一种治疗前列腺增生症的药物及其制备方法

专利名称：一种治疗前列腺增生症的药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种冶疗前列腺增生症的药物及其制备方法，属于中医领域。
背景技术：
良性前列腺增生症(BPH)是老年男性的常见病，发病率随年龄增加而增高，国内夏同礼等对321例尸检结果显示，前列腺增生发生率为，51～60岁20％，61～70岁50％，71～80岁57.1％，81岁以上为83.3％。BPH可引起患者排尿困难，淋漓不尽，尿频尿急，夜尿曾多等，进一步发展可导致尿潴留，肾功能不全，严重尿路感染等并发症，严重影响患者的生活质量。其发病机理与治疗一直是医药工作者的研究热点，又是难点。其治疗手段很多，但现有治疗BPH的各种手段中，手术治疗带有一定的创伤性，并发症多，且老年人对手术和麻醉的耐受性差；物理治疗如微波、射频、高能聚焦等远期疗效尚不肯定；在药物治疗方面，经过检索原部颁标准、国家新药注册数据(1985-2000年)光盘，对治疗前列腺曾生用药进行了分析，主要品种列表如下


国家药品监督管理局南方医药经济研究所通过对全国10个典型城市及地区(包括京、泸、穗、西安、哈、长沙、武汉、长春、渝、佳木斯)共79家医院、零售药店(其中综合医院23家属、中医院20家、零售药店36家)进行了前列腺增生用药的市场调查。调查结果表明(1)按各品种的销售当量比率计算，市场占有率较高的品种主要有非那甾胺(23.49％)、坦索罗辛(14.27％)、特拉唑嗪片(11.96％)、酚苄明(11.53％)、舍尼通(9.84％)、前列康(9.21％)、黄酮哌酯片(6.67％)、前列通(3.13％)、前列回春胶囊(1.76％)、桑塔前列泰(0.81％)、安尿通(0.67％)、氟他胺(0.58％)、保前列(0.49％)、尿塞通(0.35％)、尿通(0.35％)、护前列(0.23％)。其中，前列腺增生用药西药品种的市场占有率较高。
(2)从调查城市不同消费层次前列腺增生患者的比例情况看，长期服用高价前列腺增生西药(主要包括非那甾胺、坦索罗辛、特拉咪嗪片、黄酮哌酯片、桑塔前列泰、氟地胺，每日消费6.52～12.50元)的患者比率为57.78％，长期服用高价前列腺增生中成药或植物药(主要包括舍尼通、前列回春胶囊、保前列、护前列，每日消费8.29～27.3元)的患者比率为12.32％；长期服用低价(每日消费2.18～2.52元，主要包括前列康、前列通)和中低价(每日消费4.56～6.60元，主要包括尿塞通、尿通)前列腺增生中成药或植物药的患者比率为12.82％。由此可见，前列腺增生用药层次属高消费。
药物治疗如保列治、高特灵、哈乐等虽然疗效肯定，但价格昂贵，需长期服药，一般患者难以承受，并可引起如头痛、直立性低血压、甚至性欲低下、阳痿等令人不能接受的副作用。中药对前列腺增生症已有较系统的认识，已积累了丰富的临床治疗经验。目前已有国家标准的治疗前列腺增生的中药新药中，其处方药味组成均较复杂，其药味均在5～10味之间。如前列舒乐颗粒由淫羊藿、黄芪、蒲黄、车前草、川牛膝五味药组成；前列舒丸(水蜜丸)由熟地黄、薏苡仁、冬瓜子、山茱萸、山药、牡丹皮、苍术、桃仁、泽泻等药味组成；前列通片由前列通干浸膏、八角茴香油、肉桂油、琥珀组成；前列泰片由益母草、蓄、红花、油菜蜂花粉、知母、黄柏组成；前列通胶囊由桃仁、没药、丹参、赤芍、红花、泽兰、王不留行、皂角刺、败酱草、蒲公英、川楝子、白芷、石苇、枸杞子组成；翁沥通胶囊由薏苡仁、浙贝母、川木通等11味药组成；前列通瘀胶囊由赤芍、土鳖虫、桃仁、夏枯草、白芷、黄芪、通草等11味药组成；癃闭舒胶囊由补骨脂、益母草、金钱草、海金砂、琥珀、山慈菇等药组成；蛾苓丸由雌性柞蚕蛾等组成(具体药味不祥)；仅泽桂癃爽胶囊药味偏少，但也由泽兰、肉桂、皂角利三味药组成。目前市场虽有开发研究治疗前列腺增生症的中成药，但仍不能满足患者的需要。因此，研究开发高效、价廉、副作用小的治疗药物势在必行。

发明内容
本发明的目的是提供一种更为有效的治疗前列腺增生症的中药组合物；本发明的又一目的是提供上述药物的制备方法。
传统中医无前列腺增生症(BPH)的病名，一般根据BPH患者排尿困难的临床表现，如排尿费力、中断、尿不尽、夜尿次数增多，甚或排尿点滴而出或闭而不通等，将其归为中医“癃闭”范畴，认为本病属“虚实夹杂”。概括目前对本病的病机认识包括肾虚血瘀、膀胱气化不利、下焦湿热、脾肾气虚等。中医治则治法包括利湿通淋、补益脾肾、活血化瘀、温阳以利气化等。
然而，其基本病理变化为增大的前列腺使后尿道受压、变窄、弯曲、延长，造成膀胱流出道梗阻，从而出现排尿困难的一系列症状。同时，肛门指诊也可触及增大而质韧的前列腺。
本发明人根据其病理变化认为，其基本病机为瘀血阻滞、水道不通，应为中医“癓积”范畴(“癓积”为气血凝聚而成)。基于对前列腺增生症基本病机崭新认识，抓住瘀血阻滞、水道不通的根本病机，确立化瘀散结、通窍利水为基本治则。精选具有化瘀散结、通窍利水的蒲黄、蝼蛄两味药组方。
本发明的目的是这样实现的一种治疗前列腺增生症的药物，由中药材的提取物以及辅剂组成，其剂型为口服剂型，其特征是，所述中药材的提取物分别为蒲黄经乙醇的提取物，以及与蒲黄等重量份的蝼蛄经乙醇提取，再经分离脂肪后的提取物。
上述蒲黄提取采用8-10倍量60-95％的乙醇，优选为8-10倍量60-80％的乙醇，最优选为10倍量的60％的乙醇；上述蝼蛄提取采用8-10倍量60-90％的乙醇，优选为8-10倍量70-80％的乙醇，最优选取为8倍量80％的乙醇。
蒲黄，为香蒲科植物水浊香蒲、东方香蒲或同属植物的干燥花粉。性味甘、平，有活血化瘀，通利水道之功。《中药大辞典》“凉血止血，活血消瘀”。《本草汇言》云“血之下者可利，血之滞者可行”。《本草正义》谓其“能导瘀结而治气凝滞之痛”。《日华子本草》载“治血运血，儿枕急痛，小便不利”。《本经》载“主心腹膀胱寒热，利小便”。《药性本草》载“利水道”。《金匮要略》也用蒲灰散(蒲黄、滑石)治疗因瘀血夹热致小便不利。现今也有学者用蒲黄治疗前列腺增生症(BPH)的研究报道，如张菊兰用蒲灰散加减治疗前列腺增生症急性尿潴留患者24例，〔中医杂志，1994，(9)519〕。
蝼蛄，为蝼蛄科动物蝼蛄或华北蝼蛄的干燥体。咸、寒。归胃，膀胱经。有通窍利水、消肿散结之功效。《本草钢目·卷四十一·蝼蛄》载“利大小便，通石淋，治瘰疬、骨鲠。”《本经》载“味咸，性寒，归膀胱经，功能利水消肿，治小便不通。”《本草汇言》认为“蝼蛄性善钻利，故本药主水脏雍逆，水道不通，二便闭，胀欲死。”《本草从新》载“通便而二阴皆利，逐水而十种俱平，贴瘰疠颇效，化骨哽殊灵。”《本草纲目》引《普济方》治小便不利“用蝼蛄，推车客(蜣螂)各7枚，……一服神效。”《本草纲目》引《葛洪方》治小便不得“用大蝼蛄两枚，取下体，以一升水渍之，去皮饮之，须臾便通。”《圣济总录》中治小便不通“诸药无效，可用活蝼蛄1枚，加麝香少许共研，取汁用水调下，小便即通。”《虫类药的应用》中也讲道“蝼蛄是一味利水通便的佳药”。《鲋溪单方选》“癃闭，百药不效，蝼蛄烧灰，酒服即通，此以湿热攻湿热，借其窜利行水之性耳。”孙海鸣等用中药汤剂加蝼蛄琥珀散治疗尿潴留，其中有因前列腺增生症所致者[中西医结合应用临床急救，1996，(1)32-32]。
综上所述，我们根据古今文献记载，结合本病的基本病机的新认识，确定以蒲黄活血化瘀，通利水道为君，以蝼蛄通窍利水、消肿散结为臣。全方共奏化瘀散结、通窍利水之功，主治瘀血阻滞型前列腺增生症。
本发明的又一目的是这样实现的一种上述药物的制备方法，包括下列步骤a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄采用8-10倍量的60％-95％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8-10倍量的60％-90％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1.5-2小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液回收尽乙醇，在1-4℃冷冻8-12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合进行减压浓缩，加入辅料，再经干燥后，制成口服剂型。
优选地，该制备方法包括以下步骤a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄用滤布包裹，并采用8-10倍量的60-80％的乙醇浸泡1-1.5小时，回流提取2-3次，每次1小时，过滤，滤液回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8-10倍量的70％-80％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1.5小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇，在1-4℃冷冻12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合进行减压浓缩，加入辅料，再经干燥后，制成口服剂型。
最优选地，该制备方法包括以下步骤
a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄用滤布包裹，并采用10倍量的60％的乙醇浸泡1小时，回流提取3次，每次1小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8倍量的80％的乙醇浸泡1小时，回流提取2次，每次1.5小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇后，在1-4℃冷冻12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合，在温度为70-80℃，真空度0.02-0.04MP下进行减压浓缩，加入重量比为4∶1的微晶纤维素和磷酸氢钙作为辅料，再经干燥后，粉碎制粒，制成胶囊。
以下是关于本发明制备工艺的研究，涉及药用成分的提取、分离、浓缩和辅料的选择、加入量以及制剂成型工艺等等。
1处方蒲黄833g蝼蛄833g微晶纤维素96g磷酸氢钙24g制成胶囊1000粒(以下称前列通爽胶囊)2剂型选择依据该处方来源于临床验方，临床用于良性前列腺增生引起的排尿困难、排尿不尽，需要较长时间服药。处方中蝼蛄有特殊气味，且含较多油脂，如果制成液体制剂，有较多不溶物，且气臭难以掩盖，故宜制成固体制剂。为掩盖蝼蛄的特殊气味，可选择包衣片或胶囊剂。根据预试验结果，处方中药物浸膏粘度大，干膏收率为12％左右，临床日服剂量为20g，则日服浸膏量为2.4g，加入部分辅料可以制成胶囊剂，故拟将本处方制成胶囊剂，既可掩盖蝼蛄的不良气味，方便患者长期服用，病人易于接受，同时达到储运、携带方便的目的。
3提取工艺的研究3.1处方中药材的前处理3.1.1蒲黄药材的前处理本实验所用蒲黄应符合中国药典2000年版一部第290页蒲黄炮制项下的规定。
3.1.2蝼蛄的前处理本试验所用蝼蛄应符合中药材部颁标准第1册第101页蝼蛄炮制项下规定。
3.2工艺路线的设计及其依据3.2.1文献资料中处方中各药味的成分及性质蒲黄中主要含黄酮类化合物异鼠李素-3-O-新橙皮苷糖苷、柚皮素、槲皮素、香蒲新苷、山奈酚-3-O-2-L-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖、异鼠李素-3-O-2-L-鼠李糖(1→2)β-D-葡萄糖、山奈酚-3-O-2-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-2-L吡喃鼠李糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等。有天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、胱氨酸等。还含微量元素有铝、钙、铁、钾、锰、钠、磷、锌等；此外尚含谷甾醇、正二十五烷、琥珀酸等多种有机酸，及棕榈酸、硬脂酸和油酸的甘油酸等[1]。其中黄酮类成分为蒲黄中活血化瘀主要有效成分，活血化瘀又与本制剂功能主治直接相关，故应针对黄酮类化合物进行提取，蒲黄中黄酮类成分包括苷及苷元，可考虑用较高浓度乙醇提取。
蝼蛄，经文献检索，尚无其化学成分研究的报道。经对其化学成分的初步研究，蝼蛄内可能含内酯类、生物碱类化合物。
由于蝼蛄化学成分未见报道，为了确定蝼蛄与主治功能相对应的有效部位，故对蝼蛄采用不同的提取方法，筛选有效浸出物。
3.2.2蝼蛄有效部位药效学筛选采用系统提取法提取蝼蛄的不同部位，通过观察不同提取部位对小鼠前列腺增生的影响及对NE诱导的家兔离体膀胱三角肌收缩的影响，从而确定与本方功能主治有关的蝼蛄的有效提取物。
蝼蛄供试部位的提取以300克蝼蛄药材为原料分别用8倍量石油醚、醋酸乙酯、80％乙醇以及水作为溶剂，在相同工艺条件下(即浸泡1小时，回流提取1.5小时，过滤)，得到石油醚部位(A部位)、醋酸乙酯部位(B部位)、乙醇部位(C部位)和水部位(D部位)。
试验一A、B、C、D提取部位对小鼠前列腺增生的影响实验材料(1)试药蝼蛄各提取部位A、B、C、D部位，照处方(每日蒲黄、蝼蛄各10g)，成人(60Kg)日用量为20g原生药。按各提取物收率，试验时用蒸馏水配成相应浓度(分别相当于临床日用量的18、9倍)的药液备用，小鼠灌胃量为0.25ml/10g体重。
非那雄胺(商品名保列治)，美国默沙东公司，批号215735，(95)卫药准字J-15号。用生理盐水配成相当于临床日用量18倍量的药液作为阳性对照药，备用，小鼠灌胃量为0.25ml/10g。
丙酸睾酮注射液，广州明兴制药厂，批号020401，粤卫药准字(1996)第103043号。临用前和灭菌食用油配制成1mg/ml的药液作为造模剂，小鼠皮下注射量为10mg/kg。
(2)动物昆明种雄性小鼠，体重18～24g。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号为川实动管6号。实验在成都中医药大学药学院实验动物观察室进行，合格证川实动管第2001-7号。
方法与结果取健康雄性小鼠250只，在动物实验观察室中适应性饲养两天后，将体重不合格者剔除，选取体重18～22克的小鼠，按表1所示随机分为11组，每组14-20只。每组动物每日灌胃给药1次，空白组和模型组动物给予相同体积的生理盐水，模型组动物同时皮下注射丙酸睾酮，连续10天，末次给药后24小时处死，摘除前列腺，计算前列腺指数。
表12-1A、B、C、D提取部位对小鼠前列腺增生的影响组别 动物(只) 前列腺指数空白对照组18 9.60±4.33模型对照组17 19.14±3.13*阳性对照组15 14.37±3.41*A大剂量组 11 13.25±4.82*
A中剂量组 10 12.93±2.61*B大剂量组 11 11.25±2.21*B中剂量组 11 11.55±2.46*C大剂量组 11 14.33±4.14*C中剂量组 10 14.91±6.93D大剂量组 10 15.50±7.15D中剂量组 10 37.70±47.66注与模型对照组相比较，*p＜0.05由上表可知，A、B无论大剂量组还是中剂量组均对昆明种小鼠前列腺增生有明显作用，而D组大剂量组对昆明种小鼠前列腺增生有减小作用，中剂量组无效，其中，B的作用趋势最过明显。在此基础上，再做A、B对NE诱导的家兔离体膀胱三角肌收缩的影响。
试验二A、B提取部位对NE诱导的家兔离体膀胱三角肌收缩的影响实验材料(1)试药蝼蛄提取部位A、B，临用时配制成一定浓度；重酒石酸去甲肾上腺素由上海禾丰制药有限公司提供，批准文号沪卫药准字(1995)第010044号；高特灵；Kreb液(每1000毫升含Nacl 5.54g，Kcl 0.35g，Cacl20.28g，KH2PO40.16g，MgSO40.29g，NaHCO32.1g，Glu2.1g)。
实验器材麦氏浴槽，L型通气钩，肌张力换能器，恒温水浴锅，表面皿，手术器械，氧气发生器，细玻管，BL-410生物信号系统。
(2)动物家兔，雌雄兼有，体重1.5～2.0Kg，健康合格，由四川省医学科学院实验动物中心提供，合格证号为医动字第2410618号。实验在成都中医药大学药学院实验动物观察室进行，合格证川实动管第2001-7号。
方法与结果取家兔，猛击头部致死。打开腹腔，暴露膀胱，分离出两侧输尿管，在输尿管平面以下，输精管平面以上取下膀胱三角肌，置于通氧的37.5℃的Kreb氏液中，沿着肌纤维的纹理剪成宽3-4mm，长约6-8mm肌片，将三角肌条片两端结扎，一端固定在玻璃通气钩上，垂直地悬于盛有40mlKreb液的麦氏浴槽中，恒温37.5℃，并不断通以氧气。另一端系于张力换能器上，标本负荷2g张力。待三角肌条在浴管中稳定1小时后，加入NE(终浓度为10-5mol/L)，记录5分钟，再分别加入不同提取部位的药物A、B(终浓度为2％)和阳性药高特灵(终浓度为10-7mol/L)，观察药物的拮抗作用，记录10分钟。计算抑制度给NE后的肌张力一给药后肌张力。
用SPSS10.0对实验结果(抑制度)进行统计分析。结果见下表表12-2A、B提取部位对家兔离体膀胱三角肌收缩的影响试验次数 剂量(终浓度) 抑制度空白组 72％ 0.2176±0.09阳性组 92％ 0.9778±0.74*A部位72％ 0.5508±
0.32B部位 6 2％ 0.8673±0.18**注与空白组相比较，*p＜0.05，**p＜0.01由上表可以看出，与空白组相比较，A部位，B部位对由NE引起的家兔离体膀胱三角肌的收缩有明显的对抗作用，其中，B部位对NE引起的家兔离体膀胱三角肌的收缩有极明显的对抗作用。
由以上实验数据显示，B样效果明显优于A、C、D三个样品，即以醋酸乙酯提取部位较好。由于生产上最好用无毒、不易燃、价廉、资源丰富的水或乙醇进行提取，故考虑采用较高浓度的乙醇代替醋酸乙酯进行提取。预试验中发现，用较高浓度乙醇提取，回收乙醇后，有脂肪油析出，如果不除去，将对成型带来不利影响，并带来较大异味，故考虑将油除去。
因此选用高浓度乙醇提取物(去脂肪油后)、醋酸乙酯提取物、脂肪油进行药效学比较实验，并对化学成分的变化上进行分析。
试验三B、E、F提取部位对小鼠前列腺增生的影响蝼蛄供试部位的提取300克蝼蛄药材用80％的乙醇10倍量提取两次，每次1.5小时，过滤，合并提取液，回收尽乙醇，冷藏12h，用260目的筛网，滤去上层油层(样品E)，得到下层溶液(样品F)。
实验材料(1)试药蝼蛄各提取部位B、E、F部位，按各提取物收率，试验时用蒸馏水配成相应浓度(分别相当于临床日用量的18、9倍)的药液备用，小鼠灌胃量为0.25ml/10g体重。
非那雄胺(商品名保列治)，美国默沙东公司，批号215735，(95)卫药准字J-15号。用生理盐水配成相当于临床日用量18倍量的药液作为阳性对照药，备用，小鼠灌胃量为0.25ml/10g。
丙酸睾酮注射液，广州明兴制药厂，批号020401，粤卫药准字(1996)第103043号。
临用前和灭菌食用油配制成1mg/ml的药液作为造模剂，小鼠皮下注射量为10mg/kg。
(2)动物昆明种雄性小鼠，体重18～24g。由成都中医药大学实验动物中心提供、合格证号为川实动管6号。实验在成都中医药大学药学院实验动物观察室进行，合格证川实动管第2001-7号。
方法与结果取健康雄性小鼠150只，在动物实验观察室中适应性饲养两天后，将体重不合格者剔除，选取体重18～22克的小鼠，按表所示随机分为8组，每组15只。每组动物每日灌胃给药1次，空白组和模型组动物给予相同体积的生理盐水，模型组动物同时皮下注射丙酸睾酮，连续10天，末次给药后24小时处死，摘除前列腺，计算前列腺指数。
表12-3B、E、F提取部位对小鼠前列腺增生的影响组别 动物(只) 前列腺指数空白对照组 159.34±3.14模型对照组 1520.33±4.75*阳性对照组 1513.65±3.58*F大剂量组 1512.11±3.55*F中剂量组 1511.34±3.24*B大剂量组 1511.47±3.44*B中剂量组 1511.66±2.91*E大剂量组 1518.38±4.22E中剂量组 1518.84±5.11注与模型对照组相比较，*p＜0.05由上表可知，B、F无论大剂量组还是中剂量组均对昆明种小鼠前列腺增生有明显作用，而E组大剂量组及中剂量组无效，即可用高浓度乙醇提取物(去脂肪油)代替醋酸乙酯提取物进行提取。
试验四B、F提取部位TLC比较由于B、F在药效上接近，故对它们进行TLC分析，初步比较它们在化学成分上的差异。
称取已经干燥至恒重的B、F样各1g用80％的乙醇5ml超声提取0.5h，滤过，滤液及为供试品溶液，照TLC法，吸取上述两种溶液各10μ1点于同一硅胶GF254上，用氯仿-甲醇-冰乙酸(20∶5∶0.3)展开，取出，晾干置于紫外光λ＝254nm下检视。
结果B、F在TLC主要斑点的Rf值基本相同，可初步判断两者成分大致一致。
3.2.3蒲黄、蝼蛄混合提取后脂肪油中黄酮类成分TLC分析蒲黄中主要含有黄酮类成分，可采用乙醇进行提取；蝼蛄采用乙醇提取，回收乙醇后，冷冻析出脂肪油，去掉脂肪油后，取下层水液作为药用。可考虑两者混合提取，但脂肪油在析出过程中，可能会带走蒲黄提取物中的成分，故应进行研究。
称取蒲黄药材50g和蝼蛄药材50g一起置于2000ml圆底烧瓶中用80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1h，回收乙醇至无醇味，于4℃冷藏过夜。用260目的筛网过滤，得脂肪油层和下层溶液。取油2g溶于5ml甲醇溶液中制成供试品溶液，精密称取异鼠李素-3-0-新橙皮糖苷配成1mg/ml的对照品溶液，精密吸取供试品溶液和对照品溶液分别20μl点于同一硅胶G板上。展开剂为醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝(5∶3∶1∶1)，展开，取出，晾干，喷20％的硫酸乙醇溶液，热风显色至斑点清晰。
结果由TLC图谱可知，脂肪油中含有蒲黄中的黄酮类成分，两者混合提取，在脂肪油析出的过程中造成了蒲黄中黄酮类成分的损失。
所以应将两味药分开提取，应分别进行相应的提取工艺研究。
3.3提取工艺条件选定的依据3.3.2蝼蛄醇提工艺研究考察3.3.2.1蝼蛄提取溶媒考察以上药效学筛选研究表明，醋酸乙酯提取物及高浓度乙醇提取物(去脂肪油后)均具有较好的药效作用，故以醋酸乙酯的提取物量作为指标，对60％-90％乙醇提取浓度进行了考察。
称取蝼蛄药材100g 4份，分别用60％、70％、80％、90％的乙醇8倍量浸泡1h，回流提取2次，每次2小时。滤过，合并滤液。减压回收乙醇至无醇味，得样品溶液，将样品溶液冷藏(4℃)过夜，次日用260目的筛网过滤，除去油层，下层样品溶液用等量的醋酸乙酯提取2次，每次静止30min，合并提取液，减压回收醋酸乙酯得流浸膏，将流浸膏置于真空干燥箱中，干燥至恒重，计算醋酸乙酯提取量。
表12-4 蝼蛄提取溶媒考察醇浓度(％) 60 70 8090醋酸乙酯提取8.28.5 9.4 6.7量(g/100g)结果表明从醋酸乙酯提取量来看，用80％的乙醇提取较好。因此选用80％的乙醇作为提取溶媒。
3.3.2.2蝼蛄吸取乙醇量的研究考察称取蝼蛄药材20g三份，分别加入80％乙醇200ml，浸泡，每隔1h过滤，称蝼蛄药材的重量，以吸醇量不再增加及药材浸透为度，计算其吸醇率。
表12-5 不同浸泡时间80％乙醇吸取量时间(小时)1.0 2.0 3.0 吸醇率(％)平均值(％)第一 202.0蝼蛄重量(g) 59.8 60.2 60.3份第二 209.0蝼蛄重量(g) 59.2 59.9 60.1 204.0份第三 204.0蝼蛄重量(g) 58.1 60.3 61.0份结果表明蝼蛄药材浸泡1小时后其吸醇率为药材量的两倍。
3.3.2.3蝼蛄醇提工艺的正交实验考察对影响药物提取的80％乙醇用量、提取时间及提取次数等主要因素进行正交试验筛选，选用L9(3)4正交表进行实验，因素水平安排见表12-6。
表12-6 80％乙醇提取正交因素水平表因素水平A溶媒用量(倍) B提取时间(小时) C提取次数1 6 1.0 12 8 1.5 23 10 2.0 3实验方法选择80％乙醇用量、提取时间、提取次数三个因素，每因素选择三个水平，按L9(3)4正交表安排实验。每份取100g药材，共计9份，用80％乙醇提取，合并取提取液，减压回收尽乙醇，得样品溶液，取样品溶液冷藏(4℃)过夜，次日用260目的筛网过滤，弃去上层油层，下层溶液用等量的醋酸乙酯提取两次，每次静止30min，合并提取液，减压回收提取液，干燥至恒重，称量，计算醋酸乙酯提取率作为考察指标。结果如下表12-7表12-7用80％的乙醇提取其正交试验表及结果试验号ABCD(空白)醋酸乙酯提取量(g)1 1111 8.82 1222 9.03 1333 11.64 2123 9.85 2231 9.46 2312 8.97 3132 10.08 3213 9.29 3321 9.5K1/3 9.8 9.5 8.9 9.2K2/3 9.4 9.2 9.4 9.3K3/3 9.6 10.0 10.3 10.2R 0.43 0.8 1.4 0.9表12-8方差分析表误差来源I nMSF PA 0.282320.14150.1614＞0.05B 0.968920.48440.5540＞0.05C 2.895621.44781.6557＞0.05误差1.748920.8744结果表明由80％的乙醇提取正交实验结果分析来看，由极差R值显示，各因素影响大小为C＞B＞A，又由方差分析表看，各因素均无显著性影响(P*＞0.05)，考虑大生产条件与实验室提取条件的较大差异，为确保尽可能的提取出有效成分以及节约能源。经综合考虑，故确定蝼蛄提取工艺为A2B2C2，既用8倍量的80％的乙醇提取2次，每次1.5小时。
3.3.2.4蝼蛄正交试验最佳方案验证试验称取蝼蛄药材100g三份，用80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收尽乙醇，得样品溶液。将样品溶液冷藏(4℃)过夜，次日用260目的筛网过滤，除去上层油层，下层溶液用等量的醋酸乙酯提取2次，每次静止30min，收集醋酸乙酯提取液，减压回收醋酸乙酯得流浸膏，将流浸膏减压干燥至恒重，称取其重量，计算醋酸乙酯提取物得率。结果如下表表12-9 蝼蛄80％醇提取最佳工艺验证实验试验号药材量醋酸乙酯提取物(g)1 100 9.82 100 9.73 100 9.9结果表明三个验证试验醋酸乙酯提取物的量相差不大，说明该工艺稳定可行。故确定蝼蛄醇提工艺为用80％乙醇8倍量提取2次，每次1.5h，过滤，合并提取液，减压回收尽乙醇，冷藏过夜，次日用260目的筛网过滤，除去脂肪油层，下层溶液供药用。
3.3.2.5蝼蛄醇提冷藏时间和冷藏温度的单因素考察(1)称取蝼蛄药材100g四份，用8倍量80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收紧乙醇，得样品溶液，将1#、2#、3#样品溶液分别置于1-4℃的冷藏室分别冷藏4h、8h、12h、16h，冷藏后用260目的筛网滤过，将脂肪油层减压干燥至恒重，结果如下表。
表12-10蝼蛄醇提冷藏时间考察表试验号 冷藏时间(h) 上层油重(g)1 4 52 8 83 12104 1610.5结果冷藏12h，基本能将脂肪油全部析出，并能除去。
(2)称取蝼蛄药材100g三份，，用8倍量80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收尽乙醇，得样品溶液，将1#、2#、3#样品溶液置于-4-0℃、1-4℃、4-8℃下冷藏12h后，用260目的筛网滤过，将脂肪油减压干燥至恒重，结果如下表表12-11蝼蛄醇提冷藏温度的考察试验号 冷藏温度(℃)油的重量(g)1 -4-0下层水溶液已结冰2 1-4 9.53 4-8 2由上表得蝼蛄醇提减压回收乙醇后，冷藏条件为于1-4℃下冷藏12h后去油。
蝼蛄提取工艺为用80％乙醇8倍量提取2次，每次1.5h，过滤，合并提取液，减压回收尽乙醇，于1-4℃冷藏12h后，用260目的筛网过滤，除去脂肪油层，下层溶液供药用。
3.3.3蒲黄醇提工艺研究考察3.3.3.1乙醇浓度的单因素考察蒲黄活血化瘀的作用与本方功能主治直接相关，黄酮类成分为蒲黄活血化瘀的主要有效成分，异鼠李素-3-0-新橙皮糖苷为蒲黄中具有代表性的黄酮类化合物，故以其为指标对蒲黄的提取工艺进行了考察。
称取蒲黄药材50g各六份，分别加入10倍量的水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇，浸泡1h，回流提取两次，每次2h，滤过，合并滤液，搅匀取部分高速离心(离心5min，转速10000转/min)，上清液用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱，测定，计算即得；测定结果见表12-12。
表12-12不同乙醇浓度对蒲黄提取异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率的影响异鼠李素-3-O-新异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷实验方案橙皮糖苷理论含量 提取率％提取量(mg/50g)(mg/50g)水提84.25 46.5 55.1920％乙醇84.25 48.8 57.9240％乙醇84.25 52.0 61.7260％乙醇84.25 72.0 85.4680％乙醇84.25 63.0 74.7895％乙醇84.25 59.6 70.74(注本实验所用蒲黄中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.17％)结果表明，从异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率来看，用60％醇提异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率较高，因此选用60％的乙醇提取。
3.3.3.2蒲黄醇提前浸泡时间的单因素考察称取蒲黄药材100g各三份，加入10倍量的60％乙醇，分别浸泡0.5h、1.0h、1.5h，回流提取两次，每次1.5h，滤过，合并滤液，混匀后，取部分滤液高速离心(离心5min，转速为10000转/min)离心后上清液用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪中，测定，计算异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率，测定结果见表12-13。
表12-13不同浸泡时间对异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率的影响异鼠李素-3-O-新异鼠李素-3-O-新实验方案 橙皮糖苷理论含量 橙皮糖苷取量 提取率％(mg/100g) (mg/100g)浸泡0.5h 168.5 113.9 67.60浸泡1.0h 168.5 144.7 85.89浸泡1.5h 168.5 143.1384.94(注本实验所用蒲黄中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.17％)结果表明，从异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率来看，浸泡1h和1.5h后差异都不大，为了节约时间，所以选择60％乙醇浸泡时间为1h。
3.3.3.3蒲黄吸取乙醇率研究考察称取蒲黄药材50g各三份，分别加入250ml 60％乙醇，浸泡，每隔1h记录蒲黄粉重量。以吸醇量不再增加及药材浸透为度，计算其吸醇率。
表12-14蒲黄药材吸取60％乙醇研究考察时间(小时) 1.02.0 3.0 吸醇率(％)平均值(％)第一 301.8蒲黄粉重量(g) 198.7 200.0 199.7份第二 301.0蒲黄粉重量(g) 199.6 199.8 200.3 301.3份第三 300.6蒲黄粉重量(g) 197.9 199.2 199.8份结果显示，药材60％乙醇的吸取率为301.3％药材，即吸醇率为药材的3倍量，因此药材第一次提取时应多加3倍量的60％乙醇。
3.3.3.4蒲黄药材包煎提取的单因素考察称取蒲黄药材100g两份，一份直接置于3000ml的圆底烧瓶中，用60％的乙醇10倍量浸泡1小时，回流提取2次，每次1.5小时；另一份用350目的滤布将药材包裹起来，置于圆底烧瓶中，用60％的乙醇10倍量浸泡1小时，回流提取2次，每次1.5小时。滤过，合并滤液，混匀后取部分高速离心(离心5min，转速为10000转/min)，离心后取上清夜用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl注入液相色谱仪中，测定，计算。其于提取液减压回收，计算结果如下表12-15表12-15蒲黄药材包煎提取的单因素考察异鼠李素-3-O-新橙皮异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取实验方案 提取率％糖苷理论含量 量(mg/100g)
(mg/100g)不包煎 168.5140.3383.28包煎 168.5132.6978.74(注本实验所用蒲黄中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.17％)由于蒲黄药材本身为花粉，是很细的粉未，如不包裹大工业化生产时没法过滤，因此本实验考察包煎提取是否影响异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率。结果表明包煎对异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率影响不大。因此蒲黄提取时采用包煎。
3.3.3.5蒲黄醇提工艺条件的正交试验考察对影响药物提取的60％乙醇用量、提取时间及提取次数等主要因素进行正交试验筛选，选用L9(3)4正交表进行实验，因素水平安排见表12-16。
表12-1660％乙醇提取正交因素水平表因素水平A溶媒用量(倍)B提取时间(小时)C提取次数1 61.012 81.523 10 2.03实验方法选择60％乙醇用量、提取时间、提取次数三个因素，每因素选择三个水平，按L9(3)4正交表安排实验。每份取100g药材，共计9份，用350目的滤布包裹，用60％乙醇提取，合并提取液，混匀，取部分提取液高速离心(离心5min，转速为10000转/min)，离心后上清夜用微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱中，测定，计算。测定供试品溶液中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的含量作为考察指标。
HPLC色谱条件Kromasil ODS C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相乙晴-水-磷酸(15∶85∶0.5)；检测波长为254nm；柱温45℃；流速为1.00ml/min。
对照品溶液精密称取异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷适量，制成0.071mg/ml的对照品溶液。
供试品溶液的制备 取部分提取液高速离心5min，转速为10000转/min，取上清夜用微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液仪器试剂 岛津LC-10ATP泵，SPD-10AVP检测器，乙氰(色谱纯，迪马公司)，其于试剂都为分析纯，水(双蒸水)自制。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，采用外标法计算，即得。
表12-17正交试验结果分析实际提取量试验号 A B C D(空白)(mg/100生药材)11 1 1 1 106.7821 2 2 2 137.6931 3 3 3 138.9642 1 2 3 120.3252 2 3 1 141.3862 3 1 2 130.5073 1 3 2 166.9283 2 1 3 129.45
9 3 3 2 1 150.71K1/3127.81 131.34 122.25132.96K2/3130.73 136.17 136.24145.04K3/3149.03 140.06 149.09129.58R21.22 8.72 26.84 15.83注本实验所用蒲黄药材中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.17％表12-18方差分析表误差来源 I n MS F GA 795.89 2 397.9 1.99＞0.05B 117.05 2 58.52 0.2933 ＞0.05C 1083.952 541.97 2.72＞0.05误差 399.02 2 199.51以上结果表明以异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率计算，极差值(R)表明，各因素影响顺序C＞A＞B；但方差分析结果表明，A，B，C三因素均无显著性意义，考虑大生产条件与实验室提取条件的较大差异，为确保尽可能的提取出有效成分，经综合考虑，故确定蒲黄提取工艺为A3B1C3，既用10倍量的60％的乙醇提取3次，每次1小时。
3.3.3.6最佳工艺验证实验为了保证提取工艺的合理可行，称取100g蒲黄药材，按上述确定的提取工艺条件，进行验证实验。
对照品溶液浓度为0.071mg/ml的异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷对照品溶液。
供试品溶液的制备 用60％乙醇提取，合并取提取液，取部分提取液高速离心5min，转速为10000转/min，取上清夜用微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。
仪器试剂 岛津LC-10ATP泵，SPD-10AVP检测器，乙腈(色谱纯，迪马公司)，其于试剂都为分析纯，水(重蒸馏水)自制。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，采用外标法计算，即得。
表12-19蒲黄60％乙醇提取最佳工艺验证试验表异鼠李素-3-O-新 异鼠李素-3-O-新试验号 药材量 橙皮糖苷提取量 橙皮糖苷提取率(mg) (％)1 100 141.82 84.172 100 143.31 85.053 100 138.11 81.97结果表明三个验证试验结果相差不大，说明该工艺稳定可行。
综上所述，可确定蒲黄的提取条件为，加入10倍量60％乙醇(第一次加入13倍量，含3倍量的药材吸醇量)，浸泡1h，提取3次，每次1h。
4分离、浓缩与干燥工艺的研究4.1分离、浓缩工艺研究4.1.1蒲黄分离、浓缩工艺研究称取蒲黄药材10kg，用350目的滤布包裹，加60％的乙醇浸泡1h，回流提取3次，每次1h(提取温度为75-85℃)，合并提取液，用400目滤布滤过，滤液回收尽乙醇(温度70-80℃)，减压浓缩(温度70-80℃、真空度为0.02-0.04)至比重为1.15-1.20(60℃测)，得流浸膏，精密量取部分流浸膏测异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的提取率。
表12-20 蒲黄中试提取液中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的提取率异鼠李素-3-O-新橙皮糖 异鼠李素-3-O-新橙皮糖蒲黄药材量 提取率(％)苷理论含量(g/10kg) 苷实际提取量(g/10kg)10kg 16.32 11.75 72(注本试验药材中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的含量为0.16％)4.1.2蝼蛄分离、浓缩工艺研究称取蝼蛄药材10kg，加80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h(温度为70-80℃)，合并提取液，用260目滤布滤过，滤液回收乙醇(温度70-80℃)，减压浓缩(温度70-80℃、真空度为0.02-0.04MP)至比重为1.01得样品溶液，将样品溶液置于温度为1-4℃的环境下冷藏12h，后用260目的筛网过滤除去油层，下层样品溶液减压浓缩(温度70-80℃、真空度为0.02-0.04MP)至比重为1.10-1.15(60℃测)。
将以上两味药提取液浓缩到相应比重后，混合，加入辅料，干燥，制粒。
4.2干燥工艺研究4.2.1样品减压干燥时添加辅料的种类研究考察在前期醇提工艺的研究过程中，发现样品吸湿性很厉害，因为两味药均为乙醇提取，由于粘稠度大，故不适于喷雾干燥，可采用减压干燥。
为了利于干燥，可在干燥前加入一定的辅料，再进行干燥。实验方法为按醇提正交试验的最佳工艺分别提取200g蒲黄和蝼蛄药材，浓缩至大致相应比重后，混匀，分为四份，第一份加入12g可溶性淀粉；第二份加入12g微晶纤维；第三份加入12g乳糖；第四份加入12g磷酸氢钙。将辅料和浸膏混匀后置于真空干燥器中(温度为70℃，真空度为0.08Mpa)干燥得干膏。将干膏研细(相对湿度为40％)，精密称取2.0g于已经干燥至恒重的称量瓶中，将称量瓶置于相对湿度为70％的干燥器中，在72h内考察其吸湿率。具体数据如下表表12-21添加辅料的种类样品在72h内在相对湿度为70％的干燥器中的吸湿率样品 第一份第二份第三份 第四份称量瓶空 40.8415 42.1784 40.819436.8473重样品2.38952.32203.3984 2.2919重放置放置 吸湿 放置 吸湿 放置 吸湿 放置 吸湿时间后重 率％ 后重 率％ 后重 率％ 后重 率％1h 43.2517 0.86 44.5275 1.16 44.2435 1.33 39.1699 0.762h 43.2699 1.63 44.5416 1.77 44.2582 2.15 39.1884 1.193h 43.2857 2.29 44.5594 2.54 44.2728 2.34 39.1929 1.764h 43.2954 2.69 44.5742 3.17 44.2957 3.04 39.2091 2.298h 43.3673 5.74 44.6273 5.46 44.3469 6.19 39.2812 3.85
18h44.44558.9844.70588.84 44.427 9.76 39.36296.1827h43.509911.67 44.747810.6544.532513.0639.43879.2651h43.632516.80 44.826014.0244.621716.9439.527411.8972h43.687419.10 44.857915.4044.651219.0139.575012.75结果表明浸膏加微晶纤维和磷酸氢钙吸湿率较底。由于磷酸氢钙加入量太大(超过了1.5g/日用量)，故考虑以微晶纤维为主，磷酸氢钙为辅按一定比例混合作为辅料进行考察。
4.2.2微晶纤维、磷酸氢钙的加入量及比例实验方法按工艺分别提取250g蒲黄和250g蝼蛄药材，得混合后的浸膏，将其均分为四份。第一份加入12g微晶纤维，第二份加入9g微晶纤维，第三份加入9.6g微晶纤维和2.4g磷酸氢钙，第四份加入8g微晶纤维和4g磷酸氢钙。将四份样品置于真空干燥箱中干燥，得干膏。将干膏研细(相对湿度为40％)，精密称取2.0g于已经干燥至恒重的称量瓶中，将称量瓶置于相对湿度为70％的干燥器中，在72h内考察其吸湿率。
表12-22添加不同的辅料量和不同辅料比例在相同条件下其吸湿率样品 第一份 第二份 第三份 第四份放置放置 吸湿 放置 吸湿 放置 吸湿 放置 吸湿时间后重 率％ 后重 率％ 后重 率％ 后重 率％1h 43.71441.67 36.98192.87 45.07601.65 46.44841.382h 43.73482.39 37.00173.73 45.09712.38 46.46962.023h 43.75713.18 37.02324.67 45.11823.13 46.49322.694h 43.77973.97 37.04295.52 45.13693.78 46.51433.358h 43.82735.64 37.163910.7845.21786.62 46.66787.9418h 43.94749.86 37.221813.2945.314410.0146.72359.6127h 44.017312.3237.318717.5045.367311.8746.830712.8251h 44.078214.4637.423322.0445.423713.8446.917815.4272h 44.190818.4137.443422.9245.525717.4247.028418.73结果表明浸膏中加入微晶纤维∶磷酸氢钙(4∶1)可达到较好干燥效果，并使吸湿性较小。
5制剂成型工艺研究5.1制粒工艺研究因为浸膏中加入的辅料中含有较多的微晶纤维，使干膏的干压性能良好，并有良好的成型性，故可将干膏粉碎过5号筛后，直接干法制粒即可。
5.2颗粒临界相对湿度的研究实验方法取7个底部分别盛有不同浓度的硫酸溶液的玻璃干燥器，放入25℃恒温培养箱内恒温24小时，此时干燥器内的相对湿度分别为一定值。取7个已恒重的称量瓶底部分别加入2g颗粒，准确称重后分别置于上述玻璃干燥器中(称量瓶盖打开)，于25℃恒温培养箱内保存96小时(吸湿基本平衡)，以水分含量为纵坐标，相对湿度为横坐标作曲线，从曲线上可得颗粒的临界相对湿度为52％，吸湿性得到较好的改善。
表12-23各种相对湿度条件下颗粒的吸湿率
H2SO4∶H2O 相对湿度 吸湿前浸膏重吸湿后浸膏重 吸湿百分率V∶V (％) (g) (g) (％)79.6∶100202.0608 2.0647 0.1969.4∶100302.0689 2.0865 0.8559.2∶100402.0597 2.0847 2.0549.1∶100502.0597 2.1503 4.2038.9∶100602.0632 2.1704 5.8928.7∶100 70 2.0514 2.23489.2518.5∶100 80 2.0642 2.391916.17结果颗粒临界相对湿度为52％。表明本品在温度25℃，相对湿度52％以下的环境下，颗粒吸湿性较小。颗粒分装时，环境湿度必须控制在52％以下。
5.3颗粒流动性测定测定休止角为保证工业化生产时分剂量的准确性，要求填充颗粒有良好的流动性。取制粒后颗粒15g，采用固定圆锥底法测定休止角。
表12-24颗粒休止角试验号1 2 3休止角(°)3634 37从上表可知，颗粒休止角均小于40°，流动性较好，可满足工业大生产的要求。
5.4堆密度测定及空胶囊型号的确定堆密度的测定采用量筒法测定，结果见下表。
表12-25堆密度测定结果试验号 1 2 3 平均堆密度(g/mm3)0.580 0.585 0.581 0.582本胶囊按临床用量及上述试验结果拟定装0.32g。依据本品颗粒的平均堆密度0.582g/mm3，结合空胶囊规格型号及近似的可装容量，1号胶囊的容积为0.55ml，可装容量为0.55×0.582g/mm3＝0.41g，本品0.32g可以装下，最后确定1号空心胶囊。
四、具体实施方法制剂处方如下蒲黄833g 蝼蛄833g 微晶纤维素96g 磷酸氢钙24g制成1000粒胶囊或1000片包衣片制法以上两味，蒲黄用布包好，加入10倍量60％乙醇浸泡1小时后提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收尽乙醇并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃测)；蝼蛄加8倍量80％的乙醇浸泡1小时，提取2次，每次提取1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收尽乙醇并浓缩至相对密度1.01(60℃测)，冷藏12h，除去上层油，减压浓缩至比重为1.10-1.15(60℃测)，将蝼蛄样品溶液和蒲黄提取物混合，加入辅料(微晶纤维素和磷酸氢钙)，真空干燥，粉碎，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得；或者真空干燥后，粉碎，压片制得包衣片1000片。
按制剂工艺路线，经三批中试，平均收膏率(除去脂肪油后)为12.0％(加入一定重量辅料，干燥后，称重，再减去辅料重量，计算而得。)，则833×2×12％＝199.92g，应得199.92g干膏，加入微晶纤维96g、磷酸氢钙24g，则199.92+96+24＝319.92g。拟装0.32g/粒，则319.92÷0.32＝1000粒。
原方一日服用生药材20g，而每粒胶囊(或包衣片)相当于1666/1000＝1.666g生药材，日服剂量为20/1.666＝12粒，若日服三次，则每次服用量为4粒/次。
装量本胶囊(或包衣片)每粒装0.32g/粒。
中试规模生产研究资料及相关生产数据中试规模生产相关生产数据根据筛选出的工艺条件，在成都恩威制药集团研究所中试中心进行放大中试生产，连续试制三批中试样品，中试生产数据见下表。
表12-38 中试生产数据

结果表明，该工艺连续生产的稳定性好，工艺条件易控制可行。设备为通用制药设备，适合工业生产。
中试样品进行质量考察，符合质量标准要求，检查结果见下表。
表12-39 中试成品质量检验结果

以上工艺表明
本品按中国药典2000年版制剂通则胶囊剂项下有关规定、本品质量标准草案、中国药典2000年版微生物限度检查法进行检查，结果符合规定。
本制剂工艺稳定，重现性较好。
三批中试样品的异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷转移率分析(1)030805共投药材20kg，其中蒲黄10kg，蒲黄药材中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.19％，故应含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.84kg，每g颗粒含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量为3.71mg，故共含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷14.25g，转移率为14.25/19＝75.00％。
(2)030807共投药材20kg，其中蒲黄10kg，蒲黄药材中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.19％，故应含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.92kg，每g颗粒含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量为3.83mg，故共含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷15.01g，转移率为15.01/19＝79.00％。
(3)030809共投药材20kg，其中蒲黄10kg，蒲黄药材中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量为0.19％，故应含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.86kg，每g颗粒含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量为3.89mg，故共含异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷15.01g，转移率为15.01/19＝79.00％。
前列通爽胶囊，由成都和康药业有限责任公司研制，功能化瘀散结，通窍利水，主治前列腺增生症，由成都百康医药工业药理毒理研究院承担主要药效学实验研究(略去该实验报告，仅将其“目录”附后)，报告结果如下(一)前列腺增生模型试验(1)丙酸睾丸素致大鼠前列腺增生试验结果显示，6.66和3.33g/kg前列通爽胶囊均可显著降低前列腺重量和前列腺指数(P＜0.01)，对模型动物前列腺病理组织变化有显著改善作用(P＜0.01)。
(2)家兔前列腺增生模型尿流动力学试验结果显示，6.67～1.67g/kg前列通爽胶囊能显著改善前列腺增生家兔的排尿功能(P＜0.01)，显著减小前列腺重量、系数和体积，改善模型动物前列腺病理组织变化(P＜0.01)。
(二)活血化瘀试验(1)大鼠血液流变学试验显示，6.67～1.67g/kg前列通爽胶囊分别能明显、显著或极显著降低血瘀模型大鼠全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原等各项血粘度指标(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)，显著改善血瘀模型大鼠血液粘滞的状态。
(2)改善小鼠微循环障碍试验显示，6.67～3.33g/kg前列通爽胶囊具有明显增加小鼠耳廓毛细血管网交点开放数(P＜0.05)，明显或显著对抗耳廓微静脉和微动脉血管收缩，加快血流速度(p＜0.05和P＜0.01)，改善血流流态的作用(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)。
(3)抗小鼠尾血栓形成试验显示，6.67～1.67g/kg前列通爽胶囊对角叉菜所致小鼠尾血栓形成均有极显著、显著或明显抑制作用(P＜0.001、P＜0.01或P＜0.05)，最大血栓形成抑制率为70.11％。
(三)泌尿系统功能试验(1)大鼠利尿试验显示，6.67～1.67g/kg前列通爽胶囊均不能明显增加大鼠尿量(P＞0.05)。
(2)尿液成分分析试验显示，6.67～1.67/kg前列通爽胶囊分别能极显著或明显升高尿液PH值(P＜0.001或P＜0.05)，对大鼠尿液比重、尿胆原、尿糖、胆红素、酮体、红细胞、蛋白、亚硝酸盐和白细胞均无明显影响(P＞0.05)。
(四)抗炎试验显示6.67和3.33g/kg前列通爽胶囊均能显著抑制小鼠棉球肉芽增生肿胀(P＜0.01)，但6.67～1.67g/kg前列通爽胶囊对二甲笨所致小鼠耳肿胀和角叉菜胶所致大鼠足肿胀均没有明显抑制作用(P＞0.05)。
(五)镇痛试验显示6.67和3.33g/kg前列通爽胶囊分别能明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数(P＜0.05)，分别能明显和显著延长疼痛发作的潜伏期(P＜0.05和P＜0.01)，最高镇痛率可达52.81％。对热板所致小鼠疼痛有一定抑制的趋势，但没有统计学意义(P＞0.05)，最大镇痛率为65.76％。
结论前列通爽胶囊具有抗前列腺增生，改善模型动物排尿功能，改善血液流变性和微循环障碍，对抗肉芽组织增生和镇痛等作用。
同类产品主要从缩小前列腺体积的角度设计药效学实验方案，再配以镇痛、抗炎、活血化瘀、利尿等实验。但前列腺增生症的基本病理环节为增大的前列腺压迫尿道致后尿道狭窄、弯曲、变长，使尿道阻力增加，膀胱出口梗阻，进而表现为尿线变细、排尿费力、中断、尿不尽、甚或尿潴留等。其基本的病理改变为下尿路尿液的排泄障碍，而不是尿液的生成障碍。本研究设计了睾酮致家兔前列腺增生的膀胱出口梗阻模型，并应用先进的尿流动力学检测仪检测该制剂对上述模型尿流率、PQ值(反应梗阻的程度)、尿道压等参数的影响。其模型的设计及实验方法的选择更符合实际、接近临床，与同类产品比较有一定的创新性。
本品经过详细的制备工艺研究及中试生产，证实了工艺是科学、可行的，药效学研究证实本品具有与功能主治一致的药理作用，毒理试验表明本品基本无毒副作用，质量标准可基本达到控制本品质量的目的，3个月的初步稳定性研究表明本品质量稳定。
该制剂在成都中医药大学附属医院经临床医用多年。临床研究表明其疗效确切，起效快，不但可缓解BPH患者的各项主观症状，而且对各项客观指标也有较好的改善作用。
此外，若将提取蝼蛄的溶剂乙醇改用醋酸乙酯或石油醚代替，仍属本专利的保护范围；对蝼蛄醇提液中脂肪的分离，若采用冷冻以外的普通分离方式，如萃取等，应落入本发明的保护范围；本发明处方中关于蒲黄与蝼蛄等重量份的提法应理解为大致相等，而不是一个绝对化既念(中药材因产地、季节等因素的不同，其药用成分的含量存在着差异)。
附前列通爽胶囊主要药效学试验报告目录摘要20、前列通爽胶囊主要药效学试验资料及文献资料20.1抗前列腺增生模型试验(1)丙酸睾丸素引起大鼠前列腺增生试验(2)家兔前列腺增生模型尿流动力学试验20.2活血化瘀试验(1)大鼠血液流变学试验(2)改善小鼠微循环障碍试验(3)抗小鼠尾血除形成试验20.3改善泌尿系统功能试验(1)大鼠利尿试验(2)尿液成分分析试验20.4抗炎试验(1)二甲苯所致小鼠耳肿胀试验
(2)大鼠角叉菜胶性足肿胀试验(3)小鼠棉球肉芽肿胀试验20.5镇痛试验(1)小鼠热板镇痛试验(2)小鼠扭体镇痛试验20.6小结20.7主要参考资料
权利要求
1.一种治疗前列腺增生症的药物，由中药材的提取物以及辅剂组成，其剂型为口服剂型，其特征是，所述中药材的提取物分别为蒲黄经乙醇的提取物，以及与蒲黄等重量份的蝼蛄经乙醇提取，再经分离脂肪后的提取物。
2.根据权利要求1所述的治疗前列腺增生症的药物，其特征是，所述中药材的提取物分别为蒲黄经8-10倍量的60％-95％的乙醇的提取物，以及相应蝼蛄经8-10倍量的60％-90％的乙醇提取，再经冷冻分离脂肪油层后的提取物。
3.根据权利要求2所述的治疗前列腺增生症的药物，其特征是，所述中药材的提取物分别为蒲黄经8-10倍量的60％-80％的乙醇的提取物，以及相应蝼蛄经8-10倍量的70％-80％的乙醇提取，再经冷冻分离脂肪油层后的提取物。
4.根据权利要求3所述的治疗前列腺增生症的药物，其特征是，所述中药材的提取物分别为蒲黄经10倍量的60％的乙醇的提取物，以及相应蝼蛄经8倍量的80％的乙醇提取，再经冷冻分离脂肪油层后的提取物。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的治疗前列腺增生症的药物，其特征是，所述剂型为包衣片或胶囊；所述辅剂为微晶纤维素。
6.根据权利要求5所述的治疗前列腺增生症的药物，其特征是，所述辅剂还有磷酸氢钙；所述各组分重量配比如下蒲黄原药833份，蝼蛄原药833份，微晶纤维素96份，磷酸氢钙24份。
7.一种如权利要求1所述的治疗前列腺增生症的药物的制备方法，其特征是，包括下列步骤a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄采用8-10倍量的60％-95％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1-2小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8-10倍量的60％-90％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1.5-2小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液回收尽乙醇，在1-4℃冷冻8-12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合进行减压浓缩，加入辅料，再经干燥后，制成口服剂型。
8.根据权利要求7所述的治疗前列腺增生症的药物的制备方法，其特征是，包括下列步骤a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄用滤布包裹，并采用8-10倍量的60-80％的乙醇浸泡1-1.5小时，回流提取2-3次，每次1小时，过滤，滤液回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8-10倍量的70％-80％的乙醇浸泡1-2小时，回流提取2-3次，每次1.5小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇，在1-4℃冷冻12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合进行减压浓缩，加入辅料，再经干燥后，制成口服剂型。
9.根据权利要求8所述的治疗前列腺增生症的药物和制备方法，其特征是，包括下列步骤a)称取等重量的中药材蒲黄、蝼蛄备用；b)将上述蒲黄用滤布包裹，并采用10倍量的60％的乙醇浸泡1小时，回流提取3次，每次1小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇后，得到蒲黄醇提液；c)将上述蝼蛄采用8倍量的80％的乙醇浸泡1小时，回流提取2次，每次1.5小时，过滤，弃去药渣，合并滤液，滤液经回收尽乙醇后，在1-4℃冷冻12小时，分离除去脂肪油层，得到蝼蛄去油醇提液；d)将上述蒲黄醇提液和蝼蛄去油醇提液分别或者混合，在温度为70-80℃，真空度0.02-0.04MP下进行减压浓缩，加入重量比为4∶1的微晶纤维素和磷酸氢钙作为辅料，再经干燥后，粉碎制粒，制成胶囊。
全文摘要
本发明公开了一种治疗前列腺增生症的药物及其制备方法。由中药材的提取物以及辅剂组成，该中药材提取物分别是蒲黄经乙醇的提取物以及与蒲黄等重量份的蝼蛄经乙醇提取，再经分离脂肪后的提取物。分别以8－10倍量的60－95％的乙醇浸取蒲黄制得蒲黄醇提液，以及以8－10倍量的60－90％的乙醇浸取蝼蛄，经分离除去脂肪，得到蝼蛄去油醇提液。再将二者减压浓缩，加入辅料，干燥后制成口服剂型。本发明经临床应用证明，疗效确切，起效快，可缓解前列腺增生症患者各项主观症状，而且对各项客观指标也有较好的改善作用。
文档编号A61P13/00GK1583029SQ20041002269
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月4日 优先权日2004年6月4日
发明者邵继春, 陈谨, 李文军 申请人:成都和康药业有限责任公司