专利名称：肝功能改善剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种将orniplabin作为有效成分含有的肝功能改善剂。
背景技术：
已知来源于真菌Stachybotrys microspora的作为triprenylphenol化合物的orniplabin，具有血纤维蛋白溶酶原活化促进作用(特开2004-224737)。更具体而言，orniplabin与作为纤溶因子的血纤维蛋白溶酶原结合，改变其构象(conformation)，促进血纤维蛋白溶酶原激活剂引起血纤维蛋白溶酶原向血纤维蛋白溶酶转换。另外，orniplabin还促进血纤维蛋白溶酶原结合血纤维蛋白。orniplabin在体内促进肺栓塞模型大鼠的肺栓塞血栓的溶解。
但是，目前未知orniplabin除了血纤维蛋白溶酶原活化作用以外的作用。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种新型肝功能改善剂。
本发明人等为了解决上述问题进行了潜心研究，结果发现orniplabin可以改善肝功能障碍，以至完成本发明。
因而，本发明涉及含有orniplabin作为有效成分的肝功能改善剂、用于制造肝功能改善剂的orniplabin的使用、以及包括给药orniplabin的肝功能改善方法。
orniplabin具有下述结构式。
上述化合物可以成为盐，作为这样的盐，可以适当举出钠盐、钾盐、镁盐或钙盐之类的碱金属或碱土金属的盐；三乙胺盐、三甲胺盐之类的有机碱的盐，这样的盐也被包括在本发明中。另外，水合物或溶剂合物之类的盐也被包括的本发明中。进而，本发明的化合物可以以酯的形态使用。例如，碳原子数为1～10个的醇或羧酸等适于形成本发明的化合物在药学上允许的酯，优选由甲醇、乙醇、醋酸或丙酸等形成。
orniplabin是Stachybotrys属等丝状细菌的代谢产物，可以通过培养该菌株来配制。
更具体而言，作为产生菌，选择Stachybotrys属等丝状细菌，优选Stachybotrys属的丝状细菌。特别优选的产生菌为Stachybotrys microspora等，更优选为S.microspora IFO 30018株，但本发明不被这些菌所限定。
培养基只要是适合产生菌增殖的培养基，就可以使用任意培养基，但优选A培养基。A培养基可以如下所述地配制，即在1升纯水中溶解葡萄糖20g、蛋白胨5g、酵母提取物3g、磷酸二钾3g、硫酸镁七水合物1g，用盐酸或氢氧化钠将pH调整为5.5而制成。
在培养基组成中最重要的一点是向培养基中添加鸟氨酸。鸟氨酸的添加浓度优选为0.5～2mg/ml，但不被该浓度所限定。鸟氨酸的添加时刻优选为开始培养后到培养第3天。培养温度最优选25℃，但不被该温度所限定。培养时间为在鸟氨酸添加后1～6天可以得到充分的产生量。就通气搅拌条件而言，在向500ml容积的三角烧瓶中加入100ml的A培养基，加适当的通气孔塞的情况下，能够以180rpm的旋转培养而得到的条件为适当条件。使用发酵罐的情况下，优选与上述相当的条件。
就得到的化合物而言，根据需要，可以利用常规方法例如柱层析、硅胶层析等进行纯化。
作为本发明的化合物的给药方式，例如可以举出基于片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂或糖浆剂等的经口给药，或基于注射剂例如静脉给药、皮下给药、腹腔内给药用的注射剂或栓剂等的非经口给药。这些制剂可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味剂等添加剂，以周知的方法制造。
其使用量根据症状、年龄等而不同，对于普通成年人而言，可以1天1次或分几次给药，1天为0.01～100mg/kg体重。
图1是表示血浆AST的测定结果。各组间的显著差异检验是通过Tukey的多重比较检验进行的，相对于对照组在显著水平为0.01时认为具有显著差异时，用**表示。另外，相对于正常组在显著水平为0.05时认为具有显著差异时，用#表示，为0.01时认为具有显著差异时用##表示。误差棒(error bar)表示标准差。
图2是表示血浆ALT的测定结果。图中的符号与图1相同。
图3是表示血浆ChE的测定结果。图中的符号与图1相同。
具体实施例方式
下面利用实施例具体说明本发明，但本发明不被以下实施例所限定。
慢性肝炎模型小鼠的肝功能改善效果(1)慢性肝炎模型小鼠的制作慢性肝炎小鼠的制作是利用对Vogten等的方法(J.Mathys Vogten et al，Int J Colorectal Dis(2004)19387-394)进行改良的方法进行的。
使约30g的ICR小鼠(6周龄，雄性，Sankyo Labo Service)自由摄取固体饲料(Labo MR stock)和蒸馏水，预饲养5天后供于实验。动物的饲养是在条件为22℃±2℃、湿度60±5％、光周期12小时循环的动物饲养室中进行。
在预饲养后，每周3次向腹腔内给药四氯化碳(10％玉米油溶液(vol/vol))。给药量在初次为330μl/kg，第二次为400μg/kg，以后为500μl/kg。通过这样给药6周，制作小鼠慢性肝损害模型。
(2)orniplabin配制在1升纯水中溶解葡萄糖20g、蛋白胨5g、酵母提取物3g、磷酸二钾3g、硫酸镁七水合物1g，用盐酸或氢氧化钠将pH调整为5.5，得到A培养基，将A培养基加入500ml容积的三角烧瓶中，121℃高压灭菌15分钟。向其中接种Stachybotrys microspora IFO30018株，25℃下在旋转摇动器(rotary shaker)中以180rpm培养4天。将该培养液作为种培养液，接种1ml到含有同样配制的100ml的A培养基的500ml容积三角烧瓶中。在此接种时，添加L-鸟氨酸使浓度为1mg/ml。25℃下在旋转摇动器中以180rpm培养4天。在该培养滤液中orniplabin(SMTP-7)蓄积了305μg/ml。用盐酸将3升培养滤液的pH调整到3，然后加甲基乙基甲酮2.7升，萃取orniplabin。浓缩干固此溶剂萃取液，得到1.9g的干固物。将干固物溶解于甲醇中，通过Li Chrolut RP-18固相提取柱，然后供给到使用反相HPLC柱的层析法。使用含50mM醋酸铵的80％水性甲醇，在40℃下以25ml/分钟的流速展开柱，从保持时间为34～39分钟时洗脱的组分中得到431mg的orniplabin。
(3)orniplabin给药给药四氯化碳6周之后，分成orniplabin给药组和对照组2组(orniplabin给药组7只，对照组6只)以在统计学上为同质。连日腹腔内给药10mg/kg的orniplabin。对照组为连日腹腔内给药生理盐水2ml/kg。此操作进行14天。
给药结束后，用含有3.8％的柠檬酸钠溶液(采血量的1/10量)作为抗凝剂的注射筒，从大静脉采血，得到的血液立即以3000rpm离心分离20分钟，收集上清，作为血浆样品。
(3)血浆参数的测定对得到的血浆样品测定AST(天冬氨酸转氨酶，GOT)、ALT(丙氨酸转氨酶，GPT)以及ChE(胆碱酯酶)量(HITACHI自动分析装置7180)。
就AST而言，在orniplabin给药组相对于对照组可见显著的(P＜0.01)减少(图1)。就ChE而言，在orniplabin给药组相对于对照组可见显著的(P＜0.01)增加，对照组相对于正常组可见显著的(P＜0.01)减少(图3)。
就ALT而言，在orniplabin给药组和对照组之间未见显著差异，但可见orniplabin给药引起其值的减少。另外，对照组相对于正常组可见显著(P＜0.01)增加，但orniplabin组未见其上升(图2)。
AST或ALT这样显示肝细胞障碍的重要参数，表明在orniplabin给药后肝细胞损害的程度恢复到了接近正常的水平，另外，显示肝脏的蛋白合成能力的胆碱酯酶的值也恢复到与正常相同的水准，所以可以说肝功能有恢复的倾向。
权利要求
1.一种含有orniplabin作为有效成分的肝功能改善剂。
2.一种用于制造肝功能改善剂的orniplabin的使用。
3.一种包括orniplabin给药的肝功能改善方法。
全文摘要
本发明提供一种含有orniplabin作为有效成分的肝功能改善剂。
文档编号A61P1/16GK1976697SQ20068000042
公开日2007年6月6日 申请日期2006年2月17日 优先权日2006年2月17日
发明者莲见惠司, 前田文彦, 三森国敏 申请人:农工大Tlo株式会社