岩藻黄素在制备治疗阿尔茨海默病药物方面的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及岩藻黄素的新用途，尤其是设及岩藻黄素在制备治疗阿尔茨海默病药 物方面的新用途。
【背景技术】
[0002] 岩藻黄素（化coxanthin)又称墨角藻黄素、褐藻黄素，广泛分布于褐藻纲、娃藻纲、 金藻纲、定鞭藻纲等藻类中，参与其光合作用。岩藻黄素属于类胡萝l·素家族的叶黄素类化 合物，具有特殊的丙二締碳的骨架，有极强的抗氧化性，可有效清除自由基和单线态氧，预 防自由基损伤。现代药理学研究发现，岩藻黄素安全性好，在人体中可有效对抗氧化应激， 具有抗肿瘤、提高记忆、减肥等多种活性。
[0003] 阿尔茨海默病（AD)是老年期痴呆最常见的原因，由于缺乏特异性的临床防治措 施，目前AD已成为严重危害老年人身屯、健康和生活质量的重要疾病之一。尽管AD的病理 机制尚未完全阐明，但众多的证据表明乙酷胆碱醋酶（acetylcholinesterase，AChE)异常 会引起阿尔兹海默病（Alzheimer'sdiseases,AD)等神经系统疾病。乙酷胆碱醋酶是存 在于神经接头和胆碱能神经突触的一种具有簇肤酶和氨肤酶活性的酶。A化E能特异水解乙 酷胆碱，生成乙酸和胆碱，从而阻断乙酷胆碱神经递质的传递。AD是一种中枢神经变行性疾 病，由于患者胆碱能系统活性下降，神经末梢乙酷胆碱的合成、储存、释放减少，导致患者出 现认知功能严重障碍。同时β-淀粉样蛋白（Αβ)在脑内聚集、纤维化、沉积形成老年斑及 其神经毒性作用也是AD形成的病理学基础。
[0004] 近年来，随着对AD的神经生理、生化、药理等方面不断的深入研究，防治AD的药 物开发研究不断取得进展。目前治疗AD的药物品种繁多，适用于不同的作用机制，其中对 AD的药物治疗主要是通过抑制乙酷胆碱脂酶（Α化巧来提高患者体内的乙酷胆碱水平，即 A化Ε抑制剂。例如多奈赃齐（don巧ezil)、加兰他敏（galantamine)等A化Ε抑制剂可通过 抑制MM的活性，增加突触间乙酷胆碱，延长并增加兴奋乙酷胆碱受体的作用，因此可用 于早期AD治疗。但运些A化E抑制剂均存在不同程度的副作用。因此，有效地防止或减少 A0在脑内聚集、纤维化、沉积形成老年斑和其神经毒性作用W及抑制乙酷胆碱醋酶的活性 是防治AD的重要祀点和治疗策略。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种岩藻黄素在制备治疗阿尔茨海默病药物 方面的新用途。
[0006] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：岩藻黄素在制备治疗阿尔茨海默 病药物方面的新用途。
[0007] 所述的岩藻黄素在制备抑制乙酷胆碱醋酶药物方面的新用途。
[0008] 所述的岩藻黄素在制备抑制Aβ纤维化药物方面的新用途。
[0009] 与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明岩藻黄素在制备治疗阿尔茨海默病 药物方面的新用途，其岩藻黄素可显著抑制A化E，IC50为81. 2μΜ，显示岩藻黄素更易抑制A化Ε，另外岩藻黄素具有安全性好、提纯容易等优势，并可非竞争性抑制A化Ε，可能多祀点 协同对抗AD。同时，研究表明岩藻黄素能够有效地抑制Αβ纤维化，并能减少其神经毒性作 用。因此，有望将岩藻黄素开发为治疗阿尔茨海默病药物。
【附图说明】
[0010] 图1为体外检测岩藻黄素对乙酷胆碱醋酶的抑制效率图； 图2为体外检测岩藻黄素对乙酷胆碱醋酶的抑制作用的LineweaverBurk双倒数图； 图3为图2双倒数直线的斜率对岩藻黄素浓度的关系图； 图4为岩藻黄素与乙酷胆碱醋酶的分子对接结果图；（分子对接结果显示岩藻黄素与Asp283和Ser286残基形成氨键。图中配体使用球棍模型，受体氨基酸残基使用棍模型表 示。球体表示不同原子。LP:亲脂性。受体表面深浅表示其亲脂性程度，深色表示亲脂性 强、浅色表示亲水性强）； 图5为细胞经双氧水单独处理W及双氧水和岩藻黄素同时处理后的存活率结果对比 图； 图6为细胞经双氧水单独处理W及双氧水和岩藻黄素同时处理的抑A染色效果图； 图7为细胞经双氧水单独处理W及双氧水和岩藻黄素同时处理的化echst染色效果 图； 图8为细胞分别经岩藻黄素W及姜黄素处理的硫黄素T染色效果对照图。
【具体实施方式】
[0011] W下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0012] 具体实施例一 岩藻黄素对乙酷胆碱醋酶(AchE)的抑制作用 1、 实验材料和试剂 岩藻黄素从铜藻提取纯化获得，其化学结构式如下：
[0013] 实验试剂：舰代乙酷硫代胆碱（A化I)购自sigma公司，溶于100??Π?οΙ'Ι1Na2HP〇4 溶液，浓度为20mmol'Li。二硫代双（2 -硝基苯甲酸）（DTNB)购自LifeScience公司， 溶于100mmol'Li胞2册〇4溶液，浓度为5??Π?οΙ'Ι1。乙丙嗦（BuChE抑制剂)购自sigma公 司，溶于二甲基亚讽（DMS0)，浓度为20mmol'L1。
[0014] 脑匀浆液制备：大鼠斩首后取脑，在冰上分离取得大脑皮层后用液氮干燥。皮层称 重后，加入10倍的裂解缓冲液（肥阳S10mmol·!/，TritonX-100 0.5%，邸TA5mmol·!/， EGTA5mmol'Li，化Cl1000mmol'Li，调节抑=7. 5)，匀浆直至破坏阻止。匀浆液超声处 理30秒后，3000巧m、4度离屯、15分钟，吸取上清。
[001引 2、实验方法 2. 1A化E活力测定：A化E活力测定按照E1Ian等报道的方法稍加改变圧1Iman, G.L.，Courtney,Κ.D.，Andres,V.，Jr.etal.Anewandrapidcolorimetric determinationofacetylcholinesteraseactivity[J].BiochemPharmacol, 1961, 7: 88-95.] 。84. 5μ1 100mmol'kl胞2册〇4溶液（pH= 7. 5)中加入底物（AChl)、酶(脑匀浆 液)、待测化合物(岩藻黄素，阳性对照为多奈赃齐donepezil)各5μ1 (终浓度分别为岩藻 黄素50纳摩到500微摩，多奈赃齐10微摩)，加入乙丙嗦0.5μ1。37 °C解育30min。该 反应的产物为琉基胆碱。产生的琉基胆碱与75μ1 20mmol'klDTNB发生生色反应，生 成黄色的5-琉基-2-硝基苯乙酸，应用巧光光度计测定412nm处的吸收值。
[0016] 2. 2分子对接：A