一种从禽肉中提取哌嗪残留的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种禽肉中哌嗪残留的提取和净化的方 法。
【背景技术】
[0002] 在对动物源性食品中的兽药进行检测时，只有将药物从样本中提取出来，才可能 建立起高效的检测方法。哌嗪为白色叶片状结晶，弱碱性，在空气中吸收4〇和C02，易溶于 水，微溶于乙醇。国内外关于哌嗪的提取方法有一些报道，提取剂一般为甲醇、乙腈、三氯乙 酸溶液和高氯酸溶液等。目前，国内外对猪组织、鸡蛋、牛组织及蜂蜜中哌嗪提取和净化的 方法均有报道，以1%氨水乙腈为提取剂，乙腈饱和正己烷去除脂肪以达到净化的效果，但 该方法在本发明建立的色谱条件下所得色谱峰峰形较差，有严重拖尾现象，且提取回收率 低于60%，不能满足哌嗪在禽肉中残留检测的要求。
【发明内容】
[0003] 为了解决现有技术不能从禽肉中提取哌嗪残留的问题，本试验建立了一种提取和 净化的方法，该方法简单、方便、快速，有机试剂用量少，提取回收率高。
[0004] 本发明的技术方案是：一种从禽肉中提取哌嗪残留的方法，是以5. 0%三氯乙酸 水溶液和乙腈的混合溶液为提取剂处理禽肉样品得提取液，提取液中加入乙腈饱和的正己 烷去除脂肪后，用固相萃取法净化，再通过UPLC-MS/MS测定分析。
[0005] 具体地，将禽肉样品均质后，加入5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液（体积比 3:1)振荡、混匀直接提取，离心，将上清液转移。重复提取1-2次，合并上清液，即得提取液。
[0006] 向提取液中加入乙腈饱和的正己烷去除脂肪后，过混合阳离子固相萃取小柱 (Strata-X-C)，先依次用甲醇、超纯水、2. 0%甲酸水溶液将SPE小柱活化平衡，上样后待 提取液匀速流干后，再依次用2. 0%甲酸水溶液、超纯水、甲醇淋洗，待小柱干燥后，最终用 10.0%氨水乙腈进行洗脱。最后洗脱液用氮气吹干，上机前用2.OmL20.0%甲醇水溶液涡 旋振荡溶解残渣，转移2.OmL复溶液至离心管中，常温离心lOmin，将上层清液过0. 22ym滤 膜，滤液供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS测定分析。
[0007] 与现有的技术相比，本发明采用5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液为提取剂 (体积比3:1)，固相萃取法净化，所得色谱峰峰形较好，且回收率达85. 33 %以上。乙腈和三 氯乙酸可以有效地去除蛋白质，并将药物高效地提取出来，固相萃取法能减少内源性杂质 的污染，样品净化效果较好，明显优于传统技术。
[0008] 有益效果：本发明比较了不同提取剂（甲醇、乙腈、氨水乙腈和三氯乙酸）、不同净 化方法（液液萃取法和固相萃取法）对提取回收率的影响，最终选择5. 0%二氯乙酸水溶液 和乙腈混合溶液为提取剂（体积比3:1)为提取剂，固相萃取法为净化方法，哌嗪的提取回 收率均达到90%以上。不同提取试剂、提取方法对鸡肌肉中哌嗪提取回收率的影响见表1。
[0009] 表1不同提取试剂、提取方法对鸡肌肉中哌嗪提取回收率的影响（％ )
[0010]
【主权项】
1. 一种从禽肉中提取哌嗪残留的方法，其特征在于，以5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈 的混合溶液为提取剂处理禽肉样品得提取液，提取液中加入乙腈饱和的正己烷去除脂肪 后，用固相萃取法净化。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的混合 溶液，其中5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的体积比为3 :1。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相萃取法具体是：过混合阳离子固 相萃取小柱Strata-X-C，先依次用甲醇、超纯水、2. 0%甲酸水溶液将SPE小柱活化平衡，上 样后待提取液匀速流干后，再依次用2. 0%甲酸水溶液、超纯水、甲醇淋洗，待小柱干燥后， 最终用10.0%氨水乙腈进行洗脱。
【专利摘要】本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种禽肉中哌嗪残留的提取和净化的方法。该方法是以5.0％三氯乙酸水溶液和乙腈的混合溶液为提取剂处理禽肉样品得提取液，提取液中加入乙腈饱和的正己烷去除脂肪后，用固相萃取法净化。经提取和净化的样品可供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS测定分析。本发明哌嗪的提取回收率均达到90％以上。
【IPC分类】G01N30-14, G01N30-06
【公开号】CN104820045
【申请号】CN201510231081
【发明人】谢恺舟, 孙礼瑞, 庞茂达, 王冉, 王剑锋, 崔璐璐, 刘建宇, 高强, 刘亚楠, 王波, 张跟喜, 戴国俊, 卜仕金, 王金玉
【申请人】扬州大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月7日