μl，和培养液，各组均设三复管，37℃，5％CO2条件下培养48小时，加入3H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时，用多头细胞收集器收集细胞，在液闪仪上测CPM值，并与对照组比较，结果见表14。
2.7结果表14.蛇葡萄素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
*P＜0.05**P＜0.01与对照组比较结果表明，蛇葡萄素有明显的促进小鼠脾淋巴细胞增殖的作用，并以低剂量作用较其它两组强。
权利要求
1.一种降血糖的药物组合物，特征在于其含有降血糖有效量的蛇葡萄素和药学可接受赋形剂。
2.权利要求1的药物组合物，其中含有2％至98％重量比的蛇葡萄素。
3.权利要求1-2任一项的药物组合物，其中进一步含有与蛇葡萄素相配伍的药物活性成分。
4.权利要求3的药物组合物，其中所述相配伍的药物活性成分是黄酮类药物，组合物中黄酮类药物含量与蛇葡萄素含量重量比可以是2-80∶20-98。
5.权利要求4的药物组合物，其中所述黄酮类药物是杨梅素。
6.权利要求1-5的任一药物组合物在制备降血糖药物中的用途。
7.权利要求1-5的任一药物组合物在制备降血糖和降血脂药物中的用途。
8.蛇葡萄素在制备降血糖药物中的用途。
9.蛇葡萄素在制备降血糖和降血脂药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了一种降血糖的药物组合物，特征在于其含有降血糖有效量的蛇葡萄素和药学可接受赋形剂。所述组合物优选含有2％至98％重量比的蛇葡萄素。本发明还公开了所述组合物的制备方法，以及蛇葡萄素在制备降血糖药物中的用途。
文档编号A61K31/352GK1457774SQ0313805
公开日2003年11月26日 申请日期2003年5月30日 优先权日2003年5月30日
发明者任启生, 宋新荣 申请人:任启生, 宋新荣