专利名称：(二芳基－甲基)－丙二腈和它们作为雌激素受体配体的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及(二芳基-甲基)-丙二腈化合物以及它们作为雌激素受体配体的用途。
背景技术：
雌激素受体配体抑制炎症基因表达(引起细胞因子、趋化因子、黏着分子和炎症酶的减少)的能力被认为提供了治疗疾病例如动脉粥样硬化、心肌梗塞(MI)、充血性心力衰竭(CHF)、炎性肠疾病和关节炎的炎症成分的手段。这类分子的其他潜在治疗适应症包括II型糖尿病(Cefalu，J.WomensHealth & Gender-basedMed.，2001，10，241和Yuan等人，Science，2001，293，1673)、骨关节炎(Pelletier等人，Arthr.& Rheum.，2001，441237和Felson等人，Curr Opinion Rheum，1998，10，269)、哮喘(Chin-Chi Lin等人，Immunol. Lett.，2000，73，57)、阿尔茨海默病(Roth，A.等人，J.Neurosci.Res.，1999，57，399)和自身免疫病例如多发性硬化症和类风湿性关节炎。
这些慢性炎症病症的共同成分被怀疑是通过细胞因子和引起它们募集的黏着分子的表达增加而造成多形核白细胞和单核细胞浸润进入损伤的部位。细胞因子白细胞介素(IL-6)的超量产生与慢性炎症的状态有关(BauerM.A.，Herrmann F.，Ann.Hematol.，1991，62，203)。IL-6基因的合成通过转录因子核因子κB(NF-κB)而受到诱导。在炎症过程的这一步进行干预被认为可有效地调节在这些慢性病症中出现的未受控制的增生过程。
在内皮细胞中，17β-雌二醇(E2)以雌激素受体(ER)依赖方式抑制IL-1β诱导的NF-κB报道基因活性和IL-6的表达(Kurebayashi S.等人，J.SteroidBiochem.Molec.Biol.，1997，60，11)。这据说与E2的体内抗炎作用有关，如已经在炎症的不同动物模型中得到确认。在动脉粥样硬化的模型中，E2显示可保护内皮细胞的完整性和功能，并减少白细胞粘连和内膜积聚(Adams，M.R.等人，Arterio.，1990，1051，Sullivan，T.R.等人，J.Clin.Invst．1995，96，2482，Nathan，L.等人，Circ. Res.，1999，85，377)。在心肌梗塞(Delyani，J.A.等人，J.Molec.Cell.Cardiol.，1996，28，1001)和充血性心力衰竭的动物模型中也已经证实了血管壁上雌激素的相似作用。在临床上，已经证实雌激素替代疗法(ERT)在同时患有CHF(Reis等人，J.Am.Coll.Cardio.，2000，36，529)和MI(Grodstein，F.等人，Ann.Int.Med.，2000，133，933，Alexander等人，J.Am.Coll.Cardio.，2001，38，1和Grodstein F.等人，Ann.Int.Med，2001，135，1)的患者中可降低死亡的风险。在ERT中，临床研究证实了E2在降低β-淀粉状蛋白1-42(Aβ42)——在阿尔茨海默病中老年斑形成关键肽——产生中的影响(Schonknecht，P.等人，Neuroscci. Lett.，2001，307，122)。
但是，17-β-雌二醇也强烈刺激肌酸激酶的表达。所以，已经证实在ERT中的一些潜在的不可取副作用，如在使用的第一年中心血管事件的风险增加(Hulley，S.等人，J.Am.Med．Assoc.，1998，280，605)，以及在子宫和乳房组织中的增生作用。
发明概述本发明涉及能够用作雌激素受体配体的化合物。这一类型的优选化合物是(二芳基-甲基)-丙二腈。在某些实施方案中，这类化合物为下式化合物
其中R1、R2和R3各自独立地是氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基、硝基、氰基、烷硫基、CF3、OCF3或OH；且R4为氢、烷基、链烯基、芳基烷基、环烷基-甲基或杂环基-烷基；条件是R1、R2、R3和R4中至少一个不是氢；和其可药用盐、水合物和溶剂合物。
在另一方面，本发明涉及包含一种或多种雌激素受体配体和可药用载体的药物组合物。
在其他方面，本发明涉及在有需要的哺乳动物中治疗或抑制慢性炎性疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的本发明化合物。
这类疾病包括类风湿性关节炎、脊椎关节病、骨关节炎、银屑病关节炎、幼年关节炎、炎性肠疾病、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、不确定性结肠炎、银屑病、哮喘和慢性梗阻性肺疾病。
本发明也涉及在有需要的哺乳动物中治疗或抑制中风、缺血或再灌注损伤的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的本发明化合物。在其他的实施方案中，本发明涉及在哺乳动物中降低胆固醇、甘油三酯、Lp(a)和LDL的水平；抑制或治疗高胆固醇血症、高脂血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、周围血管疾病、再狭窄或血管痉挛的方法。
仍在其他方面，本发明的化合物可用于在哺乳动物中治疗或抑制阿尔茨海默病、认知减退、老年痴呆或II型糖尿病。
发明详述本发明优选的化合物为在人内皮细胞中以ER依赖性方式阻滞白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的核因子κB(NF-κB)萤光素酶报道基因活性或白细胞介素-6(IL-6)表达的那些。可用于本发明的化合物优选不显示或仅显示少量与体内雌激素有关的对子宫和乳房组织的增生作用。在体外通过肌酸激酶(CK)-典型的雌激素反应基因-表达的缺乏可确认不存在雌激素的副作用。本文所述的化合物预期证明可用于治疗和预防慢性炎性疾病而不会象典型的雌激素一样刺激子宫和乳房细胞的增生。
本发明的化合物包括(二芳基-甲基)-丙二腈。在一些方面，该化合物可用下式表示 其中R1、R2和R3各自独立地是氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基、硝基、氰基、烷硫基、CF3、OCF3或OH；且R4为氢、烷基、链烯基、芳基烷基、环烷基-甲基或杂环基-烷基；条件是R1、R2、R3和R4中至少一个不是氢，和其可药用盐、水合物和溶剂合物。
在某些化合物中，R4优选是H。在其他的化合物中，R4为烷基、链烯基、芳基烷基、环烷基-甲基或杂环基-烷基。
在一些实施方案中，R1、R2、R3中至少一个是卤素、烷基、环烷基、烷氧基、硝基、氰基、烷硫基、CF3、OCF3或OH。
在一些化合物中，R1和R2优选各自独立地是氢、卤素、烷基、烷氧基、氰基、CF3或OH。在某些这些化合物中，R1和R2是相同的。在其他化合物中，R3优选是氢、烷基、链烯基、烷基芳基或杂环基-甲基。在某些实施方案中，R1和R2各自独立地是氢、卤素、烷基或烷氧基。在其他实施方案中，R3是烷基、烯丙基、苄基。
在某些优选的化合物中，R1和R2各自为H，且R3为卤素、烷基、烷氧基、氰基、CF3或OH。在其他化合物中，R1和R2各自为H，且R3为卤素、烷基或烷氧基。在某些这些化合物中，R4是H。在其他化合物中，R3为甲基或甲氧基。
本发明代表性的化合物包括
2-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(3-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(2-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(4-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(4-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]-2-甲基丙二腈，和2-[二(1-萘基)甲基]丙二腈。
本发明也涉及本文所述化合物的全部或任何一种其立体异构体和可药用盐。当本发明的化合物包含碱性部分时，可从有机和无机酸形成可药用盐，例如乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸和类似的已知可用酸。当本发明的化合物含有酸性部分时，从有机和无机碱也可形成盐，例如碱金属盐(例如钠盐、锂盐或钾盐)、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或在每一个烷基中含有1-6个碳原子的二烷基铵盐，以及在每一个烷基中含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
除非另有说明，术语“烷基”指的是(C1-C6)直链或(C3-C6)支链单价饱和烃部分。饱和烃烷基部分的实例包括但不限于化学基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基；高级同系物如正戊基、正己基等。
除非另有说明，术语“链烯基”指的是含有至少一个双键的(C2-C6)直链或(C3-C6)支链单价烃部分。这类烃链烯基部分可以是单或多不饱和的，并可以以E或Z构型存在。本发明的化合物意欲包括所有可能的E和Z构型。单或多不饱和烃链烯基部分的实例包括但不限于化学基团如乙烯基、2-丙烯基、异丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、丁间二烯基、2-(丁间二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)以及高级同系物、异构体等。
除非另有说明，术语“环烷基”指的是具有3-10个碳原子的单环、双环、三环、稠合、桥连或螺状单价饱和烃部分，其中碳原子位于环系内或外。环烷基部分的任何适宜环位置可以共价连接于所定义的化学结构。环烷基部分的实例包括但不限于化学基团如环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基、环己基、环己基甲基、环己基乙基、环庚基、降冰片基、金刚烷基、螺[4.5]癸基以及同系物、异构体等。
除非另有说明，单独或与其他术语组合使用的术语“卤素”在本文被定义为氟、氯、溴或碘原子。
除非另有说明，单独或与其他术语组合使用的术语“芳基”在本文被定义为至多20个碳原子例如6-20个碳原子的芳族碳环部分，其可以是单环(一个环)或稠合在一起或共价连接的多环(二环，至多三环)。芳基部分的任何适宜环位置可以共价连接于所定义的化学结构。芳基部分的实例包括但不限于化学基团如苯基、1-萘基、2-萘基、二氢萘基、四氢萘基、联苯基、蒽基、菲基、芴基、2，3-二氢化茚基、亚联苯基(biphenylenyl)、苊基、亚苊基(acenaphthylenyl)等。
本文所用的术语“芳基烷基”指的是基团-R-Ar，其中Ar为芳基且R为烷基。芳基烷基部分的实例包括但不限于化学基团如苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、二苯基甲基、3-苯基丙基、2-苯基丙基、芴基甲基以及同系物、异构体等。
术语“杂环”或“杂环基”包括“杂芳基”，除非另有说明，其指芳族杂环系统，其可以是单环(一个环)或稠合在一起或共价连接的多环(二环，至多三环)。在一些实施方案中，杂芳基具有4-20个碳原子。该环可含有一至四个选自氮(N)、氧(O)或硫(S)的杂原子，其中的氮或硫原子任选地被氧化，或氮原子任选地被季铵化。杂芳基部分的任何适宜环位置可以共价连接于所定义的化学结构。在一些实施方案中，杂芳基可以是具有一到两个独立地是氮、氧或硫的杂原子的芳族5元至7元含碳单环。杂芳基部分的实例包括但不限于杂环如呋喃、噻吩、吡咯、N-甲基吡咯、吡唑、N-甲基吡唑、咪唑、N-甲基咪唑、唑、异唑、噻唑、异噻唑、1H-四唑、1-甲基四唑、1，3，4-二唑、1H-1，2，4-三唑、1-甲基-1，2，4-三唑、1，3，4-三唑、1-甲基-1，3，4-三唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、苯并呋喃、苯并噻吩、噻蒽、二苯并[b，d]呋喃、二苯并[b，d]噻吩、苯并咪唑、N-甲基苯并咪唑、吲哚、吲唑、喹啉、异喹啉、喹唑啉、喹啉、嘌呤、蝶啶、9H-咔唑、β-咔啉等。
如本文前述所定义的杂环化学基团也包括任选地饱和或部分饱和的杂环。饱和或部分饱和的杂环部分的实例包括但不限于化学基团如氮杂环丁烷基、1，4-二烷基、六氢氮杂基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异唑基、二氢异噻唑基、二氢二唑基、二氢唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、二氢-1，4-二烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。
术语“杂环基-烷基”指的是基团-R-杂环，其中R为烷基。
除非另有说明，术语“烷氧基”指的是与氧原子共价键合的(C1-C6)直链或(C3-C6)支链烃。烷氧基部分的实例包括但不限于化学基团如甲氧基、乙氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、癸氧基以及同系物、异构体等。
除非另有说明，术语“烷硫基”指的是与硫原子共价键合的(C1-C6)直链或(C3-C6)支链烃。烷硫基部分的实例包括但不限于化学基团如甲硫基、乙硫基、异丙硫基、仲丁硫基、叔丁硫基以及同系物、异构体等。
每一个上述术语(例如烷基、芳基、杂芳基)意欲包括所示基团或部分的未取代、单取代和多取代形式。以下提供每一类型部分的取代基。
烷基、链烯基、环烷基、亚烷基、芳基烷基和杂环基-烷基和酰基部分的烷基部分的取代基包括-R′、OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、-NR′R″、-SR′、卤代-OC(O)R′、-CO2R′、-C(O)NR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″CO2R′、-NR′C(O)NR′R″、-NH-C(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、氰基和硝基，其中R’和R”各自独立地为氢、未被取代的(C1-C6)烷基、未被取代的(C3-C7)环烷基、芳基、芳基-(C1-C3)烷基、芳基氧基-(C1-C3)烷基、芳基硫基-(C1-C3)烷基、杂芳基、杂芳基-(C1-C3)烷基、杂芳基氧基-(C1-C3)烷基或杂芳基硫基-(C1-C3)烷基，或任选地合在一起(当R’和R”不是氢时)形成环。
芳基或杂环基部分可任选地被取代基单、双或三取代。代表性的取代基包括-R′、-OR′、-SR′、-C(O)R′、-CO2R′、-烷氧基烷基、烷氧基烷基氧基、氰基、卤素、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NR′R″、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、羟基烷基、-S(O)R′、-S(O)2R′、-SO3R′、-S(O)2NR′R″、-CO2R′和C(O)NR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″CO2R′、-NR′C(O)NR′R″、-NH-C(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR′、-S(O)R′和-S(O)2R′，其中R’和R”各自独立地为氢、(C1-C6)烷基、(C3-C7)环烷基、芳基、芳基-(C1-C3)烷基、芳基氧基-(C1-C3)烷基、芳基硫基-(C1-C3)烷基、杂芳基、杂芳基-(C1-C3)烷基、杂芳基氧基-(C1-C3)烷基或杂芳基硫基-(C1-C3)烷基，或任选地合在一起(当R’和R”不是氢时)形成环。
本发明的化合物可包含不对称的原子，且一些化合物可含有一个或多个不对称的原子或中心，所以可产生光学异构体和非对映体。
在方案1中描述了本发明化合物的一种合成方法。
方案1 本文所用的起始原料可购得或通过本领域技术人员已知的方法进行制备。这些方法可见于标准的参考文献例如“Handbook of Reagents forOrganic Synthesis”第1-4卷(John Wiley & Sons，Chichester，UK，1999)和Organic Reactions，第1-55卷(John Wiley & Sons，NY)。
如方案1所示，丙二腈与任选取代的芳族或杂芳族醛在催化剂存在下进行缩合产生中间体(1)。催化剂可以是衍生于胺和羧酸的盐(例如甲酸铵或氨基酸如丙氨酸)(G.Jones，Organic Reactions，1967，15，204；Y.Sumida，Polymer Journal，1981，13，521)，路易斯酸如含四氯化钛的吡啶(W.Lehnert，Tetrahedron Lett.，1970，54，4723)，或在树脂上固定的胺(J.Simpson，Tetrahedron Lett.，1999，40，7031)。近来，已经发现离子性液体可用作碱催化的诺文葛耳反应的介质。将芳基格利雅或锂/铜(例如Gilman型)试剂(N.Laitif，J.Chem.Soc.，1974，875；Gupte，J.Org.Chem.，1959，24，1334)迈克尔加成至浓缩产物，产生取代的丙二腈(2)。用烷基卤或磺酸酯烷基化(2)的阴离子(A.A.Fadda，Ind.J.Chem.，1990，29B，171)，产生所需的二腈(3)。
中间体2(其中Ar1＝萘基，Ar＝苯基)的替代合成法包括二芳基甲基卤化物(或对等物)的合成和随后用于丙二腈的烷基化。如方案2所示。
方案2 如方案3所示，可获得方案2中的中间体二芳基甲基-X。使用本领域技术人员已知的方法(例如Ph3P/CCl4、Ph3P/CBr4、碘化甲基三苯氧基、TsCl/Pyr、MsCl/TEA、AC2O/Pyr)，可将醇(3)转化为离去基团。
方案3
R4为烯丙基或苄基的化合物的替代合成法包括使用本领域技术人员已知的方法(例如诺文葛耳反应)合成2-二苯基亚甲基-丙二腈，随后在Mizuno等人的条件下(J.Am Chem Soc 1988 110，1288)加成烯丙基(或苄基)锡烷，如方案4所示。
方案4 实施例实施例12-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈将(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液加入2-甲氧基苯基溴化镁(2.4mL，2.4mmol，1M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌1.5小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。用硅胶(20％乙酸乙酯/己烷)纯化后，分离出灰白色泡沫状的551mg产物。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.14(d，1H，J＝8.05Hz)，7.93(m，2H)，7.74(d，1H，J＝7.32Hz)，7.60(d，1H，J＝8.05Hz)，7.53(m，2H)，7.27(t，1H，J＝7.85Hz)，7.21(dd，1H，J＝7.81，1.71Hz)，7.09(d，1H，J＝7.56Hz)，6.89(t，1H，J＝7.75Hz)，6.02(d，1H，J＝10.25)，5.97(d，1H，J＝10.49)，3.89(s，3H)。
MS(APCI)m/z 311[M-H]-；C21H16N2O的分析计算值C80.75 H5.16 N8.97。实测值C80.37H5.05 N8.70。
实施例22-萘-1-基亚甲基-丙二腈将1-萘甲醛(20g，128mmol)、丙二腈(10.15g，153.7mmol)、哌啶(5.45g，64mmol)、150mL乙醇和100mL甲苯在装有搅拌棒的烧瓶中合并，并回流除去水达4小时，之后将反应冷却并用乙酸乙酯处理。将有机层用0.1N盐酸、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至干。将残余物从乙酸乙酯中重结晶，产生8.80g晶体固体产物，mp165-167℃；1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 9.36(s，1H)，8.25(m，2H)，8.17(d，1H，J＝7.3Hz)，8.06(d，1H，J＝7.4Hz)，7.68(m，3H)。
MS(EI)m/z(M)+(204)C14H8N2·0.1mol H2O的分析计算值C81.62 H4.01 N13.60。实测值C81.76 H3.76 N13.75。
实施例32-[(3-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈将来自实施例2的(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液加入3-甲氧基苯基溴化镁(2.4mL，2.4mmol，1M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌1.5小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。硅胶(20％乙酸乙酯/己烷)纯化后，分离出灰白色泡沫状的401mg产物。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.30(d，1H，J＝8.29Hz)，7.94(m，2H)，7.80(d，1H，J＝7.32Hz)，7.62(t，1H，J＝8.0Hz)，7.54(m，2H)，7.25(t，1H，J＝8.0Hz)，7.09(t，1H，J＝1.95Hz)，7.04(d，1H，J＝7.08Hz)，6.83(dd，1H，J＝8.30Hz，0.73Hz)，6.11(d，1H，J＝10.49Hz)，5.87(d，1H，J＝10.49Hz)，3.69(s，3H)；MS(EI)m/z，312(M)+；C21H16N2O·0.3mol H2O的分析计算值C79.37 H5.27 N8.82。实测值C79.32 H5.14 N8.62。
实施例42-[(2-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈将来自实施例2的(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液加入邻-甲苯基溴化镁(1.2mL，2.4mmol，2M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌1.5小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。硅胶(20％乙酸乙酯/己烷)纯化后，分离出灰白色泡沫状的455mg产物。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.38(d，1H，J＝8.54Hz)，7.96(d，1H，J＝8.05Hz)，7.91(d，1H，J＝8.05Hz)，7.60(m，1H)，7.54(m，2H)，7.46(m，2H)，7.24(m，1H)，7.20(m，2H)，6.04(d，1H，J＝9.76Hz)，5.95(d，1H，J＝9.76Hz)，2.30(s，3H)；MS(APCI)m/z 295[M-H]-；C21H16N2的分析计算值C85.11 H5.44 N9.45。实测值C84.81 H5.30 N9.43。
实施例52-[(4-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈将来自实施例2的(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液加入4-甲基苯基溴化镁(2.4mL，2.4mmol，1M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌1.5小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。硅胶(15％乙酸乙酯/己烷)纯化后，分离出灰白色泡沫状的116mg产物。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.25(d，1H，J＝7.81Hz)，7.92(m，2H)，7.78(d，1H，J＝7.32Hz)，7.61(t，1H，J＝7.44Hz)，7.52(m，2H)，7.37(d，2H，J＝7.56Hz)，7.13(d，2H，J＝7.81Hz)，6.06(d，J＝9.76Hz，1H)，5.85(d，J＝10.49Hz，1H)，2.21(s，3H)；
MS(APCI)m/z 295[M-H]-；C21H16N2·0.15mol H2O的分析计算值C84.34 H5.49 N9.37。实测值C84.03 H5.54 N9.17。
实施例62-[(4-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈将来自实施例2的(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液中加入4-甲氧基苯基溴化镁(4.8mL，2.4mmol，0.5M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌1.5小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。硅胶(20％乙酸乙酯/己烷)纯化后，分离出灰白色泡沫状的465mg产物。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.25(m，1H)，7.93(m，1H)，7.90(s，1H)，7.79(d，1H，J＝7.32Hz)，7.61(t，1H，J＝7.81Hz)，7.52(m，2H)，7.40(d，2H，J＝8.79Hz)，6.88(d，2H，J＝8.79Hz)，6.05(d，1H，J＝10.49Hz)，5.84(d，1H，J＝10.49Hz)，3.68(s，3H)；MS(APCI)m/z 330[M+NH4]+；C21H16N2O·0.4mol H2O的分析计算值C78.93 H5.30 N8.77。实测值C79.09 H5.11 N8.47。
实施例72-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]-2-甲基丙二腈将实施例1的2-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈(196mg，0.63mmol)溶解于10mL四氢呋喃中并冷却至-35℃。加入六甲基二甲硅烷基氨基钾(1.14mL，0.75mmol，0.66M甲苯溶液)。移去冷却浴，温热反应至室温，之后加入甲基碘(0.078mL，125mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。硅胶(20％乙酸乙酯/己烷)纯化并用甲醇重结晶后，分离出104mg晶体状固体产物，mp175-177℃。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.10(m，1H)，7.95(m，3H)，7.64(t，1H，J＝7.75Hz)，7.52(m，2H)，7.31(m，2H)，7.14(d，1H，J＝7.57Hz)，6.91(td，1H，J＝7.57Hz，0.98Hz)，5.93(s，1H)，3.91(s，3H)，1.90(s，3H)；MS(APCI)m/z 327[M+H]+；C22H18N2O的分析计算值C80.96 H5.56 N8.58，实测值C80.91H5.56 N8.55。
实施例82-[(二(1-萘基)甲基)丙二腈将来自实施例2的(1-萘基亚甲基)丙二腈(408mg，2mmol)和10mL无水四氢呋喃加入烧瓶中。在室温下，向该搅拌的溶液加入1-萘基溴化镁(12.5mL，2.5mmol，0.1M四氢呋喃溶液)。将反应搅拌2小时，之后用1N盐酸猝灭并用乙酸乙酯处理。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发至干。残余物用乙醇重结晶，得到231mg晶体状固体产物，mp179-181℃。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.41(m，2H)，7.96(m，2H)，7.91(d，2H，J＝8.05Hz)，7.60(dd，2H，J＝7.32Hz，0.98Hz)，7.53(m 6H)，6.76(d，1H，J＝9.52Hz)，6.08(d，1H，J＝9.27Hz)；MS(APCI)m/z 331[M-H]-；C24H16N2的分析计算值C86.72 H4.85 N8.43。实测值C86.53 H4.70 N8.51。
实施例92-(2-氟-亚苄基)-丙二腈将丙二腈(3.303g，50mmol)、2-氟苯甲醛(6.205g，50mmol)、1g分子筛和500mg树脂结合的哌啶(描述于Tetrahedron Lett.，1999，40，7031-33)置于容器中，将该容器用300W单模式微波照射15秒。将反应混合物置于乙酸异丙酯中，过滤，蒸发，用二氯甲烷处理，通过Magnasol垫过滤，蒸发，用乙醇重结晶，得到2.435g晶体状固体标题物，mp117-118℃(Can.J.Chem.，1967，45 1001-06)。
1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.58(s，1H)，8.04(td，1H，J＝7.57Hz，1.71Hz)，7.74(m，1H)，7.45(m，2H)；MS(APCI)m/z 172(M)-；C10H5FN2的分析计算值C69.77 H2.93 N16.27。实测值C69.65H2.67 N16.33。
实施例10体外方法细胞将T-175烧瓶中100％融合HAECT-1细胞(无限增殖化人主动脉内皮细胞)用8ml HBSS(HEPES缓冲的盐水溶液)洗涤，并用6ml Ad5-wt-hERα病毒(介导CMN启动子驱动的人ERα表达的腺病毒转染载体)在含0.25％牛血清白蛋白(EBM-BSA)的不含酚红内皮细胞基础培养基(Clonetics，SanDiego CA，目录号CC-3129)中的1∶10稀释液感染四小时。四小时后，将细胞用EBM-BSA洗涤并在相同培养基中孵育过夜。过夜孵育后，将细胞用EBA-BSA洗涤，并用6ml Ad5-3x(NFκB).Luc病毒(通过MHC NFκβ位点5’至胸腺嘧啶激酶启动子的3次重复驱动的腺病毒萤光素酶表达载体)在EBM-BSA中的1∶10稀释液感染2小时。两小时后，洗涤细胞，在34℃孵育1小时。然后洗涤细胞、用胰酶消化、计数并以4×106细胞/ml的浓度重新悬浮在95％FBS/5％二甲基亚砜中，并在冷冻管中冷冻为1或5ml的等分试样，在-150℃储存。如上所述处理对照细胞(无ER感染)，但未经Ad5-wt-hERα病毒感染。
IL-6和肌酸激酶测定将ERα感染的HAECT-1细胞或对照细胞解冻，在温热的EBA-BSA中稀释42倍，以0.1ml/孔接种于96孔板并在34℃孵育4小时。将受试化合物在含有2ng/ml IL-1β(R&D Systems)的EBM-BSA中的2倍原液加入到细胞中，并将板放回培养箱(34℃)。15-20小时后，从细胞中取出100μl培养基等分试样，使用BioSource人IL-6 ELISA试剂盒测定IL-6含量。随后将细胞用300μl Dulbecco磷酸盐缓冲盐水洗涤，并溶解在50μl细胞培养溶解试剂(Promega)中。使用10μl裂解物并与100μl Promega萤光素酶测定试剂混合，在Wallac Victor2发光计(Gaithersburg，MD)上测定萤光素酶。将100μl CK测定试剂(Sigma，目录号No47-10)加入到剩余细胞裂解物后，从A340处增长率测定肌酸激酶。
数据分析为了计算IC50和EC50，将平均IL-6、萤光素酶或CK值相对于化合物浓度的log10值拟合为四参数对数方程。迭代估计出IC50/EC50值、“Hill斜率”、曲线的上限和下限。
小鼠将切除卵巢的C57BL/6小鼠(16-20g)(Taconic)分组，每组8只。恢复5-7天后，小鼠被饲以固型(chow)饲料或致动脉粥样化饲料(15.75％脂肪、1.25％胆固醇和0.5％胆酸钠)(Purina饲料#21539)。通过管饲将在甲基纤维素/吐温载体中的EE或受试化合物每天一次施用(每只小鼠0.1ml)，持续5周。在试验期结束时，收集肝脏并记录子宫湿重。
RNA分析使用Trizol试剂(BRL)制备肝脏总RNA。根据生产商(AppliedBiosystems)的方案，使用ABI PRISM 7700序列检测系统、通过实时RT-PCR验证了NF-κB靶基因的雌激素和化合物调节。使用SequenceDetector vl.7软件(Applied Biosystems)分析数据，并使用AppliedBiosystems引物集合将数据归一化为GAPDH。
体外结果表1总结了在Ad5-wt-ER感染的细胞中E2和几个“抗炎雌激素”在HAECT-1 NF-κB、IL-6和肌酸激酶测定中的活性。表2列出了在未感染的细胞中相同化合物在HAECT-1 NF-κB和肌酸激酶测定中的活性。
表1.在Ad5-wt-ER感染的HAECT-1细胞中，17-β-雌二醇对NF-κB、IL-6和CK表达的影响
*有效性值相对于用E2观察到的最大抑制(NF-κB或IL-6测定)或刺激(CK测定)表2.在无ER感染的HAECT-1细胞中，17-β-雌二醇对NF-κB和CK表达的影响
E2在Ad5-wt-ER感染的HAECT-1细胞中抑制NF-κB和IL-6表达，IC50值为1nM左右，并以类似的强度(5.8nM)在相同细胞中诱导肌酸激酶的表达(表1)。相反，在Ad5-wt-ER感染的HAECT-1细胞中，本发明化合物抑制NF-κB和IL-6表达，显示被降低的CK表达或没有CK表达(表1)。正如它们在未经Ad5-wt-ER病毒感染的HAECT-1细胞中无活性所表明，上述化合物以ER-依赖性的方式抑制NF-κB的表达(表2)。本化合物抑制NF-κB和IL-6表达而不诱导CK活性的能力(表1)与它们具有抗炎活性而没有典型的雌激素活性相一致。
实施例11体内活性为了测定在肝脏中雌激素调节饮食诱导的炎症发展的能力，监测了由致动脉粥样化饮食导致的基因表达的改变。切除卵巢的C57BL/6小鼠被饲以固型或致动脉粥样化饲料，每天用EE(0.01mg/kg)或受试化合物(10mg/kg)处理(表3)。实时RT-PCR分析证实了致动脉粥样化饮食对MHC不变链(MHI)、VCAM-1、PANTES和TNF-α的mRNA的诱导作用，用EE处理强烈地抑制这些基因的诱导。
用受试化合物处理并不导致显著诱导子宫湿重增加——与EE有关的不良活性(表3)。
表3.与载体对照相比在C57BL/6中EE(0.01mg/kg/天)和受试化合物(10mg/kg/天)对子宫湿重增加的影响。
在MCF-7乳腺癌细胞中使用ERE-报道基因实验法评价受试化合物在DMSO中制备受试化合物的储备液(通常为0.1M)，然后用DMSO稀释10至100倍以制得1或10mM的工作液。将DMSO储备液储藏在4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)。MCF-7细胞用生长培养基[含有10％(v/v)热灭活胎牛血清、1％(v/v)青霉素-链霉素和2mM glutaMax-1的D-MEM/F-12培养基]每周传代二次。将细胞维持在5％CO2/95％湿度的空气培养箱内的37℃通风烧瓶中。在处理前一天，以25,000细胞/孔将细胞接种入96孔板的生长培养基并在37℃孵育过夜。
将细胞用50μl/孔的腺病毒5-ERE-tk-萤光素酶在实验培养基[含有10％(v/v)热灭活、碳处理的胎牛血清、1％(v/v)青霉素-链霉素、2mMglutaMax-1、1mM丙酮酸钠的无酚红D-MEM/F-12培养基]中的1∶10稀释液在37℃感染2小时。然后将各孔用150μl实验培养基洗涤一次。最后，用150μl/孔的载体(≤0.1 v/v DMSO)或在实验培养基中稀释≥1000倍的化合物以一式8孔在37℃处理细胞24小时。
以单独测试的1μM单剂量(雌激素受体激动剂模式)或与0.1nM 17β-雌二醇组合(EC80；雌激素受体拮抗剂模式)进行受试化合物的初始筛选。每个96孔板也包括载体对照组(0.1％v/v DMSO)和雌激素受体激动剂对照组(0.1或1nM 17β-雌二醇)。以雌激素受体激动剂模式和/或雌激素受体拮抗剂模式对活性化合物以10-14至10-5M的对数增加进行剂量-反应实验。从这些剂量-反应曲线可分别得到EC50和IC50值。在每一个处理组的最后孔含有5μl3×10-5M ICI-182，780(10-6M最终浓度)作为雌激素受体拮抗剂对照。
在处理后，用25μl/孔的1x细胞培养溶解试剂(Promega Corporation)在振动器中将细胞溶解15分钟。将细胞裂解物(20μl)转移至96孔发光计板，使用100μl/孔的荧光素酶底物(Promega Corporation)、在MicroLumat LB96P发光计(EG&G Berthold)中测定萤光素酶的活性。在注射底物前，每孔测量背景1秒。在注射底物之后，在延迟1秒之后测量荧光素酶活性10秒。将数据从发光计转移至Macintosh个人计算机，使用JMP软件(SAS学会)对数据进行分析；该程序减去了每孔萤光素酶测量值的背景读数，然后确定每一处理的均值和标准偏差。
通过对数变换萤光素酶数据，使用Huber M-估计量以降低外围变换观察值的权重。使用JMP软件分析经变换和加权的数据以进行单尾ANOVA(Dunnett检验)。将化合物处理与雌激素受体激动剂模式的载体对照结果比较，或与雌激素受体拮抗剂模式的阳性雌激素受体激动剂对照结果(0.1nM 17β-雌二醇)比较。对于初始的单剂量实验，如果化合物处理结果与适当的对照显著不同(p＜0.05)，那么以相对于17β-雌二醇对照的百分数报告结果[即((化合物-载体对照)/(17β-雌二醇对照-载体对照))×100]。也使用JMP软件从非线性剂量-反应曲线确定EC50和/或IC50值。
子宫增重(uterotrophic)活性的评价根据下列标准药理实验方法测定受试化合物的子宫增重活性。
方法1从Taconic获得性未成熟(18日龄)的Sprague-Dawley大鼠，大鼠可自由获取以酪蛋白为基础的饲料(Purina Mills 5K96C)和饮水。在第19、20和21天，用17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/只/天)、受试化合物或载体(50％DMSO/50％Dulbecco′s PBS)对大鼠皮下给药。为了评价雌激素受体拮抗剂，将化合物与17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/只/天)共同施用。每组六只大鼠，在最后注射后约24小时通过CO2窒息和气胸实施安乐死。取出子宫，在修剪相关脂肪并挤出任何内部液体后进行称重。也可将组织样本急速冷冻用于基因表达分析(例如补体因子3mRNA)。
方法2从Taconic获得性未成熟(18日龄)的129SvE小鼠，小鼠可自由获取以酪蛋白为基础的饲料(Purina Mills 5K96C)和饮水。在第22、23、24和25天，用化合物或载体(玉米油)对小鼠皮下给药。每组六只小鼠，在最后注射后约6小时通过CO2窒息和气胸实施安乐死。取出子宫，在修剪相关脂肪并挤出任何内部液体后进行称重。
骨质疏松和脂类调节(心脏保护)的评价从Taconic农场获得术后1天的切除卵巢或经假手术的雌性Sprague-Dawley大鼠(重量240-275g)。它们以3或4只大鼠/笼饲养在12/12(白昼/黑夜)交替的房间内，并随意获取饲料(Purina 5K96C大鼠固型饲料)和饮水。在到达后第1天开始所有研究的处理，如所示那样大鼠每周7天给药，共6周。一组日龄相配的、未进行任何处理的假手术大鼠作为完整的、雌激素充足的对照组用于每一项研究。
所有受试化合物以所定义的浓度制备在50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco磷酸盐盐水(GibcoBRL，Grand Island，NY)的载体中，以使处理体积为0.1mL/100g体重。将17β-雌二醇溶解在玉米油中(20μg/mL)，以0.1mL/大鼠皮下递送。以3周间隔根据组平均体重测定值调整所有的剂量，并皮下给药。
在处理开始后五周和研究结束之前一周，评价每一只大鼠的骨矿物质密度(BMD)。使用XCT-960M(pQCT；Stratec Medizintechnik，Pforzheim，德国)在麻醉的大鼠中评价近端胫骨的总密度和小梁密度。如下进行测定在扫描之前15分钟，每只大鼠腹膜内注射45mg/kg氯胺酮、8.5mg/kg甲苯噻嗪和1.5mg/kg乙酚丙嗪进行麻醉。
使右后肢通过直径25mm的聚碳酸酯管，并与踝关节成90°角和膝关节成180°角将其捆在丙烯酸框架上。将聚碳酸酯管固定于滑动平台，该滑动平台维持它与pQCT的孔呈垂直。调整平台，使股骨的远端和胫骨的近端在扫描场之内。以长度10mm、线分辨率0.2mm进行二维探查性扫描。在探查性图像显示于监视器后，将胫骨的近端定位。距该点3.4mm远处开始pQCT扫描。该pQCT扫描为1mm厚，体素大小0.140mm(三维象素)，并由通过切片的145个投射组成。
在完成pQCT扫描后，图像被显示在监视器上。画出包括胫骨但排除腓骨的感兴趣区域。使用迭代算法以数学方法除去软组织。以mg/cm3报告剩余骨的密度(总密度)。在同心螺旋管中用数学方法除去骨头的外部55％。以mg/cm3报告剩余骨的密度(小梁密度)。
在BMD评价后一周，通过CO2窒息和气胸对大鼠实施安乐死，收集血液用于胆固醇测定。取出子宫，在修剪相关脂肪并挤出任何内部液体后进行称重。使用Boehringer-Mannheim Hitachi 911临床分析仪、使用胆固醇/HP试剂盒测定总胆固醇。使用单向方差分析、以Dunnet检验比较统计结果。
抗氧化活性的评价从屠宰场获得猪主动脉，将其洗涤，在冷却PBS中运输，并收获主动脉的内皮细胞。为了收获细胞，将主动脉的肋间血管结扎并夹住主动脉的一端。将新鲜的、无菌过滤的0.2％胶原酶(Sigma I型)置于血管中，然后将血管的另一端夹住以形成封闭系统。将主动脉在37℃孵育15-20分钟，之后收集胶原酶溶液，并在2000xg下离心5分钟。将每一沉淀悬浮在7mL内皮细胞培养基中，该培养基由不合酚红的DMEM/Ham′s F12培养基组成，补充有碳处理的FBS(5％)、NuSerum(5％)、L-谷氨酰胺(4mM)、青霉素-链霉素(1000U/ml，100μg/ml)和庆大霉素(75μg/ml)，再接种于100mm培养皿，在37℃、5％CO2中孵育。20分钟后，将细胞用PBS漂洗并加入新鲜培养基。在24小时时重复这一操作。约1周后细胞融合。将内皮细胞例行地每周补料两次，在融合时，用胰蛋白酶消化并以1∶7的比率接种。在待评价化合物(5μM)存在下，使细胞介导的12.5μg/mL LDL的氧化在37℃进行4小时。结果通过用于游离醛分析的TBARS(硫代巴比妥酸反应性物质)法[Yagi，Biochemical Medicine，1976，15，212-6]测得的氧化过程的百分抑制来表示。
孕酮受体mRNA调节标准药理实验方法本实验方法可用于评价本发明化合物的雌激素或抗雌激素活性[Shughrue等人，Endocrinology，1997，138，5476-5484]。
大鼠热潮红实验方法受试化合物对热潮红的影响可在标准药理实验方法中进行评价，该实验方法测定受试化合物减弱在使用纳洛酮而急性撤药的吗啡成瘾大鼠中出现的尾皮肤温度升高中的能力[Merchenthaler等人，Maturitas，1998 30，307-16]。通过受试化合物和参照雌激素的共同给药也可用于检测雌激素受体拮抗剂的活性。
在离体大鼠主动脉环中血管舒缩功能的评价将Sprague-Dawley大鼠(240-260克)分成4组1.正常未切除卵巢(完整)2.切除卵巢(ovex)载体处理3.切除卵巢17β-雌二醇处理(1mg/kg/天)4.切除卵巢的动物用受试化合物处理(多种剂量)在处理之前约3周将动物切除卵巢。通过胃管饲法使每只动物接受混悬于含1％吐温-80的蒸馏或去离子水中的17-β雌二醇硫酸酯(1mg/kg/天)或受试化合物。载体处理的动物接受在药物处理组使用的适当体积的载体。
通过CO2吸入和放血对动物实施安乐死。迅速地取出胸大动脉并将其放置在具有下列组成(mM)的37℃生理溶液中NaCl(54.7)、KCl(5.0)、NaHCO3(25.0)、MgCl22H2O(2.5)、D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)，用95％/5％的CO2-O2充气，最终pH为7.4。从外表面除去外膜，将血管切成2-3mm宽的环。将环悬挂于10mL的组织浴中，其一端连接于组织浴的底部，另一端连接于力传感器。在环上放置1克的静止张力。将环平衡1小时，获得信号并分析。
在平衡后，将环暴露于升高浓度的脱羟肾上腺素(10-8至10-4M)中并记录张力。然后将组织浴用新鲜缓冲液漂洗3次。在洗完后，将200mML-NAME加入组织浴中并平衡30分钟。然后重复脱羟肾上腺素的浓度反应曲线。
心脏保护活性的评价从Taconic农场获得载脂蛋白E缺陷的C57/B1J(apo E KO)小鼠。在严格符合IACUC指导原则的条件下进行所有的动物操作。将4-7周龄的切除卵巢的雌性apo E KO小鼠饲养在鞋盒状笼子中，小鼠可自由摄食和饮水。根据体重将动物随机分组(n＝12-15只小鼠每组)。使用精确给药的实验方案，用饲料中的受试化合物或雌激素(17-β雌二醇硫酸酯，1mg/kg/天)对动物给药，其中每周测量消耗的饲料量，并根据动物体重相应地调整剂量。所用饲料是由Purina制备的Western风格的饲料(57U5)，其含有0.50％胆固醇、20％猪油和25IU/KG维生素E。用这种方法对动物给药/喂食12周。对照动物饲以Western风格的饲料但不接受任何化合物。在研究期结束时，将动物安乐死并获得血浆样本。就地灌注心脏，首先用盐水，然后用中性缓冲的10％福尔马林溶液。
为了测定血浆脂类和脂蛋白，使用分别商购自Boehringer Mannheim和Wako Biochemicals的试剂盒、利用酶方法测定总胆固醇和甘油三酯，并使用Boehringer Mannheim Hitachii 911分析仪进行分析。使用FPLC尺寸分离法进行血浆脂蛋白的分离和定量。简言之，过滤50-100mL血清，并注入串联连接的Superose 12和Superose 6柱，并用1mM EDTA钠和0.15M NaCl以恒定流速洗脱。使用Waters MillenniumTM软件对代表VLDL、LDL和HDL的每一曲线的面积进行积分，通过将总胆固醇值与各个色谱峰面积的相对百分数相乘来定量每一种脂蛋白成分。
为了定量主动脉的动脉粥样硬化，在处理之前小心地分离主动脉并将其放置在福尔马林固定液中48-72小时。使用油红O染色法鉴别动脉粥样硬化性损伤。将血管短暂脱色，然后使用装备有与作为图像捕捉软件的IMAQ Configuration Utility(National Instrument)相兼容的Sony 3CCD电视摄像系统的Nikon SMU800显微镜进行成像。使用自定阈(custumthreshold)应用软件包(Coleman Technologies)在沿着主动脉弓的表面对损伤进行定量。使用程序的阈值函数对血管进行自动损伤评价，特别包含在从头臂干的近端边缘到左锁骨下动脉的远端边缘的主动脉弓内的区域。主动脉的动脉粥样硬化数据以严格包含在所定义腔区域之内的百分损伤来表示。
认知提高的评价在连续5天的每一天，每天10分钟使切除卵巢的大鼠(n＝50)习惯于8臂放射臂迷宫。在习惯和测定之前动物不得饮水。将100μl水放置在每一臂的末端以起到增强的作用。通过允许动物进入一放置诱饵的臂，完成在放射臂迷宫中赢-变换任务(win-shift task)的习得。在饮水之后，动物退出该臂并重新进入中央室，在这里它可以进入先前已到过的臂或进入一个新臂。当动物选择进入一个新臂时记录正确的反应。每只动物每天进行5次试验，共3天。在最后的习得试验之后，将动物分配到下列4个组之一1.阴性对照每天一次注射10％DMSO/芝麻油载体，共6天(1mL/kg，SC)2.阳性对照用17β-雌二醇苯甲酸酯注射2天，在第二次注射后实验4天(每只大鼠10μg/0.1mL 17β-雌二醇苯甲酸酯)3.雌二醇每日注射17β-雌二醇，共6天(20μg/kg，SC)4.受试化合物每日注射，共6天(剂量变化)。
在习得最后一天的实验之后开始所有的注射。第1、3和4组的最后注射在工作记忆实验之前2小时进行。
工作记忆的实验是延迟型与样本不匹配任务(DNMS)，其利用15、30或60秒的延迟。本任务是习得任务的变体，在其中将大鼠放置于中心舞台并允许其进入如前的一个臂。一旦大鼠通过第一个臂的一半路程就打开第二个臂，并再次要求大鼠选择这个臂。当它沿着第二个臂移动一半路程时，将两个门都关闭并开始延迟。一旦延迟到期，同时打开最初的两个门和第三个新门。当动物沿着第三个新的臂移动一半路程时，记录为正确的反应。当动物沿着第一或第二臂移动一半路程时，记录为不正确的反应。每一只动物在三次延迟间隔的每一次接受5次试验，每一受试者共接受15次试验。
对胸膜炎影响的评价根据Cuzzocrea的方法[Endocrinology 1411455-63(2000)]，可评价减轻实验诱导的大鼠胸膜炎症状的能力。
保护以免于谷氨酸盐诱导的细胞毒性(神经保护)的评价本发明化合物的神经保护活性可以在使用谷氨酸盐攻击的体外标准药理实验方法[Zaulyanov等人，Cellular & Molecular Neurobiology，1999，19，705-18；Prokai等人，Journal of Medicinal Chemistry，2001，44，110-4]中评价。
在乳房终芽(end bud)实验方法中的评价乳腺管的完全管伸长和分支，以及在孕酮影响下小叶-小泡(lobuloalveolar)终芽的后续发育需要雌激素。在本实验方法中，根据下列标准药理实验方法可评价本发明所选化合物的催乳(mammotrophic)活性。将28日龄的Sprague-Dawley大鼠(Taconic农场，Germantown，NY)切除卵巢并休养9天。将动物在12小时白昼/黑夜循环下饲养，饲以以酪蛋白为基础的Purina实验室啮齿类饲料5K96(Purina，Richmond，IN)并允许动物自由饮水。然后将大鼠用载体(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco磷酸盐缓冲的盐水(GibcoBRL，Grand Island，NY)、17β-雌二醇(0.1mg/kg)或受试化合物(20mg/kg)皮下给药6天。在最后三天，还用孕酮对大鼠皮下给药(30mg/kg)。在第七天，将大鼠安乐死并切除乳房脂肪垫。分析该脂肪垫的酪蛋白激酶II mRNA作为终芽增生的标记。通过实时RT-PCR分析酪蛋白激酶II mRNA。简言之，根据生产商的说明、按照Trizol(GibcoBRL，Grand Island，NY)分离RNA，使用不含DNA的试剂盒(Ambion)、用DNAse处理样本，使用Taqman Gold方法(PE AppliedBiosystems)通过实时RT-PCR测定酪蛋白激酶II mRNA水平。使用酪蛋白激酶II特有的引物对(5′引物，CACACGGATGGCGCATACT，SEQ IDNO1；3′引物，CTCGGGATGCACCATGAAG，SEQ ID NO2)和专用探针(TAMRA-CGGCACTGGTTTCCCTCACATGCT-FAM，SEQ ID NO3)一式三份分析共50ng RNA。使用由PE Applied Biosystems提供的引物和探针，将酪蛋白激酶II mRNA水平归一化为每一个样本反应中含有的18s核糖体RNA。
在炎性肠疾病的HLA大鼠标准药理实验方法中的评价在模拟人炎性肠疾病的HLA大鼠标准药理实验方法中可评价代表性的化合物。以下简要描述所用的方法和获得的结果。从Taconic获得雄性HLA-B27大鼠，大鼠可自由摄食(PMI实验室饲料5001)和饮水。对大鼠一日一次用载体(50％DMSO/50％1x Dulbecco磷酸盐缓冲盐水)或受试化合物(0.1至10mg/kg)皮下给药至少一周。每天观察粪便质量并根据下列评分表进行评分腹泻＝3；软便＝2；正常便＝1。在研究结束时，收集血清并储存在-70℃。制备用于组织学分析的结肠切片，分析另一段以确定髓过氧化物酶活性。
为了组织学分析，将结肠组织浸于10％中性缓冲的福尔马林中。将结肠的每一标本分成用于评价的4个样本。将福尔马林固定的组织在TissueTek真空渗入处理机(Miles，Inc；West Haven，Connecticut)中处理进行石蜡包埋。将样本以5μm切片，然后用苏木精和曙红(H&E)染色，使用Boughton-Smith修正后的评分表进行盲法组织学评价。在评分完成之后将样本破盲，将数据制成表，通过具有多均值比较的ANOVA线性模型分析数据。对结肠组织切片进行数种疾病指征的评价并给出相应的分数。
在三种关节炎模型中的评价Lewis大鼠佐剂诱导的关节炎测定。根据标准装备操作程序饲养60只雌性12周龄Lewis大鼠。它们接受标准的摄食方案并自由饮水。每只动物通过标示项目组和动物号的笼卡进行识别。每只大鼠的编号通过尾部不能拭除的墨水记号进行标记。在研究前至少10-21天将它们麻醉并通过标准无菌手术技术切除卵巢。
使用Freund完全佐剂(Sigma Immuno Chemicals，St.Louis，MO)诱导关节炎，每毫升含有1mg热杀灭并干燥的结核分支杆菌、0.85mL矿物油和0.15mL二缩甘露醇单油酸酯，批号为084H8800。
下列为两种实验方法的实施例。抑制实验方法将30只大鼠在大鼠尾根部皮内注射0.1mL Freund完全佐剂。将动物随机分成4组，每组含有6只大鼠。每天各组接受载体(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1xDulbecco磷酸盐盐水(GibcoBRL，Grand Island，NY))或受试化合物(0.1-10mg/kg，皮下施用)。所有大鼠在第1天开始处理。
处理实验方法将30只大鼠在大鼠尾根部皮内注射0.1mL Freund完全佐剂。将动物随机分成4组，每组含有6只大鼠。每天各组接受载体(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco磷酸盐盐水(GibcoBRL，Grand Island，NY))或受试化合物(0.1-10mg/kg，皮下施用)。所有大鼠在佐剂注射后的第8天开始处理。
使用Abacus Concepts Super ANOVA(Abacus Concepts，Inc.，Berkeley，CA)进行统计分析。对所有感兴趣的参数进行方差分析以及组间Duncan新多范围post hoc检验。自始至终以均值±标准偏差(SD)表示数据，如果p＜0.05则认为差别是显著的。
依据下列疾病指数每天监察关节炎严重性的程度后爪红斑、后爪肿胀、关节触痛、运动和姿势。使用0至3的整数评分表来定量红斑水平(0＝正常爪、1＝轻微红斑、2＝中度红斑、3＝严重红斑)和肿胀(0＝正常爪、1＝轻微肿胀、2＝中度肿胀、3＝后爪严重肿胀)。每天的最高得分是12。
在研究结束时，将大鼠用CO2安乐死，在尸体剖检时取出后肢并固定在10％缓冲的福尔马林中，将跗关节脱钙并包埋在石蜡中。将组织切片用苏木精和曙红或藏红O-固绿染色。
将载玻片进行编码使得检查人无从知晓处理组。基于如下列出的滑膜增生、炎症细胞浸润和血管翳形成[Poole和Coombs，International Archivesof Allergy & Applied Immunology，1997，54，97-113]评价来自跗关节的滑膜组织。
除此之外，使用如下所示的Mankin组织学分级系统[Mankin等人，Journal of Bone & JointSurgery-American Volume，1971，53，523-37]评价关节软骨和骨。
在关节炎HLA-B27大鼠模型中的评价在模拟人关节炎的HLA-B27大鼠标准药理实验方法中评价代表性的化合物。以下简要描述所用的方法。从Taconic获得雄性HLA-B27大鼠，大鼠可自由摄食(PMI实验室饲料5001)和饮水。对大鼠一日一次用载体(50％DMSO/50％1x Dulbecco磷酸盐缓冲盐水)或受试化合物(0.1至10mg/kg)皮下给药至少一周。如上对于佐剂诱导的关节炎Lewis大鼠模型所述评价关节得分和组织学。
在胶原诱导的关节炎模型中的评价在6-8周龄的BALB/c小鼠中评价化合物，其中通过对抗II型胶原的单克隆抗体加脂多糖(LPS)诱导关节炎。在第0天对动物静脉内施用总量为4mg/小鼠的4种不同mAbs的组合，72小时之后(第3天)静脉施用25μgLPS。从第3天开始，在使用LPS后一小时，每天一次口服给予受试化合物，共15天。对于每只动物，在第0、5、7、10、14和17天使用带有水池(直径12mm)的器官充满度测量器测量两只后爪的体积增加。计算体积增加的百分抑制。
在体内致癌作用模型中的评价本发明化合物治疗或抑制多种恶性肿瘤或过度增生疾病的能力可在文献中容易获得的标准药理实验方法中评价，包括以下两种方法。
乳癌切除卵巢的无胸腺nu/nu小鼠(裸鼠)从Charles River实验室(Wilmington，MA)获得。在注射肿瘤细胞的前一天，对动物植入含有0.36-1.7mg 17β-雌二醇的延时-释放小丸(在60或90天释放，InnovativeResearch of America，Sarasota，FL)或安慰剂。使用10号精密套针将小丸皮下引入到肩胛区内。随后，将1×107MCF-7细胞或1×107BG-1细胞皮下注射入小鼠的乳腺组织。将细胞与相同体积的matrigel-一种促进肿瘤固定的基膜基质制剂-混合。通过在肿瘤细胞植入后一天给药(抑制方案)或在肿瘤已经达到一定大小后给药(治疗方案)可评价受试化合物。每天腹膜内或口服施用含1％吐温-80盐水载体中的化合物。每三天或七天评价肿瘤的大小。
结肠癌在Smirnoff的实验方法[Oncology Research，1999，11，255-64]中可评价治疗或抑制结肠癌的能力。
在两种体内实验方法中对神经保护的评价在蒙古沙鼠中的短暂性全脑缺血使用下列的实验方法，可测定受试化合物预防或治疗由于缺氧/再灌注造成的脑损伤的作用。
将雌性蒙古沙鼠(60-80g；Charles River实验室，Kingston，NY)饲养于Wyeth-Ayerst动物护理设施(获AAALAC认证)中，光周期为12小时白昼12小时黑夜，沙鼠可自由饮用自来水和低雌激素酪蛋白饲料(Purina；Richmond，IN)。在适应后(3-5天)，将沙鼠用异氟烷(与O2的2-3％混合物)麻醉，切除卵巢(第0天)。从第二天早晨开始(第1天)，每天对沙鼠皮下注射载体(10％ETOH/玉米油)、17β-雌二醇(1mg/kg)或实验化合物(0.1-20mg/kg)。在第6天，将沙鼠(n＝4-5只/组)用异氟烷麻醉，通过正中线颈切开术使颈总动脉可视，用非创伤性微动脉瘤夹同时将两动脉阻塞5分钟。在阻塞之后，移去夹子使大脑再灌注，并用创伤夹关闭颈切口。在全脑缺血外科手术之前，将所有动物禁食过夜，这是一项有助于缺血损伤一致的的步骤。在第12天，将沙鼠暴露于致死剂量的CO2，在干冰上将大脑冷冻并储存在-80℃。
通过神经颗粒素(neurogranin)mRNA的原位杂交分析评价神经保护的程度。简言之，在明胶包衣的载玻片上收集20μm冠状恒冷箱切片，干燥并贮存在-80℃。在处理时，将干燥的载玻片盒温热至室温，将载玻片固定在4％的低聚甲醛中后，用乙酸酐处理，然后用氯仿和乙醇脱脂和脱水。然后将已处理的安放切片的载玻片与200μl(6×106DPM/载玻片)的神经颗粒素(35S-UTP-标记的NG-241；碱基99-340)的反义或正义(对照)核糖核酸探针在50％甲酰胺杂交混合液中进行杂交，并在55℃在没有盖玻片的潮湿载玻片槽中孵育过夜。在第二天早晨，将载玻片收集在架子上，浸入2xSSC(0.3M NaCl，0.03M柠檬酸钠；pH7.0)/10mM DTT中，用RNA酶A(20μg/ml)处理并在67℃在0.1xSSC中洗涤(2×30分钟)以除去非特异性标记。在脱水之后，将载玻片对BioMax(BMR-1；Kodak)X射线胶片过夜。
用神经颗粒素杂交信号的水平来定量地评估在损伤后CA1区域神经元损失的程度并评价17β-雌二醇和实验化合物的有效性。选择神经颗粒素mRNA用于这些研究是因为它在包括CA1的海马神经元中高度表达，但在该脑部区域的神经胶质和其他细胞类型中不存在。所以，存在的神经颗粒素mRNA的量的测量值代表了存活的神经元。用基于计算机的图像分析系统(C-Imaging Inc.，Pittsburgh，PA)从胶片放射自显影中获得神经颗粒素杂交信号的相对光密度测定值。将来自每只动物的6个切片(相隔40μm)的结果平均并进行统计学评价。以均值±SEM报告数值。使用方差单向分析来检验神经颗粒素mRNA水平的差别，在结果部分所有无差别陈述意味着p＞0.05。
小鼠大脑中动脉阻塞根据Dubal描述的实验方法[参阅Dubal等人，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica，2001，98，1952-1957，Dubal等人，Journal of Neuroscience，1999，19，6385-6393]可评价神经保护。
排卵抑制标准药理实验方法该实验方法用以确定受试化合物是否可抑制或改变排卵时间。其也可用于确定排出的卵母细胞的数量[Lundeen等人，J.Steroid Biochm.Mol.Biol.，2001，78，137-143]。
移植排斥为测试受试化合物预防移植排斥的能力。可在心脏移植(Stetson等人，Circulation，2001，104676-682)或移植动脉粥样硬化(Deitrich等人，Arterioscler.Thromb. Vasc Biol.，2000，20343-352；Lou等人，Circulation，1996，94，3355-3361)的动物模型中测试化合物。
再狭窄的预防该实验方法用以确定受试化合物是否可抑制类似于球囊血管成形术后出现的颈动脉损伤后血管平滑肌细胞增生。在先前描述的动物模型(Karas等人，Circ Res.，2001，89，534-539；Cerek等人，Atherosclerosis，1997，131，59-66)中可测试受试化合物。
心肌梗塞的治疗在缺血/再灌注动物模型中可测试受试化合物，以确定它们是否可抑制在心肌梗塞中出现的细胞死亡。在先前描述的模型中可检测该化合物(Delyani等人，J.Mol.&Cell Cardiology，1996，28，1001-1008；Izumi等人，J.Clin.Invest.，2001，108，203-213；Chandrasekar等人，Circulation，2001，103，2296-2302)。
心肌炎和充血性心力衰竭的治疗在心力衰竭模型中可测试受试化合物，以确定化合物是否可有效治疗和改善心脏功能。可如前所述在动物中测试化合物(Yokoseki等人，Circ.Res.，2001，89，1-9；Wallen等人，Hypertension，2000，36，774-779；Toshiaki等人，Circulation，2001，104，1094-1103)。
糖尿病的治疗在糖尿病的模型中可测试受试化合物，以确定它们在逆转肥胖症和饮食诱导的胰岛素抵抗中的作用。可如前所述在动物模型中测试化合物(Yuan等人，Science，2001，2931673-1677)。
哮喘的治疗肺炎症模型在第0天和第14天(ip注射)用在明矾中乳化的OVA使小鼠致敏。在第28天和第29天，用OVA气雾剂激发20分钟(1％-5％OVA)，然后在第30天将动物处死并收获BAL和/或肺组织用于肺炎症分析。
气道高反应性该模型与上述类似，但动物连续3天用OVA气雾剂激发，并在最后激发之后48小时测定气道的高反应性。如果需要在该阶段也可取得BAL。
为了更直接地观察对肥大细胞连同ER的影响，可使用被动皮肤过敏反应模型，其中将IgE注射入耳，然后在24小时之后静脉注射DNP-HSA。测量耳的厚度和早期和后期反应。此外，在K2中固定组织并包埋入环氧树脂，切成1μm切片。这些可就肥大细胞染色并对肥大细胞脱粒程度进行定量。
基于标准药理实验方法中获得的结果，本发明的化合物为本文所述的选择性的抗炎化合物，可用于治疗和预防慢性炎性疾病而不会如在典型雌激素中发现的那样刺激子宫和乳腺细胞的增生。
相应地，本发明的化合物可用于治疗或抑制骨质疏松症、抑制骨脱矿质作用，骨脱矿质作用可因个体新骨组织形成和老组织吸收的不平衡而引起并导致净骨丢失。这类骨缺失在一定范围的个体中产生，特别是绝经后妇女、双侧卵巢切除的妇女、正在接受或已经接受长期皮质类固醇疗法的那些、患有性腺发育不全的那些以及患有Cushing综合征的那些。对于包括牙和口腔骨在内的骨替换的特殊需求也可以在骨折、骨结构缺陷以及正在接受骨有关外科手术和/或植入假体的那些个体中使用这些化合物而得到解决。除了上述那些问题外，这些化合物可用于治疗或抑制骨关节炎、低钙血症、高钙血症、佩吉特病、骨软化症、骨钙质缺乏、多发性骨髓瘤和其他形式对骨组织具有害作用的癌症。
本发明的化合物在脑中也是有活性的，所以可用于抑制或治疗阿尔茨海默病、认知减退、性欲降低、老年痴呆、神经变性疾病、抑郁症、焦虑、失眠、精神分裂症和不育。本发明的化合物也可用于治疗或抑制良性或恶性的异常组织生长，其包括肾小球硬化、前列腺肥大、子宫平滑肌瘤、乳癌、硬皮病、纤维瘤病、子宫内膜异位(endometriosis)、子宫内膜癌、多囊性卵巢综合征、子宫内膜息肉、良性乳房疾病、子宫内膜异位(adenomyosis)、卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、结肠癌、CNS癌症，如神经胶质瘤或星形母细胞瘤(astroblastoma)。
本发明的化合物是心脏保护剂和抗氧剂，可用于降低胆固醇、甘油三酯、Lp(a)、LDL水平；抑制或治疗高胆固醇血症、高脂血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、周围血管疾病、再狭窄和血管痉挛，并抑制来自导致免疫介导血管损伤的细胞事件的血管壁损伤。
本发明的化合物也可用于治疗与炎症或自身免疫病相关的疾病，包括炎性肠疾病(局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、不确定性结肠炎)、关节炎(类风湿性关节炎、脊椎关节病、骨关节炎)、胸膜炎、缺血/再灌注损伤(例如中风、移植排斥、心肌梗塞等)、哮喘、巨细胞动脉炎、前列腺炎、眼色素层炎、银屑病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮和脓毒病。
本发明的化合物也可用于治疗或抑制眼疾病，包括白内障、眼色素层炎和黄斑变性，并治疗皮肤病症如老龄化、脱发和痤疮。
本发明的化合物也可用于治疗或抑制代谢性疾病如II型糖尿病、脂类代谢疾病、食欲(例如神经性厌食和贪食症)。
本发明的化合物也可用于治疗或抑制出血性疾病例如遗传性出血性毛细管扩张、功能障碍性子宫出血，并用于对抗出血性休克。
本发明的化合物可用于其中闭经有利的疾病状态，例如白血病、子宫内膜剥离、慢性肾或肝疾病或凝结疾病或疾患。
依据受试化合物阻滞炎症基因表达并在活性上具有选择性——因为未观察到子宫湿重诱导——的能力，提示了受试化合物的抗炎作用。
所有专利、出版物和引用其他文件全部引用在此作为参考。
权利要求
1.下式的化合物和其可药用盐、水合物和溶剂合物， 其中R1、R2和R3各自独立地是氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基、硝基、氰基、烷硫基、CF3、OCF3或OH；且R4为氢、烷基、链烯基、芳基烷基、环烷基-甲基或杂环基-烷基；条件是R1、R2、R3和R4中至少一个不是氢。
2.权利要求1的化合物，其中R4是H。
3.权利要求1或2的化合物，其中R1、R2和R3中至少一个是卤素、烷基、环烷基、烷氧基、硝基、氰基、烷硫基、CF3、OCF3或OH。
4.权利要求1至3任意一项的化合物，其中R1和R2各自独立地是氢、卤素、烷基、烷氧基、氰基、CF3或OH。
5.权利要求1至4任意一项的化合物，其中R1和R2是相同的。
6.权利要求1至5任意一项的化合物，其中R3是氢、烷基、链烯基、烷基芳基或杂环基-甲基。
7.权利要求1至6任意一项的化合物，其中R1和R2各自是氢、卤素、烷基或烷氧基。
8.权利要求1至7任意一项的化合物，其中R3是烷基、烯丙基或苄基。
9.权利要求1至5任意一项的化合物，其中R1和R2各自为H，且R3为卤素、烷基、烷氧基、氰基、CF3或OH。
10.权利要求9的化合物，其中R1和R2各自为H，且R3为卤素、烷基或烷氧基。
11.权利要求1至10任意一项的化合物，其中R4是H。
12.权利要求9至11任意一项的化合物，其中R3是甲基或甲氧基。
13.权利要求1的化合物，其为2-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(3-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(2-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈2-[(4-甲基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(4-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]丙二腈、2-[(2-甲氧基苯基)(1-萘基)甲基]-2-甲基丙二腈，或2-[二(1-萘基)甲基]丙二腈。
14.药物组合物，其包含权利要求1至13任意一项的化合物和可药用赋形剂、稀释剂或载体。
15.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制慢性炎性疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
16.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制类风湿性关节炎、脊椎关节病、骨关节炎、银屑病关节炎或幼年关节炎的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
17.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制炎性肠疾病、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎或不确定性结肠炎的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
18.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制银屑病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
19.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制哮喘或慢性梗阻性肺疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
20.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制中风、缺血或再灌注损伤的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
21.在有需要的哺乳动物中降低胆固醇、甘油三酯、Lp(a)和LDL的水平、抑制或治疗高胆固醇血症、高脂血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、周围血管疾病、再狭窄或血管痉挛的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
22.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制阿尔茨海默病、认知减退或老年痴呆的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
23.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制II型糖尿病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
24.在有需要的哺乳动物中治疗或抑制脓毒病的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1至13任意一项的化合物。
25.权利要求1至13任意一项的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于在哺乳动物中治疗或抑制慢性炎性疾病、类风湿性关节炎、脊椎关节病、骨关节炎、银屑病关节炎、幼年关节炎、炎性肠疾病、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、不确定性结肠炎、银屑病、哮喘、慢性梗阻性肺疾病、中风、缺血、再灌注损伤、高胆固醇血症、高脂血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、周围血管疾病、再狭窄、血管痉挛、阿尔茨海默病、认知减退、老年痴呆、II型糖尿病、脓毒病，或用于降低胆固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL的水平。
全文摘要
本发明涉及式(I)化合物，其中R
文档编号A61P29/00GK1989101SQ200580024211
公开日2007年6月27日 申请日期2005年5月17日 优先权日2004年5月19日
发明者T·J·卡贾诺, A·A·布拉扎莱 申请人:惠氏公司