专利名称：一种中药废渣培养蛹虫草菌的方法
技术领域：
本发明涉及一种培养蛹虫草菌的方法，具体涉及ー种中药废渣培养蛹虫草菌的方法。
背景技术：
中草药业是中国的传统产业之一，近几年随着中医药事业的发展，中草药和中成药的应用日益增多，而随之带来的则是大量中药材经提取后产生的中药废渣污染。现有中药材的提取エ艺较为単一，从而造成中药废渣中含有大量的营养物质如粗纤维、粗蛋白、粗脂肪、糖类和氨基酸等，而且中药废渣中还会含有许多药用活性成分。但目前为止对中药废渣的利用一般仅限于将其粉碎后添加到动物饲料中，从而对动物的生长起到一定的促进作用。该法应用普遍，但具有一定的局限性，如:一、中药废渣原料来源不同，组方复杂，加工エ艺有差异、有效成分差距较大，很难对中药废渣做出准确的药效评定和统一的质量标准；ニ、中药废渣一般是通过干燥、粉碎后直接添加于饲料中，但由于中药废渣中含有大量动物不易消化吸收的粗纤维，从而造成其营养成分的流失；三、由于中药废渣中的药用活性成分含量较低，其在生产中的添加量偏高，常会影响到饲料的适ロ性；四、生产企业在进行中草药添加剂组方时，大多根据中医资料吉泽或中草药的用途和功能，而不是针对不同动物的特性和生长阶段的需要，片面的追求添加的作用和效果，缺乏科学系统的理论佐证；五、目前中药废渣的利用价值评估绝大多数仅停留在表观的生产性能，而生产性能与药渣活性成分之间的关系不明确，就限制了药渣更深层次的加工与利用。综上，现有对中药废渣的利用还需得到进ー步的开发。
发明内容
有鉴于此，本发明提供ー种中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其可以有效而充分地利用中药废渣所含有的营养成分以及有效成分，而且其生产成本较低，中药废渣得到有效充分利用的同时，其对环境的污染大幅减小。
为解决以上技术问题，本发明的技术方案是采用ー种中药废渣培养蛹虫草菌的方法，步骤如下:将中药五味子提取物废渣和水按照1:1-2的重量比例混合并灭菌后得培养基，所得培养基表面接种蛹虫草菌种液，将接种后的培养基于25-27°C下恒温避光培养10-15天即可。优选的，所述中药五味子提取物废渣经粉碎成药渣粉末后，将所得药渣粉末与水按照100:10-20的重量比例混合并灭菌得培养基。优选的，所述药渣粉末经20目以上筛筛选过后，筛下药渣粉末与水按照100:10-20的重量比例混合并灭菌得培养基。优选的，所述灭菌方式为采用蒸汽灭菌和/或紫外灭菌。优选的，所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为110-130°C。优选的，所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为121°C。
本发明与现有技术相比，其详细说明如下:本发明首先采用将中药材废渣制备成微生物培养基的方式；中药废渣中一般含有一定量的营养成分，包括粗纤维、粗蛋白、粗脂肪、糖类和氨基酸等；中药废渣制备成动物饲料，而动物在对其中包含的营养物质的消化吸收上具有一定的局限性，因此，将中药废渣制备成微生物培养基的方式，可以利用微生物包括各种真菌以及细菌等对上述营养物质的酶解作用从而达到对中药废渣中营养物质的充分利用，同时，中药废渣制备的微生物培养基对于微生物的培养能够起到一定的促进作用。现有已知的中药材有近万种，而且从这些近万种的中药材的废渣中筛选出具有能够不加入其他营养物质而直接对微生物进行培养的种类，需要进行大量的研究工作。本发明人经过充分的研究发现，在所有已知的近万种中药材中，中药五味子提取物废渣中含有大量的营养成分以及多种微量元素，因此，将中药五味子提取物废渣和水共同制备而成的培养基，其中不加任何的营养物质，所得培养基仍然可以对微生物进行培养。本发明人经过筛选后经中药五味子提取物废渣和水制备而成的培养基与现有其他利用中药废渣制备的培养基而言，本发明培养基中未加入任何的营养物质，但仍然能够对微生物进行培养。另外，由于现有对中药材的提取エ艺较为单一，从而造成中药五味子提取物废渣中所含有的药效成分相对较多，因此，利用中药五味子提取物废渣和水制备而成的培养基对于微生物的培养有一定的促进作用。另外，本发明所述培养基仅采用中药五味子提取物废渣和水制成，其相对于现有其他利用中药废渣制备的培养基而言，同样可以減少中药废渣当做垃圾处理而造成的对环境的污染问题，同时本发明微生物培养基在制作上由于没有使用外加的营养物质，而是采用药渣本身所含有的营养物质来对微生物进行培养，因此本发明微生物培养基的制作成本大幅降低。本发明所述虫草菌是现有已知的ー类寄生于昆虫、蜘蛛等节肢动物以及某些真菌上的真菌类群，包括有蛹虫草菌、冬虫夏草菌、珊瑚虫草菌、红座虫草菌、蚁窝线虫草菌等。
本发明所述蛹虫草菌(Cordyceps militaris)又叫北冬虫夏草菌,其为冬虫夏草菌同属的真菌；蛹虫草菌是现已报道的虫草菌种唯一能大量形成虫草素的菌种；虫草素是ー种具有免疫调节、抗肿瘤、降低血糖和降血脂等作用的物质。另外，多糖是ー种在蛹虫草菌中含量为4-10%的具有提高免疫力作用的物质。本发明人经过研究发现，利用本发明方法中的培养基培养蛹虫草菌，相较于普通的培养基而言，所得虫草素的含量得到明显提高；同时，也能够达到现有较为优良的培养基的培养效果。因此，本发明培养方法可以促进虫草素大量产生。本发明方法优选采用所述中药五味子提取物废渣经粉碎成药渣粉末后，将所得药渣粉末与水按1:1-2的重量比例混合并灭菌得培养基。本发明培养基中未采用加入其它任何的营养物质的方式，而是直接将中药五味子提取物废渣粉碎成粉末后，将其与水进行混合并灭菌的方法；本发明还可采用直接将中药五味子提取物废渣与水混匀的方式，但本发明优选采用将中药五味子提取物废渣先粉碎后与水混合的方式，该方式所得培养基对于微生物的培养有更好的促进作用。本发明培养方法中优选采用所述药渣粉末经20目以上筛筛选过后，筛下药渣粉末与水按1:1_2的重量比例混合并灭菌得所述中药废渣制备的培养基。本发明优选采用将药渣粉碎后经过筛的方式来除去一些杂质成分，从而所得培养基对微生物的培养有进一歩的促进作用。本发明中可以采用现有的任ー种方式对培养基进行灭菌处理，本发明优选为采用所述灭菌方式为蒸汽灭菌和/或紫外灭菌；更进一歩的，本发明优选为采用蒸汽灭菌和紫外灭菌相结合的方式，更进一歩的优选为先采用蒸汽灭菌后采用紫外灭菌的方式。本发明蒸汽灭菌的温度可以采用现有常用的温度，本发明优选采用所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为110-130°C。在上述温度区间内，培养基内的营养物质以及药效成分不会得到较大的损失，尤其是中药五味子提取物废渣中药效成分。更进ー步优选的，本发明优选采用所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为121°C ;经过发明人的多次研究发现，由于本发明培养基的主要成分为中药五味子提取物废渣和水，若蒸汽灭菌时的温度为121°C，培养基中五味子的药效成分能够得到最大程度的保留。
具体实施例方式为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进ー步的详细说明。对照例1现有PDA培养基，组成及制备如下:马铃薯200.0g (去皮煮后取汁)，葡萄糖20.0g,酵母膏5g,蛋白胨5g, KH2PO4 2g, MgSO4 lg, VBl 一片，蒸懼水1000ml,高压蒸汽灭菌后制成培养基。对照例2现有大米固态培养基，制备如下，称取一定量大米，加水浸泡50min，115°C灭菌15min,制成培养基。对照例3现有人參提取物废渣经粉碎过20目筛，过筛粉末与水按照1:1.5 (W/V，lg:lmL)比例混合，高压蒸汽灭菌(121°C，30min),制成培养基。对照例4将中药五味子提取物废渣和水按照1:1-2的重量比例混合并紫外灭菌后制成培养基。对照例5将中药五味子提取物废渣先进行粉碎，所得粉末和水按照1:1-2的重量比例混合并紫外灭菌后制成培养基。对照例6将中药五味子提取物废渣先进行粉碎，所得粉末经20目筛过筛后，筛下药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽灭菌后制成培养基。对照例7将中药五味子提取物废渣先进行粉碎，所得粉末经50目筛过筛后，筛下药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽灭菌后制成培养基。对照例8将中药五味子提取物废渣先进行粉碎，所得粉末经20目筛过筛后，筛下药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在110-130°C下蒸汽灭菌，然后紫外灭菌的方式制成培养基。对照例9将中药五味子提取物废渣先进行粉碎，所得粉末经20目筛过筛后，筛下药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在121°c下蒸汽灭菌，然后紫外灭菌的方式制成
培养基。下面将分别以实施例1和实施例2两组实验来说明本发明五味子药渣培养基对于蛹虫草菌的培养促进作用。
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实施例1——菌质多糖含量測定将对照例1-9所得培养基分别用于培养蛹虫草菌和冬虫夏草菌，每个对照例所得培养基设置五个重复培养蛹虫草菌和冬虫夏草菌的实验，培养方法为采用将蛹虫草菌种液和冬虫夏草菌种液分别散布于对照例1-9所得培养基的表面,并将所得培养基于25-27°C下恒温避光培养10-15天，从第五天开始对各培养基取样后将所得样品烘干并进行药性菌质多糖含量測定，实验条件如下:采用浓硫酸-苯酚法检测多糖含量，用分析纯葡萄糖绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.0078X-0.061，R2=0.9992 ;每个对照例的五个重复试验通过上述实验条件检测得多糖含量后取平均值，各培养基的检测结果即多糖含量平均值如表一和表ニ所示。实施例2——菌质虫草素含量测定将对照例1-9所得培养基分别用于培养蛹虫草菌，每个对照例所得培养基设置五个重复培养蛹虫草菌的实验，培养方法为采用将蛹虫草菌种液分别散布于对照例1-9所得培养基的表面，并将所得培养基于25_27°C下恒温避光培养10-15天，从第五天开始对各培养基取样后将所得样品烘干并进行药性菌质虫草素含量測定实验，实验条件如下:采用高效液相色谱法检测虫草素含量，色谱条件为Diamonsil C18柱(4.6mm*150mm, 5 u m),以磷酸盐缓冲液(pH6.5)(取0.01mol/L磷酸ニ氢钠68.5mL与0.01mol/L磷酸氢ニ钠31.5mL，混合)-甲醇(17: 3，体积比)为流动相，流速lmL/min，检测波长260nm，进样量10 u L，柱温30°C。首先绘制虫草素标准曲线，得回归方程为Y=34473X+34135，R2=0.9988 ;每个对照例的五个重复试验通过上述实验条件检测得虫草素含量后取平均值，各培养基的检测结果即虫草素含量平均值如表三所示。实施例3——本发明培养基对不同菌质的培养程度利用实施例1的实验条件及实验方法将对照例4-9分别用于培养蛹虫草菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌并检测各培养的微生物的第7天、第9天和第11天的多糖含量，计算平均值，所得结果如表四所示。上述所使用的菌种均可以在市场上购买得到，或者从中国微生物菌种保藏中心得至IJ。表一
权利要求
1.ー种中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于步骤如下:将中药五味子提取物废渣和水按照1:1-2的重量比例混合并灭菌后得培养基，所得培养基表面接种蛹虫草菌种液，将接种后的培养基于25-27°C下恒温避光培养10-15天即可。
2.根据权利要求1所述的中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于:所述中药五味子提取物废渣经粉碎成药渣粉末后，将所得药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并灭菌得培养基。
3.根据权利要求2所述的中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于:所述药渣粉末经20目以上筛筛选过后，筛下药渣粉末与水按照1:1-2的重量比例混合并灭菌得培养基。
4.根据权利要求1所述的中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于:所述灭菌方式为采用蒸汽灭菌和/或紫外灭菌。
5.根据权利要求4所述的中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于:所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为110-130°C。
6.根据权利要求4所述的中药废渣培养蛹虫草菌的方法，其特征在于:所述蒸汽灭菌时蒸汽的温度为121で。`
全文摘要
本发明公开一种培养蛹虫草菌的方法，具体涉及一种中药废渣培养蛹虫草菌的方法。所述中药废渣培养蛹虫草菌的方法步骤如下将中药五味子提取物废渣和水按照1:1-2的重量比例混合并灭菌后得培养基，所得培养基表面接种蛹虫草菌种液，将接种后的培养基于25-27℃下恒温避光培养10-15天即可。本发明中药废渣培养蛹虫草菌的方法可以有效而充分地利用中药废渣所含有的营养成分以及有效成分，而且其生产成本较低，中药废渣得到有效充分利用的同时，其对环境的污染大幅减小。
文档编号C05F5/00GK103098650SQ201310064150
公开日2013年5月15日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者李英伦, 贺晓玉, 罗杰, 何晓利, 叶刚, 施飞, 房春林 申请人:四川农业大学, 成都乾坤动物药业有限公司