一种虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的检测方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种中药制剂的检测方法，特别涉及一种虫草菌粉 (Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的含量测定方法。
【背景技术】：
[0002] 金水宝制剂（如金水宝胶囊）为已经上市的产品，由发酵虫草菌粉（Cs-4)填充而 得，具有补益肺肾，秘精益气功能。用于肺肾两虚，精气不足，久咳虚喘，神疲乏力，不寐健 忘，腰膝痠软，月经不调，阳瘘早泄；慢性支气管炎、慢性肾功能不全、高脂血症、肝硬化见上 述证候者。
[0003]甘露醇、核苷类、麦角留醇、虫草多糖、氨基酸等被认为是发酵虫草菌粉的活性成 分，因此，收载入中国药典的金水宝片、胶囊和百令胶囊，以及收载入卫生部药品标准的至 灵胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊，均以腺苷或腺苷和甘露醇为含量测定的指标，缺乏各产 品专属的指标成分。
[0004] 最近，我们从Cs-4发酵菌丝体中发现了一种含量高、特征性强的化合物一马索亚 内酯。有文献报道，马索亚内酯有良好的抗真菌、抗病毒、抑制肿瘤等药理活性，因此可能是 金水宝胶囊中重要的活性成分，且该化合物在其他菌种的发酵虫草产品中未被检出或含量 极低，作为定量测定的指标成分具有很强的专属性。
[0005] 本发明建立了虫草菌粉（Cs-4)及其制剂金水宝胶囊中马索亚内酯的高效液相色 谱测定法，该方法精确度高，操作简单，精密度，稳定性，重复性良好。
【发明内容】
：
[0006] 本发明的目的在于提供一种新的虫草菌粉（Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的检测方 法。为此，本发明提供一种测定虫草菌粉（Cs-4)及其制剂金水宝胶囊中马索亚内酯的方 法。
[0007]本发明是通过如下技术方案实现的：
[0008] 本发明为采用高效液相色谱法对虫草菌粉（CS-4)及其制剂金水宝胶囊中含有的 马索亚内酯进行含量测定。所述方法包括以下步骤：
[0009] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，置于离心管中，加入甲醇溶 液，密塞，超声提取，离心，将上清液转移至量瓶。残渣重复上述提取过程，合并上清液，以甲 醇溶液定容。取适量，过0. 45um微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液。
[0010] 对照品溶液的制备：精密称取马索亚内酯对照品，置于量瓶中，以甲醇溶解并定 容，得对照品溶液。
[0011] 测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定得到色 谱图，根据色谱图计算马索亚内酯的含量。
[0012] 其中色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水 溶液为流动相，等度洗脱。
[0013] 优选的，本发明的含量测定方法。包括以下步骤：
[0014] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.l_2g，精密称 定，置于l〇-5〇ml的离心管中，加入2-50ml20-100%的甲醇溶液，密塞，超声提取5-60min， 4500rmp/min下离心2-30min，将上清液转移至10-200ml量瓶。残澄重复上述提取过程两 次，合并上清液，以20-100%的甲醇定容。取适量，过0. 45um微孔滤膜，取滤液作为供试品 溶液。
[0015] 对照品溶液的制备：精密称取0. 001-0.lg马索亚内酯对照品，置于2-100ml量瓶 中，以80%甲醇溶解并定容，得对照品储备液。分别吸取适量的对照品储备液，以20-100% 甲醇稀释得到不同浓度的系列对照溶液，备用。
[0016] 测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定得到色 谱图，根据色谱图计算马索亚内酯的含量。
[0017] 其中色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为10-50cm，内径 为2-8mm，粒径为2-10ym;以乙腈：0. 01-0. 5 %磷酸水溶液（50:50)为流动相，等度洗脱； 检测波长为200-260nm;流速为0. 5-1.Oml/min;进样量为2-50ul;柱温为10-30°C。理论 板数按马索亚内酯峰计算应不低于2000-6000。
[0018] 最优选的，本发明的含量测定方法。包括以下步骤：
[0019] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0. 5g，精密称定， 置于5〇1111的离心管中，加入1〇111180%的甲醇溶液，密塞，超声提取1〇111；[11，45001'11^/111；[11下 离心5min，将上清液转移至50ml量瓶。残渣重复上述提取过程两次，合并上清液，以80% 的甲醇定容。取适量，过0. 45um微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液。
[0020] 对照品溶液的制备：精密称取0.Olg马索亚内酯对照品，置于10ml量瓶中，以 80%甲醇溶解并定容，得浓度为1000yg/mL的对照品储备液。分别吸取适量的对照品储备 液，以80%甲醇稀释得到不同浓度的系列对照溶液，备用。
[0021] 测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液10y1，注入液相色谱仪，测定得 到色谱图，根据色谱图计算马索亚内酯的含量。
[0022] 其中色谱条件如下：照中华人民共和国药典2010年版附录VID高效液相色谱法 试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为25cm，内径为4. 6mm，粒径为5ym;以 乙腈-0. 1 %磷酸水溶液（50:50)为流动相，等度洗脱；检测波长为206nm;流速为1. 0ml/ min;进样量为10ul;柱温为30°C。理论板数按马索亚内酯峰计算应不低于2500。
[0023] 其中，本品内容物是指：金水宝胶囊壳内的物质。
[0024] 其中，马索亚内酯属于现有产品，可以在上市场购买到。
[0025] 其中，续滤液是指：先被过滤下来的滤液称为初滤液，此时的滤液纯净度不够，弃 去，把初滤液倒掉之后继续采集到的滤液，就是续滤液。
[0026] 本发明的测定方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
[0027] 1提取条件的选择
[0028] 1. 1提取方法的选择
[0029] 由于马索亚内酯的挥发性较强，本发明采用提取温度较低的索氏提取和超声辅助 法提取金水宝胶囊中的马索亚内酯。通过比较发现，超声辅助提取法的提取效率略高于索 氏提取法，且索氏提取法操作繁琐，提取时间长，因此选用超声辅助提取法。
[0030] 1.2提取溶剂的选择
[0031] 考察了正己烷、二氯甲烷、甲醇作为提取溶剂时的提取效果，结果表明，甲醇对马 索亚内酯的提取效率最高。又比较了不同浓度的甲醇的提取效率，发现80 %甲醇水溶液作 为提取溶剂时，提取效果最佳。
[0032] 1. 3提取次数的选择
[0033] 超声时间对马索亚内酯的提取效率影响不大，从节省时间的角度考虑，选择超声 时间为lOmin。超声提取次数增加，马索亚内酯的提取效率提高，但达3次后，马索亚内酯的 提取效率不再提高，因此选择超声提取次数为3次。
[0034] 2色谱条件的优化
[0035] 2.1流动相的选择
[0036] 选用甲醇-水、乙腈-水为流动相，并在流动相中添加磷酸，结果表明，乙腈_0. 1% 磷酸水溶液（50:50)为流动相时，马索亚内酯峰型对称，峰宽更窄。
[0037] 2. 2检测波长的选择
[0038] 马索亚内酯仅有紫外末端吸收，因此选择检测波长为206nm。
[0039] 3线性关系考