抗应激剂的制作方法

专利名称：抗应激剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用了咖啡或茶，如乌龙茶中含有的芳香成分的抗应激剂。本发明还涉及一种含有咖啡或茶，如乌龙茶中所含的芳香成分的药物或功能性食品，这些药物或功能性食品防止或缓解由应激所引发的精神和身体疾病。此外，本发明涉及一种使用咖啡或茶，如乌龙茶中含有的芳香成分的化妆品或芳香剂。
背景技术：
在二十四小时运转的前进且复杂的现代社会中，人们面临各式各样的物理化学的，心理的和社会应激。尤其是现代人处于复杂的人际关系中，心理因素构成了应激的主要部分。
人们做了各种关于心理应激以及由此所引发的各种症状的研究。例如，报道称当心理应激被大脑感知后，在大脑的许多部位去甲肾上腺素被加速释放，如此就导致了情绪表现，如焦虑和紧张(非专利文献1)。当应激长期持续，人体的各种器官都受到影响，结果可能引发了身心机能紊乱，抑郁，胃溃疡，高血压等严重情况。
当前用于缓解应激或预防或治疗应激引发的疾病的药物主要是苯并二氮杂类抗焦虑剂和安眠药。中枢GABA神经系统被认为是苯并二氮杂类抗焦虑剂和安眠药的作用部位。GABA神经系统中存在的GABAA受体与作为中心的C1通道，还与苯并二氮杂受体以及巴比妥结合位点形成复合体。有报道称，当苯并二氮杂受体和巴比妥结合位点受到刺激时，GABAA受体对GABA的亲和力加大(非专利文献2)。
还有报道称，当中枢GABA神经系统被激活时，就出现了应激缓解作用。当大鼠暴露于寒冷的受限应激(4℃，2小时)中时，就出现了胃溃疡。报道称，此类胃溃疡的出现以剂量依赖方式被心室内给予GABA(5，10，20，50μg)和GABAA受体激动剂蝇蕈醇(5，10μg)抑制以及GABA受体拮抗剂比枯枯灵碱(40μg)减轻GABA对应激性溃疡的抑制作用(非专利文献3)。此外，报道称大鼠由于应激引起的运动过度和胃溃疡受氨基氧-乙酸(GABA脱氨基酶抑制剂)的抑制，该氨基氧-乙酸可以增加作为GABAA受体激动剂的蝇蕈醇或中枢GABA的浓度(非专利文献4)。如上所述，中枢GABA神经系统在缓解应激方面起重要作用。
尽管苯并二氮杂类抗焦虑药物和安眠药是具有相对高安全性的药物，但仍不优选在日常生活中频繁服用它们用于短暂应激，因为他们具有成瘾性和副作用。此外，当在给药后中断使用它们时，会出现反弹，在一些病例中，因此症状可能被更恶化。因此，很难认为它们是理想的抗应激剂。
由于现代社会应激负荷增大，而且应激不但对精神健康而且对活体的严重影响，因此开发真正有效、安全的抗应激剂是需要的。尤其从预防的角度来看，开发可被用在食品和奢侈品中的抗应激剂是需要的。
其间有报道称，诸如咖啡这一奢移品中的香气增加α波频率，给人以放松的感觉(非专利文献5)。然而，其中的活性物质不明确。
(非专利文献1)Masatoshi Tanaka，Metabolism，vol.26，p122-131，1989(非专利文献2)D.G Nicholls，Amino Acids as Neurotransmitter，in″Proteins，Transmitters and Synapses″.Blackwell ScientificPublication，Oxford，p.155-185，1994(非专利文献3)KP Bhargava，GP Gupta and MB Gupta，″CentralGABA-eragic mechanism in stress-induced gastric ulceration″，BritishJournal of Pharmacology，vol.84，p.619-623，1985(非专利文献4)Psychopharmacology 89472-476，1986(非专利文献5)Life and Health，August，2000发明内容本发明目的在于提供一种抗应激剂，它可以有效预防或减轻应激所带来的各种症状，并且安全、易服用或摄取。同样，依据本发明咖啡或茶，如乌龙茶中含有的芳香成分适用作化妆品或芳香剂，因为它具有挥发性和抗应激活性。
为了开发一种有效和安全的抗应激剂，本发明人经过反复试验，研究了各种不同的化合物。结果，他们意外地发现咖啡和茶中的芳香成分具有抗应激活性。
更特别的是，本发明人使用对表达GABA受体的非洲蟾蜍属卵母细胞的GABA应答的增强作用为指标，进行了抗应激活性物质的筛选。结果，本发明人发现咖啡和茶中的芳香成分具有增强GABA对GABA受体的应答的活性。进而，本发明人使用当给予小鼠GABA受体活化药物戊巴比妥时，延长睡眠持续时间的活性为指标，进行了体内药理学研究，他们发现，咖啡或茶的芳香成分明显延长由戊巴比妥诱导的睡眠持续时间。如上所述，因为中枢GABA神经系统在缓解应激方面起重要作用，咖啡或茶中的芳香成分通过激活中枢GABA受体具有减轻应激的作用。
此外，因为人们长期习惯性地饮咖啡和茶，因此含有咖啡或茶中的芳香成分的抗应激剂没有安全性问题。
也就是说，本发明涉及(1)含有咖啡或茶中的芳香成分作为活性成分的抗应激剂，(2)根据上述(1)的抗应激剂，其中的芳香成分是选自下述物质的一种或多种组分2-甲基-3-丁烯-2-醇，3-甲基-2-丁烯-1-醇，1-戊烯-3-醇，(B)-2-己烯-1-醇，1-辛烯-3-醇，高砂(sotolone)，2，4-二甲基苯乙烯，苯并噻唑，2，3，5-三甲基苯酚，顺式-茉莉酮，甲基茉莉酮酸酯，茉莉内酯和氧化芳樟醇，(3)根据上述(1)的抗应激剂，其中的茶为乌龙茶，(4)根据上述(1)的抗应激剂，其中的芳香成分是选自1-辛烯-3-醇，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的一种或多种成分，(5)根据上述(1)到(4)中任何一项的抗应激剂，其中每个剂量或每次摄取的芳香成分的量为5-50mg，(6)根据上述(1)到(5)中任何一项的抗应激剂，它是药物，(7)根据上述(1)到(5)中任何一项的抗应激剂，它是功能性食品，(8)根据上述(1)到(5)中任何一项的抗应激剂，它是化妆品，(9)根据上述(1)到(5)中任何一项的抗应激剂，它芳香剂，(10)根据上述(1)到(9)中任何一项的抗应激剂，它GABA受体激动剂，(11)一种预防或减轻应激的方法，包括给予哺乳动物在咖啡或茶中含有的芳香成分，和(12)咖啡或茶中含有的芳香成分在制备用于预防或减轻应激的药物中的用途。
本发明的抗应激剂通过激活GABA受体，尤其是激活中枢GABA神经系统，能有效地预防或减轻应激。因此，本发明的抗应激剂可以抑制或预防应激所引起的各种症状。
而且，因为本发明的抗应激剂包含咖啡和茶，如乌龙茶中的芳香成分作为活性成分，该抗应激剂具有安全性好和使用时无特殊限制的优点。
此外，由于本发明的抗应激剂包含了奢侈品如咖啡和茶中的芳香成分，该抗应激剂易被服用或摄入。特别是，当将本发明抗应激剂制成功能性食品，如健康饮料时，该抗应激剂能够被每天使用以便预防和/或减轻应激。另外，咖啡或茶，如乌龙茶中的芳香成分，可以用作化妆品或芳香剂，因为它具有挥发性，并且不仅具有愉快的芳香而且有抗应激活性。


图1是显示咖啡或茶中的各种芳香成分的体外GABA受体激活活性的图。
图2是显示1-辛烯-3-醇的GABA受体激活活性的剂量依赖性的图。
图3是显示当对小鼠口服给药1-辛烯-3-醇时，戊巴比妥对睡眠持续时间的影响的图。1-OCOL(20)显示给予20mg/kg 1-辛烯-3-醇的组，1-OCOL(100)显示给予100mg/kg 1-辛烯-3-醇的组，CONT显示对照组。
图4是显示乌龙茶中各种芳香成分的体外GABA受体激活活性的图。图中，顺式-茉莉酮，甲基茉莉酮酸酯，茉莉内酯和氧化芳樟醇分别用cis-JSM， Me-JSM，JSM-LAC和LINL-OX代表。
图5是显示顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的GABA受体激活活性的剂量依赖性的图。
图6是显示当小鼠吸入顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯时，戊巴比妥对睡眠持续时间的影响图，*表示相对于对照p＜0.05。
实施本发明的最佳模式本发明提供了一种含有咖啡和茶的芳香成分的抗应激剂。本发明中所用的茶的例子包括未发酵的茶，例如，一种蒸过的茶如Sencha(日本最流行的绿茶)，Hojicha(烘烤的茶)，Gyokuro(精制的生长在阴暗处的绿茶)，kabusecha(生长在阴暗处的绿茶，周期比Gyokuro短)以及Tencha(除了没有翻动干燥，其他制备方法与Gyokuro一样的绿茶)或用平底锅焙炒过的茶如Ureshinocha(日本Saga出产的绿茶)，Aoyagicha(日本Miyazaki出产的带蓝色的茶)或各种中国茶；半发酵的茶如Bao Zhon茶(台湾wen shan地区出产的)，铁观音茶和乌龙茶；发酵的茶如红茶，Awabancha(日本Tokushima出产的粗茶)，Goishicha(日本Tosa出产的粗茶)以及普洱茶；和Genmaicha(混合了烘烤而且爆裂的稻米的粗茶)，草药茶，姜黄茶，烘烤的大麦茶，烘烤的薏苡茶，马黛茶等。在上述所有的茶中，乌龙茶为优选，因为它含有本发明中所使用的大量的有效的芳香成分。
本发明抗应激剂中所含的芳香成分可以是采用已知方法如柱色谱法从咖啡和茶中提纯的那些，或可以是未纯化的浓缩物。至于所述的芳香成分，可以使用商业途径获得的纯化产品。此外，也可使用化学合成的芳香成分。咖啡和茶中所含的大量芳香成分可以混合状态被包含，或者可以只是单一的芳香成分被包含在本发明的抗应激剂中。
咖啡和茶中的芳香成分没有特别的限制，可以是一种已知的成分。具体地说，优选的芳香成分的例子包括，2-甲基-3-丁烯-2-醇，3-甲基-2-丁烯-1-醇，1-戊烯-3-醇，(E)-2-己烯-1-醇，1-辛烯-3-醇，高砂，2，4-二甲基苯乙烯，苯并噻唑，2，3，5-三甲基苯酚，顺式-茉莉酮，甲基茉莉酮酸酯，茉莉内酯和氧化芳樟醇等。已知在咖啡和红茶中均含有这些成分作为芳香成分(Food Rev.Int.，1989，5，317-414)。在这些芳香成分中，优选1-辛烯-3-醇，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯。这些芳香成分可以是商业途径获得的产品，合成产物或提取产物，并且合成方法和提取方法可以是已知的方法。
在茶中，已知乌龙茶含有大量的上述芳香成分。例如，龙井茶(中国绿茶)中茉莉内酯的含量只有0.33ppm，而乌龙茶Huang jing gui中却有26.43ppm。同样，绿茶之一的龙井茶中没有检测到甲基茉莉酮酸酯，但乌龙茶之一的Huangjing gui含有3.33ppm(Keiichiro Muramatsu，Function of Tea，Gakkaishuppan Center，2002)。据报道，茉莉内酯在乌龙茶的发酵过程中产生，并通过乌龙茶的发酵增长了50倍茉莉内酯(J.Agric.Food Chem.2001，49，5391-5396)。然而，就进一步进行发酵的红茶而言，大吉岭茶仅有0.74ppm的茉莉内酯。此外，作为甲基茉莉酮酸酯的类似物，甲基表茉莉酮酸酯在红茶中的含量最多仅有约1ppm(Michiko kawakami，Study Note of Tea Perfume，Koseikan，2000)。应被解释为，在本发明中，甲基茉莉酮酸酯包括甲基表茉莉酮酸酯。
当包含在本发明抗应激剂中的咖啡和茶的芳香成分为游离酸或碱时，所述芳香成分可以药学上可接受的盐的形式被包含。药学上可接受的盐的例子包括与药学上可接受的酸(如有机酸或无机酸)的盐，或者与药学上可接受的碱(如无机碱或有机碱)的盐。更具体的实例包括与无机酸，如盐酸，硫酸，磷酸和氢溴酸的盐；与有机酸，如草酸，马来酸，富马酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸和苯甲酸的盐；与无机碱如碱金属(如钠，钾)和碱土金属(如镁，钙)的盐；和与有机碱，如有机胺(如三乙胺)，碱性氨基酸(如精氨酸)的盐。
本发明的抗应激剂涉及一种具有松驰或平静应激并能维持活体的稳态的抗应激活性的物质，或是一种包含该物质的组合物。换而言之，本发明的抗应激剂涉及一种引起防御应激或适应应激的生物学反应的物质，或包含所述物质的组合物。这里，应激通常是指，当引起应激的刺激(应激物)施加到活体时，精神或身体中产生的应变。应激物的例子包括物理刺激，如寒冷，天气改变，辐射和噪音；化学刺激如药物，维生素缺乏和缺氧；生物刺激如细菌感染；源于疾病或紊乱如疼痛和发烧的身体刺激；由社会和家庭中人际关系引起的精神刺激如紧张，焦虑和恐惧。
因此，本发明的抗应激剂用于预防应激或促进从应激中恢复是有效的，从而能够预防，促进或治疗由应激所引起的医学症状。
应激所引起的医学症状的例子包括(a)循环疾病如动脉硬化，局部缺血性心脏病(心绞痛，心肌梗塞)，原发性高血压，心脏神经机能病和心律失常，(b)呼吸疾病如支气管哮喘，呼吸加快综合征和神经性咳嗽，(c)消化疾病如消化性溃疡，溃疡性结肠炎，过敏性肠综合征，神经性厌食，神经性呕吐，腹胀，和吞气症，(d)内分泌代谢疾病如肥胖，糖尿病，精神性息肉病和巴塞多氏病，(e)神经性疾病如偏头痛，肌肉收缩性头痛和自主神经机能失调(f)泌尿疾病如夜间遗尿，阳萎和神经性膀胱，和(g)骨骼和肌肉疾病如类风湿性关节炎，全身性肌痛和脊柱刺激。
此外，应激所引起的医学症状的例子还包括(h)皮肤疾病如神经性皮炎，斑秃，多汗和湿疹，(i)耳鼻咽喉科疾病如美尼尔综合征，咽喉中异物感，听觉障碍，耳杂音，运动症和失语口吃，(j)眼科疾病如原发性青光眼，眼疲劳，睑痉挛和眼癔病，(k)妇科和产科疾病如痛经，闭经，月经失调，机能障碍性子宫出血，绝经紊乱，性冷淡和不孕症，(l)儿科疾病如直立障碍，复发性脐绞痛，精神性发烧和夜惊，(m)手术前和手术后的状况如肠粘连，倾倒综合征，整形手术后的polysurgery和神经症，(n)口腔疾病如自发性舌痛，一些类型的口炎，口臭，唾液分泌异常，咬肌功能抑制(masseter check)和假牙神经症，(o)神经症和(p)抑郁症。
本发明的抗应激剂可以用作药物或功能性食品。当本发明的抗应激剂用作药物时，只要有利地进行口服或胃肠道外给药，该药物可以是任意剂型。本发明药物的剂型的例子包括注射剂，输液剂，粉剂，颗粒剂，片剂，胶囊剂，肠衣剂，锭剂，内服的溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，外用的溶液，热敷剂，滴鼻剂，滴耳剂，滴眼剂，吸入剂，软膏，洗液和栓剂。同样，在本发明中，上述剂型的本发明药物可以单独使用或依照症状将它们联合用药。
在本发明的药物中，根据目的在主要成分中可以添加已知的药学领域常用的添加剂如赋形剂，粘合剂，崩解剂，润滑剂，矫味剂和稳定剂。
更特别的是，当本发明的药物是固体制剂如胶囊，片剂，粉剂和颗粒剂时，制剂中可含有添加剂，例如赋形剂如乳糖，葡萄糖，蔗糖，和甘露醇；崩解剂如淀粉和藻酸钠；润滑剂如硬脂酸镁和滑石粉；粘合剂如聚乙烯醇，羟丙基纤维素和白明胶；表明活性剂如脂肪酸酯；增塑剂如甘油。另一方面，当本发明的药物为液体制剂时，制剂中可含有添加剂，例如糖如蔗糖，山梨醇，果糖；二醇如聚乙二醇和丙二醇；油如麻油，橄榄油和豆油；防腐剂如对羟基苯甲酸酯。此外，在液体制剂的情况下，本发明的药物可以是呈这样形式的制剂，以便作为活性成分的芳香成分在使用时被溶解。
上述本发明的药物可以利用药学领域本身公知的或常规的方法容易地制备。
本发明药物的给药途径不受特殊限定，并且可以是口服给药或胃肠道外给药。尤其，从易于摄入的角度考虑，可以口服的本发明的药物是优选的。
本发明药物的剂量因给药途径，剂型和症状的严重情况，患者的年龄或体重而变化，因此不能一概而论。特定地，对于成年人每剂量的量是这样的，包含在一种固体制剂如胶囊中的本发明芳香成分的总量为约5到500mg，优选约5到50mg。
当本发明的抗应激剂用作功能性食品时，其形式可以与上述药物制剂的形式相同。可选地，食品可以被加工成如天然液体食品，半消化的滋养食品，成分滋养食品和饮料等形式。此外，本发明的功能性食品可以制成易溶解的制剂，在使用时将该制剂加入到酒精饮料或矿泉水中。更特别地，本发明功能性食品的形式的例子包括糖食如饼干，小甜饼，蛋糕，糖果，巧克力，口香糖和日本糖果；面包，面条，大米和豆腐，或它们的加工产品；发酵食品如精制米酒和具有药性的酒精饮料；调味品如Mirin(烹饪用的日本甜米酒)，食醋，大豆沙司，日本豆面酱(发酵的豆酱)和调味料；家畜类食品产品如酸奶酪，火腿，咸肉，香肠和蛋黄酱；加工过的海产品如煮熟的鱼酱，油炸的鱼酱和Hampen(鱼酱蛋糕)；饮料如水果饮料，不含酒精的饮料，等渗的饮料，酒精饮料，茶，咖啡和可可饮料。当本发明的芳香成分通过添加在饮料中而被使用时，含量优选为每1L饮料中0.0005到1.0wt％和每次摄取量为约5到500mg，优选约5到50mg。
可选择地，可将本发明的功能性食品以通过如下方法原地制备的功能性食品的形式提供给患者基于医生食品处方，在营养学家的监督下，在制备医院的膳食中，添加本发明的抗应激剂到任意的食物中。本发明的抗应激剂可以是液体，或固体如粉末和颗粒。
本发明的功能性食品可以含有食品领域常用的补充成分。补充成分的例子包括乳糖，蔗糖，液态糖，蜂蜜，硬脂酸镁，丙氧基纤维素，各种维生素，微量元素，柠檬酸，苹果酸，香料和无机盐。
当预期发生应激，或正经历应激时，例如，体力劳动，脑力劳动和运动过程中，可以服用本发明的功能性食品。可替代地，为了预防或减轻应激，可有规律地服用该功能性食品。
本发明的功能性食品的摄取的量因应激状况，摄入所述食品的人的年龄，性别等而变化，因此不能一概而论。特定地，对于成年人每次摄入的量是这样的，使得本发明芳香成分的总量为约5到500mg，优选约5到50mg。
本发明的药物或功能性食品可以与其它抗应激剂，营养剂如维生素，激素类制剂等，微量元素或铁化合物联用。例如，当本发明的功能性食品是健康饮料时，如果需要，通过与其它生理活性成分，矿物质，激素，营养成分，香料等混合，能够将奢侈饮料的性质更好地赋于本发明饮料中。
应激对人的作用包括抑郁趋向。在达到病理状态之前，这种趋向经常在正常日常生活中被看出。因此，提供一种减轻这种趋向的方法已经是一项亟待解决的重要挑战。最近，特别是，芳香剂疗法作为一种减轻抑郁趋向的方法而引起关注。具有挥发性并具有令人舒服的香气的本发明的芳香成分，可以用作化妆品或芳香剂。
本发明的咖啡或茶中的芳香成分可以用作化妆品或芳香剂，包括，例如，身体护理产品如香水，esu de toilette，科隆水，防汗剂，除臭剂，洗发剂，头发冲洗剂，头发调理剂，头发处理剂，头发修饰剂，肥皂，洁身肥皂，基础皮肤护理产品等；洗衣产品如洗衣洗涤剂，家用清洁剂，家用织物柔顺剂，洗衣漂白剂等；家用产品如盘碟洗涤剂，洁厕剂，家用漂白剂，芳香剂，地板上光剂等；口腔护理产品如牙膏，漱口液，口腔清洁剂，口腔清新剂等；以及各种产品如泥敷剂等。
化妆品领域所使用的可选择的化妆品成分如油和脂肪，保湿剂，天然染料，表面活性剂，抗氧化剂，防腐剂等，均可以用在本发明的含有咖啡和茶中的芳香成分的化妆品中，并且所述的化妆品可以通过本领域本身公知的方法制备。使用本发明的化妆品将产生使人们从他们在日常生活中所经历的生理心理状况，如瞌睡，疲劳，倦怠等中解脱出来，提神，并恢复精神活力的效果。尽管根据剂型以及使用该化妆品的目的来决定化妆品中所含的芳香成分的量，但该量按化妆品的总重量计，通常为0.005到10％。
此外，本发明的芳香剂可以装在本身公知的用于芳香剂的容器中并可使用。芳香剂的形式包括喷雾剂和固体(颗粒)，而且这种芳香剂能够创造出闻起来令人愉快的空间。尽管依据使用的场所或必需的香味的浓度来决定芳香剂中使用的芳香成分的量，但该量按芳香剂的总重量计，通常为0.005到10％。
实施例下面的实施例进一步阐述本发明，但是不限定本发明的范围。
实施例1在体外芳香成分(9种)对GABA受体的激活活性作为实验材料，使用非洲蟾蜍属的卵母细胞。将一种源于大鼠的GABA受体mRNA注入卵母细胞核中用于在卵的表面表达GABA受体。卵母细胞在常规的青蛙的林格氏液(115mM NaCl，1mM KCl，1.8mM CaCl2，5mM Tris，pH 7.2)中培养。利用所得到的卵母细胞，测定GABA(10μM)的抑制电位以及GABA(10μM)与下面提及的样品的混合溶液的抑制电位。使用电压钳放大器(CEZ-1100；NIHONKODEN CORPORATION制造)，通过电压钳方法测定抑制电位的发生。
作为样品，下述的9种咖啡或茶中含有的芳香成分使用时的浓度为2μ1/ml。所使用的样品如下所述2-甲基-3-丁烯-2-醇(在图1中用2-M3BOL表示)，3-甲基-2-丁烯-1-醇(在图1中用3-M2BOL表示，1-戊烯-3-醇(在图1中用1-POL表示)，(E)-2-己烯-1-醇(在图1中用HXOL表示)，1-辛烯-3-醇(在图1中用1-OCOL表示)，高砂(在图1中用STOL表示)，2，4-二甲基苯乙烯(在图1中用2，4-DMS表示)，苯并噻唑(在图1中用BZT表示)和2，3，5-三甲基苯酚(在图1中用2，3，5-TEP表示)。实验中所使用的上述样品为商业途径可获得的产品。换句话说，所使用的高砂由Ogawa & Co.，Ltd.制造，其它化合物由Tokyo Kasei Co.，Ltd.制造。
结果在图1中显示。将样品对由GABA诱发的抑制电位的增强活性用作指标。结果用相对于只加入GABA(0.25μM)时产生的抑制电位(设定为100％)，GABA和样品联用时抑制单位的百分比增加来表示。如从图1中显而易见的，发现所有的评价样品均增强了GABA对GABA受体的应答，并且特别是1-辛烯-3-醇具有强的增强应答的活性。
在实施例1中，使用己醇作为阳性对照。已知作为植物杀菌素的成分的己醇具有激活GABA受体活性(Biosci.Biotechnol.Biochem.，63，743-748，1999)以及缓解应激的活性(1998-1999 Scientific Research Subsidy，Fundamental Research(C)(2)Research Outcome Report，Research ThemeNo.10670070)。
实施例2对1-辛烯-3-醇的剂量依赖性的研究现研究在实施例1中已经被证实具有强活性的1-辛烯-3-醇的剂量依赖性。实验方法与实施例1的那些完全相同。GABA的浓度为5μM，1-辛烯-3-醇的浓度为0.3-1mM。结果在图2中显示。如从图2中显而易见的，1-辛烯-3-醇显示出至多400％的GABA对GABA受体的应答。图2中显示的结果用相比于只加入GABA(5μM)时抑制电位(设定为100％)，GABA和1-辛烯-3-醇联用时的抑制电位的相对值表示。
实施例31-辛烯-3-醇对戊巴比妥诱导的睡眠的增强活性作为实验动物，ddy雄性小鼠(8周龄)购买自Shimizu Laboratory SuppliesCo.，Ltd.，饲养一周后用于实验。每五只小鼠饲养在饲养室的聚异戊烯笼子(Clea Japan.Inc.制造)中，饲养条件设定为室温23±2℃，湿度为55±5％，通风频率为12-15/小时(所有新鲜空气流通)，照明时间12小时/天(从7a.m.到7p.m.)。小鼠喂固体饲料CE-2(Clea Japan Inc.)并允许任意进水。
溶解在橄榄油中的1-辛烯-3-醇按照20或100mg/Kg的剂量对小鼠口服给药。每组中有8只小鼠。30分钟后，溶解在生理盐水中的戊巴比妥按照50mg/kg的剂量腹膜内给药，测定睡眠持续时间。睡眠时间定义为从丧失正位反射到其恢复的时间段。
结果在图3中显示。图3中显示的实验结果用平均值±标准误差来表示，在显著性差异检测中使用Student-t检验。如从图3中显而易见的，以剂量依赖型的方式，1-辛烯-3-醇延长了戊巴比妥诱导的睡眠的持续时间。
实施例4在体外奢侈品(乌龙茶)中的芳香成分对GABA受体的激活活性作为实验材料，使用非洲蟾蜍属的卵母细胞。将一种源于大鼠的GABA受体mRNA注入卵母细胞核中用于在卵的表面表达GABA受体。卵母细胞在常规的青蛙的林格氏液(115mM NaCl，1mM KCl，1.8mM CaCl2，5mM Tris，pH 7.2)中培养。使用电压钳放大器(CEZ-1100；Nihon Koden corporation制造)，通过电压钳方法测定GABA(0.25μm)所引起的抑制电位的发生。
作为样品，下述的乌龙茶中的4种芳香成分使用时的浓度为0.5mM。所使用的样品如下顺式-茉莉酮，甲基茉莉酮酸酯，茉莉内酯和氧化芳樟醇。
所述的实验中使用的样品由Ogawa & Co.，Ltd.制造。
结果在图4中显示。将样品对由GABA诱发的抑制电位的增强活性作为指标。结果用相对于只加入GABA(0.25μM)时产生的抑制电位(设定为100％)，GABA和样品联用时的抑制电位的百分比增加来表示。如从图4中显而易见的，发现所有评价的样品均增强了GABA对GABA受体的应答，特别是顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯具有增强应答的活性。
在实施例4中，使用己醇用作阳性对照。已知作为植物杀菌素的成分的己醇具有激活GABA受体的活性(Biosci.Biotechnol.Biochem，63，743-748，1999)的活性以及缓解应激(1998-1999 Scientific Research Subsidy，Fundamental Research(C)(2)Research Outcome Report，Research ThemeNo.10670070)。
实施例5对顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的剂量依赖性的研究现研究在实施例4中已经被证实具有强活性的顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的剂量依赖性。实验方法与实施例4的那些完全相同。GABA的浓度为5μM，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的浓度为0.2-1mM。结果在图5中显示。如从图5中显而易见的，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯分别显示出至多200％和300％的GABA对GABA受体的应答。图5中显示的结果用相比于只加入GABA(5μM)时产生的抑制电位(设定为100％)，GABA和顺式茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯联用时的抑制电位相对值表示。
实施例6顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯对戊巴比妥诱导的睡眠的增强活性作为实验动物，ddy雄性小鼠(8周龄)购买自Shimizu Laboratory SuppliesCo.，Ltd.，饲养一周后用于实验。每五只小鼠饲养在饲养室的聚异戊烯笼子(Clea Japan.Inc.制造)中，饲养条件设定为室温23±2℃，湿度为55±5％，通风频率为12-15/小时(所有新鲜空气流通)，照明时间12小时/天(从7a.m.到7p.m.)。小鼠喂固体饲料CB-2(Clea Japan Inc.)并允许任意进水。
使小鼠在曝露的盒子中吸入稀释到0.1％的顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯，直到实验完成。每组中有5只小鼠。吸气开始30分钟后，溶解在生理盐水中的戊巴比妥按照50mg/kg的剂量腹膜内给药，并测定睡眠持续时间。睡眠时间定义为从丧失正位反射到其恢复的时间段。
结果在图6中显示。图6中的实验结果用平均值±标准误差来表示，在显著性差异检测中使用Student-t检验。如从图6中显而易见的，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯显著延长了戊巴比妥诱导的睡眠的持续时间。
制剂实施例制剂实施例1胶囊a.配方(每500mg)1-辛烯-3-醇5mg乳糖493mg硬脂酸镁2mg
b.方法按照上述配方，将1-辛烯-3-醇和乳糖混合，压制和研磨。按照配方量向该物质中混合硬脂酸镁。将每500mg混合物装入2号胶囊中制成每粒中含有5mg1-辛烯-3-醇的胶囊。
制剂实施例2健康饮料a.配方1-辛烯-3-醇5gDL-酒石酸钠0.1g琥珀酸9mg液态糖800g柠檬酸12g维生素C10g香料12ml氯化钾1g硫酸镁0.5gb.方法按照上述配方，将上述成分溶解在8L蒸馏水中，将蒸馏水加入其中到总量为10L。所得的溶液过0.22μm的除菌滤器，将每100ml上述溶液在无菌操作下装入到棕色瓶中制成每剂中含5mg 1-辛烯-3-醇的健康饮料。
制剂实施例3胶囊a.配方(每粒胶囊)甲基茉莉酮酸酯5mg乳糖 493mg硬脂酸镁 2mg500mgb.方法按照上述配方，将甲基茉莉酮酸酯和乳糖混合，压制和研磨。按照配方量向该物质中混合硬脂酸镁。将每500mg混合物装入2号胶囊中制成每粒胶囊中含有5mg甲基茉莉酮酸酯的胶囊。
制剂实施例4健康饮料的制备a.配方顺式-茉莉酮5gDL-酒石酸钠0.1g琥珀酸9mg液态糖800g柠檬酸12g维生素C10g香料12ml氯化钾1g硫酸镁0.5gb.方法按照上述配方，将上述成分溶解在8L蒸馏水中，将蒸馏水加入其中到总量为10L。所得的溶液过0.22μm的除菌滤器，将每100ml上述溶液在无菌操作下装入到棕色瓶中制成每剂中含5mg顺式-茉莉酮的健康饮料。
工业应用性本发明的抗应激剂能够抑制或预防各种伴有应激的症状，并适用作药物，功能性食品，化妆品或芳香剂。
权利要求
1.一种抗应激剂，它包含咖啡或茶的芳香成分作为活性成分。
2.根据权利要求1的抗应激剂，其中的芳香成分是选自下述物质的一种或多种组分2-甲基-3-丁烯-2-醇，3-甲基-2-丁烯-1-醇，1-戊烯-3-醇，(E)-2-己烯-1-醇，1-辛烯-3-醇，高砂，2，4-二甲基苯乙烯，苯并噻唑，2，3，5-三甲基苯酚，顺式-茉莉酮，甲基茉莉酮酸酯，茉莉内酯和氧化芳樟醇。
3.根据权利要求1的抗应激剂，其中的茶为乌龙茶。
4.根据权利要求1的抗应激剂，其中的芳香成分是选自1-辛烯-3-醇，顺式-茉莉酮和甲基茉莉酮酸酯的一种或多种成分。
5.根据权利要求1至4任意一项的抗应激剂，其中每个剂量或每次摄取芳香成分的量为5-50mg。
6.根据权利要求1至5任意一项的抗应激剂，它为药物制剂。
7.根据权利要求1至5任意一项的抗应激剂，它为功能性食品。
8.根据权利要求1至5任意一项的抗应激剂，它为化妆品。
9.根据权利要求1至5任意一项的抗应激剂，它为芳香剂。
10.根据权利要求1至9任意一项的抗应激剂，它为GABA受体激活剂。
11.一种预防或减轻应激的方法，它包括给予哺乳动物一种包含在咖啡或茶中的芳香成分。
12.包含在咖啡或茶中的芳香成分在制备预防或减轻应激的药物中的用途。
全文摘要
一种抗应激剂，它可以有效预防或减轻应激相关的症状，安全并且易于给药和摄取，该抗应激剂的特征是含有咖啡或茶的香料成分作为有效成分。
文档编号A61K31/21GK1798567SQ20048001498
公开日2006年7月5日 申请日期2004年5月28日 优先权日2003年5月30日
发明者青岛均, 好田裕史, H·J·舍克 申请人:三得利株式会社