专利名称：由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法
技术领域：
本发明涉及一种由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法。
背景技术：
血吸虫病是发展中国家的主要寄生虫病之一，其历史悠久，传播广泛，危害严重。在我国流行的是日本血吸虫病，至少有2100多年历史，日本血吸虫病主要流行于我国长江流域及其以南的地区。建国后虽取得了举世瞩目的防治成就，但由于血吸虫病的传播过程错综复杂，其流行与传播同自然环境、气象水文，以及人们的生活、生产方式和社会经济的发展有着十分密切的关系，并且在一定时期内还不能根本改善。
自80年代以来，我国血吸虫病疫情呈徘徊态势，局部地区疫情严重回升。这是由于这些地区大部分人群居住在有螺水系的堤坝、围垸附近，水位不能控制，因生产、生活的需要，人们每年有长达9个月的时间在疫水中劳作；此外，长江每年一度洪水季节，有大批人群因抗洪抢险救灾不可避免的接触疫水，如在1998、1999年的长江洪水期间，参加抗洪抢险救灾的军民接触疫水的人数达200余万。使急性血吸虫病、慢性血吸虫病病例成批发生，人群血吸虫病感染率高，严重危害了人民群众的生命健康，血吸虫病仍是当前制约农村经济建设发展的阴霾，阻碍农民脱贫致富的隐患。
日本血吸虫的生活史涉及2个宿主，湖北钉螺是其唯一的中间宿主，人或乳哺动物是其终末宿主，这2个宿主均为血吸虫的受害者和扩散者。因此，控制或阻断日本血吸虫病传播的重要措施集中在两个方面；一方面是采用化学灭螺剂杀灭日本血吸虫的中间宿主湖北钉螺，主要的化学灭螺剂有五氯酚钠、氯硝柳胺、烟酰苯胺等。这些科研成果虽然在血吸虫病防治工作中起到了重大作用，但是随着这些化学灭螺剂大量使用及时间延长，其弊端越来越突出。五氯酚钠(NaPCP)因毒性大，污染环境，对环境土壤中的微生物活性及其优势菌群有强烈的抑制作用，并含有致人畜癌变的二恶英(PCDDS)成份，目前已被世界卫生组织(WHO)禁止使用；氯硝柳胺(Nicjosamide)是目前唯一被WHO推荐使用的灭螺药物，但该药亦存在如下致命的弱点一是在灭螺推荐剂量下钉螺呈现明显的离水上爬、逃离药物的趋向，以致钉螺的死亡率大大降低；二是其价格昂贵，发展中国家难以承受，且长期单一使用可能使钉螺产生耐药性，使用范围受到极大限制。烟酰苯胺虽然对贝类具有广谱性，杀灭效果也好，但由于贝类因接触药液而离水上爬的问题未得到改善并对生态环境有影响，而未被血防部门采用。另一方面是采取早期预防性服药治疗血吸虫病；现行的防护措施中，对流行区因生产、生活、抗洪抢险等不可避免频繁接触疫水的人群仅采用“吡喹酮早期化疗”的手段进行个体预防；这不仅浪费了有限防治经费，还可导致吡喹酮药物对人体肝脏的损害。“早期化疗”一是目标人群选择不准，造成没病也要吃药；二是只能杀灭血吸虫成虫，服药时间难以确定。由于上述两种防治血吸虫病的措施的局限性与缺陷性，因此，研制出一种防护效果好、选择性强、对动植物毒性低、对环境无污染且价格低廉、便于使用的防护剂迫在眉睫。
血吸虫病的感染途经主要经人体的皮肤，因此，搞好个体防护是综合防治血吸虫病的一个极其重要的环节。多年来，国内外对预防血吸虫病感染的防护剂有过不少的深入研究，在杀灭血吸虫尾蚴上有一定作用，如邻苯二甲酸酯类、苯甲酸苄酯制剂以及以化学灭螺剂氯硝柳胺为主要原料的防护膏。七十年代，国内科技工作者发现以苯甲酸苄酯、邻苯二甲酸二丁酯和松节油加一定的基质合成的制剂—化学制剂“皮避敌”有预防人群感染血吸虫病效果，但动物试验证明防护效果仅在60％左右，现场人群使用经不起水冲耐磨(与泥磨擦仅持续5min)，防护效果不理想，后不再使用。因此，寻找一种经济有效的、能防止血吸虫感染的外用涂擦药物(防护剂)尤为必要。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种杀蚴效果好、显效时间快、生物毒性低、防护作用好、无皮肤刺激和不适感、无毒无害、无环境污染、高效廉价，使用安全方便的由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法。
本发明目的的实现方式为，由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法，具体步骤为(1)清洗—将麻风树籽用水清洗干净，(2)烘干—将清洗干净的麻风树籽在50℃-60℃的温度下烘干至含水量≤10％；粉碎—将烘干麻风树籽粉碎至细末，(3)提取与分离—在压榨机上压榨，从麻风树籽粉中提取麻风树素油，其含油量在20％-35％之间，(4)将麻风树素油通过强制循环蒸馏、回流提取，将提取液浓缩至即为麻风树素含量为95.6％的麻风树素A，(5)麻风树素A与酶制剂按1∶0.309的比例混合，在38.618℃、相对湿度为61.8％的条件下进行生物发酵得产品。
本发明将麻风树果实经过清洗、烘干、强制循环蒸溜、回流提取后，对提取清液进行浓缩，然后对浓缩物进行生物发酵等生产工艺制备出无异味、桔黄色液体产品。
本发明将麻风树果实经过清洗、烘干、强制循环蒸溜、回流提取后，对提取清液进行浓缩，然后对浓缩物进行生物发酵等生产工艺制备出产品。本防护剂对水生动物毒性低、对日本血吸虫防护作用好，还可阻止水蛭叮咬宿主皮肤。本防护剂即时接触杀虫4、6、8h的有效率均为100％，日本血吸虫尾蚴接触实验3min显作用，接触8min内死亡率为100％，涂抹后尾蚴感染动物试验防护率为100％，水冲泥磨后防护效果可持续4-8h，现场预防保护率为100％，对健康Wistar大鼠经口灌胃LD50＞5000mg/kg；经皮LD50＞2000mg/kg，大鼠均未见死亡；48h后恢复用药前的平静，观察2w后无异常。
本发明以麻风树的麻风果实为原料，麻风树植物在疫区任何荒地等有螺环境均易于生长，栽种发展容易，年初插种，年底即可采籽，籽取材容易，还能防止水土流失，保护环境。本发明制备工艺简单易行，生产的产品主要含粗蛋白、脂类物质、碳水化合物、灰分、大戟二萜醇酯(麻风树素)等。本防护剂对水生动物毒性低、对日本血吸虫防护作用好，还可阻止水蛭叮咬宿主皮肤。本防护剂无刺激、无毒、价格低廉、使用方便，不污染环境。本防护剂杀灭日本血吸虫尾蚴作用机理为干扰日本血吸虫尾蚴细胞信息通道，影响尾蚴钻腺的分泌，激活尾蚴蛋白酶e，导致尾蚴Ca++浓度下降，使尾蚴活力减弱，尾叉断折。
具体实施例方式
本发明以麻风树的麻风果实为原料，将麻风树果实经过清洗、烘干、强制循环蒸溜、回流提取后，对提取清液进行浓缩，然后对浓缩物进行生物发酵等生产工艺制备出无异味、桔黄色液体防护剂。
用本方法生产的产品防护作用好，持续时间长，预防日本血吸虫感染的保护率为100％，这从以下试验可看出。
1、用本防护剂作了直接杀尾蚴试验，试验情况及结果如下1.1即时接触实验将“防蚴灵”防护剂以1mg/cm2剂量均匀涂抹在聚乙烯食用薄膜上，取尾蚴30±2条，滴数滴去氯水，使尾蚴与防蚴灵充分接触，在解剖镜下观察并记录尾蚴的反应和死亡时间，空白对照为去氯水。
1.2水冲延迟接触实验将“防蚴灵”防护剂以1mg/cm2剂量均匀涂抹在聚乙烯食用薄膜上后，用去氯流水不间断地冲洗，分别于4h、6h和8h取出，再按即时接触实验方法测试。
结果是4、6、8h的有效率均为100％；日本血吸虫尾蚴接触实验3min显作用，接触8min内死亡率为100％。
2、防止血吸虫尾蚴感染小白鼠实验实验用小白鼠50只(每组10只)，感染前剪去腹毛，面积2-3cm2，动物仰卧，四肢固定于板上，将本防护剂均匀涂抹在小白鼠腹部已脱毛部位(1mg/cm2)，空白对照为去氯水。
2.1即时接触感染实验取尾蚴40±2条于盖玻片上，贴在小白鼠腹部已脱毛部位，滴加适量去氯水，使尾蚴与本防护剂充分接触，感染15min，35d后作动物解剖，记录血吸虫成虫条数。
2.2水冲延迟接触感染实验用去氯流水不间断地冲洗涂抹有本防护剂的小白鼠腹部已脱毛部位，分别于1h、2h和4h时，再按即时接触感染实验方法测试，防护效果可持续4-8h。
结果是涂抹本防护剂后尾蚴感染动物试验防护率为100％。
3、生物毒性试验3.1大鼠急性经口毒性试验①动物分组和剂量Wistar50只大鼠，雌，随机分成5组，每组5只。各设立464mg.kg-1、1000mg.kg-1、2150mg.kg-1、4640mg.kg-1及5000mg.kg-15个剂量组。②操作步骤动物给药前隔夜禁食但不禁水。称重后按剂量1次经口灌胃，染毒后观察中毒症状及死亡情况，观察时间为2周。
3.2大鼠急性经皮毒性试验①动物分组和剂量将40只大鼠随机分成4组，每组5只。各设立215mg.kg-1、464mg.kg-1mg/kg、1000mg.kg-1、2150mg.kg-14个剂量组。②操作步骤动物给药前24h背部去毛4×5cm2。称重后，按剂量在稍小于剃毛区面积内涂药，然后覆盖1个与脱毛区面积相当的盒式罩，再以胶布固定，观察中毒症状及死亡情况，涂药4h后取下盒式罩，用温水洗去防护剂，观察时间为2周。
结果评价用Horn氏法计算LD50，结果是本防护剂对健康Wistar大鼠经口灌胃LD50＞5000mg/kg；经皮LD50＞2000mg/kg，大鼠均未见死亡；48h后恢复用药前的平静，观察2w后无异常。
4.本防护剂现场防护效果综合评价4.1现场地点，鄂州市芦洲村属血吸虫病湖沼型州垸亚型流行区，芦洲村第2组人群感染率为5.6％，作为对照组观察区；第3组人群感染率为7.37％，作为对实验组观察区。试验前，对第2组和第3组18-50岁的居民采用粪便沉淀孵化法进行3次检查(1次/10d)，其中将检查出的芦洲村第2组、第3组3次粪检均为阴性的居民28人与36人分别作为对照组、实验组人群(其他查出的病人进行病原治疗)。
4.2涂抹本防护剂的方法和时间实验组人群在接触疫水之前，可根据当天身体接触疫水部位的深浅程度，每隔4h均匀涂抹本防护剂于身体的相应部位(涂药面积计算①至双踝8％；②双膝19％；③双胯37％；④腰部42％；⑤双腕6％；⑥双肘12％；⑦双肩20％；⑧颈部88％；⑨全身100％)。对照组人群为安慰剂，涂抹方法和时间与实验组相同。
4.3防蚴灵的毒副作用观察对实验组的人群每次接触疫水之前以及涂抹后1h、3h、24h、48h、72h的症状、体征进行观察，观察其涂抹、后的毒副作用的表现。对照组发放安慰剂，观察方法与时间同实验组。
4.4试验人群接触疫水观察方法在试验期间，每晚7时对试验人群1天内接触疫水的比率、方式、频率、频度等情况进行逐一询问调查，最后计算实验组与对照组人群指数A、指数B。(指数A＝∑{[持续时间(h)×接触面积(％)]/调查日数(d)}，指数B＝∑[持续时间(h)/调查日数(d)]，其中指数A代表暴露强度，指数B代表暴露持续时间。)4.5防护效果评价方法实验组、对照组人群在2000年10月底(此时江水退滩，人群无再接触疫水的机会)的第5周起，采用粪便沉淀孵化法进行3次检查(1次/10d)，然后统计分析实验组和对照组的人群感染率及人群预防保护率，考核防蚴灵的预防效果。[预防保护率＝(对照组阳性率-实验组阳性率)×100％/对照组阳性率]。结果是本预防剂预防日本血吸虫感染的保护率为100％。
本防护剂与其它防护剂的比较见下表防护剂皮避重楼皂 紫香驱蚴 氯硝柳胺涂肤 吡喹酮纸性能比较 防蚴灵敌 甙 灵 剂 巾化学类型 植物型型 植物型 植物型 化学型 化学型预防人群感染血吸虫病的保护率(％ 100 ＜70 ＜80＜80＜90 ＜85水冲、泥磨持续时间(小时) 8 ＜0.5＜4 ＜3 ＜5＜4＜160大鼠经皮急性LD50(mg/kg) ＞2000 0＞400 ＜5325 ＜1500 ＜1000对皮肤有无刺激无 有 有 无 重 较重
权利要求
1.由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法，其特征在于，具体步骤为(1)清洗—将麻风树籽用水清洗干净，(2)烘干—将清洗干净的麻风树籽在50℃-60℃的温度下烘干至含水量≤10％；粉碎—将烘干麻风树籽粉碎至细末，(3)提取与分离—在压榨机上压榨，从麻风树籽粉中提取麻风树素油，其含油量在20％-35％之间，(4)将麻风树素油通过强制循环蒸馏、回流提取，将提取液浓缩至即为麻风树素含量为95.6％的麻风树素A，(5)麻风树素A与酶制剂按1∶0.309的比例混合，在38.618℃、相对湿度为61.8％的条件下进行生物发酵得产品。
全文摘要
由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法，涉及由麻风树籽制备预防日本血吸虫感染的防护剂的方法。本发明将麻风树果实经过清洗、烘干、强制循环蒸溜、回流提取后，对提取清液进行浓缩，然后对浓缩物进行生物发酵等生产工艺制备出产品。本防护剂对水生动物毒性低、对日本血吸虫防护作用好，还可阻止水蛭叮咬宿主皮肤。本防护剂即时接触杀虫的有效率均为100％，日本血吸虫尾蚴接触8min内死亡率为100％，涂抹后尾蚴感染动物试验防护率为100％，水冲泥磨后防护效果可持续4－8h，现场预防保护率为100％，对健康大鼠无毒副作用。本防护剂无刺激、无毒、价格低廉、使用方便，不污染环境。
文档编号A61P33/12GK1546109SQ20031011155
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月11日 优先权日2003年12月11日
发明者戴裕海, 刘建兵, 周鸿勇 申请人:戴裕海, 刘建兵, 周鸿勇