治疗高血脂症的组合物的制作方法

专利名称：治疗高血脂症的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗高血脂症的新的组合物，特别是含有阿昔莫司和洛伐他汀及药用辅料的组合物。
背景技术：
洛伐他汀(Lovastatin)是国内外进行了广泛研究并已在多国上市的HMG-CoA还原酶抑制剂，它通过在体内选择性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶HMG-CoA还原酶，使胆固醇的合成减少，也使低密度脂蛋白受体合成增加，主要作用部位在肝脏，结果使血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平降低，由此对动脉粥样硬化和冠心病的防治产生作用。本品还降低血清甘油三酯水平和增高血高密度脂蛋白水平。但与其他他汀类药物一样，洛伐他汀最重要的不良反应是肝毒性和肌毒性。其中，肝毒性主要表现为转氨酶升高，并且随着剂量的增加，肝转氨酶升高的发生率增加，但在治疗剂量范围内，有症状的肝病的报道非常罕见。肌毒性主要表现为不明原因的肌痛或肌无力，可能伴随肌酸激酶(CK)升高至正常上限10倍以上，如继续发展可能会导致横纹肌溶解、肌红蛋白尿和急性肾功能衰竭。肌毒性的发生率也与剂量相关。
阿昔莫司(Acipimox)是一种人工合成的烟酸衍生物，该药口服后吸收迅速，服后2小时内血浆浓度即达高峰，半衰期为2小时。阿西莫司与血浆蛋白结合，几乎不变地从尿中排出，主要作用于脂肪组织，抑制脂肪组织释放非酯化脂肪酸，减少TG、VLDL及LDL的生成。并通过激活脂蛋白脂肪酶，加速VLDL的降解，通过抑制肝脂肪酶而增高血浆HDL水平。阿昔莫司是一种安全、有效及易耐受的血脂调节药，尤其适用于血清TG水平明显升高、HDL-C水平明显低下，TC水平轻度上升或正常的糖尿病患者。
目前，该领域的研究趋势是将两种不同作用机制的血脂调节药制成复方制剂，可以发挥协同作用，同时减少毒副作用。
欧洲专利申请EP0373507公开了HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀、洛伐他汀、velostatin分别为5mg、10mg、20mg、40mg和烟酸500mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的实验数据，也没有涉及阿昔莫司和洛伐他汀组合物及最佳配比。
《洛伐他汀和烟酸肌醇单用和合用治疗高血脂症的比较》，发表于《心血管病学进展》1996年第17卷第六期，公开洛伐他汀和烟酸肌醇合用治疗高血脂症；《普伐他汀和烟酸肌醇单用和合用治疗高血脂症的疗效观察》，发表于《中国动脉硬化杂志》1997年，第5卷第3期，公开普伐他汀和烟酸肌醇合用治疗高血脂症。二者均未涉及阿昔莫司和洛伐他汀组合物及最佳配比。
美国专利US5260305A公开了HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀和烟酸及其衍生物的组合物，具体公开了规格为普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿昔莫司750mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的实验数据，也没有涉及阿昔莫司和洛伐他汀组合物及最佳配比。
中国专利申请CN1425374A公开了阿昔莫司和洛伐他汀组合物，公开的比例是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比为25～50∶1，优选的比例是25∶1或37.5∶1，但该专利申请的说明书中存在以下缺陷1)证明有益效果的实施例中试验是在固定剂量下(即阿昔莫司25mg/kg与洛伐他汀1mg/kg)进行实验的，只是对已设定剂量的复方进行了实验，并没有按照科学的方法在有效剂量范围内对复方的剂量及合理配比进行筛选，无法证明上述比例是如何得出的。
2)实施例中单方的有效剂量设置不合理。比如临床上洛伐他汀的剂量为10～20mg/次，1次/日，每日量最大不超过80mg。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为1.0-1.5mg/kg。但据文献报道，在高脂饲料导致的大鼠高脂血症模型上洛伐他汀使血清中低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平显著降低的有效剂量为20mg/kg[5]，在Triton WR 1399导致的大鼠高脂血症模型和正常兔子和豚鼠上，洛伐他汀10mg/kg能使血清中低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平显著降低[6、7]。根据国内大量文献报道，洛伐他汀动物试验的剂量不能直接按体表面积为单位的剂量等效原则推至人，即动物实验的剂量大。故将洛伐他汀的剂量设为1mg/kg是不合理的。
3)实验方案设计不合理。在药效学和毒性实验中都没有将复方与相同剂量的两个单方同时进行比较研究，没有从实验的角度来说明复方设定的依据，即无法说明组成复方后的药效及毒性与单方相比的变化情况。此外，通常大鼠长期毒性试验最长为6个月，而在该专利申请的实施例为1年时间，不符合实验常规。
4)临床使用不方便。由于洛伐他汀本身临床使用就是一日1次，组成复方后反而成了每日使用1～4次(优选2次)，缺乏科学依据。
2001年12月，由KOS公司研制开发的洛伐他汀和烟酸(缓释部分)组成的复方制剂，获美国FDA批准上市，每片含烟酸500mg，洛伐他汀20mg，临床应用效果较好。但在临床试验中，缓释烟酸洛伐他汀引起的主要不良反应是潮红(如皮肤红、痒、热、刺痛，主要由烟酸引起)，其发生率为53％～83％，患者耐受性差，停药率为19％，其中8％的停药率是由于潮红引起的。
发明目的本发明的目的是通过一系列科学的筛选实验，提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其优点是作用强、毒副作用低和使用方便。本药物含有特定比例的阿昔莫司和洛伐他汀，由于两药作用机制不同，组成组合物后降脂作用将更加全面，并且两药合用有协同作用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方；此外，通过降低组合物中洛伐他汀的用量，使组合物在有效降低血脂水平的同时又无明显的毒副作用，同时本组合物一日只需用药一次，用药方便，这将大大提高患者的顺应性。
技术方案本发明的组合物由阿昔莫司和洛伐他汀以及药用辅料组成，其中阿昔莫司和洛伐他汀的重量比为(5～40)∶1，优选的比例的是(10～30)∶1，进一步优选的比例的是20∶1；其中阿昔莫司优选做成缓释部分。该组合物的药物制剂的剂型，包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等固体制剂，可以按照本领域公知的一般制剂方法制备，阿昔莫司含量相当于在将组合物给药时约200～750mg的日剂量，洛伐他汀含量相当于10～80mg的日剂量，其中优选洛伐他汀含量相当于10～30mg的日剂量。
本发明的组合物在制成固体制剂，如片剂或胶囊时，为达到持久的治疗效果，优选地将有效量的阿昔莫司制成缓释部分，再与有效量的洛伐他汀共同制成缓释制剂，如缓释片、缓释胶囊等。相应地，可药用的辅料包括稀释剂，如淀粉、乳糖、甘露醇、预胶化淀粉、糊精、微晶纤维素；崩解剂，如羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠；缓释剂，如乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素-4M、羟丙基甲基纤维素-15M；优特奇RS-100、RL100、RS30D、RL30D、NE30D，以及苏丽丝(乙基纤维素的水分散体)粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮，交联聚乙烯吡咯烷酮，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。
同KOS公司研制开发的洛伐他汀和烟酸(缓释部分)组成的复方制剂相比，本发明药物组合物用阿昔莫司代替烟酸，阿昔莫司适用范围与烟酸相似，但是与烟酸相比具有如下优点①无初效反应，半衰期较长；②抗脂肪分解作用的持续时间较长，效能较强，无非酯化脂肪酸的反跳现象；③能明显改善葡萄糖耐受性，能降低空腹血糖15％左右，不与口服降糖药发生交互作用，故能用于糖尿病患者；④不引起尿酸代谢变化，可用于高尿酸血症患者；⑤出现肝脏转氨酶高者极少；⑥服药后有面部潮红及皮肤搔痒症状者仅6％左右，明显少于服烟酸治疗者，且多数在服药几天后逐渐自行减轻或消失，一般不影响患者继续治疗。
本发明的组合物通过药理方面的研究工作，表明当用本发明的组合物时，尤其是采用优选的配比时，与单独应用有效量的阿昔莫司或洛伐他汀时相比，本发明的组合物给出令人吃惊的更好效果，同时毒性没有增加，因而用药量可选安全范围大，疗效持续时间长，综合效果好，使用方便。本发明的组合物可以每日1～2次给药，优选为每日一次。
具体实施例方式现通过如下实例进一步说明本发明的内容，但本发明的应用范围不仅限于下列实例。
实例1a、阿昔莫司200g乳糖30g羧甲基淀粉钠30g微晶纤维素 18g6％PVP的无水乙醇溶液100g硬脂酸镁2g
制备工艺阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
b、洛伐他汀10g羟丙基纤维素15g预胶化淀粉 10g6％PVP的无水乙醇溶液30g山榆酸甘油酯1g制备工艺洛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的洛伐他汀和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。
实例2a、阿昔莫司200g乳糖30g羧甲基淀粉钠30g微晶纤维素 18g6％PVP的无水乙醇溶液100g硬脂酸镁2g制备工艺阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
b、洛伐他汀20g羟丙基纤维素30g预胶化淀粉 20g
6％PVP的无水乙醇溶液50g山榆酸甘油酯2g制备工艺洛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的洛伐他汀和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。
实例3a、阿昔莫司300g羟丙基甲基纤维素-4M 40g微晶纤维素 30g8％PVP的无水乙醇溶液150g硬酯酸镁2g制备工艺阿昔莫司过100目筛，羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素混合均匀，加入8％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
b、洛伐他汀20g羧甲基纤维素钠 30g乳糖20g6％PVP的95％乙醇溶液50g硬酯酸镁2g制备工艺洛伐他汀过100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过80目筛，称取处方量的洛伐他汀和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例4a、阿昔莫司600g
甘露醇 10g乳糖40g微晶纤维素 20g6％PVP的95％乙醇溶液120g硬酯酸镁2g制备工艺阿昔莫司过100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
b、洛伐他汀15g预胶化淀粉 50g甘露醇 50g6％PVP的95％乙醇溶液100g微粉硅胶5g制备工艺洛伐他汀过100目筛，预胶化淀粉、甘露醇过80目筛，称取处方量的洛伐他汀和预胶化淀粉、甘露醇混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例5a、阿昔莫司500g乳糖30g羟丙基甲基纤维素-15M20g8％PVP的95％乙醇溶液150g山榆酸甘油酯2g制备工艺阿昔莫司过100目筛，乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M混合均匀，加入8％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。
b、洛伐他汀20g羟丙基纤维素15g糊精20g6％PVP的95％乙醇溶液50g滑石粉 2g制备工艺洛伐他汀过100目筛，羟丙基纤维素、糊精过80目筛，称取处方量的洛伐他汀和羟丙基纤维素、糊精混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的滑石粉。
c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。
实例6a、阿昔莫司200g空白丸芯250g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g制备工艺将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机(台湾元成机械厂)，入风压力0.5bar，入风温度30℃，喷枪压力(CYL)3bar，雾化压力(CAP1)0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、洛伐他汀30g空白丸芯90g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 50g制备工艺将洛伐他汀过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，转盘转速160rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
c、将a和b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与洛伐他汀的重量分别为200mg和30mg进行填充，即可。
实例7a、阿昔莫司300g空白丸芯250g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g制备工艺将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸Surelease 90g滑石粉 1g纯水50g制备工艺将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入转盘，开造粒包衣机，入风压力1.0bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 1.5bar，蠕泵5％，转盘转速180rpm，喷入Surelease的纯水溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。
c、按照实例5中b的要求制得洛伐他汀小丸，与本例b中制得的阿昔莫司小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与洛伐他汀的重量分别为300mg，和30mg进行填充，即可。
实例8a、阿昔莫司200g空白丸芯200g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g制备工艺将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速165rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、洛伐他汀40g空白丸芯150g
7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 150g制备工艺将洛伐他汀过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速120rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
c、将a与b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与洛伐他汀的重量分别为200mg和40mg进行填充，即可。
实例9a、阿昔莫司300g空白丸芯300g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g制备工艺将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、a中制得的含阿昔莫司小丸乙基纤维素 40g硬脂酸 70g聚乙二醇-6000 6g滑石粉 12g95％乙醇1000g制备工艺将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风温度30℃，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 1.0bar，蠕泵6％，转盘转速175rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。
c、洛伐他汀40g空白丸芯150g7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 150g
制备工艺将洛伐他汀过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 0.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速120rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
d、将b与c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与洛伐他汀的重量分别为300mg和40mg进行填充，即可。
实例10阿昔莫司和洛伐他汀复方治疗大鼠高血脂症的配比筛选[摘要]本试验目的在于通过筛选确定毒性低、作用强和使用方便的阿昔莫司和洛伐他汀复方制剂配伍组成。采用正常Wistar大鼠或高脂饲料致大鼠高脂血症模型。受试品阿昔莫司为鲁南制药股份有限公司生产，洛伐他汀由浙江瑞邦大药厂生产。结果发现，饲以高脂饲料14天后，大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇均明显升高，形成高脂血症模型。给模型大鼠灌服阿昔莫司(100～500mg/kg)和(或)洛伐他汀(10～50mg/kg)14天后，血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均明显下降，高密度脂蛋白胆固醇升高。单用其中一种药或两药伍用，其效果随剂量递增加强。
结果表明，阿昔莫司和洛伐他汀伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显治疗作用，效果与两种药物的剂量相关。从药效和毒性两方面分析，洛伐他汀10mg/kg和阿昔莫司200mg/kg伍用较好。
1试验目的通过筛选确定阿昔莫司和洛伐他汀复方制剂组成，以达到复方制剂毒副作用低、作用全面和增强、使用方便(如每日1次用药)之目的。在上述实验基础上按有关要求，进行复方制剂的量效关系和多组份相互影响的试验，为申报开发复方制剂提供实验依据。
2受试药物2.1烟酸衍生物药品名称阿昔莫司(Acipimox)批号0207002
纯度大于99.7％生产单位鲁南制药股份有限公司保存条件阴凉干燥处保存，有效期1年半。
配制方法临用前用1％CMC混匀，配成试验所需浓度。
2.2他汀类药物药品名称洛伐他汀(Lovastatin)批号020205纯度大于99.0％生产单位浙江瑞邦大药厂保存条件阴凉干燥处保存，有效期2年。
配制方法临用前用1％CMC混匀，配成试验所需浓度。
3实验动物3.1品系和来源Wistar大鼠，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖，实验动物质量许可证号为医动字D01-3039。
3.2体重和性别年龄为9周～10周。体重180-220g。雄性。
3.3饲养条件动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养5只动物，饲以本院实验动物中心专门为大鼠配制的膨化饲料，自由饮水。动物实验条件合格证号为医动字D01-2051。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等1周，选择健康动物进入试验。
4大鼠高脂血症模型制备[1]大鼠高脂血症模型采用高脂饲料致高脂血症法。高脂饲料配方如下基础饲料87.3％、胆固醇2％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、猪胆盐0.5％，各成分保证混合均匀。连续2周。给药期间隔天给予高脂饲料，其余时间给予正常饲料。
5阿昔莫司和洛伐他汀对正常大鼠血脂的影响[1]
5.1剂量选择临床上阿昔莫司剂量为250mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超过1200mg[2]。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为50mg/kg/day。结合文献报道[3]，加之本试验采用1次/日给药方法，故在本试验中阿昔莫司剂量设为100、200、300、400、500mg/kg。
临床上洛伐他汀的剂量为10～20mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为0.2-0.3mg/kg)，1次/日，每日量最大不超过80mg[4]。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为1.0-1.5mg/kg。文献报道，在高脂饲料导致的大鼠高脂血症模型上洛伐他汀20mg/kg能使血清中低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平显著降低，60mg/kg效果显著[5]，在Triton WR 1399导致的大鼠高脂血症模型和正常兔子和豚鼠上，洛伐他汀10mg/kg能使血清中低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平显著降低[6，7]。故在本试验中洛伐他汀剂量设为10、20、30、40、50mg/kg。
5.2组别设置依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，把正常动物按照随机原则分为(1)正常对照组；(2)阿昔莫司100mg/kg组；(3)阿昔莫司200mg/kg组；(4)阿昔莫司300mg/kg组；(5)阿昔莫司400mg/kg组；(6)阿昔莫司500mg/kg组；(7)洛伐他汀10mg/kg组；(8)洛伐他汀20mg/kg组；(9)洛伐他汀30mg/kg组；(10)洛伐他汀40mg/kg组；(11)洛伐他汀50mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀20mg/kg组；(14)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀30mg/kg组；(15)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀40mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀20mg/kg组；(17)阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀30mg/kg组；(18)阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀40mg/kg组(19)阿昔莫司400mg/kg和洛伐他汀20mg/kg组。每组6只，雄性。
5.4给药临床给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃4天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。14:00～16:00给药。
5.5检测指标血清化学指标包括总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)检测试剂采用北京中生生物工程高技术公司产品，用SABA/18全自动生化分析仪测定；其余试剂采用日本罗氏试剂公司产品，用日立7020自动生化分析仪测定。测定方法参照试剂说明书取血样前禁食16小时。
6阿昔莫司和洛伐他汀对模型大鼠血脂的影响6.1剂量依据同正常大鼠实验。
6.2组别设置(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司100mg/kg组；(4)阿昔莫司200mg/kg组；(5)阿昔莫司300mg/kg组；(6)阿昔莫司400mg/kg组；(7)阿昔莫司500mg/kg组；(8)洛伐他汀10mg/kg组；(9)洛伐他汀20mg/kg组；(10)洛伐他汀30mg/kg组；(11)洛伐他汀40mg/kg组；(12)洛伐他汀50mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg组；(14)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀20mg/kg组；(15)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀30mg/kg组；(16)阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀40mg/kg组；(17)阿昔莫司600mg/kg和洛伐他汀15mg/kg组；(18)阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀30mg/kg组；(19)阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀40mg/kg组；(20)阿昔莫司400mg/kg和洛伐他汀20mg/kg组。按血清总胆固醇水平均匀原则随机分组。每组10只。
6.3给药临床给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃14天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。
6.4检测指标同正常大鼠实验。
7阿昔莫司和洛伐他汀复方的量效关系试验7.1组别设置设定3个复方剂量组，同时设正常对照组、模型对照组，共5组，每组10只。
7.2给药与观测指标同前。
8阿昔莫司和洛伐他汀复方不同组分相互影响试验8.1组别设置共设10组正常对照组、模型对照组、阿昔莫司200mg/kg、300mg/kg二剂量组、洛伐他汀10mg/kg、30mg/kg二剂量组、阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg组复方组、阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀30mg/kg组复方组。每组10只。
8.2给药和指标的观察同前。
9试验结果9.1阿昔莫司和洛伐他汀对正常大鼠血脂的影响正常大鼠给药4天后，阿昔莫司、洛伐他汀和联合用药组的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有所降低，高密度脂蛋白胆固醇升高(表1)。给药后血清甘油三酯略有下降，但无统计学差异。联合用药组的效果优于单药。
表1阿昔莫司和洛伐他汀及配伍对正常大鼠血脂的影响


注*与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.019.2阿昔莫司和洛伐他汀对模型大鼠血脂的影响大鼠饲以高脂饲料14天后分组给药。阿昔莫司的剂量从100～500mg/kg，洛伐他汀的剂量从10～50mg/kg，组成联合用药组。给药14天后，与模型对照组比较，阿昔莫司和洛伐他汀各剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均下降(表2)。综合分析，阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀30mg/kg联合用药效果显著，对血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均表现出协同作用。
部分阿昔莫司剂量组及与洛伐他汀联合用药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶升高，高剂量组升高幅度大(表3)。各组大鼠血清中肌酸激酶活性变化趋势与血清丙氨酸氨基转移酶相似。因此在复方中应尽可能降低洛伐他汀的剂量，以阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg剂量配伍较好，对血清中肌酸激酶与血清丙氨酸氨基转移酶活性的影响较小。
表2 阿昔莫司和洛伐他汀及复方对模型大鼠血脂的影响


注与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表3阿昔莫司和洛伐他汀及复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的影响

注与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0019.3阿昔莫司和洛伐他汀复方的量效关系给药14天后，用药组的血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇明显低于模型对照组，高密度脂蛋白胆固醇明显高于模型对照组(表4)。效果与剂量呈正相关，随剂量递增，降血脂作用越明显。
表4 阿昔莫司和洛伐他汀复方治疗大鼠高脂血症的量效关系


注与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，***P＜0.001；9.4阿昔莫司和洛伐他汀复方中不同组分相互影响试验连续灌服14天，结果发现阿昔莫司、洛伐他汀和两者联合用药均能明显降低模型大鼠血清的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、明显升高高密度脂蛋白胆固醇(表5)。综合分析，阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和洛伐他汀30mg/kg联合用药组效果显著，与同剂量的阿昔莫司或洛伐他汀单方组相比，有明显的统计学差异。但为减少毒副作用，在有显著疗效的前提下选择小剂量联合使用，即优选阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg组成的复方，其各项指标均呈协同作用。
表5 阿昔莫司和洛伐他汀复方中不同组分治疗大鼠高脂血症的效果

注与正常对照组比较，###P＜0.001，#P＜0.05；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与阿昔莫司200mg/kg组比较，！！！P＜0.001；与洛伐他汀10mg/kg组比较，$P＜0.05，$$$P＜0.001与阿昔莫司300mg/kg组比较，^^^P＜0.001；与洛伐他汀30mg/kg组比较，&&&P＜0.00110结论阿昔莫司和洛伐他汀伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，其中阿昔莫司200mg/kg和洛伐他汀10mg/kg剂量伍用效果显著，同时又无明显的毒性作用。此外，本试验结果发现，高剂量的阿昔莫司每日给药1次也有显著的降血脂作用，且毒性小，这为阿昔莫司和洛伐他汀组成复方，实现每日给药1次提供了实验依据。
实例11小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方急性毒性试验摘要 预备试验中，小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及其单药80.0mg/只，不能引起动物死亡。故改LD50测定为最大耐受量(MTD)测定。
试验动物按体重均衡的原则分成4组，每组20只动物，雌、雄各半。其后将上述4组随机分成对照组，阿昔莫司/洛伐他汀复方组，阿昔莫司和洛伐他汀单药组。
各给药组动物药后即刻均有1-2只动物活动减少，药后1小时左右恢复正常。药后1天，各给药组动物均出现进食量下降及体重增加的明显抑制，药后5天恢复至对照组水平。
根据给药量和动物体重计算，昆明种小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及其单药，雌性或雄性小鼠按千克体重计算MTD均大于3.96/kg；按体表面积计算MTD均大于13.05mg/m2。
1试验目的观察小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及其单药后所产生的急性毒性反应，为多次重复给药毒性试验的剂量、可能的靶器官和毒性反应等指标的设计提供参考。所获得的结果为预测人体过量时可能出现的急性毒性反应，以及为该药临床研究提供参考信息。
2试验材料2.1受试药物2.1.1药物名称 阿昔莫司/洛伐他汀复方(The mixture of acipimox andlovastatin简称MAL)，阿昔莫司(Acipimox简称A)，洛伐他汀(Lovastatin简称L)。
2.1.2生产单位及产品批号 洛伐他汀是浙江瑞邦大厂生产，产品批号为020205；阿昔莫司是鲁南制药股份有限公司生产，产品批号为020702。
2.1.3药物性状 阿昔莫司和洛伐他汀均为白色粉剂，无味，不溶于水。
2.1.4受试药纯度 受试药纯度均大于99.0％。
2.1.5MAL中受试药比例 阿昔莫与司洛伐他汀的比例为20∶1。
2.1.6保存条件 常温保存。
2.1.7药物配制 阿昔莫司、洛伐他汀均不溶于水，故用1％羧甲基纤维素钠作混悬剂配制成试验所需的浓度，用时现配。
2.2动物
2.2.1名称、来源、品种及品种合格证 本院实验动物中心生产的昆明种小鼠，动物品种合格证编号为医动字D01-3023。
2.2.2性别、日龄、体重 小鼠为雌雄各半，日龄30天，雌性小鼠体重20.0±0.6g，雄性小鼠体重20.2±0.5g。
2.2.3饲养和试验条件 我院医学动物小鼠实验室，室温26～28℃，湿度50％RH左右，光照良好，动物实验条件合格证编号D01-2050。动物饲以我院实验动物中心为小鼠生产的块料，自由进食和饮水。
3试验方法3.1预备试验 小鼠18只分成三组，每组6只(雌、雄各半)，分别一次灌胃MAL、A和L药各80.0mg/0.8ml/只，药后除个别动物懒动外未见其它显急性毒性反应。故改LD50测定为最大耐受量(MTD)测定。
3.2试验分组及每组动物数 试验动物按体重均衡的原则分成4组，每组20只动物，雌、雄各半。其后将上述4组随机分成对照组、MAL、A和L组。
3.3给药剂量及容积 MAL、A和L组小鼠不论性别一律按80.0mg/0.8ml/只一次灌胃，对照组动物灌胃一次灌胃1％羧甲基纤维素钠0.8ml/只。
3.4禁食时间 给药前小鼠禁食12小时。
3.5观测指标及观测时间 药后动物即刻反应(动物行为、活动、瞳孔、眼睑、分泌、呼吸、腹形、排便等)连续观察2小时。其后上述内容每天观察1-2次。药后1、5、10和15天各称进食量和体重一次。药后15天称体重后处理动物进行大体解剖观察，若有肉眼可见变化，则进行组织病理学检查。
3.6试验时间 试验于2003年1月6日开始，21日结束。
4试验结果4.1动物给药后急性毒性反应 给药后每组1-2只动物活动减少，药后1小时左右恢复正常。
4.2动物死亡情况 在15天的观察期内未见动物死亡。
4.3动物进食量的变化 给药后1天，各给药组动物进食量比对照组下降0.4-0.6g/只，但只有MAL和L组雌性动物有统计差别，药后5天恢复至对照组水平(表6)。
表6小鼠灌胃MAL后进食量的变化

4.4动物体重的变化 各组动物体重均有明显增长，但给药后1天，各给药组动物体重增加非常明显地受到抑制(P＜0.001，表7)，抑制率约为5-7％，药后5天恢复至对照组水平(表7)。
表7小鼠灌胃MAL后体重的变化

4.5动物大体解剖观察 药后15天称体重后处理动物进行大体解剖，脑、心、肝、脾、肺、胃、肾等主要脏器肉眼未见明显变化。
4.6MTD的计算 小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及阿昔莫司、洛伐他汀单药，均按80.0mg/只一次给药计算，根据各组给药时雌性和雄性动物体重，MTD结果见表8。
表8 阿昔莫司/洛伐他汀复方及单药MTD值

5讨论1.给药后1天，小鼠无论是灌服阿昔莫司/洛伐他汀复方或其单药，能引起进食量下降和体重增长的明显抑制。但从二者变化的程度看，体重的抑比进食量的下降更为显著，提示给药组动物体重下降还不能完全用进食量减少来解释。
2.小鼠灌服阿昔莫司/洛伐他汀复方或其单药引起的动物进食量下降和体重增长明显抑制三者之间比较一致。提示由阿昔莫司和洛伐他汀组成的复方没有增加对小鼠的急性毒性。
6结论1.昆明种小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及其单药，除个别动物出现一时性活动减少，没有观察到其它明显的急性毒性反应。
2.给药后1天，小鼠无论是灌服阿昔莫司/洛伐他汀复方或其单药，能引起进食量下降和体重增长的明显抑制，药后5天恢复至对照组水平。
3.昆明种小鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方及其单药，雌性或雄性确小鼠按千克体重计算MTD均大于3.96/kg；按体表面积计算MTD均大于13.05mg/m2。
3.由阿昔莫司和洛伐他汀组成的复方没有增加对小鼠的急性毒性。
实例12大鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方重复给药毒性试验试验目的 观察动物重复给予阿昔莫司/洛伐他汀复方后，对机体产生的毒性反应及其严重程度、主要的毒性靶器官及其损害的可逆程度，提供无毒性反应剂量。为临床设计人用剂量和主要观察指标提供参考。
试验方法 本院实验动物中心生产的Wistar大鼠，动物品种合格证编号为医动字D01-3039。年龄6周，雌性大鼠体重163.8±4.8g，雄性大鼠体重168.0±6.3g。
受试药为阿昔莫司与洛伐他汀以20∶1的比例组成复方。试验设对照组及阿昔莫司/洛伐他汀复方210、630及1890mg/kg/d三个给药剂量组。为了观察多组分毒性的相互影响，另设阿昔莫司和洛伐他汀单剂量组，剂量分别为600mg/kg和30mg/kg，分别相当于复方中剂量的单药剂量。给药途径为灌胃，每周6次连续26周。
试验观测动物一般药物反应、尿液生化、外周血有形成分、凝血时间、血清生化、脏器重量及组织病理学等指标。
试验结果1.在试验期内，各组动物均存活到预定活杀期内。对照组、阿昔莫司/洛伐他汀复方小和中剂量组、单药阿昔莫司和洛伐他汀组动物，活泼好动，毛顺而亮，大便成粒，小便白色或微黄，而阿昔莫司和洛伐他汀复方大剂量组动物，于给药14周后，形体消瘦，毛色黄而乱，但二便未见异常变化。
2.在给药期内，对照组和阿昔莫司/洛伐他汀复方小剂量组，无论是雌性动物还是雄性动物进食量均无明显差别。阿昔莫司/洛伐他汀复方中剂量雌性动物给药6和10周、雄性动物给药6和8周进食量与对照组比较有统计学差别(P＜0.05)。而阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量组动物进食量下降更为明显，雌性动物给药4-18周、雄性动物给药4-12周，与对照组比较有明显或非常明显的统计学差别(P＜0.05或P＜0.01)。阿昔莫司和洛伐他汀组动物进食量的变化介于阿昔莫司/洛伐他汀复方中剂量与大剂量，两药比较，洛伐他汀组动物进食量下降比阿昔莫司组动物轻。
3.给药组动物尿液生化、外周血有形成分、凝血时间与对照组比较没有与给药有关的变化。
4.给药13周，阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量雄性动物；给药26周，阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量雌性和雄性动物丙氨酸氨基转移酶与对照组比较明显或非常明显的升高(P＜0.05或P＜0.01)。给药26周，阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量雌性和雄性动物天门冬氨酸氨基转移酶，与对照组比较明显升高(P＜0.05)。给药13周阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量雄性动物，给药26周阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量雌性和雄性动物肌酸磷酸激酶，与对照组比较明显升高(P＜0.05)。
3.给药13周处理大鼠，各给药组动物脏器重量及脏器系数与对照组比较均没有明显差别。给药26周处理大鼠，阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量组雌性和雄性动物肝脏及雄性动物胸腺和睾丸脏器重量明显或非常明显地低于对照组(P＜0.05或P＜0.001)。但脏器系数中，只有阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量组雄性动物肝脏系数非常明显地低于对照组(P＜0.001)。停药4周处理大鼠，各给药组动物脏器重量及脏器系数与对照组比较均没有明显差别。
4.停药4周，上述有变化的观测指标基本恢复至或接近对照组水平。
5.组织病理学观察表明，阿昔莫司/洛伐他汀复方大剂量组和中剂量组动物肝脏出现肝细胞核深染、固缩性病变，直至停也未完全恢复。
结论1.大鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方210.0MKD连续26周，各项观测指标未见明显变化，故可认为该剂量为大鼠的安全剂量。
2.大鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方630.0MKD连续26周，动物食欲下降，体重增长有剂量依赖性抑制等变化。故可认为该剂量为大鼠中毒的起始剂量。
3.大鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方1890.0MKD连续26周，能引起动物进食量持续下降，体重增加明显抑制，丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶及肌酸磷酸激酶显著升高，肝脏、胸腺及睾丸重量明显减轻及组织病理学改变。故可以认为该剂量为大鼠明显中毒剂量。
4.停药4周，上述有变化的观测指标基本恢复至或接近对照组水平。
5.根据动物临床症状、生化指标及组织病理学的变化，可以认为大鼠灌胃阿昔莫司/洛伐他汀复方中毒靶器官为肝脏。
6.由阿昔莫司和洛伐他汀按20∶1组成的复方与阿昔莫司或洛伐他汀单药比较，未见在大鼠中的毒性有明显的增减。
参考文献[1]徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理学实验方法学(第三版)，人民卫生出版社出版，2002年1月，1201-1202[2]OLBETAM(acipimox)说明书(Pharmacia，New Zealand)[3]Al-Shurbaji A，et al.The effect of Acipimox on triacylglycerolmetabolism in rat.Scand J Clin Lab Invest，1990，50(2)203-208[4]MEVACOR(lovastatin)说明书(MERCK&Co.，INC.)[5]郑高利等.洛伐他汀降血脂作用的研究.现代应用药学，1997；14(2)3-5[6]包旭等.国产洛伐他汀(Lovastatin)调血脂作用的实验研究。华西药学杂志，1996；11(1)32-34[7]Krause BR，et al.Lipid-lowering activity of atorvastatin andlovastatin in rodent speciestriglyceride-lowering in ratscorrelates with efficacy in LDL animal models.Atherosclerosis1995，117237-4权利要求
1.一种治疗高血脂症的组合物，其特征在于该组合物含有(1)第一个活性成分，它是阿昔莫司(Acipimox)；(2)第二个活性成分，它是洛伐他汀(Lovastatin)或其溶剂化物；(3)一种或多种其它可药用的活性成分或者非活性成分。
2.按照权利要求1所述的组合物，其特征是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比是(5～40)∶1。
3.按照权利要求1所述的组合物，其特征是优选为阿昔莫司和洛伐他汀的重量比是(10～30)∶1。
4.按照权利要求1所述的组合物，其特征是进一步优选为阿昔莫司和洛伐他汀的重量比是20∶1。
5.按照权利要求1～4所述的组合物制成的医疗用制剂。
6.权利要求5所述的医疗用制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸。
全文摘要
本发明提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其特征是含有有效量的阿昔莫司(Acipimox)和洛伐他汀(Lovastatin)，重量比是(5～40)∶1，优选重量比(10～30)∶1，进一步优选重量比20∶1。其降脂作用明显优于相同剂量的单方，表明两药合用有协同作用，同时又无明显的毒性作用。
文档编号A61K9/48GK1672683SQ20041004786
公开日2005年9月28日 申请日期2004年6月16日 优先权日2004年3月23日
发明者赵志全 申请人:山东新时代药业有限公司