专利名称：一种含有六环水的兽用阿米卡星溶液的制作方法
技术领域：
本发明属于兽药的技术领域，涉及以阿米卡星为原料制备一种广谱抗菌药，用于畜禽细菌和支原体感染的兽用药剂及其制法。
背景技术：
水是所有生物中最重要的成分，生物体一般含水量都在60％以上；食品中除干制品之外，含水量都在65％-90％之间；可以说水在我们的生活中起着非常重要的作用。水有许多特殊的性质，近年来引起人们的关注。例如杂志《江西化工》1997年第四期第34页《生命的水神奇的水》中介绍了具有六个水分子团结构的水，即所谓“六环水”，具有促进健康的功能。
天津大学学报2000年1月第33卷第1期收载的《水的六环结构及其对溶菌酶热变性的影响》通过理论分析和实验证明了水的六环结构及其生物功能。研究表明，水经过低温超声定频谱振后，大多数呈六环和六笼形水分子簇存在，这种水在生物蛋白、核酸、细胞及组织活动中起到重要作用；经DSC法实验证明，用六环水水合溶菌酶时，提高了其热抗变性能力。
化学通报2004年第四期收载的《水分子团簇结构的改变及其生物效应》概述了近30年来从水分子团簇结构的发现到水分子簇的稳定结构及相关理论计算的研究进展；总结了改变水分子团簇结构的四种方法，包括外加磁场、外加电场、激光辐射以及直接加热法，分别讨论了这四种方法的作用机理，介绍了水分子团簇结构变小后，作用于生物体，能产生多种生物效应，在很多方面能够改善生物体的生理机能。
科学研究表明，水分子团越小，活性越大，这种水喝起来越好喝，反之亦然。许多实验证明，改变水的结构时对生物的生理反应有很大的影响；具有五个水分子或六个水分子的小分子团结构的水，即五环水和六环水，对健康有很好的促进作用。目前在兽用口服液的制备工艺中，纯净水是最常用的溶媒，即将自来水进行一定的水处理后，用做药物的溶媒。然而科学研究表明，在药物制作的过程中使用普通水，由于水分子的结构，使药物的生物利用度不能得到最大限度的发挥。然而六环水能够保持较长时间的稳定性，对于细胞有很强的亲和力，能够显著提高药物的疗效，对于疾病的恢复有较快的促进作用。
水是一种特殊的物质，它具有很多功能。首先它是一种良好的溶剂，它含有O2、CO2等物质，具有不同的PH值。因此，可以溶解很多矿物质，为人体输送营养；水体又是一个“化学场”，其中可以进行各种复杂的化学反应如酸碱反应、氧化还原反应等，同时，还可以发生溶解、沉淀、分解、化合、胶溶等化学作用，在兽用口服液的制备工艺中，纯净水是最常用的溶媒。即将自来水进行一定的水处理后，用作药物的溶媒。在药物制作的过程中使用普通水，由于水分子的结构及其排列等原因，使药物的生物利用度不能得到最大限度的发挥。
已知阿米卡星的化学名称为O-3-氨基-3-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→6)-O-[6-氨基-6-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→4)]-N-(4-氨基-2-羧基-1-氧丁基)-2-脱氧-D-链霉胺硫酸盐。按干燥品计算，每1ml的效价不得少于690阿米卡星单位(n＝1.8)或不得少于674阿米卡星单位(n＝2)，阿米卡星的结构式见下图。该药物为白色或类白色粉末或为结晶粉末，几乎无臭，无味。在水中极易溶解，在甲醇、丙酮、乙醚或三氯甲烷中几乎不溶。
本品抗菌谱与庆大霉素相似，主要作用于革兰氏阴性菌如大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等。对结核杆菌、金黄色葡萄球菌也有良好的抗菌作用，其特点是对氨基糖苷酶较庆大霉素和妥布霉素稳定，这两种耐药菌的菌株对阿米卡星仍敏感。主要作用于革兰氏阴性菌引起的呼吸道、尿路、腹腔、软组织、骨、关节、生殖系统感染和败血症等。本类药物通过干扰细菌蛋白质的合成，对各种革兰氏阴性杆菌有强大杀菌作用，其杀菌活力在较广的范围内和药物浓度成正比，并对大肠杆菌等革兰氏阴性杆菌有较长时间的抗菌后效应作用；与头孢菌素类、青霉素类联合，对大肠杆菌等多种革兰氏阴性菌具协同作用。本类药物内服吸收很少，几乎完全从粪便排出，可用作肠道感染用药，肌注给药后吸收迅速，大部分以原形从尿中排出。
目前有关阿米卡星的产品主要有阿米卡星溶液，是将阿米卡星与适宜溶媒配制而成的溶液，含阿米卡星(C22H43N5O13)应为标示量的90.0％～110.0％，性状为无色或微黄色澄明液体。
本产品的鉴别方法为(1)取本品与阿米卡星标准品适量，分别加水制成每1ml中含10mg的溶液，照薄层色谱法(《中华人民共和国兽药典》2000年版一部附录23页)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨溶液-水(1∶4∶2∶1)为展开剂，展开后，晾干，喷以0.2％茚三酮的水饱和正丁醇溶液，在100℃加热10分钟，供试品溶液于标准品溶液所显斑点的颜色与位置相同。
(2)取本品1ml，加1mol/ml氢氧化钠溶液1ml，混合后加5％硝酸钴溶液2ml，即产生紫蓝色絮状沉淀。
(3)本品显硫酸盐的鉴别反应(《中华人民共和国兽药典》2000年版一部附录15页)。
pH值应为5.0～7.0(《中华人民共和国兽药典》2000年版一部附录40页)。
本药品的含量测定方法为精密量取本品适量，加灭菌水制成每1ml中约含阿米卡星1000单位的溶液，照抗生素微生物检定法(《中华人民共和国兽药典》2000年版一部附录68页)测定，1000阿米卡星单位相当于1mg的C22H43N5O13。
阿米卡星的制备工艺为1、将阿米卡星25g加入适量纯化水使之充分稀释、搅拌均匀；2、加入30％硫酸溶液10-40ml，使之溶解。
3、加注纯化水至全量1000ml，调解PH至5.0-7.04、过滤。
5、半成品送检，测定7、合格品灌装，装量100±1％。
8、包装密封性检查。
9、装箱打包。
以上所述的即为阿米卡星溶液现有的制备工艺及检测方法，但是现有阿米卡星溶液存在着释放速度慢、血药高峰浓度存在时间短、生物利用度差等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用六环水制备的具有释放速度快、血药高峰浓度时间长、生物利用度高的阿米卡星溶液兽用制剂。
为了达到上述目的，本发明提供一种畜禽抗菌药物，包含六环水，其特征在于以六环水为载体以微溶或溶于六环水的抗菌药物为活性成分，制备畜禽抗菌药物。
所述的畜禽抗菌药物，包含六环水，阿米卡星(化学名称为O-3-氨基-3-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→6)-O-[6-氨基-6-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→4)]-N-(4-氨基-2-羧基-1-氧丁基)-2-脱氧-D-链霉胺硫酸盐。化学结构式见下图) 其特征在于以六环水为载体制备阿米卡星溶液。
所述的阿米卡星溶液，其特征在于a、选用净化的水(即纯净水)作为原水，一般市售合格纯净水，电导率小于20μs/cm即可，静置数小时后缓慢冷冻，降温速率为2-5℃/h，冷冻最低温度达-30～-50℃，使水充分结晶，而后再解冻，其解冻过程在低于10℃下进行，溶化的水及时收集储存在4-10℃的温度环境中，即得到六环水；b、将阿米卡星25g加入适量六环水使之充分稀释、搅拌均匀；c、加入30％硫酸溶液10-40ml，使之溶解。
d、加注六环水至全量1000ml，调解PH至5.0-7.0；e、过滤；f、半成品送检，测定；g、合格品灌装，装量100±1％；h、包装密封性检查后装箱打包。
下面以实验说明本发明的治疗效果1材料与方法
1.1供试药品试验药品为六环水阿米卡星组，推荐剂量为1ml/1000ml水，饮水；对照药品为普通水阿米卡星组，推荐剂量为1ml/1000ml水，饮水1.2试验动物200只AA混合肉雏，购自天津市某养鸡公司，运至本实验室禽舍内笼养，常规管理，喂给全价饲料至14日龄，经检查没有发生大肠杆菌病，即可示为实验用鸡。将200只试验用健康鸡分成4组，其中1、2组分别为攻毒试验药物组和对照药物组，3组为阳性对照组，4组为阴性对照组。
1.3大肠肝菌人工感染剂量的确定1.3.1菌种 鸡大肠埃希氏菌标准菌株(O78血清型)由南京农业大学动物医学院提供1.3.2试验菌液的制备 将标准冻干菌O78加0.5ml肉汤溶解后接种于麦康凯琼脂上，分离单个菌落。挑取直径1-2mm光滑、圆形、红色菌落2-3个接种于2ml普通肉汤，37℃培养18h。肉汤培养物接种鸡复壮后，从死鸡肝脏中分离大肠杆菌，按上述方法重新接种。革兰氏染色镜检无杂菌生长后，作为试验菌液。用平板稀释法进行活菌计数约为6×109CFU/ml。
1.4试验方法除阴性对照组外，每只鸡肌肉注射1.2亿大肠杆菌。攻毒后约一周左右，雏鸡表现羽毛松乱，精神沉郁，减食及水样粪便或白色粪便污染肛周羽毛，饮水量增加。主要病理变化为出现心包膜肥厚、混浊；肝明显肿胀，包被白色胶样渗出物，有纤维蛋白附着物，肝有白色坏死斑；脾充血、肿胀。气囊混浊、肥厚，再用细菌学检查法确诊，此后马上用药，连续使用五天，观察治疗效果。
表1试验分组
1.5疗效判定标准1.5.1死亡 在试验期间出现鸡大肠杆菌病的典型症状并死亡，尸体剖检有典型的病变特征，并从肝、脾及心分离培养出鸡大肠埃希氏菌，判定为感染该菌而死亡。根据死亡鸡数计算各组的死亡率。
1.5.2治愈 在试验期间经内服给药后鸡精神状态、食欲恢复正常，不再出现排稀粪等临床症状，均属治愈。根据治愈鸡占试验鸡数的比率计算治愈率。
1.5.3有效 经内服给药后，完全治愈的鸡和没有死亡但有临床症状表现者，均为有效；试验结束时，每组存活的鸡数占试验鸡数的百分率为有效率。
1.5.4增重 根据试验开始及试验结束时每只鸡的体重，计算每只鸡的增重量，然后据此计算每组试验鸡的平均增重。相对增重率是按各用药治疗组与健康对照组的增重之比计算，其中健康对照组鸡增重率设为100％。
2试验结果各实验组对鸡大肠杆菌病的疗效见表2表2试验疗效比较
通过上表可以看出在相同条件下六环水组的治疗效果比普通水组高，差异较显著，对鸡大肠杆菌病有较好的疗效。
发明效果在其它条件相同情况下，与现有含纯化水阿米卡星溶液相比，将冷冻制备的六环水加注阿米卡星溶液中，水分子簇的体积变小，相应的水的粘度、表面张力等有所下降，使阿米卡星扩散阻力降低，促进药物释放，阿米卡星溶液药物释放速率和释放量都有所提高。六环水对于细胞有很强的亲和力，生物利用度好，用于畜禽细菌和支原体感染，能够显著提高药物的疗效，对于疾病的恢复有较快的促进作用。
具体实施例方式
实施例1a、选用净化的水(即纯净水)作为原水，一般市售合格纯净水，电导率小于20μs/cm即可，静置数小时后缓慢冷冻，降温速率为2-5℃/h，冷冻最低温度达-30～-50℃，使水充分结晶，而后再解冻，其解冻过程在低于10℃下进行，溶化的水及时收集储存在4-10℃的温度环境中，即得到六环水；b、将阿米卡星25g加入适量六环水使之充分稀释、搅拌均匀；c、加入30％硫酸溶液10-40ml，使之溶解。
d、加注六环水至全量1000ml，调解PH至5.0-7.0e、过滤。
f、半成品送检，测定g、合格品灌装，装量100±1％。
h、包装密封性检查后装箱打包。
该方法工艺简单，易于实现。
实施例2本发明药物，可用于治疗革兰氏阴性菌如大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等。对结核杆菌、金黄色葡萄球菌也有良好的抗菌作用。用法用量为混饮，1ml/1000ml水，自由饮用，连用3-5天。
权利要求
1.一种畜禽抗菌药物，包含六环水，其特征在于以六环水为载体以微溶或溶于六环水的抗菌药物为活性成分制备畜禽抗菌药物。
2.根据权利要求1所述的畜禽抗菌药物，包含六环水，阿米卡星(化学名称为O-3-氨基-3-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→6)-O-[6-氨基-6-脱氧-α-D-葡吡喃糖基-(1→4)]-N-(4-氨基-2-羧基-1-氧丁基)-2-脱氧-D-链霉胺硫酸盐)，化学结构式为 其特征在于以六环水为载体制备阿米卡星溶液。
3.根据权利要求2所述的阿米卡星溶液，其特征在于a、选用净化的水(即纯净水)做为原水，一般市售合格纯净水，电导率小于20μs/cm即可，静置数小时后缓慢冷冻，降温速率为2-5℃/h，冷冻最低温度达-30～-50℃，使水充分结晶，而后再解冻，其解冻过程在低于10℃的条件下进行，溶化的水及时收集储存在4-10℃的温度环境中，即得到六环水；b、将阿米卡星25g加人适量六环水使之充分稀释、搅拌均匀；b、将阿米卡星25g加入适量六环水使之充分稀释、搅拌均匀；c、加入30％硫酸溶液10-40ml，使之溶解；d、加注六环水至全量1000ml，调解PH至5.0-7.0；e、过滤；f、半成品送检，测定；g、合格品灌装，装量100±1％；h、包装密封性检查后装箱打包。
全文摘要
本发明属于兽药的技术领域，涉及一种畜禽抗菌药物以阿米卡星为原料制备一种抗菌溶液，阿米卡星溶液以六环水为载体，经冷冻制备的六环水加注阿米卡星溶液中，水分子簇的体积变小，相应的水的粘度、表面张力等有所下降，使阿米卡星扩散阻力降低，促进药物释放，发明阿米卡星溶液药物释放速率和释放量都有所提高，六环水对于细胞有很强的亲和力，用于畜禽细菌和支原体感染，能够显著提高药物的疗效，对于疾病的恢复有较快的促进作用。
文档编号A61P31/00GK1965847SQ20051001614
公开日2007年5月23日 申请日期2005年11月18日 优先权日2005年11月18日
发明者李旭东, 鲍恩东, 苏建东 申请人:天津市润拓生物技术有限公司