专利名称：一种芳香化酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物性别研究领域，具体地说是关于来曲唑作为芳香化酶抑制剂在诱导斜带石斑鱼提前性逆转中的应用。
背景技术：
斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)，属鲈形目、鮨科、石斑鱼亚科，石斑鱼属。其肉质鲜美，营养丰富，为餐桌中的上等佳肴。其生长快、市场价格高且稳定，是目前我国沿海地区重要的海水养殖经济鱼类。斜带石斑鱼是一种雌性先熟的雌雄同体鱼类，开始为雌性，在体长为500～750mm时发生性逆转，雄性需6龄左右才成熟，在人工繁殖时常会遇到难以同时得到功能性雄性和雌性亲鱼的问题，给种苗生产造成很大困难。因此，如何使斜带石斑鱼提早性转变，尽早获得功能性的雄鱼显得非常重要。目前，在诱导斜带石斑鱼提前性逆转的研究中，主要还是应用性类固醇激素，如甲基睾酮(MT)。但MT是一种禁药，不易购买，而且使用后可能会造成环境激素污染。本发明发现来曲唑也能够作为芳香化酶抑制剂，能够诱导斜带石斑鱼提前性逆转。目前，来曲唑主要用于治疗妇女的乳腺癌，而用于控制鱼类性别还无报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种购买容易、使用方便、副作用小的芳香化酶抑制剂。
芳香化酶是动物体内催化雄激素向雌激素转化的一个关键酶，通过抑制芳香化酶活性可降低体内雌激素的水平，从而提高动物体内雄激素与雌激素的比例，诱导动物向雄性方向发展。
本发明发现来曲唑(1etrozole)能够作为芳香化酶抑制剂，能够有效抑制雌激素的产生，但对肾上腺类固醇激素的代谢无影响，因此，这是一个选择性很强的芳香化酶抑制剂。
本发明应用投喂来曲唑以诱导斜带石斑鱼提前性逆转的方法，操作简单方便，可供人工养殖，效果显著，有很大的经济价值。另外，来曲唑不是一种性激素，不会对环境造成激素污染。
图1为实验进行20天，来曲唑组中一条斜带石斑鱼的性腺切片图；图2为实验进行20天，空白对照组中一条斜带石斑鱼的性腺切片图；图3为实验进行40天，来曲唑组中一条斜带石斑鱼的性腺切片图；图4为实验进行40天，空白对照组中一条斜带石斑鱼性腺切片图；图5为实验进行60天，来曲唑组中一条已完成性逆转的斜带石斑鱼的性腺切片图；图6为实验进行60天，来曲唑组中一条已处在性逆转后期的斜带石斑鱼的性腺切片图；
图7为实验进行60天，空白对照组中一条斜带石斑鱼的性腺切片图。
具体实施例方式
实施例1从广东省大亚湾附近水域渔排网箱购买2龄斜带石斑鱼40尾，体重0.6～1Kg，暂养于大亚湾水产试验中心渔排网箱(5*5*3m)。暂养2周后，斜带石斑鱼随机分为两组，每组20尾，分养于两个网箱，其中一个箱为来曲唑组，另外一个箱为空白对照组。实验在2003年5～8月间进行，平均水温26.5～29.6℃。
投喂方法如下把冰鲜鱼打成鱼浆，再添加适当比例的配合饵料、高质鱼油、水制作饵料。空白对照组只投喂饵料，来曲唑组则在饵料中添加来曲唑，按每公斤饵料添加2mg来曲唑的比例添加。每天定时投喂2次，投饵量约为鱼体重的5％，未吃完的残饵及时清除。
在实验进行到20、40和60天时从各组随机抽取5尾鱼，解剖取其性腺样品。性腺样品用波恩氏固定液液(Bouin’s)固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为5～8μM，哈利氏苏木精-伊红染色，Olympus BX40型显微镜下观察性腺发育状况，并拍照。
实验结果(1)实验进行到20天时，从来曲唑组取样5条鱼，组织切片观察，发现其中一条鱼出现初级精母细胞，如图1所示，其余4条在切片中未发现初级精母细胞。因此，处理20天时，来曲唑组有20％的鱼发生性逆转；而空白对照组鱼性腺与实验开始时无明显变化，性腺仍处在II期卵巢，如图2所示。
(2)实验进行到40天时，从来曲唑组取样5条鱼，组织切片观察，发现所有的鱼的性腺切片图中都出现了精巢组织，其中4条鱼的性腺切片中出现了大量的精巢组织，已处在性逆转后期，如图3所示。而空白对照组性腺与实验开始时一样无明显变化，性腺仍处在II期卵巢，如图4所示。
(3)实验进行到60天时，从来曲唑组中取样5条鱼，组织切片观察，发现其中有3条鱼完成了性逆转，如图5所示；另外两条存在少量退化的初级卵母细胞，如图6所示。因此，处理60天时，有60％的斜带石斑鱼完成了性逆转，其余处在性逆转后期。而空白对照组性腺切片显示其性腺仍处在II期卵巢，如图7所示。
从上面的结果看出投喂来曲唑(2mg/Kg饲料)20天时，有部分2龄斜带石斑鱼(20％)开始了性逆转；投喂40天后，大部分2龄斜带石斑鱼(80％)处在性逆转的后期；投喂60天后，大部分2龄斜带石斑鱼(60％)完成了性逆转，性腺由卵巢变成了精巢。在整个实验过程中，空白对照组斜带石斑鱼性腺变化不明显，一直处在II期卵巢。这些结果表明给2龄斜带石斑鱼投喂来曲唑(2mg/Kg饲料)，经过60天的处理，能有效地诱导其提前性逆转。
权利要求
1.一种芳香化酶抑制剂，其特征在于所述的芳香化酶抑制剂为来曲唑。
2.根据权利要求1所述的芳香化酶抑制剂，其特征在于所述的来曲唑在诱导动物雄性化中的应用。
3.根据权利要求2所述的芳香化酶抑制剂，其特征在于所述的来曲唑在诱导雌雄同体鱼类提前性逆转中的应用。
4.根据权利要求3所述的芳香化酶抑制剂，其特征在于所述的来曲唑在诱导斜带石斑鱼提前性逆转中的应用。
全文摘要
一种芳香化酶抑制剂。芳香化酶是动物体内催化雄激素向雌激素转化的一个关键酶，通过抑制芳香化酶活性可降低体内雌激素的水平，从而提高动物体内雄激素与雌激素的比例，诱导动物向雄性方向发展。本发明发现来曲唑能够作为芳香化酶抑制剂，在诱导斜带石斑鱼提前性逆转中，操作简单方便，效果显著，有很大的经济价值。另外，来曲唑不是一种性激素，不会对环境造成激素污染。
文档编号A61K31/4196GK1628659SQ20041005119
公开日2005年6月22日 申请日期2004年8月24日 优先权日2004年8月24日
发明者张为民, 张勇, 张利红, 林浩然 申请人:中山大学