专利名称：治疗子宫内膜异位症经期腹痛的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗子宫内膜异位症的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和各种制剂。
背景技术：
子宫内膜异位症，已为妇科临床工作中的常见病、多发病。近年来明显地看到其发病率大有上升趋势，同时也看到本病所导致的临床症状也呈现渐进的加重状态，加之本病又多发于生育年龄阶段，故除病痛之外，又有多方面的因素给广大妇女患者之身心以沉重的困扰，从而降低了他们的生活质量和健康状态。虽然子宫内膜异位的病灶分布不一，如宫骶韧带、子宫直肠陷凹及子宫肌腺症、盆腔腹膜部位和盆腔器官的表面，有时是多个部位同时受侵，其所表现的临床症状也有一定的差异，但所引起的经期腹痛、腰骶疼痛等症状基本上是一致的。
由于异位的子宫内膜同样受到周期性卵巢激素的影响，同样出现月经期的变化，如增生、出血、分泌液及组织碎片等均聚集在组织间隙之中，结聚不散，从而导致临床所见的主要症状之一的疼痛，且此疼痛症状多出现在经前1～2天，多以在经期第一天为最剧，一般在月经干净时此疼痛逐渐减轻或缓解，这是因为月经过后，异位之内膜逐渐萎缩之故。
痛经为常见和突出的临床症状，多为“继发”。除由于以上所提到的组织结聚所导致的疼痛之外，因为异位的子宫内膜同样产生前列腺素，刺激子宫过度收缩，使子宫内压增高，而引起子宫之血流量减少，局部缺血亦是导致疼痛产生之原因。
子宫内膜异位症所表现的痛经症状的轻重是不一致的。有的是“难以忍受”，必用药物止痛方能缓解，一般来说这种病痛是比较痛苦的。由于是周期性的发生，患者实有较为明显的恐惧情绪，参读《中华妇产科学》中引用Lukayat的统计数据，在618例诊断为子宫内膜异位症的患者中有27-40％无疼痛症状，但有73-60％的患者会出现痛经症状，由此可见，痛经乃是子宫内膜异位症的多发症状。此外在其他有关的书籍中也把疼痛列为子宫内膜异位症的主要临床症状。临床实践中也确是看到此点。
综观以上情况，研制开发治疗子宫内膜异位所引发的经期疼痛的药物是临床工作中所迫切需要的，也是药品流通市场所需要的。
虽然目前有关治疗“痛经”的药品已有很多，但定位在医治子宫内膜异位性痛经的专治品种，经过查新，截至目前尚属缺如，此乃本次发明目的。
由于子宫内膜组织的异位改变，所引起的经期或月经前后期的疼痛现象乃为本病的主要和常见的症状。其疼痛特点除发作时间上有其“规律性”之外，在临床症状的表现方面也是有其可循之处的。如疼痛部位多在下腹部及腰骶部、阴道、会阴、肛门等处，并常伴有胀坠难忍之感。当然有关疼痛程度是与异位之部位、范围有明显关系，在时间上则多以经期第一天为最剧。临床诊断认为本症之经期疼痛多归属于继发痛经之范畴(个别病例属原发)。参阅多篇有关子宫内膜异位引起的痛经症的临床总结，主要是以化瘀止痛为主治方法。
子宫内膜异位症的部位之多发性及其病理变化之特殊性，其所形成反复的凝滞和结聚状态，致使本症痛经症状为缠绵起伏和出现周期性的反复发作，在不断的困扰着广大的病患者。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种新的治疗子宫内膜异位症经期腹痛的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗子宫内膜异位症经期腹痛的中药组合物的方法；本发明的另一个目的在于公开一种新的治疗子宫内膜异位症经期腹痛中药组合物的制剂和质量控制方法。
本发明药物组合物的主要原料药组成及配比如下(按重量份)当归 50～1000重量份 茜草 50～600重量份川芎 10～500重量份三七 10～700重量份。
上述原料药配比优选如下(按重量份)当归 200～600重量份 茜草 80～300重量份川芎 50～300重量份三七 30～300重量份。
上述本发明主要原料药其中还可包含下述中药中的一种或几种
延胡索 50～800重量份 牡 蛎 50～1500重量份杜 仲 50～600重量份 夏枯草 50～1000重量份野菊花 50～1000重量份车前子 50～1000重量份；配比优选如下(按重量份)延胡索 100～400重量份牡 蛎 150～700重量份杜 仲 100～300重量份夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份车前子 150～500重量份本发明的组合物也可按如下配比组成当 归 200～600重量份茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份延胡索 100～400重量份牡 蛎 150～700重量份杜 仲 100～300重量份夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份车前子 150～500重量份本药物最佳组合物的制备方法当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加5～20倍量20～90％的有机溶媒回流提取1～5次，每次1～5小时，滤过，合并滤液，回收溶剂并浓缩至相对密度为1.10～1.38(30～80℃)的清膏。牡蛎先煎0.5～3小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮1～5次，每次0.5～3小时，加水量为药材量的5～20倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10～1.38(30～80℃)，加乙醇使醇浓度达30～90％，放置12～84小时，滤过，滤液回收溶媒并浓缩至相对密度为1.10～1.38(30～80℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.10～1.38(30～80℃)，减压干燥，粉碎成细粉，经过常规工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液、胶囊、颗粒剂、注射剂等。
上述制备方法所述的有机溶媒可以为乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯等中的任一种。
本发明组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。(下述质量控制方法所用本发明组合物制剂为颗粒剂，每克颗粒剂相当原药材2.4克；所用颗粒剂型不意味该质量控制方法在应用剂型范围上的限制，其它剂型应用该质量控制方法，用量上应与所用颗粒剂在原药材的量上相当。)鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种a.取本发明颗粒剂5g，加8-11∶0.3-0.7醋酸乙酯-甲酸20ml，超声处理20-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归、川芎各2g，分别同法制成对照药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7-10∶1-3∶1-2石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯—冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与当归、川芎对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b.取本发明颗粒剂2g，加甲醇20ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，再加盐酸1ml，置水浴中加热25-40分钟，立即冷却，用乙醚分1-3次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茜草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶1-3石油醚(60～90℃)-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以饱和氢氧化钠溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；c.取本发明颗粒剂10g，加入水饱和正丁醇25ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用氨试液提取1-3次，每次25ml，弃去，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以11-15∶6-9∶1-3氯仿-甲醇-水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；d.取本发明颗粒剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取1-3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以6-9∶3-5∶1-2正己烷—氯仿—甲醇为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；e.取本发明颗粒剂5g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚(30-60℃)浸泡1-3次，每次15ml，1-3分钟，倾去石油醚液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶8∶0.5环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25-35∶60-80甲醇-1％冰醋酸为流动相；检测波长320nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的本发明颗粒剂约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加5％碳酸钠溶液50ml，称定重量，超声处理25-40分钟，功率250W，频率20kHz，放置至室温，再称定重量，用5％碳酸钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，用盐酸1-3ml调节PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明每单位量含当归、川芎以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.85-1mg。
所述单位量是指相当24克原药材的成品药剂量。
本发明组合物各配方制剂均具有很好的化瘀止痛，除湿散结，促进机体的恢复，治疗子宫内膜异位症经期腹痛等作用，且无毒副作用。
下面实验例用于进一步说明本发明(内异痛经颗粒为本发明组合物颗粒剂)实验例1 药效学实验经实验本发明组合物制剂具有化瘀止痛，除湿散结，促进机体的恢复，治疗子宫内膜异位症经期腹痛等作用。
一、主要药效学试验研究受试药物内异痛经颗粒，由山西亚宝药业集团股份有限公司提供，批号020627，含8.5g生药/g药粉，临用前以蒸馏水配制至所需浓度。剂量设计临床用量为72g生药/d，按60kg计算，即1.2g生药/kg/d。按动物与人公斤体重等效剂量折算，小鼠用13.0g/kg/d(11倍)、大鼠用6.5g/kg/d(5.4倍)，家兔用3.8g/kg/d(3.2倍)，相当于临床等效剂量为中剂量，高剂量为中剂量的2倍，低剂量为中剂量的1/2倍。阳性对照药妇女痛经丸，某上市产品，批号1070671。临床用量为18.5g/d，按60kg计算，即0.308g/kg/d。按动物与人公斤体重等效剂量的2倍剂量折算，小鼠6.8g/kg/d(22倍)、大鼠用3.33g/kg/d(11倍)。宫血宁胶囊，某上市产品，批号010605，成人日用量0.78g/d，按平均体重60kg计算为0.013g/kg，大鼠用0.14g/kg、小鼠用0.286g/kg，妇宁片，某上市产品批号010801。达那唑胶囊，某上市产品，批号20020401。给药量和给药途径小鼠给药量为20ml/kg；大鼠给药量为10ml/kg，家兔给药量为2ml/kg，采用灌胃给药方式。动物昆明小鼠，体重20±2g；北京生物制品研究所提供，合格证号为京动许字1999第012号；SD大鼠，体重200±20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK(京)-02-0003；家兔，由北京学院路通利试验动物养殖场提供，合格证号第024总069号。试剂己烯雌酚，上海第九制药厂生产，批号010102；缩宫素注射液，上海第一生化药业公司、上海生物化学制药厂生产，批号020161；甲醛，北京化工厂生产，批号840601。戊巴比妥钠，佛山市化工实验厂生产，批号860901；材料及仪器消毒手术器械；ZS-3型半自动生化分析仪，上海中生生物工程高技术公司出品。电子天平，瑞士制造；MP-100多导生理记录系统，美国；恒温干燥箱，北京朝阳区来广营医疗器械厂；组织天平，型号BS200S-WE1，北京赛多利斯天平有限公司。R-20型血液粘度测试仪，北京中勒世帝公司生产。
试验方法和结果1. 内异痛经颗粒对动物子宫内膜异位症和大鼠离体子宫平滑肌的影响1.1 内异痛经颗粒对家兔子宫内膜异位症的影响1.1.1 试验方法1.1.1.1 手术用3％戊巴比妥钠按1ml/kg于雌性家兔耳缘静脉注射麻醉(48只)，腹部皮肤常规消毒，沿腹中线剪开腹壁和腹膜(切口大约3cm)，找到右侧子宫，在离卵巢1cm处，分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织后，两头分别用手术线结扎，剪取中间约2cm一段子宫体置于盛有生理盐水的培养皿中，断端吻合，剪开子宫暴露子宫内膜，剪成5mm×5mm三块，缝在左侧子宫靠卵巢附近，左侧子宫正中，及子宫角附近。缝合线为无损伤6-0锦纶单丝线，正常对照组(8只)做开腹、缝合假手术。术后，肌肉注射庆大霉素0.5ml/只，连续4天。
1.1.1.2 分组及给药术后将40只子宫内膜异位症家兔随机分成模型组，阳性对照药组(达哪唑20mg/kg)，内异痛经颗粒大剂量组(7.6g生药/kg)、中剂量组(3.8g生药/kg)、小剂量组(1.9g生药/kg)5组。正常对照组与模型组给予相同体积的蒸馏水，其余各组按2ml/kg给相应药物，连续1个月。
1.1.1.3 解剖末次给药后24小时，用3％戊巴比妥钠按1ml/kg戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉，腹主动脉抽血检测血液流变学(东直门医院活血化瘀组测定)，子宫用10％甲醛固定作病理组织学检查。
1.1.1.4 病理组织学判断标准观察指标定量采用假腺体记数法，用t检验进行统计学处理；半定量采用假腺体形成和炎症细胞浸润及出血情况综合判断，用秩和检验进行统计学处理。
半定量标准“-”子宫内膜正常，腺体大、小均匀，记分为0；“+”子宫内膜轻度假腺体形成，少量炎症细胞浸润，记分为1；“++”子宫内膜假腺体形成，炎症细胞浸润，并有少量出血，记分为2；“+++”大量的假腺体形成，炎症细胞浸润明显增多，间质有出血、肿胀，记分为3。
1.1.2 试验结果1.1.2.1 内异痛经颗粒对家兔子宫内膜异位症的影响(血液流变学检查)表1结果可见，模型对照组全血粘度与正常对照组相比显著升高，所有给药组均有不同程度的降低，内异痛经颗粒高剂量组有显著的抑制作用，可降低全血粘稠度。
表1 内异痛经颗粒对家兔子宫内膜异位症的影响(血液流变学检查)剂量动物数 全血粘度(mpa.s) (X±SD)组别(g/kg)5 10 38150模型对照 -- 814.67±3.219.64±1.74 5.09±0.61 3.29±0.33正常对照 -- 89.07±1.73** 6.26±1.09** 3.62±0.54** 2.52±0.35**达哪唑 0.02 79.49±0.96** 6.59±0.45** 3.86±0.12** 2.72±0.13**内异痛经 7.689.57±1.28*6.65±0.80** 3.89±0.43** 2.75±0.32*3.8712.92±2.168.62±1.14 4.66±0.46 3.10±0.441.9811.97±2.848.03±1.59 4.41±0.63*2.96±0.41注与模型对照组相比*P＜0.05 **P＜0.01。
1.1.2.2 内异痛经颗粒对家兔子宫内膜异位症的影响(病理组织学观察)病理检查表明(表2、附病理报告1和彩色照片1)，模型组异位子宫内膜有囊肿形成，腺上皮呈萎缩状态，呈假腺体样改变，内异痛经颗粒高、中剂量组异位内膜腺体明显减少，并可不同程度的减轻异位子宫内膜炎症细胞浸润、出血和肿胀。
表2内异痛经颗粒对家兔子宫内膜异位症的影响(病理组织学观察)剂量 鼠数假腺体 病理综合判断 秩和检验组别(g/kg) (只) (数) (积分值) (值)模型对照 --89.50±6.65 2.37±0.52达哪唑0.02 81.13±1.13** 1.25±0.89** 46.0*内异痛经 7.6 72.75±4.59*1.37±1.06* 49.0*3.8 83.25±4.37*1.50±0.76* 47.5*1.9 75.63±5.37 1.75±0.8969.5注与对照组相比 *P＜0.05 **P＜0.011.2 内异痛经颗粒对大鼠子宫内膜异位症的影响1.2.1 试验方法1.2.1.1 手术 手术前连续2天皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，手术时用3％戊巴比妥钠1ml/kg腹腔注射麻醉，腹部皮肤常规消毒，沿腹中线剪开腹壁和腹膜(切口2-3cm)，找右侧子宫，在离卵巢1cm处，分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织后，剪取中间约1.5cm一段子宫体置于盛有生理盐水的培养皿中，断端吻合，剪开子宫暴露子宫内膜，剪成4mm×4mm三块，缝在左侧子宫卵巢附近，子宫正中，子宫角附近。缝合线为无损伤6-0锦纶单丝线。对照组开腹、缝合作假手术。手术后，肌肉注射庆大霉素0.2ml/只，连续4天。
1.2.1.2 分组及给药 手术后1个月后，随机抽出4只，观察移植的子宫内膜生长情况，移植子宫内膜成活后，将子宫内膜异位症动物随机分成模型组、中药阳性组(妇女痛经丸3.33g/kg)，西药阳性组(妇宁片0.72mg/kg)，内异痛经颗粒高剂量组(13g生药/kg)、中剂量组(6.5g生药/kg)、低剂量组(3.25g生药/kg)六组，对照组(假手术组)。给药各组按10ml/kg给相应药物，对照组与模型组给相同体积的蒸馏水，连续1个月。解剖和病理观察同上，血液流变学由望京医院药理室测定。
1.2.2 试验结果1.2.2.1 内异痛经颗粒对大鼠子宫内膜异位症的影响(血液流变学检查)
表3 内异痛经颗粒对大鼠子宫内膜异位症的影响(血液流变学检查)剂量 动物 全血粘度(mpa.s) (X±SD)组别(g/kg)数高切 中切1 中切2 低切模型对照 -- 10 4.00±0.46 4.48±0.625.74±1.318.14±2.91正常对照 -- 10 3.27±0.41** 3.41±0.54** 3.77±0.86** 4.39±1.47**妇宁片0.72mg 10 3.77±0.20 4.13±0.305.09±0.716.84±1.60痛经丸3.33 10 3.65±0.25*4.00±0.32* 4.75±0.60* 6.03±1.01内异痛经 13.0 10 3.54±0.37*3.75±0.45** 4.30±0.65** 5.25±1.02*6.5 10 3.57±0.39*3.87±0.41* 4.62±0.57* 5.98±1.05*3.25 10 3.70±0.43 4.11±0.535.17±0.857.12±1.55注与模型对照组相比 *P＜0.05 **P＜0.01。
表3结果可见，模型对照组全血粘度与正常对照组相比显著升高，所有给药组与模型对照组相比均有不同程度的降低，内异痛经颗粒高、中剂量组均有明显的降低作用。
1.2.2.2 内异痛经颗粒对大鼠子宫内膜异位症的影响(病理组织学观察)病理检查表明(表4、附照片2)，模型组大鼠异位子宫内膜病灶组织中有假腺体样形成，子宫内膜的间质有纤维组织增生。内异痛经颗粒异位内膜腺体、间质纤维增生明显减少，可不同程度的抑制异位子宫内膜的病理改变。
表4 内异痛经颗粒对大鼠子宫内膜异位症的影响(病理组织学观察)剂量鼠数假腺体 病理综合判断 秩和检验组别(g/kg) (只) (数) (积分值) (P值)模型对照 -- 10 4.60±3.86 2.00±0.67妇宁片 0.72 10 1.70±1.34*0.90±0.74**70.0**痛经丸 3.33 10 1.50±0.85*1.60±0.70 88.013.0 10 0.80±0.92*1.00±0.82**72.0*内异痛经 6.510 1.10±0.57*1.10±0.57**72.0*3.25 10 2.50±2.68 1.00±0.68**71.0**注与对照组相比 *P＜0.05 **P＜0.012 内异痛经颗粒对正常大鼠及宫缩素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响2.1 内异痛经颗粒对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响[3]2.1.1 试验方法2.1.1.1 药物制备
内异痛经颗粒高剂量(1.300g生药/ml)3.04g药粉加蒸馏水至20ml离心，调pH为中性；中、低剂量对倍稀释。
阳性药妇宁片(0.0719mg/ml)1mg妇宁片加蒸馏水至14ml离心，调pH为中性。
洛氏液的配制称取氯化钠22.5g；氯化钾1.05g；碳酸氢钠0.5g；氯化钙0.6g；葡萄糖2.5g(临用时加)加蒸馏水至2500ml2.1.1.2 试验前大鼠雌激素处理SD雌性未孕大鼠，体重200-220g，实验前两天，皮下注射己烯雌酚(0.1ng/kg)促情，待用。
2.1.1.3 试验步骤实验时用颈椎脱臼法处死大鼠，剖腹取出子宫，立即置于盛有洛氏液的平皿中，轻柔剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织，取一侧子宫角长约2cm，一端固定于浴槽中，另一端与张力传感器相连，并使恒温水浴保持工作，使温度在37±0.5℃，通混合气(氧气95％+二氧化碳5％)(61-80个泡/min)。使子宫保持1g的张力，用MP-100多导生理记录系统记录子宫收缩情况，待子宫自发收缩稳定后，记录一段正常收缩曲线，加入药物，观察记录给药后20min内子宫平滑肌收缩幅度、频率和活力的变化。观察结束后，用新鲜营养液冲洗5次，待子宫稳定，记录一段正常收缩曲线后，再加入另一种药物。通过MP-100数据采集器，连续记录各参数，保存于计算机；实验结束后，用该系统专用程序对张力、频率、活力进行实时分析整理，其中活力＝张力×频率。
2.1.2 试验结果表5 内异痛经颗粒对正常大鼠子宫平滑肌收缩的影响(5min)剂量 样本 张力减少值 频率减少值活力减少值组别(g/ml) (个) (mm) (次/10min) (单位)对照组-- 100.02±0.110.1±0.32 0.66±1.93妇宁片0.072mg100.14±0.250.5±0.85 2.2±3.207内异痛经 1.3100.54±0.54** 0.95±0.89* 4.31±3.51*0.65 100.44±0.37** 1.1±0.876** 5.01±3.58**0.325 100.4±0.28** 0.7±0.82*4.52±4.71*与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.01
表6 内异痛经颗粒对正常大鼠子宫平滑肌收缩的影响(10min)剂量样本 张力减少值 频率减少值活力减少值组别(g/ml) (个) (mm) (次/10min)(单位)对照组 -- 100.05±0.13 0.1±0.32 0.77±1.71妇宁片 0.072mg 100.28±0.26* 0.75±0.95 3.59±3.39*内异痛经1.3 100.72±0.56** 1.1±1.13* 5.33±3.41**0.65100.57±0.43** 1.35±0.82** 5.98±3.21**0.325 100.56±0.36** 0.75±0.79*5.25±4.38**与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.01表7 内异痛经颗粒对正常大鼠子宫平滑肌收缩的影响(20min)剂量样本 张力减少值 频率减少值 活力减少值组别(g/ml) (个) (mm) (次/10min)(单位)对照组--100.06±0.06 0±00.31±0.3妇宁片0.072mg 100.62±0.38** 1.3±0.95** 6.33±3.94**内异痛经 1.3 101.06±0.65** 1.7±1.23** 7.82±4.56**0.65 100.73±0.45** 1.55±0.86**7.02±3.32**0.325 100.65±0.41** 1.2±0.98** 6.46±4.44**与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.01由表5-7结果可见内异痛经颗粒三个剂量组对正常大鼠子宫平滑肌张力、频率和活力在所观察时间内均有明显的抑制作用，张力减少、频率减慢、活力降低。
2.2 内异痛经颗粒对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响2.2.1 实验方法2.2.1.1 药物配制同前。
2.2.1.2 试验前大鼠雌激素处理同前。
2.2.1.3 试验步骤实验时用颈椎脱臼法处死大鼠，剖腹取出子宫，立即置于盛宫素0.6ml(0.1u/ml)，并记录子宫活动，缩宫素作用明显时加入药物，观察给药后药物对缩宫素所致子宫收缩的影响。观察结束后，用洛氏液冲洗5次，待子宫稳定，记录一段正常收缩曲线后，再加入另一种药物。
2.2.2 实验结果由表8-10结果可见内异痛经颗粒三个剂量组对缩宫素所致大鼠子宫平滑肌张力增加、频率加快和活力增强有明显的抑制作用，在所观察的时间内张力减少、频率减慢、活力降低。
表8 内异痛经颗粒对缩宫素致大鼠子宫平滑肌收缩增强的影响(5min)剂量 张力减少值 频率减少值 活力减少值组别样本(个)(g/ml)(mm) (次/10min) (单位)对照组 -- 10 0.02±0.03 0±0 0.11±0.19妇宁片 0.072mg10 0.43±0.40* 0.8±0.79**5.45±4.83**内异痛经1.310 1.7±0.47** 1.1±0.84**9.09±3.76**0.65 10 1.32±0.91** 0.9±1.10* 9.24±4.14**0.325 10 1.16±0.5** 1.05±0.69** 10.4±3.49**与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.01表9 内异痛经颗粒对缩宫素致大鼠子宫平滑肌收缩增强的影响(10min)剂量 样本 张力减少值频率减少值 活力减少值组别(g/ml) (个) (mm) (次/10min)(单位)对照组 -- 10 0.06±0.060±00.36±0.44妇宁片 0.072mg10 0.67±0.36** 1.35±0.75**8.71±4.79**内异痛经 1.310 2.01±0.49** 1.75±0.92**11.3±5.24**0.65 10 1.66±1.15** 1.35±1.16**11.6±5.96**0.325 10 1.41±0.57** 1.45±1.0** 12.7±5.05**与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.01表10 内异痛经颗粒对缩宫素致大鼠子宫平滑肌收缩增强的影响(20min)剂量张力减少值 频率减少值 活力减少值组别 样本(个)(g/ml) (mm)(次/10min) (单位)对照组 -- 10 0.08±0.06 0±0 0.49±0.35妇宁片 0.072mg10 0.93±0.36**1.8±0.72** 11.2±4.57**内异痛经 1.310 2.33±0.61**3.4±1.97** 14±7.55**0.65 10 1.94±1.34**2.1±1.24** 14±6.69**0.325 10 1.8±0.82** 2±0.91**15.9±6.00**与对照组相比 *p＜0.05 **p＜0.013 抗炎作用3.1 内异痛经颗粒对大鼠棉球肉芽肿形成的影响[4]3.1.1 试验方法3.1.1.1 动物与手术取230-260g SD雌性大鼠50只，腹腔注射3％戊巴比妥钠0.ml/kg麻醉，常规消毒，沿腹中线切口，用止血钳将20mg的高压灭菌棉球，从切口处植入两侧腹股沟皮下，随即缝合皮肤。
3.1.1.2 实验分组及给药将术后大鼠按体重随机分为5组，模型对照组，阳性药妇女痛经丸组，内异痛经颗粒高、中、低剂量组。模型对照组每天按10ml/kg给蒸馏水，其余各组给相应药物，连续7天，第8天打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放烘箱37℃24小时，烘干，称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量，比较各组肉芽肿重量。
3.1.2 试验结果 内异痛经颗粒三个剂量组均可明显抑制大鼠棉球肉芽组织形成，对胸腺、脾等脏器指数无明显影响(表11)。
表11 内异痛经颗粒对大鼠棉球肉芽肿形成的影响剂量 鼠数 芽组织 胸腺指数脾指数组别(g/kg) (只) (mg) (g/100g) (g/mg)对照组-- 1075.35±20.85 0.14±0.03 0.26±0.05痛经丸3.31055.20±16.81**0.16±0.03 0.27±0.05内异痛经 13.0 1053.85±17.00**0.15±0.03 0.24±0.026.51055.55±17.22**0.15±0.04 0.26±0.043.25 1060.25±22.83* 0.16±0.04 0.26±0.04注与对照组相比 *p＜0.05，**p＜0.013.2 内异痛经颗粒对大鼠子宫炎症的影响3.2.1 试验方法3.2.1.1 动物和手术取230-260g SD雌性大鼠50只，腹腔注射3％戊巴比妥钠0.1ml/kg进行麻醉，常规消毒后，于腹正中线切口，暴露子宫，沿右侧子宫角上1cm处做一横切口，将一塑料管(管径2mm，长0.5cm，重10mg，酒精消毒)放置于子宫内，与子宫切口缝合固定，以防脱落。伤口滴入青霉素0.1mg(溶于注射用水0.2m1中)，以防感染，缝合皮肤。
3.2.1.2 试验分组及给药将术后大鼠分为5组，模型对照组，阳性药妇女痛经丸组，内异痛经颗粒高、中、低剂量组。模型对照组每天按10ml/kg给蒸馏水，其余各组给相应药物，连续7天，第8天处死动物，取出两侧子宫，组织天平称重，每鼠的右侧子宫减去左侧子宫重量，即为炎症肿胀程度，计算各组肿胀度之均值与标准差，按公式求出给药组的肿胀抑制率，以t检验进行统计。
3.2.2 试验结果 内异痛经颗粒高、中剂量可抑制子宫炎症模型大鼠子宫肿胀，具有抗子宫炎症的作用(表12)。
表12 内异痛经颗粒对子宫炎症模型大鼠子宫的影响组别 剂量(g/kg) 鼠数(只)肿胀度(g)肿胀率(％) 抑制率(％)对照组 -- 10 0.30±0.14 107.3 --妇女痛经丸 3.3 10 0.16±0.07* 48.99 54.35内异痛经颗粒13.0 10 0.14±0.07** 41.75 61.106.5 10 0.16±0.10* 46.22 56.933.25 10 0.22±0.10 64.81 39.61注与对照组相比 *p＜0.05，**p＜0.014 镇痛作用4.1 内异痛经颗粒对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响4.1.1 试验方法选取健康雌性小鼠50只，体重为18-20g，分为5组，每组10只，对照组，阳性药妇女痛经丸组，内异痛经颗粒高、中、低剂量组。每天灌胃1次，给药组按20ml/kg给药，对照组给予相同体积的蒸馏水，连续4d，末次给药1.0h后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g，5分钟后观察记录小鼠15分钟内扭体次数，以t检验进行统计学处理，并计算扭体抑制率。
4.1.2 实验结果 由表13可见，内异痛经颗粒所试剂量均明显减少醋酸致小鼠疼痛的扭体次数，具有较强的镇痛作用。
表13 内异痛经颗粒对醋酸致小鼠疼痛的影响鼠数 抑制率组别 剂量(g/kg) 扭体数(次)(只)(％)对照组 -- 1029.5±9.57妇女痛经丸 6.81018.8±10.97* 36.3内异痛经颗粒26.0 1017.0±8.12** 42.413.0 1015.3±10.97**48.16.51016.0±11.3* 45.8注与对照组相比 *p＜0.05，**p＜0.014.2 内异痛经颗粒对缩宫素所致小鼠疼痛反应的影响4.2.1 试验方法选取健康雌性小鼠50只，体重18-20g，随机分为5组，每组10只，每天灌胃1次，对照组给予相同体积的蒸馏水，连续4d，末次给药1h后腹腔注射缩宫素0.2u/只，观察记录各小鼠30min内扭体次数，比较各组的差异性。
表14 内异痛经颗粒对缩宫素致小鼠疼痛的影响剂量鼠数 扭体数 抑制率组别(g/kg)(只) (次) (％)对照组 -- 10 10.3±7.5妇女痛经丸 6.8 10 4.3±4.3*58.3内异痛经颗粒26.0 10 2.7±3.5*73.813.0 10 3.4±4.3*67.06.5 10 5.1±4.7 50.5注与对照组相比 *p＜0.05，**p＜0.014.2.2 试验结果 由表14可见，内异痛经颗粒所试剂量均明显减少缩宫素致小鼠疼痛的扭体发生数，高、中剂量与对照组相比有显著性差异。
5. 内异痛经颗粒对小鼠出、凝血时间的影响5.1 内异痛经颗粒对小鼠凝血时间的影响5.1.1 试验方法取体重18-22g健康雌性小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，空白对照组，阳性对照组宫血宁胶囊，内异痛经颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组，每天灌胃给药1次，给药组按20ml/kg给相应药物，对照组给予同体积的蒸馏水，连续7d，末次给药1h后，用毛细管插入鼠内眦静脉丛，采血两滴于玻片上，每隔10s用针头挑一次，计算从采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间，所得数据与对照组进行t检验。
5.1.2 试验结果 内异痛经颗粒对小鼠凝血时间无明显影响(表15)。
表15 内异痛经颗粒对小鼠凝血时间的影响组别 剂量(g/kg)鼠数(只) 凝血时间(秒)抑制率(％)对照组-- 10 155.0±73.7宫血宁0.28610 82.0±51.4* 47.1内异痛经 26.0 10 123±36.5320.613.0 10 137.0±84.1 11.66.5 10 132.0± 102.9 14.8注与对照组相比 *p＜0.05，5.2 内异痛经颗粒对小鼠出血时间的影响[9]5.2.1 试验方法动物分组、给药等同小鼠凝血时间实验，末次给药0.5h，分别以利剪将小鼠尾尖0.5cm处剪断，血液自行流出后计时，每隔10s用滤纸吸去血滴一次，直至血液自行停止，计算出血时间，所得数据与对照组进行t检验。
5.2.2 试验结果 内异痛经颗粒对小鼠出血时间无明显影响(表16)。
表16 内异痛经颗粒对小鼠出血时间的影响组别 剂量(g/kg) 鼠数(只) 出血时间(秒) 抑制率(％)对照组 -- 10 135.0±97.7宫血宁 0.286 10 135.0±75.7 0内异痛经 26.0 10 102.0±90.6 24.413.0 10 73.0±36.8 45.96.510 122.0±66.3 9.56 内异痛经颗粒对幼鼠生殖器发育的影响[10]6.1 试验方法将12-14g雌性幼小鼠随机分为5组，每组10只，空白对照组，阳性对照组、雌二醇组(每周给药2次，肌肉注射)、内异痛经颗粒高、中、低剂量组，每天灌胃给药1次，空白对照组给同体积蒸馏水，连续14天，第15天将动物称重，处死，摘取子宫和卵巢，剥离净其周围的结缔组织，用组织天平称重，计算脏器指数。
表17 内异痛经颗粒对幼鼠生殖器官发育的影响组别 剂量(g/kg)鼠数(只) 子宫指数(mg/100g)卵巢指数(mg/100g)对照组-- 1052.53±13.16 31.17±17.83雌二醇0.0015 1070.81±16.45* 51.60±19.16*内异痛经 26.0 1056.65±16.62 36.98±12.4213.0 1051.33±12.99 34.03±12.636.5 1052.52±9.82 33.50±12.006.2 试验结果内异痛经颗粒对小鼠子宫和卵巢重量无明显影响(表17)小结通过以上药理实验，表明内异痛经颗具有以下药理作用1.对子宫内膜异位症的影响 内异痛经颗粒不同程度的降低大鼠子宫内膜异位症模型家兔和大鼠的全血粘度，抑制血清雌二醇增高，病理检查结果表明，高、中剂量组明显抑制子宫假腺体生成。2.对大鼠子宫平滑肌的影响 内异痛经颗粒对正常大鼠子宫平滑肌和缩宫素所致大鼠子宫平滑肌收缩增强均有不同程度的抑制作用。3.抗炎作用内异痛经颗粒可抑制子宫炎症模型大鼠子宫内肉芽组织增生，对大鼠棉球肉芽组织生成亦有明显的抑制作用。4.镇痛作用 对乙酸及缩宫素所致小鼠扭体发生数均有明显的抑制作用，有较强的镇痛作用。5.内异痛经颗粒高剂量组小鼠出、凝血时间无明显影响。6.内异痛经颗粒对幼鼠生殖器官发育无明显影响。
以上结果表明内异痛经颗粒对动物子宫内膜异位症有明显的治疗作用，可抑制子宫平滑肌收缩，并有明显的抗炎和镇痛作用，对小鼠出、凝血时间和幼鼠生殖器官发育无明显影响。
实验例2 毒性研究1、急性毒性试验内异痛经颗粒以动物能耐受的最大浓度、最大体积的药量一日内连续三次灌胃给予小鼠，共20只，雌性，最大给药量为557.8g生药/kg，相当于临床用量的464.8倍。给药后即刻观察动物反应，并连续观察7天。未发生死亡，动物体重均增加，肉眼观察未见明显毒性反应。为临床安全用药提供参考。2、长期毒性试验大鼠分别灌胃给予内异痛经颗粒60.0、30.0、15.0g生药/kg/d，(相当于人临床用药剂量的50.0、25.0和12.5倍)连续26周，停药后观察30天。对动物体重增长、进食量等一般情况无明显影响，外周血象和肝、肾功能等十项生化指标均在正常范围内波动，对重要脏器的重量、肉眼检查均未见明显变化，经组织病理学观察亦未见有由于药物所引起的明显病理形态学改变。
实验例3 临床试验病例来源本组观察病例44例，均来源于北京中医医院妇科门诊。其中33例为观察组，中药对照组(痛经宝颗粒)11例。
两组年龄比较治疗组年龄为20-46岁，平均年龄为33.42±4.17岁。
对照组年龄为20-44岁，平均年龄为33.18±7.04岁。
两组病程比较治疗组病程1-20年，平均7.82±3.43年。
对照组病程1-16年，平均5.83±2.82年。
两组病情期别比较治疗组I期患者13例，II期患者13例，III期患者4例，IV期患者3例。
对照组I期患者4例，II期患者4例，III期患者2例，IV期患者1例。
治疗方法1、治疗组内异痛经颗粒。2、对照组痛经定颗粒，每次4粒，每日4次。
服药方法以上两组药均为经前10天服药，连服14天。一个月经周期为一个疗程，连续服用3个疗程。(并可反复治疗)统计学方法计量资料采用t检验，计算资料采用X2检验。等级资料采用Kidit分析。
结果两组疗效比较，见表一表1两组子宫内膜异位组别 总例数 痊愈例％ 显效例％ 有效例％无效例％ 愈显率％ 总有效率％治疗组 33 36.3(12/33) 42.4(14/33)15.1(5/33) 6.0(2/33)78.7 93.9对照组 11 18.11(2/11) 27.2(3/11) 9.0(1/11) 43.3(5/11) 45.4 34.3注本表中结果乃为包括多种临床症状及B超结果等项目。
统计学结果两组痊愈率比较X2＝34282 P＜0.05两组愈显率比较X2＝8.4068 P＜0.01表2治疗前后痛经症状改善情况组别 例数疗前评分 疗后评分差值治疗组3311.14±4.404.13±1.287.07±3.22对照组117.60±2.18 4.90±3.142.73±0.97统计学处理结果治疗组织疗前后评分比较P＜0.01对照组织疗前后评分比较P＜0.01治疗组与对照组评分改变的差之比P＜0.01表3 两组治疗前后B超监测结果比较→组别 例数 疗前 疗后→ 缩小值治疗 154.17±1.02 2.92±0.811.32±0.05对照组7 3.65±0.86 3.27±0.830.34±0.27妊娠率治疗组伴有不孕的14例，妊娠5例对照组伴有不孕的5例，无一例妊娠安全性检查33例患者停药后做肝、肾功能及尿便检查均无异常。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1颗粒剂当 归260g 茜 草120g川 芎80g 三 七50g延胡索230g
牡 蛎350g杜 仲200g夏枯草230g野菊花300g车前子280g制法以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃)，减压干燥，粉碎成细粉，加入阿司帕坦10g，糊精适量，混匀，用85％乙醇制粒，干燥，制成颗粒1000g，即得。
功能与主治化瘀止痛，除湿散结。治疗子宫内膜异位症经期腹痛等的作用。用法与用量开水冲服，一次1袋，一日3次。
实施例2胶囊剂当 归400g茜 草200g川 芎200g三 七200g延胡索300g牡 蛎500g杜 仲200g夏枯草400g野菊花400g车前子400g制法以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃)，减压干燥，粉碎成细粉，经常规工艺制成胶囊剂300粒，一次3粒，一日3次。
实施例3片剂当 归250g茜 草100g川 芎150g三 七100g延胡索150g牡 蛎300g杜 仲100g夏枯草200g野菊花250g车前子250g制法以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃)，减压干燥，粉碎成细粉，经常规工艺制成片剂300片，一次3片，一日3次。
实施例4颗粒剂当 归260g茜 草120g川 芎80g三 七50g延胡索230g参照实施例1的工艺制成颗粒剂。
实施例5胶囊剂当 归260g茜 草120g川 芎80g三 七50g延胡索230g牡 蛎350g杜 仲200g夏枯草230g参照实施例2的工艺制成胶囊剂。
实施例6颗粒剂当 归260g茜 草120g川 芎80g三 七50g野菊花300g车前子280g参照实施例1的工艺制成颗粒剂。
实施例7片剂当 归260g茜 草120g川 芎80g三 七50g野菊花300g车前子280g杜 仲200g参照实施例3的工艺制成颗粒剂。
实施例8颗粒剂当 归260g茜 草120g川 芎80g三 七50g 延胡索230g野菊花300g车前子280g参照实施例1的工艺制成颗粒剂。
实施例9胶囊剂当 归450g茜 草250g川 芎150g 三 七240g 延胡索340g牡 蛎540g杜 仲250g夏枯草350g 野菊花350g 车前子360g制法以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃)，减压干燥，粉碎成细粉，经常规工艺制成胶囊剂300粒，一次3粒，一日3次。
实施例10片剂当 归300g茜 草150g川 芎180g三 七150g延胡索150g牡 蛎300g杜 仲100g夏枯草200g野菊花250g车前子250g制法以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃)，减压干燥，粉碎成细粉，经常规工艺制成片剂300片，一次3片，一日3次。
实施例11口服液当 归250g茜 草100g川 芎150g三 七100g车前子250g制法当归、川芎、三七加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)的清膏。茜草、车前子(车前子包煎)，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)，加入适量糖浆，纯化水及适量其他辅料，制成1000ml，灌入10ml小瓶，即得。每次2支，每日3次。
实施例12颗粒剂的质量控制方法鉴别a.取本品5g，加醋酸乙酯-甲酸(9.5∶0.5)20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归、川芎各2g，分别同法制成对照药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯—冰醋酸(8.5∶1.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与当归、川芎对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。b.取本品2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取茜草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(4∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以饱和氢氧化钠溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。C.取本品10g，加入水饱和正丁醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用氨试液提取2次，每次25ml，弃去，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。d.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷—氯仿—甲醇(7.5∶4∶1)为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。e.取本品5g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚(30-60℃)浸泡2次，每次15ml(约2分钟)，倾去石油醚液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸(30∶70)为流动相；检测波长320nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加5％碳酸钠溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，(功率250W，频率20kHz)，放置至室温，再称定重量，用5％碳酸钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，用盐酸1-3ml调节PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含当归、川芎以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.90mg。
权利要求
1.一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物，其特征在于该中药组合物主要是由下述中药组成的当 归 50～1000重量份 茜 草 50～600重量份川 芎 10～500重量份 三 七 10～700重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物主要是由下述中药组成的当 归 200～600重量份 茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份。
3.如权利要求1所述的中药组合物，还可包含下述中药中的一种或几种延胡索 50～800重量份 牡 蛎 50～1500重量份杜 仲 50～600重量份 夏枯草 50～1000重量份野菊花 50～1000重量份 车前子 50～1000重量份。
4.如权利要求2所述的中药组合物，还可包含下述中药中的一种或几种延胡索 100～400重量份 牡 蛎 150～700重量份杜 仲 100～300重量份 夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份 车前子 150～500重量份。
5.如权利要求4所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可由下述原料药的配比组成当 归 200～600重量份 茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份延胡索 100～400重量份 牡 蛎 150～700重量份杜 仲 100～300重量份 夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份 车前子 150～500重量份。
6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加5～20倍量20～90％的有机溶媒回流提取1～5次，每次1～5小时，滤过，合并滤液，回收溶剂并浓缩至30～80℃相对密度为1.10～1.38的清膏。牡蛎先煎0.5～3小时后加入茜草等其余四味，煎煮1～5次，每次0.5～3小时，加水量为药材量的5～20倍量，滤过，合并煎液，浓缩至30～80℃相对密度为1.10～1.38，加乙醇使醇浓度达30～90％，放置12～84小时，滤过，滤液回收溶媒并浓缩至30～80℃相对密度为1.10～1.38，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至30～80℃相对密度为1.10～1.38，减压干燥，粉碎成细粉，经过常规工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的片剂、口服液、胶囊、颗粒剂、注射剂中的任一剂型。
7.如权利要求6所述的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法中有机溶媒为乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯中的任一种；车前子需包煎。
8.如权利要求7所述的中药组合物的制备方法，其特征在颗粒剂的制备方法为以上十味，当归、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至50℃相对密度为1.15-1.20的清膏。牡蛎先煎1小时后加入茜草等其余四味，煎煮三次，每次1小时，加水量为药材量的10倍量，滤过，合并煎液，浓缩至50℃相对密度为1.10-1.15，加乙醇使醇浓度达70％，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至50℃相对密度为1.15-1.20，和上述醇提清膏合并，继续浓缩至50℃相对密度为1.25-1.30，减压干燥，粉碎成细粉，加入阿司帕坦10重量份，糊精适量，混匀，用85％乙醇制粒，干燥，制成颗粒。
9.如利要求1-5所述的中药组合物制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本发明颗粒剂5g，加8-11∶0.3-0.7醋酸乙酯-甲酸20ml，超声处理20-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归、川芎各2g，分别同法制成对照药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7-10∶1-3∶1-2石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与当归、川芎对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b.取本发明颗粒剂2g，加甲醇20ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，再加盐酸1ml，置水浴中加热25-40分钟，立即冷却，用乙醚分1-3次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茜草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶1-3石油醚(60～90℃)-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以饱和氢氧化钠溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；c.取本发明颗粒剂10g，加入水饱和正丁醇25ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用氨试液提取1-3次，每次25ml，弃去，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以11-15∶6-9∶1-3氯仿-甲醇-水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；d.取本发明颗粒剂5g，加甲醇50ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取1-3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以6-9∶3-5∶1-2正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；e.取本发明颗粒剂5g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚(30-60℃)浸泡1-3次，每次15ml，1-3分钟，倾去石油醚液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶8∶0.5环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
10.如利要求9所述的中药组合物制剂的质量控制方法，其特征在于颗粒剂的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本品5g，加9.5∶0.5醋酸乙酯-甲酸20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归、川芎各2g，分别同法制成对照药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8.5∶1.5∶1石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与当归、川芎对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b.取本品2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茜草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1.5石油醚(60～90℃)-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以饱和氢氧化钠溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；C.取本品10g，加入水饱和正丁醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用氨试液提取2次，每次25ml，弃去，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶7∶2氯仿-甲醇-水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；d.取本品5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以7.5∶4∶1正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；e.取本品5g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣用30-60℃石油醚浸泡2次，每次15ml，2分钟，倾去石油醚液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶8∶0.5环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
11.如利要求1-5所述的中药组合物制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定方法为照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25-35∶60-80甲醇-1％冰醋酸为流动相；检测波长320nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的本发明颗粒剂约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加5％碳酸钠溶液50ml，称定重量，超声处理25-40分钟，功率250W，频率20kHz，放置至室温，再称定重量，用5％碳酸钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，用盐酸1-3ml调节PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明每单位量含当归、川芎以阿魏酸计，不得少于0.85-1mg。
12.如利要求11所述的中药组合物制剂的质量控制方法，其特征在于颗粒剂的含量测定方法为照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶70甲醇-1％冰醋酸为流动相；检测波长320nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的本品约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加5％碳酸钠溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，功率250W，频率20kHz，放置至室温，再称定重量，用5％碳酸钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，用盐酸1-3ml调节PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每10克当归、川芎以阿魏酸计，不得少于0.90mg。
全文摘要
本发明公开了一种治疗子宫内膜异位所致的经期或经期前后腹痛、腰骶疼痛、下腹坠胀等妇科临床常见病的中药组合物及其制备方法。该组合物主要由当归、茜草、川芎、三七等组成。该中药组合物制备，经过科学的方法直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，包括片剂、口服液、胶囊、滴丸、颗粒剂、注射剂、冻干粉针和各种缓释制剂等剂型。本组合物具有很好的化淤止痛，除湿散结，治疗子宫内膜异位症经期腹痛等的作用。
文档编号A61K9/00GK1611231SQ20031010228
公开日2005年5月4日 申请日期2003年10月30日 优先权日2003年10月30日
发明者李亚政, 柴嵩岩, 任武贤, 冯伟, 卫银波, 王辉轩, 李阳波 申请人:山西亚宝药业集团股份有限公司