专利名称：刺梨多糖的新作用的制作方法
技术领域：
本发明涉及刺梨多糖的新作用，特别是在治疗神经干细胞损伤中的应用。
背景技术：
刺梨(Rosa roxburghii Tratt)是蔷薇科蔷薇属植物，又名缫丝花，多以果实入药，分布于我国西南地区，富含三萜化合物、SOD、维生素C和鞣酸等。关于刺梨汁的抗肿瘤、增强免疫力、抗动脉粥样硬化、清除自由基等生物活性研究较多，但其活性成分研究的研究较少。对刺梨多糖的研究仅限于粗多糖的免疫增强功能和抗应激功能等。
发明内容
本发明的目的是提供一种刺梨多糖在治疗脑功能性疾病中的应用。特别是在对神经干细胞保护中的应用。
本发明从刺梨汁中分离纯化得到刺梨多糖对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用进行研究，结果表明，RRTP-1对神经干细胞硫代硫酸钠损伤有明显的保护作用。
本发明的刺梨多糖采用如下方法制备(1)神经干细胞的培养与鉴定(2)刺梨多糖的分离纯化(3)刺梨多糖纯度鉴定。
本发明从刺梨中提取了刺梨多糖，并应用神经干细胞硫代硫酸钠损伤模型研究其对中枢神经系统的保护作用。对刺梨多糖在脑功能性疾病的应用提供了一种新方法。
具体实施例方式1.神经干细胞的分离培养与鉴定无菌条件下取出大鼠胚胎的纹状体，放入含有1％B27，20ng·mL-1表皮生长因子(EGF)，10ng·mL-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的F12-DMEM(1∶1)培养基中，吹打制成细胞悬液，于37℃，5％CO2饱和湿度下常规培养，每培养一周传代一次。将细胞贴附在载玻片上生长，2d后取出。吸出培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗去残余培养液，4％(m/m)多聚甲醛固定20min。PBS洗2次；10％正常山羊血清封闭1h；PBS洗3次；抗nestin抗体(v/v 1∶100，用抗体稀释液稀释)4℃过夜，PBS洗3次；二抗(v/v 1∶50，用抗体稀释液稀释)32℃孵育1h，PBS洗3次；50％(v/v)甘油封片，观察荧光。
2.脑缺氧体外模型的构建将1mL密度为5×105mL-1细胞悬液置于24孔板中，加入浓度为250mmol·L-1的硫代硫酸钠(Na2S2O3)溶液20μL，使硫代硫酸钠溶液浓度为5mmol·L-1，混匀，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，每隔24h观察并细胞计数(用1.5％台盼蓝染色，计算500个总细胞中活细胞的百分率)。
3.实验分组与检测指标正常对照组细胞培养液为正常神经干细胞培养液；硫代硫酸钠损伤组方法如2.7.2所述。试验组不同浓度RRTP-1加入硫代硫酸钠损伤组培养液中形成3个亚组，即低浓度组(20μmol·L-1)、中浓度组(40μmol·L-1)和高浓度组(80μmol·L-1)。
神经干细胞死亡率将1mL密度为5×105mL-1各组细胞悬液置于24孔板中，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，观察并计算活细胞的百分率(1.5％台盼蓝染色，显微镜下计数500个总细胞)；乳酸脱氢酶(LDH)漏出率各组换无血清培养液12h后收集上清液，用速率法测定细胞外液中LDH活性。
4.结果硫代硫酸钠损伤组培养液中细胞死亡率和LDH漏出率明显增加，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。刺梨多糖高浓度组神经干细胞培养液中，细胞死亡率和LDH漏出率相对较小，与硫代硫酸钠损伤组比较有显著性差异(P＜0.01)。说明一定剂量RRTP-1对神经干细胞缺氧损伤有明显的保护作用。在实验浓度范围内，RRTP-1对神经干细胞损伤的保护作用与其浓度呈现一定的量效关系。
权利要求
1.刺梨多糖在治疗脑功能性疾病中的应用。
2.刺梨多糖在治疗神经干细胞损伤中的应用。
全文摘要
本发明涉及刺梨多糖的新作用，特别是在治疗神经干细胞损伤中的应用。本发明从刺梨中提取了刺梨多糖，并应用神经干细胞硫代硫酸钠损伤模型研究其对中枢神经系统的保护作用。对刺梨多糖在脑功能性疾病的应用提供了一种新方法。
文档编号A61P25/00GK1813789SQ20051011073
公开日2006年8月9日 申请日期2005年11月25日 优先权日2005年11月25日
发明者朱晓霞, 段艳红, 陈付学 申请人:上海大学