专利名称：虫草头孢菌粉抗心律失常有效部位的制备及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从虫草头孢(C.sinensis Chen.sp.nov)菌粉中提取、分离、纯化抗心律失常活性部位的方法和药物制剂，该药物制剂用于治疗心律失常等多种心血管疾病。
背景技术：
冬虫夏草是我国传统的中药材。传统中医药理论认为冬虫夏草味甘、性温，有补肺益肾的作用，可治久咳虚喘、劳嗽咳血和肾虚引起的阳痿、遗精等症。但由于冬虫夏草特殊的生长环境和生长习性，使得其数量稀少，资源稀缺。人们从冬虫夏草中分离真菌菌株并进行大规模的深层发酵培养获得虫草菌粉。研究表明这些虫草菌粉具有与冬虫夏草类似的活性成分和药理作用，可以代替冬虫夏草药材起治疗和滋补作用。目前，市场上已经有多种以虫草菌粉为主要原料的药品和滋补品面世，如金水宝、宁心宝、至灵胶囊等，这些产品疗效确切，销售良好，取得了较好的社会效益和经济效益。
心律失常是指心率及心动节律的改变、心脏冲动形成和(或)冲动的传导异常，在中医上属于惊悸、怔忡的范畴，临床表现为心慌、心悸、惊恐不安和脉律不齐，伴有气短、胸闷、憋喘和头晕等症状。药物、心肌缺血、电解质紊乱、自主神经功能紊乱等原因引起心脏冲动形成、传导异常，导致心律失常。心律失常是常见疾病，目前，心律失常的发病率尚无确切的统计。据有关资料对各种心律失常发病率进行比较表明，其中窦性心律不齐发病率最高，为25％～27％，窦性心动过速次之，为20％～22％，窦性心动过缓为13％～15％，室性过早搏动为14％～16％，房性过早搏动为5％～7％，心房颤动为11％～15％，房室传导阻滞为5％～7％，其它各种心律失常约5％～8％。目前，用于治疗抗心律失常的西药大致可以归纳成四大类型钠通道阻滞剂、β受体阻断药、延长动作电位时程药和钙通道阻滞剂等。临床上常用的抗心律失常药物均有其不足①作为抗心律失常药物往往易诱发心律失常，发生率约为3％～13％。②对传导系统抑制作用较强，剂量不当或长期用药易诱发传导阻滞及心衰。而与西药相比，抗心律失常中药又存在作用效能效价低的问题，其主要原因是①对心律失常的作用靶点少而且作用弱。②作用缺乏特异性。③复方制剂的有效成分不明确。④中药有效成分口服时生物利用度低。这些因素影响了抗心律失常中药的临床治疗效果。
从冬虫夏草中分离的麦角菌科真菌虫草头孢(C.sinensis Chen.sp.nov)经液体深层发酵得到虫草头孢菌粉，其含有虫草多糖、蛋白质、氨基酸、甘露醇、脂肪、脂肪酸、虫草素、生物碱、微量元素等多种成份，物质组成复杂，药效物质不清楚。
宁心宝胶囊为虫草头孢菌粉简单干燥后即装入胶囊所得制剂。它具有提高窦性心律，改善窦房结、房室传导功能，改善心脏功能的作用，用于治疗多种难治性缓慢型心律失常和房室传导阻滞。但由于宁心宝未经现代工艺提取，对于心律失常起效较慢而且服药量大；而复杂的药物组份使得有效物质不清楚，作用机制不明了，导致工业化生产中缺乏有效的质量检测和质量控制方法，从而影响了对药材的质量检测和控制，不利于产品的进一步推广和利用。
发明内容
本发明的任务是采用现代提取分离纯化技术和化合物结构鉴定技术，结合现代药理研究方法，提供一种从虫草头孢菌粉中适合产业化提取、分离、纯化具有明确物质组成的抗心律失常活性有效部位的方法；本发明还提供该抗心律失常活性有效部位为主要药物与其它一种或多种药学上允许的赋形剂制成的中药制剂，用于心血管疾病的治疗。
本发明的技术方案为
(1)将虫草头孢菌粉用体积重量比为2～5倍量的8％-98％乙醇浸泡12～48小时，用8％-98％乙醇超声提取，提取3次，每次超声时间为30分钟，合并3次超声提取液；(2)回收乙醇溶剂后得到含有效部位的乙醇提取物，再用蒸馏水超声提取3次，每次用体积重量比3倍的蒸馏水，超声时间30分钟，合并3次超声提取液，回收水溶剂，得到水提取物；将水提取物均匀混悬在水中，或含乙醇的水中后用有机溶剂分步萃取，水提取物与混悬溶剂水或含乙醇水的体积之比为3∶1，有机溶剂与含有效部位的混悬物体积之比为1∶1；(3)得到的萃取物经硅胶柱层析，以氯仿或氯仿与甲醇混合溶剂洗脱，得到抗心律失常的有效部位。
所述的乙醇提取物均匀混悬在含乙醇的水中，乙醇∶水的体积之比为0.1-1.0∶9.9-9.0。
所述的萃取有机溶剂为环己烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯、异丙醇或水饱和正丁醇中的一种或几种。
所述的洗脱用氯仿与甲醇混合溶剂时，其重量配比在10～1∶0～1之间。
本发明制备方法得到的有效部位主要成分为腺苷、尿苷和胸苷等核苷类化合物，可作为心律失常的治疗药物。
本提取分离纯化方法步骤较少，操作简单，可以将虫草菌丝体粉末中所含有的大部分核苷类成分提取出来，最终所得的抗心律失常活性部位，采用HPLC加量法，测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷的含量为30％～50％；而腺苷的含量为20％～40％。
本发明的上述方法可以用于产业化大量制备抗心律失常活性有效部位，通过高效液相色谱仪进行分离纯化，共得到3个化合物。根据化合物的理化特性和波谱数据，确定3个主要化合物，分别为尿苷、胸苷和腺苷。其具体化学结构如下
尿苷(uridine) 胸苷(thymidine)腺苷(adenosine)主要化合物结构确定方法化合物1尿苷(uridine)，MFC9H12N2O6，无色针晶(MeOH)，mp168.5-170.0℃，MW244。[ESI-MS]+m/z 267[M+Na]+；245[M+H]+；113[M-132+H]+。[ESI-MS]-m/z 487[2M-H]-；243[M-H]-。根据上述质谱数据可以推出化合物的分子量为244，含有偶数个N原子，结合化合物的13CNMR和1H NMR数据，确定化合物的分子式为C9H12N2O6。根据化合物的13C NMR，1H NMR和HMQC谱，完成了化合物中C及其所连接的H原子的化学位移归属(见Table 1)。
Table 11H and13C NMR data of compound 1 in Pyridine*
*Recorded on a Bruker AV 400(400MHZ for1H，100MHz for13C)NMR spectrometer
上述ESI-MS，NMR数据与文献中的尿苷数据基本一致，因此确定该化合物为尿苷(uridine)。
化合物2胸苷(thymidine)，MFC10H14N2O5，黄色粉末，mp186-187.5℃，MW242。[ESI-MS]+m/z 265[M+Na]+；243[M+H]+。[ESI-MS]-m/z 483[2M-H]-；241[M-H]-。根据上述质谱数据可以推出化合物的分子量为242，含有偶数个N原子，结合化合物的13C NMR和1HNMR数据，确定化合物的分子式为C10H14N2O5。
根据化合物的13C NMR，1H NMR和HMQC谱，完成了化合物中C及其所连接的H原子的化学位移归属(见Table 2)。
Table 21H and13C NMR data of compound 2 in DMSO*
*Recorded on a Bruker AV 400(400MHZ for1H，100MHz for13C)NMR spectrometer上述ESI-MS，NMR数据与文献中的胸苷数据基本一致，因此确定该化合物为胸苷(thymidine)。
化合物3腺苷(adenosine)，MFC10H13N5O4，无色针晶(MeOH)，mp 236.8-238℃，MW267。1％的茴香醛硫酸试剂显黄灰色。[ESI-MS]+m/z 290[M+Na]+；268[M+H]+；136[M-132+H]+。[ESI-MS]-m/z 533[2M-H]-；266[M-H]-；134[M-132-H]-。根据上述质谱数据可以推出化合物的分子量为267，含有奇数个N原子，结合化合物的13C NMR和1H NMR数据，确定化合物的分子式为C10H13N5O4。
化合物的13C NMR，1H NMR的数据如下表所示(Table 3)。
Table 31H and13C NMR data of compound 3 in Pyridine*
*Recorded on a Bruker AV 400(400MHZ for1H，100MHz for13C)NMR spectrometer将本化合物与腺苷对照品共薄层，发现两者在不同的展开系统中均有相同的Rf值，而如上所述的ESI-MS，NMR数据与文献中的腺苷数据基本一致，因此确定该化合物为腺苷(adenosine)。
按药剂学方法，可以将本发明的有效部位制成多种临床药物剂型作为治疗心律失常的药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自片剂、胶囊剂、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊、口崩片、滴丸或软胶囊制剂当中的一种；非肠道给药剂型选自透皮吸收剂或注射剂当中的一种。
本发明的药物含有5％～25％的有效部位和95％～75％的赋形剂。
本发明的药物中的辅料是指常规的赋形剂，如淀粉、PVP、羧甲基淀粉钠等。
本发明所述的虫草头孢(C.sinensis Chen.sp.nov)，购自购自浙江万丰企业集团制药有限公司。
以下对上述方案的具体步骤进行详细说明。
1.虫草头孢菌粉活性有效部位的制备(1)虫草头孢菌粉水提取物浸膏制备虫草头孢菌粉1kg以2-5倍量(V/W)的乙醇浸泡12-48小时后，超声提取3次，每次超声时间为30分钟。合并3次的超声提取液，回收溶剂，即得到虫草头孢菌粉乙醇提取物湿浸膏。经过乙醇提取的虫草头孢菌粉再用蒸馏水超声提取三次，每次用蒸馏水3倍量(V/W)，超声30分钟。合并3次的超声水提取液，回收溶剂，即得到虫草头孢菌粉水提取物浸膏。上述用于浸泡和提取的乙醇浓度范围可以在8％-98％之间。
(2)虫草头孢菌粉水提取物的萃取分离将上述虫草头孢菌粉的水醇提取物浸膏均匀分散在含有1％～10％乙醇的蒸馏水(2000mL)中，用等体积的有机溶剂(如环己烷、氯仿、乙酸乙酯或水饱和正丁醇等一种或几种混合)萃取，萃取3次。分离萃取液，回收溶剂，得虫草头孢菌粉萃取物。
(3)虫草头孢菌粉水提取物柱层析分离将上述萃取物进行进一步的硅胶柱层析后，洗脱，即得本发明所述的活性有效部位，洗脱溶剂可选用氯仿或氯仿与甲醇的混合溶剂，选用氯仿与甲醇混合溶剂时，氯仿与甲醇的重量之比在10～1∶1～1之间。
2.制备虫草头孢菌粉活性有效部位的抗心律失常的药物本发明制备的活性有效部位，可以直接制成治疗药物，通过口服、静脉、肌肉注射或其它给药方式施用于心律失常患者。按照药学领域常规生产方法制备各种药剂学上所说的剂型，包括片剂、胶囊剂、注射剂、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊、各种透皮吸收剂、口崩片、滴丸或软胶囊。
本发明与现有技术相比具有特出的特点和显著的进步。
本发明采用提取、萃取和柱层析等方法，从虫草头孢(C.sinensisChen.sp.nov)菌粉中分离纯化抗心律失常活性部位，其药理活性高于现有的虫草菌粉制剂。
本发明中的活性有效部位用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化(LC-8A制备型高效液相色谱仪(日本岛津株式会社)、AQUSAILSS4251(120)10×250mm和SHIM-PACK PREP-ODS(20×250mm)流动相为甲醇/水(15/85V/V)；流速1.0mL/min；柱温30℃)，共得到3个化合物。根据化合物的理化特性和波谱数据，确定3个主要化合物，分别为尿苷、胸苷和腺苷。经采用HPLC加量法测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷所占重量百分比为30％～50％，腺苷所占重量百分比为20％～40％。
本发明所得到的有效部位物质组成清楚、质量标准可控。与宁心宝相比，本发明得到的有效部位主要成分为腺苷、尿苷和胸苷等核苷类化合物，该有效部位活性高，有效提高药物的治疗作用，药物服用量少，同时又避免制成产品时提取物的其它杂质成分对人体产生的不良反应。同时，由于有效物质明了，工业化生产中产品质量易控制，质量可靠性高。
本发明有效部位可以开发成多种剂型，用于治疗心律失常等多种心血管疾病。
本发明所得的活性有效部位开发的抗心律失常药物，用于心血管疾病的治疗，解决了现有冬虫夏草制剂活性物质含量小，服用量大，服用不方便的问题。而且对比化药其毒性小，可制成各种剂型，如片、胶囊或针剂。
本发明制备的活性有效部位经体外试验表明其可对抗由氯化钙和异丙肾上腺素诱发的心肌细胞抗心律失常作用，且疗效与现有抗心律失常药相当。本发明所得的有效部位药物，日剂量少，药效作用时间早，发挥药效作用时间长，获得了意想不到的效果。
本发明制备的活性有效部位经动物试验表明其使用范围很宽，保持了中药毒副作用小的特点。
(四)具体实施方案下面，参照附随的实施例对本发明进行更详细的描述，这些实施例决不是对本发明的限制。
实施例1有效部位提取试验1虫草头孢菌粉1kg以3倍量(V/W)的8％乙醇浸泡24小时后，超声提取3次，每次超声时间为30分钟。合并3次的超声提取液，回收乙醇溶剂，即得到虫草头孢菌粉乙醇提取物浸膏。浸膏再用蒸馏水超声提取三次，每次用蒸馏水3000mL，超声30分钟。合并3次的超声水提取液，回收水溶剂，得到虫草头孢菌粉水提取物浸膏。将上述虫草头孢菌粉的水醇提取物浸膏均匀分散在含有10％乙醇的蒸馏水(2000mL)中，用等体积的环己烷萃取3次。分离萃取液，回收溶剂得萃取物。将上述萃取物进行进一步的硅胶柱层析，用氯仿进行洗脱，后即得本发明所述的活性有效部位。标记为A1。
有效部位A1化学成分的HPLC分离、纯化及检测根据实施例1所得有效部位经制备型高效液相色谱仪分离纯化(LC-8A制备型高效液相色谱仪、AQUSAIL SS4251(120)10×250mm和SHIM-PACK PREP-ODS(20×250mm)色谱柱、洗脱剂甲醇为色谱纯、流动相为甲醇/水(15/85，V/V)，)，共得到3个化合物。根据化合物的理化特性和波谱数据，确定3个主要化合物，分别为尿苷、胸苷和腺苷。经采用HPLC加量法测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷的含量为35％；而腺苷的含量为38.1％，这两种主要成分的含量达到73.1％。
实施例2有效部位提取试验2虫草头孢菌粉1kg以5倍量(V/W)的98％乙醇浸泡12小时后，超声提取3次，每次超声时间为30分钟。合并3次的超声提取液，回收溶剂，即得到虫草头孢菌粉乙醇提取物浸膏。浸膏再用蒸馏水超声提取三次，每次用蒸馏水3000mL，超声30分钟。合并3次的超声水提取液，回收溶剂，得到虫草头孢菌粉水提取物浸膏。将上述虫草头孢菌粉的水醇提取物浸膏均匀分散在含有5％乙醇的蒸馏水(2000mL)中，用等体积的氯仿萃取3次。分离萃取液，回收溶剂得萃取物。将上述萃取物进行进一步的硅胶柱层析，用氯仿与甲醇(重量比1∶1)进行洗脱，后即得本发明所述的活性有效部位。标记为A2。
有效部位A2化学成分的HPLC分离、纯化及检测根据实施例1，实施例2所得A2同样分离得尿苷、胸苷和腺苷。经采用HPLC加量法测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷的含量为45.3％；而腺苷的含量为29.6％，这两种主要成分的含量达到74.9％。
实施例3有效部位提取试验3虫草头孢菌粉1kg以2倍量(V/W)的60％乙醇浸泡48小时后，超声提取3次，每次超声时间为30分钟。合并3次的超声提取液，回收溶剂，即得到虫草头孢菌粉乙醇提取物浸膏。浸膏再用蒸馏水超声提取三次，每次用蒸馏水3000mL，超声30分钟。合并3次的超声水提取液，回收溶剂，得到虫草头孢菌粉水提取物浸膏。将上述虫草头孢菌粉的水醇提取物浸膏均匀分散在含有1％乙醇的蒸馏水(2000mL)中，用等体积的异丙醇萃取3次。分离萃取液，回收溶剂得萃取物。将上述萃取物进行进一步的硅胶柱层析，用氯仿与甲醇(重量比8∶2)进行洗脱，后即得本发明所述的活性有效部位。标记为A3。
有效部位A3化学成分的HPLC分离、纯化及检测根据实施例1，实施例3所得A3同样分离得尿苷、胸苷和腺苷。经采用HPLC加量法测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷的含量为42.7％；而腺苷的含量为24.5％，这两种主要成分的含量达到67.2％。
实施例4有效部位提取试验4虫草头孢菌粉1kg以3.5倍量(V/W)的80％乙醇浸泡30小时后，超声提取3次，每次超声时间为30分钟。合并3次的超声提取液，回收溶剂，即得到虫草头孢菌粉乙醇提取物浸膏。浸膏再用蒸馏水超声提取三次，每次用蒸馏水3000mL，超声30分钟。合并3次的超声水提取液，回收溶剂，得到虫草头孢菌粉水提取物浸膏。将上述虫草头孢菌粉的水醇提取物浸膏均匀分散在蒸馏水(2000mL)中，用等体积的水饱和正丁醇萃取3次。分离萃取液，回收溶剂得萃取物。将上述萃取物进行进一步的硅胶柱层析，用氯仿与甲醇(重量比9∶1)进行洗脱，后即得本发明所述的活性有效部位。标记为A4。
有效部位A4化学成分的HPLC分离、纯化及检测根据实施例1，实施例4所得A4同样分离得尿苷、胸苷和腺苷。经采用HPLC加量法测得虫草头孢菌丝体提取物抗心律失常有效部位中尿苷的含量为48.2％；而腺苷的含量为30.6％，这两种主要成分的含量达到78.8％。
实施例5本发明制备的活性部位制备抗心律失常药胶囊制剂配方本发明获得的活性有效部位2克，颗粒型预胶化淀粉18克。
制备方法取上述任一实施例中制备的虫草抗心律失常有效部位共2克，加入填充剂颗粒型预胶化淀粉18克，混合均匀，装入胶囊，共得胶囊100粒，每粒胶囊的总重量为200mg，有效部位含量为20mg。
用法和用量用温开水冲服，每次1粒，一日3次。
实施例6本发明制备的活性部位制备抗心律失常药片剂配方本发明获得的活性有效部位3克，药用淀粉15克，硬脂酸镁2克。
制备方法取上述任一实施例中制备的虫草抗心律失常有效部位共3克，加入赋形剂药用淀粉15克，润滑剂硬脂酸镁2克，混合均匀，制成片剂100粒，每粒片剂的总重量为200mg，有效部位含量为30mg。
用法和用量用温开水冲服，每次1片，一日3次。
实施例7本发明制备的活性部位制备抗心律失常药缓释片制剂配方本发明获得的活性有效部位5克，羟丙甲纤维素13克，聚丙烯酸树脂II2克。
制备方法取上述任一实施例中制备的虫草抗心律失常有效部位共5克，加入填充剂羟丙甲纤维素13克和缓释剂聚丙烯酸树脂II 2克，混合均匀，制成缓释片剂100片，每片的总重量为200mg，有效部位含量为50mg。
用法和用量用温开水冲服，每次1片，一日3次。
实施例8本发明制备的活性部位制备抗心律失常药注射剂配方本发明获得的活性有效部位2.5克，其余为注射用水，定容至500ml。
制备方法取上述任一实施例中制备的虫草抗心律失常有效部位共2.5克加入注射用水完全溶解，定容至500ml，以微孔滤膜过滤，灌装，规格为5ml/瓶，得到虫草总核苷注射液100瓶，有效部分的含量为25mg/瓶。
实施例9本发明制备的活性有效部位的药效实验本发明制备的活性有效部位具有治疗心律失常等心血管疾病作用，通过以下的药效实验得到证实。
实验试剂与材料本发明制备的活性有效部位；DMEM/F12细胞培养液(Sigma公司)；胶原酶II型(上海生工产品)；5％CaCl2注射液(上海信谊金朱药业有限公司产品，批号030602)；盐酸维拉帕米注射液(上海禾丰制药有限公司产品，批号020801)。出生1-3天SD大鼠(乳鼠)原代培养的心肌细胞；光电换能装置及光电换能软件系统。
1.有效部位对氯化钙诱发的心肌细胞抗心律失常体外抑制作用试验方法 分别取以上本发明制备的活性有效部位，设不同梯度浓度0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg/ml；以氯化钙诱发的心肌细胞心律失常为模型组，分别以维拉帕米作阳性对照；记录给药前后心肌细胞的搏动频率和节律。采用细胞搏动频率绝对值数据作统计学处理，结果显示A1、A2、A3、A4在1.0-10.0μg/ml浓度时，对氯化钙所致的乳鼠原代培养心肌细胞正性频率作用有明显的改善效应，其作用强度与10*10-6μmol/ml维拉帕米相当。
有效部位对乳鼠原代培养心肌细胞氯化钙诱发心律失常的体外抑制作用(n＝3)
注#p＜0.05 ##p＜0.01 ###p＜0.001氯化钙组vs造模前组*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001有效部位组vs氯化钙组结果 本发明所制备的活性有效部位成份明确，对氯化钙诱发的心肌细胞心律失常试验证明了本发明所制备的活性有效部位在较低浓度下即可取得与维拉帕米相当的效果，具备良好的抗心律失常效果。
2.有效部位对异丙肾上腺素诱发的乳鼠原代培养心肌细胞心律失常抑制作用试验方法 分别取本发明制备的活性有效部位，设不同梯度浓度0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg/ml；以异丙肾上腺素诱发的心肌细胞心律失常为模型组，分别以普萘洛尔作阳性对照；记录给药前后心肌细胞的搏动频率和节律。采用细胞搏动频率绝对值数据作统计学处理，结果显示A1、A2、A3、A4在10.0μg/ml，50.0μg/ml浓度时对异丙肾上腺素所致的乳鼠原代培养心肌细胞正性频率作用有明显的改善效应，其作用强度与0.500μg/ml普萘洛尔大致相当。
有效部位对乳鼠原代培养心肌细胞异丙肾上腺素诱发心律失常的体外抑制作用(n＝3)
注#p＜0.05##p＜0.01###p＜0.001异丙肾上腺素组vs造模前组*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001加有效部位组vs异丙肾上腺素组结果 本发明所制备的活性有效部位成份明确，对异丙肾上腺素诱发的心肌细胞心律失常试验证明了本发明所制备的活性有效部位在较低浓度下即可取得与普萘洛尔相当的效果，具备良好的抗心律失常效果。
3.有效部位急毒试验方法取以上本发明制备的活性有效部位，对其急性毒性进行(半数致死量LD50)测定，实验结果见下表
结果 本发明制备的活性有效部位灌胃LD50为9.290g/kg，95％可信区间为8.507-10.14g/kg。
因此有效部位急毒试验表明了本发明所制备的活性有效部位毒性低，安全性高，有很好的应用前景。
权利要求
1.一种虫草头孢菌粉抗心律失常有效部位的制备方法，其特征是(1)将虫草头孢菌粉用2～5倍量的8％-98％乙醇浸泡12～48小时，然后用8％-98％乙醇超声提取；(2)回收溶剂后得到含有效部位的乙醇提取物，再用蒸馏水超声提取，得到水提取物；将水提取物均匀混悬在水中后用有机溶剂分步萃取，水提取物与混悬溶剂水的体积之比为3∶1，有机溶剂与含有效部位的混悬物体积之比为1∶1；(3)得到的萃取物经硅胶柱层析，以氯仿或氯仿与甲醇混合溶剂洗脱，得到抗心律失常的有效部位。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是步骤(2)中，将水提取物均匀混悬在含乙醇的水中后用有机溶剂分步萃取，乙醇∶水的体积之比为0.1～1.0∶9.9～9.0，水提取物与混悬溶剂含乙醇水的体积之比为3∶1，有机溶剂与含有效部位的混悬物体积之比为1∶1。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是分步萃取所用有机溶剂为环己烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯、异丙醇或水饱和正丁醇中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是步骤(3)中洗脱用氯仿与甲醇混合溶剂时，其重量配比在10～1∶0～1之间。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是抗心律失常的有效部位主要成分为核苷类化合物腺苷、尿苷和胸苷，可作为心律失常的治疗药物。
6.一种药物制剂，其特征是含有治疗有效量的虫草头孢菌粉抗心律失常有效部位和一种或多种药学上允许的赋形剂。
7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征是含有5％～25％的有效部位和95％～75％的赋形剂。
8.根据权利要求6或7所述的药物制剂，其特征是所说的药物制剂是口服制剂或非肠道给药的剂型，口服制剂选自片剂、胶囊剂、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊、口崩片、滴丸或软胶囊制剂当中的一种；非肠道给药剂型选自透皮吸收剂或注射剂当中的一种。
全文摘要
本发明公开了一种从虫草头孢菌粉中产业化提取制备抗心律失常有效部位的新方法和药物制剂，其方法为将虫草头孢菌粉以乙醇浸泡，超声提取；回收溶剂后乙醇提取物均匀混悬在水中，分步萃取；萃取物经硅胶柱层析，以氯仿或氯仿与甲醇混合溶剂洗脱，得到抗心律失常的有效部位。该方法适合产业化大量制备，制备的有效部位可制成各种剂型，具有起效快、日服用剂量小、中药毒副作用小等特点。
文档编号A61P9/00GK1899319SQ200610052509
公开日2007年1月24日 申请日期2006年7月18日 优先权日2006年7月18日
发明者邹峥嵘, 王如伟, 胡江宁, 姚新生, 颜小峰 申请人:浙江现代中药与天然药物研究院有限公司