专利名称：对生物液体进行病毒灭活的成套一次性袋的制作方法
技术领域：
本发明涉及包括病毒灭活袋的一次性袋成套系统，以及任选结合其它用于进一步纯化并制备治疗性蛋白质的袋和装置使用该成套一次性袋的方法。
本发明涉及在无菌条件下对单个单位或小池(pool)形式的诸如人或动物血浆、血清和血浆组分的生物液体进行病毒灭活。
人和动物血浆以及血浆组分在现代医学中起着重要的作用。它们主要在出血期、感染期治疗时用于输血或用于预防或在某些临床情况中的手术之前用于对患者预处理。
使用人或动物血浆或血浆组分的主要缺点是冒着传播血液携带病毒的危险，这些病毒例如为人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)以West Nile病毒。
因此，已经发展了对血浆和/或血浆组分进行病毒灭活的不同方法。例如，最近发展的一种病毒灭活方法是用亚甲基蓝进行处理，接着用可见光照射，这可以应用于单份献血。遗憾的是这种方法导致蛋白质活性，特别是因子VIII、纤维蛋白原以及Von Willebrand因子(VWF)活性的某种程度的损失，并且在大剂量的亚甲基蓝时可能出现蛋白质变性。此外，关于亚甲基蓝可能的致突变性的问题已经引发人们的关注。
第4,481,189号和第4,540,573号美国专利描述了使用有机溶剂/除垢剂组合，或者单独使用溶剂以使血浆和血浆制品中含有的或加入其中的肝炎病毒或其它包膜病毒的传染性减少几个数量级。
第4,789,545号美国专利公开了一种通过分配入无毒天然油或合成甘油三酯从血浆和血浆制品中除去有机溶剂/除垢剂组合或单独溶剂的方法。
第5,094,960号美国专利描述在温和条件下，即在蛋白质、盐和其它生物组分的天然浓度下，通过疏水相互作用层析法从血浆或血浆制品中除去溶剂/除垢剂组合。
在试剂浓度、温度和接触时间适宜的条件下，溶剂/除垢剂或单独溶剂处理有效地分解具有结合脂质的包膜蛋白的病毒，同时可以忽略对敏感的血浆蛋白质的分子构象和生物活性的影响。
然而，用溶剂/除垢剂、单独溶剂处理对人血浆进行病毒灭活常常涉及处理大量份数献血的大池(100到500升或更多)，并且需要大的及昂贵的药用制造设备。此外，溶剂/除垢剂或单独溶剂处理对非包膜病毒没有效果，例如目前已知的血浆携带的病毒细小病毒B19或甲肝病毒(HAV)。因此，如果血浆池的一份献血被非包膜病毒污染，整个池就会被污染。
另外，尽管没有阐明原因但可能是由于大规模进行的严酷工业处理步骤，已经显示加入血浆大池中的工业溶剂/除垢剂处理导致蛋白酶抑制剂和抗血栓/抗凝血蛋白质，例如蛋白质S和α-2抗纤溶酶的损失，以及Von Willebrand因子的高分子量多聚体的减少。
本发明的一个目的在于提供一种方便、易用以及节省成本的装置，其允许对小池的生物液体，例如血浆或血浆组分进行病毒灭活。另一目的在于避免蛋白质变性以及蛋白质活性损失。
目前本发明人意外地并经过深入研究之后发现该目的可以通过包括至少一个病毒灭活袋的一套一次性袋实现，该病毒灭活袋包括内室和均与内室连接的入口装置和出口装置，该袋的形状特征在于内室具有卵形的纵截面，任选地该袋可连接到其它处理装置上，例如一套一个或几个漏斗形袋、和/或各种蛋白质吸附袋、和/或各种蛋白质处理袋、和/或各种层析吸附袋或柱或装置系统，不同的袋或处理系统可彼此连接从而在处理步骤中保持无菌并减少或消除所需的引起蛋白质损失的细菌过滤步骤。
优选地，病毒灭活袋的卵形纵截面为椭圆形的。
有利的是，该椭圆形纵截面具有第一水平轴a和第二垂直轴b，比率a/b大于1。所用的术语水平的和垂直的是相对于使用时出口装置垂直向下的袋的位置而言。轴a对应于水平横截面，轴b对应于垂直横截面。
卵形，优选为椭圆形纵截面的内室具有没有任何角落的优点，这些角落会保留一些生物液体并阻止液体和病毒灭活剂全部充分的混合。
病毒灭活袋由治疗上可接受的柔性材料制成。柔性材料理解为一种当例如由于填充和晃动袋而受到压力或应力时可变形的材料。所述材料应当在5℃至60℃温度范围内，尤其是在溶剂/除垢剂组合或单独溶剂进行病毒灭活处理中普遍采用20℃至60℃范围内保持其柔性。
适合的材料为适于与血液和血浆制品及其衍生物接触的材料，例如血液和血浆行业中使用的传统医用/药用级聚氯乙烯(PVC)。
病毒灭活袋优选由治疗上可接受的柔性材料的两层压薄片制成，为了分别形成包括至少两个用于入口装置的孔和一个用于出口装置的孔的卵形内室，两薄片在其边缘焊接在一起。该焊接应能承受生物液体，特别是填充和晃动袋时产生的压力和应力。优选地，为了避免内室被化学品污染，所述薄片例如通过超声密封或射频(高能)密封焊接在一起。
有利的是，病毒灭活袋包括一个邻近出口装置的至少半透明的部分。优选地，整个袋是半透明的。
在特定的实施方案中，病毒灭活袋配备有将袋垂直悬挂的装置，使出口装置向下。有利的是，用于悬挂袋的装置设置在袋的上边缘区域中，以使得可以悬挂或放置袋而不变形。其也可以配备有使其平放的装置(例如，用于在控制温度和温和晃动下的病毒灭活步骤)。
内室的体积取决于要处理的生理液体的量。有利的是，内室的体积在50ml至20l的范围内，优选在50ml至5000ml范围内，更优选在100ml至3000ml范围内，甚至更优选在200ml至2000ml范围内，这取决于要进行病毒灭活的血浆或血浆组分或用作起始池的血浆单位的数量。
入口装置和出口装置优选设置在病毒灭活袋的相对边上。
在优选的实施方案中，入口装置包括两个端口，用于转移生物液体的第一端口和用于加入处理化学品的第二端口。处理化学品理解为在病毒灭活过程中使用的任何化学产品。有利的是，为了容易地将生物液体从储存或收集袋转移到病毒灭活袋，第一端口提供有至少一个现有技术的袋针刺件或路厄氏锁(Luer-lock)，例如一个、或两个或三个袋针刺件或路厄氏锁。
出口装置使得能从病毒灭活袋直接或借助柔性管转移到另一容器，例如一次性漏斗形袋。
用于除去病毒灭活试剂的一次性漏斗形袋包括内室和均连接到内室的入口装置和出口装置，特征在于内室包括与出口装置相接的漏斗状下部，并且内室含有分离试剂。
优选地，漏斗形袋的内室具有包括基本上为三角形的下部的纵截面，所述三角形由内室的纵截面的下部界限形成。下部界限基本上为线形，并围起15°至170°的角度α，优选30°至150°，更优选50°至130°，例如120°。所述角α与漏斗形袋的出口装置重合。
优选地，三角形部分的高度为围成角度α的三角形的顶点和漏斗形袋的入口装置的下端之间的总高度的10至100％，优选15至50％，更优选20％至40％，例如25％。
内室的下部为漏斗形具有的优点在于允许例如上部油相和含有生物液体的下部相之间最佳的相分离，以及令人满意的、即规则的并连续地排出内容物以及生物组分相(下层)与油相(上层)的控制良好的、可能机械辅助的分离。
漏斗形袋由治疗上可接受的柔性材料制成。柔性材料理解为当例如由于填充和晃动袋而受到压力或应力时可变形的材料。该材料应当在5℃至60℃温度范围内，尤其是在20℃至37℃范围内保持其柔性，该20℃至37℃范围是在没有热稳定剂时稳定蛋白质溶液的最佳温度。
适合的材料例如为医用/药用的常规聚氯乙烯(PVC)。
漏斗形袋可由治疗上可接受的柔性材料的两薄片制成，这两薄片彼此叠合并且它们的边缘焊接在一起，以便形成包括分别用于入口和出口装置的两个孔的内室。所述焊接应能承受生物液体、特别是填充和晃动袋时产生的压力和应力。优选地，为了避免内室被化学品污染，所述薄片通过超声密封焊接在一起。
有利的是，漏斗形袋包括一个邻近出口装置的至少半透明的部分。优选地，整个袋是半透明的。
在特定的实施方案中，漏斗形袋配备有将袋垂直悬挂的装置，使出口装置向下。有利的是，用于悬挂袋的装置设置在袋的上边缘区域中，以使得可以悬挂或放置袋而不变形。
内室的体积基本上取决于含有处理化学品的生物液体的体积。有利的是，内室的体积比病毒灭活袋的内室体积大10％，并且在55ml至22L范围内，优选在55ml至5500ml范围内，更优选在110ml至3300ml范围内，甚至更优选220ml至2200ml的范围内，这取决于要进行病毒灭活的血浆或血浆组分或用作起始池的血浆单位的数量。
入口装置和出口装置优选设置在漏斗形袋的相对边上。有利的是，为了使得混合物能容易转移到萃取袋，入口装置包括现有技术的血浆袋针刺件。为此，病毒灭活袋的出口装置用针刺件刺穿，混合物通过重力转移到萃取袋中。
有利的是，病毒灭活袋的出口装置和下游漏斗形袋的入口装置可以通过管状物连接并且由易碎阀(breakable valve)和夹子控制。
优选漏斗形袋的出口装置被密封。
为了进行油萃取以及随后的相分离，漏斗形袋适于含有无菌药用级油。在特定的实施方案中，在油萃取之前，油在漏斗形袋中例如通过高压蒸汽灭菌。
药用级油可以是天然产生的油，例如从植物或动物提取的，或有类似结构的合成化合物。适合的天然产生的油包括蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油。优选的合成化合物为合成的甘油三酯。适合的合成甘油三酯的实例包括三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆寇酸甘油酯及其组合。
袋中药用级油的量使得能萃取至少80％脂溶性处理化学品，基于生物液体重量油的用量为2至20％重量比，优选为从5到15％重量比，更优选为从5到10％重量比，例如7.5％重量比。
上述漏斗形袋也能与层析固定相结合使用。在这种情况下，也可以考虑其它形式的一次性袋。层析固定相在所述一次性袋中被处理后，被转移至一次性柱层析装置。
可用于进一步处理生物制品的适合的固定相包括如那些用于除去溶剂或除垢剂病毒灭活剂的反相(疏水作用)基质，或诸如离子交换(阴离子和阳离子)基质和亲和(如免疫亲和或固定的肝素)基质的蛋白吸附基质，或体积排阻基质。优选的反相基质为C18硅胶填充材料或SDR(去除溶剂-除垢剂)hyper D。取决于要纯化的蛋白质，优选的阴离子交换基质为阴离子交换凝胶，例如DEAE-Sephadex A-50、DEAE-Sepharose FF， Q-Sepharose、 DEAE-Toyopearl 650M、DEAE-Hyper D。
由于经济原因，为了填充一次性柱层析袋装置，在本发明的一次性袋中优选使用便宜的固定相。较贵的固定相优选反复使用，从而用于传统的层析柱中，所述层析柱可与本发明的一次性袋连接并且在无菌条件下使用。
更具体地，一次性柱层析袋装置可被用于使用DEAE-SephadexA-50纯化凝血酶原复合物浓缩物。
柱层析袋由治疗上可接受的半刚性材料制成。半刚性材料被理解为当例如由于填充和晃动袋而受到压力或应力时可以变形的材料。所述材料应当在4℃至50℃温度范围内保持其半刚性。
在一种实施方案中，本发明的成套袋包括两个病毒灭活袋。尽管只使用一个袋已经能完全进行病毒灭活，但使用第二个病毒灭活袋进一步增加所有的生物液体与病毒灭活剂接触的可能性。
在特定的实施方案中，本发明的成套一次性袋中的袋，例如通过柔性管彼此连接。所述管有利地配备停止并最终调节生物液体从一个袋流到另一个袋的流动的装置，例如夹子或阀。
在对用于输血的全血浆进行病毒灭活的实施方案中，成套一次性袋包括至少一个、优选两个本发明的病毒灭活袋，1至3个、优选2个、更优选3个，有利的是连续的预先填充有无菌药用级油的本发明漏斗形袋，以及预先填充有用于柱层析的固定相的本发明的漏斗形袋。优选地，这些袋彼此连接，即，病毒灭活袋的出口装置连接第一漏斗形袋的入口装置，第一漏斗形袋的出口装置连接第二漏斗形袋的入口装置，第二漏斗形袋的出口装置连接第三漏斗形袋的入口装置。第三漏斗形袋的出口装置连接层析系统。该层析系统也包括含有纯化缓冲液或溶剂的塑料袋。如果成套一次性袋包括两个病毒灭活袋，在第一病毒灭活袋前采用另外的病毒灭活袋，即其出口装置与第一病毒灭活袋的入口装置连接。
在对用于输血的全血浆、无冷凝蛋白血浆(cryo-poor plasma)或冷凝蛋白质(cryoprecipitate)进行病毒灭活的另一实施方案中，成套一次性袋包括至少一个、优选两个本发明的病毒灭活袋，1至3个、优选2个、更优选3个，有利的是连续的预先填充无菌药用级油的本发明的漏斗形袋。优选地，这些袋彼此连接，即，病毒灭活袋的出口装置连接第一漏斗形袋的入口装置，第一漏斗形袋的出口装置连接第二漏斗形袋的入口装置，第二漏斗形袋的出口装置连接第三漏斗形袋的入口装置。第三漏斗形袋的出口装置连接不必要具有漏斗形的第四袋的入口装置。如果成套一次性袋包括两个病毒灭活袋，在第一病毒灭活袋前采用另外的病毒灭活袋，即其出口装置与第一病毒灭活袋的入口装置连接。
在对用于纯化PCC或任何其它存在于无冷凝蛋白血浆中的蛋白质的无冷凝蛋白血浆进行病毒灭活，或在对冷凝蛋白质进行病毒灭活的实施方案中，成套一次性袋包括至少一个、优选两个本发明的病毒灭活袋，1至3个、优选2个、更优选3个，有利的是连续的预先填充有药用级油的本发明漏斗形袋，以及预先填充有用于柱层析的固定相的本发明漏斗形袋。优选地，这些袋彼此连接，即，病毒灭活袋的出口装置连接第一漏斗形袋的入口装置，第一漏斗形袋的出口装置连接第二漏斗形袋的入口装置，第二漏斗形袋的出口装置连接第三漏斗形袋的入口装置，第三漏斗形袋的出口装置连接含有固定相的漏斗形袋的入口装置。含有固定相的漏斗形袋的出口装置被密封。如果所述成套一次性袋包括两个病毒灭活袋，在第一病毒灭活袋前采用另外的病毒灭活袋，即其出口装置与第一病毒灭活袋的入口装置连接。
无论所述成套一次性袋具体实施方案，这些袋以柔性管状物连接。所述管状物有利地配备停止并最终调节生物液体从一个袋流到另一个袋的装置，例如夹子或阀。
用于或和成套一次性袋一起使用的任何装置或附件，例如管状物、夹子或阀均由医学和药物上可接受的材料制成。
本发明的成套一次性袋使用时非常有柔性。它可节省空间、容易运输，因此可在可能需要对生物液体进行病毒灭活的任何地方使用。使用所述成套一次性袋不需要配置任何工业设施，例如制药车间。然而该一次性使用的一次性袋系统也可用在制造设备组中以减少不锈钢装置的使用，并消除制备血浆衍生物过程中所需的冲洗和消毒。
此外，可以容易地改进成套一次性袋的组成。为了极好适应需要的制备过程，可以使用或不使用漏斗形袋和/或使用或不使用柱层析袋装置。病毒灭活袋和漏斗形袋的数量也可改变。因此成套袋可以适应个别需要以及每种情况的要求。
本发明的成套袋的另一优点在于每次使用后它们被弃去。因此避免了污染其它批次的风险。
本发明还涉及使用上述成套一次性袋的方法。其特别涉及对生物液体进行病毒灭活的方法，包括以下步骤a.在至少一个本发明的病毒灭活袋中对生物液体进行病毒灭活，以及任选地b.在含有药用级油的本发明的漏斗形袋内用油萃取生物液体，和/或c.在本发明的柱层析袋内对生物液体进行柱层析。
根据本发明，生物液体包括哺乳动物血液、血浆、血清、血浆组分、来自血液组分的沉淀物和血液分级分离的上清液、贫血小板血浆、无冷凝蛋白血浆(冷上清)。优选的生物液体为血浆，包括回收血浆(recovered plasma)(来自全血的血浆)和置换血浆(apheresis plasma)、无冷凝蛋白血浆、血浆组分，例如用于纯化因子VIII、Von Willebrand因子、纤维蛋白原、粘连蛋白、凝血酶原复合物、因子IX、因子VII、蛋白质C、蛋白质S、抗凝血酶、α1抗胰蛋白酶、C1-抑制剂、免疫球蛋白、白蛋白的组分，血浆的沉淀物，例如冷凝蛋白质，聚乙二醇、辛酸或硫酸铵沉淀的组分，及其相应的上清液，或来自血浆分级分离的任何其它沉淀物或上清液，如冷上清、上清液I+II+III、沉淀物I+II+III、上清液II+III、沉淀物II+III、上清液I+III、沉淀物II、上清液IV、沉淀物V。血浆组分、沉淀物和上清液可以从回收血浆(来自全血的血浆)以及置换血浆中获得。来自一份全血献血的回收血浆的体积通常在100到240毫升之间，而一份分离血浆献血的体积通常在500到900毫升之间。
优选的可在本发明的病毒灭活袋中进行的病毒灭活方法为S/D(溶剂/除垢剂)法，单独溶剂法或单独除垢剂法，其中加入生物液体中的处理化学品为溶剂/除垢剂组合、溶剂或单独溶剂的组合、或除垢剂或单独除垢剂的组合。
适合的溶剂为二-或三烷基磷酸酯，如三-(正丁基)磷酸酯、三-(叔丁基)磷酸酯、三-(正己基)磷酸酯、三-(2-乙基己基)磷酸酯、三-(正癸基)磷酸酯、二-(正丁基)磷酸酯、二-(叔丁基)磷酸酯、二-(正己基)磷酸酯、二-(2-乙基己基)磷酸酯、二-(正癸基)磷酸酯以及含不同烷基链的二烷基磷酸酯。可以使用具有不同烷基链的二或三烷基磷酸酯，如乙基-二-(正丁基)磷酸酯。一种特别优选的三烷基磷酸酯是三-(正丁基)磷酸酯(TnBP)。
适合的除垢剂包括脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、山梨醇酐的偏酯，例如以名称“Tween 80”(聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯)销售的产品，也被叫做“聚山梨醇酯80”，“Tween 20”(聚氧乙烯(20)山梨聚糖单月桂酸酯)，以及非离子油溶性水除垢剂，如以名称“Triton X-100”销售的氧乙基化烷基酚(聚氧乙烯(9-10)对叔辛基苯酚；分子式t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH，X＝9-10)和“Triton X-45”(聚氧化乙烯(4-5)对叔辛基苯酚，也叫做4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇或聚乙二醇4-四-辛基苯基醚；分子式t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH，x＝～5)。
进一步考虑的除垢剂是去氧胆酸钠和磺基甜菜碱(sulfobetaine)，如N-十二烷基-N，N-二甲基-2-铵基丁氧硫氰醚磺酸酯(lethanesulphonate)。特别优选的除垢剂是“Tween 80”，“Triton X-100”和“Triton X-45”。
有利的是，如果单独使用，溶剂的用量为生物液体重量的0.1到3％重量比，优选为0.3到2.5％重量比，甚至更优选为2％重量比。
有利的是，当与除垢剂结合使用时，溶剂的用量为生物液体重量的0.1至2％重量比，优选0.3至1％重量比，对复合混合物如血浆、无冷凝蛋白血浆或冷凝蛋白质进行病毒灭活甚至更优选1％重量比，或者对于更纯的组分如因子VIII进行病毒灭活为0.3％重量比。
有利的是，当与溶剂结合使用时，除垢剂的用量为生物液体重量的0.1至2％重量比，优选0.3至1.5％重量比，对于复合混合物如血浆、无冷凝蛋白血浆或冷凝蛋白质进行病毒灭活更优选1％ ％重量比，或者对于更纯的组分如因子VIII进行病毒灭活为1％重量比。
有利的是，如果单独使用除垢剂，其使用量为生物液体重量的0.5至2％重量比，优选1％重量比。
在4至8小时的时间段用溶剂/除垢剂组合、溶剂或除垢剂处理生物液体时期，优选4至6小时，例如，使用例如1％TnBP和1％TritonX-45或Triton X-100对血浆、无冷凝蛋白血浆或冷凝蛋白质进行病毒灭活处理4小时，或使用例如0.3％TnBP和1％Tween-80对因子VIII组分进行病毒灭活处理6小时。在使用超过1个病毒灭活袋的情况下，在不同的袋之间分配时间。例如，4.5小时的总处理时间可以以如下方式分给第一和第二袋第一袋内30分钟，第二袋内4小时。总处理期的这种分配使得能遵循良好操作规范，因为第一袋用于生物液体和处理化学品的混合以及病毒灭活的起始，而第二袋用于最后的病毒灭活。
可以用药用级油通过油萃取从生物液体中萃取出溶剂和/或除垢剂。为此，优选将含有溶剂和/或除垢剂的生物液体转移到本发明含有无菌药用级油的漏斗形袋中。
内室的下部的漏斗形设计的一个优点在于油和朝向出口装置的生物液体相之间的接触面减少并且朝向出口装置的上层相的厚度增加。因此临近下层相排出终了时界面(2个流动相之间的区域)更加明显，两个相可容易地分开，因而最优化对病毒灭活化学品的去除和血浆体积回收率。
药用级油可以是天然产生的油，例如从植物或动物中提取的，或具有类似结构的合成化合物。适合的天然产生的油包括蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油。优选的合成化合物为合成甘油三酯。适合的合成甘油三酯的例子包括三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯及其组合。
存在于袋中的药用级油的量使得能萃取至少80％的脂溶性处理化学品，油的用量基于生物液体的重量为2至20％重量比，优选5至15％重量比，更有选5至12％重量比，例如7.5或10％重量比。
可以进行几次或多次油萃取，例如1至3次，优选为2次，更优选3次，这特别取决于油浓度以及也有助于除去溶剂和/或除垢剂的进一步的净化步骤的能力。
萃取步骤可以采用2％重量比的油或更少，但是为了得到期望纯度的生物液体，萃取步骤将不得不重复多次，由于费时并且可能引起物质损失而并不优选。
也可使用装有用于柱层析的固定相的漏斗形袋或与本发明的系统连接的一次性层析柱装置或其它层析系统，通过柱层析法从生物液体中除去溶剂和/或除垢剂。
可以在油萃取之后或在溶剂/除垢剂处理之后直接进行柱层析。
在某些情况下为了令人满意地除去病毒灭活中使用的处理化学品，需要在油萃取之后进行另外的柱层析步骤。不能完全通过油萃取除去因而需要柱层析分离的除垢剂的例子是Triton X-100。
当对因子VIII血浆组分进行病毒灭活时，为了除去病毒灭活所使用的处理化学品、纯化因子VIII并浓缩因子VIII，通常也使用柱层析。适合种类的柱层析包括阴离子交换免疫亲和层析、固定因子VIII配体或固定肝素上的亲和层析。通常，在病毒灭活步骤之后直接进行病毒灭活的因子VIII的柱层析，而没有任何之前的油萃取。
本发明的一次性病毒灭活袋也可用于使用其它处理化学品的生物液体的其它病毒灭活法，例如亚甲基蓝处理、核黄素(维生素B2)处理、酸性pH处理(通常使用盐酸，pH＝4)或辛酸处理(通常pH＜6.5)。
在本发明成套袋中对生物液体，特别是血浆、无冷凝蛋白血浆、冷凝蛋白质和其它血浆组分，例如因子VIII血浆组分进行病毒灭活，允许对小量的生物液体进行病毒灭活。
当灭活方法不是对所有类型的病毒都有效时，例如对非包膜病毒进行溶剂/除垢剂处理的情况，这是特别重要的。这样，避免了污染多达几千升生物液体的大池的风险。
此外，与现有技术溶剂/除垢剂(S/D)病毒灭活大池的生物液体相比，根据本发明对单份献血或生物液体的小池进行病毒灭活避免机械现象，例如聚集、络合或氧化现象，这都能使蛋白质变性。
处理小量的另一优点在于可能特制经病毒灭活的生物液体。因此，患者可能使用例如单独来自一个献血者或者少数献血者的病毒灭活血浆组分，从而减少暴露到任何血浆携带的传染物的风险。
本发明描述的这种处理的另一优点在于可能处理及病毒灭活用于治疗性临床研究的作为单份献血或作为小池的病毒感染血浆，例如HCV阳性血浆或SARS阳性血浆，或任何其它含有可治疗其它患者的中和抗体的潜在的传染性血浆。因此，患者可能例如使用单独来自一个献血者或少数献血者的经病毒灭活的HCV阳性或SARS阳性血浆组分，因此消除暴露于HCV或SARS或任何血浆携带的传染物的风险。
参照附图，通过下面的描述本发明上述和其它目的、特征以及优势将会更显而易见。
图1是本发明病毒灭活袋的一种实施方案的纵截面示意图；图1a是本发明病毒灭活袋的另一种实施方案的纵截面示意图；图1b是当袋为空的时，沿图1实施方案的线AA’的横截面示意图；图1c是当袋被装满时，沿图1实施方案的线AA’的示意图横截面；图2是本发明萃取袋的一种实施方案的纵截面示意图；图2a是本发明萃取袋的另一实施方案的纵截面示意；图2b是当袋为空时，沿图2实施方案的线AA’的横截面示意图；图2c是当袋被装满时，沿图2实施方案的线AA’的横截面示意图；图3是一次性层析柱的一种实施方案的纵截面示意图；图4是本发明成套一次性袋的一种实施方案的纵截面示意图；图5是本发明成套一次性袋的另一实施方案的纵截面示意图；下文使用的术语水平、垂直、上面和下面是相对于使用中的出口装置垂直向下的袋的位置。
图1显示的病毒灭活袋1基本上具有矩形的外形，水平边2比垂直边3长。
袋1包括内室4、入口装置5和出口装置6。内室4具有椭圆形的纵截面，具有第一轴a和第二轴b。第一轴a与袋1的水平边2a和2b平行，第二轴b与其垂直边3平行，比率a/b＞1。
入口5和出口6装置各自分别连接到内室4。入口装置5设置在上水平边2b的中央并与椭圆的第二轴b重合。出口装置6正好与入口装置5相对、设置在下水平边2a的中央，并且也与椭圆的第二轴b重合。
入口装置5包括柔性管状入口管，与入口管的端部相连的第一端口5a以及侧向连接到入口管的第二端口5b。第一端口5a是袋针刺件。采用其将生物液体例如从储存或收集袋转移到病毒灭活袋1的内室4。第二端口5b为用于加入处理化学品的端口。
病毒灭活袋1由两个常规医用/药用级聚氯乙烯(PVC)或其它合适材料的长方形薄片层压并将其边缘焊接在一起制成，从而形成包括分别用于入口5和出口6装置的两个孔的内室4。
内室4被焊接在一起的边缘区域7围绕，边缘区域延伸到薄片的边界。该边缘区域7包括两个孔8，其位于入口装置的左侧和右侧。孔8用作垂直悬挂袋1的装置。
图1a显示本发明的病毒灭活袋1的可选择的实施方案。图1a的病毒灭活袋1与图1的袋的不同之处不仅在于其入口装置5没有包括第一5a和第二端口5b，还在于袋1包括第二入口装置1a，其邻近于上平行边2b上的入口装置5。通常，在该结构中，第一入口装置5用于加入处理化学品，第二入口装置1a用于将生物液体转移到病毒灭活袋1中。入口装置5被密封装置5c密封，该密封装置适于例如被针或插管穿孔。
病毒灭活袋1的入口装置1a包括现有技术的管夹1c。
病毒灭活袋1的出口装置6包括现有技术的易碎阀6a。
图1b显示空的病毒灭活袋1。图1c中，相同的袋被填满，薄片分开并向外膨胀。填充袋的厚度c小于两个轴a和b中最小的那一个。
图2显示的漏斗形袋9包括内室10、入口装置11和出口装置12。入口11和出口12装置各自分别连接到内室10，并设置在袋9的相对边上。
内室包括漏斗状底部10a。
入口装置11包括一端与内室11连接并且另一端与现有技术的血浆袋针刺件连接的柔性管状入口管。这样，含有处理化学品的生物液体容易借助重力例如从病毒灭活袋1转移到漏斗形袋9中。
漏斗形袋9由两个常规医用/药用级聚氯乙烯(PVC)或其它合适材料的长方形薄片层压并将其周边焊接在一起形成，从而形成包括分别用于入口11和出口12装置的两个孔的内室10。
内室10被焊接在一起的边缘区域13围绕，该边缘区域延伸到薄片的边界。该边缘区域13包括两个孔14，其位于入口装置的左侧和右侧。孔14用作垂直悬挂袋9的装置。
图2a显示本发明漏斗形袋的优选实施方案。
在该实施方案中，漏斗形袋9的内室10的纵截面包括基本上为三角形的下部10a，该三角形由内室10的纵截面的下部界限c和d形成。下部界限c和d基本上为线性，并围起大约125°的角度α。所述角α与漏斗形袋9的出口装置12重合。
三角形部分的高度htri大约为围成角度α的三角形顶点和漏斗形袋9入口装置11下端11a之间的总高度h的1/3。
漏斗形袋9包括另外的端口9a。该端口被密封装置9c密封，该密封装置适于例如被针或插管穿孔。
漏斗形袋9的入口装置11包括现有技术的管夹11c。
漏斗形袋9的出口装置12包括现有技术的易碎阀12a。
图2b显示空的漏斗形袋9。图2c中，相同的袋被填满，薄片分开并向外膨胀。
图3中显示的一次性层析柱袋装置15包括装有层析固定相的圆柱形中空体16，该中空体的下部设有过滤器17。圆柱体的上端设有入口装置18，在其相对的下端设有出口装置19。入口装置包括三个端口(18a、18b、18c)，出口装置也包括三个端口(19a、19b和19c)。
图4显示的一套一次性袋包括本发明的病毒灭活袋1，三个连续的本发明的漏斗形袋9，其预先装有药用级油(没有显示油)，以及本发明的漏斗形袋9，其预先装有柱层析的固定相。
所述袋用柔性管彼此连接，即，病毒灭活袋1的出口装置6与第一漏斗形袋9的入口装置11连接，第一袋9的出口装置12与第二漏斗形袋9的入口装置11连接，第二漏斗形袋9的出口装置12与第三漏斗形袋9的入口装置11连接，第三漏斗形袋9的出口装置12与含有固定相的漏斗形袋9的入口装置11连接。含有固定相的漏斗形袋9的出口装置12被密封。
图4中成套袋的病毒灭活袋1的入口装置5的第一端口5a用于将生物液体转移到所述病毒灭活袋1。通过从一个或多个收集袋转移生物液体，生物液体可以直接汇集在第一病毒灭活袋1中。
图5显示的一套一次性袋包括图1a实施方案的两个病毒灭活袋1，三个连续的图2a实施方案的漏斗形袋9，其预先装有药用级油(没有显示油)，以及用于收集病毒灭活的生物液体的标准血袋20。
所述袋通过柔性管彼此连接，即，第一病毒灭活袋1的出口装置6连接第二病毒灭活袋1的入口装置1a，第二病毒灭活袋1的出口装置6连接第一漏斗形袋9的入口装置11，第一袋9的出口装置12连接第二漏斗形袋9的入口装置11，第二漏斗形袋9的出口装置12连接第三漏斗形袋9的入口装置11，以及第三漏斗形袋9的出口装置12连接标准血袋20的入口装置21。
图5中成套袋的第一病毒灭活袋1的入口装置1a用于将生物液体转移到所述病毒灭活袋1中。通过从一个或多个收集或储存袋转移生物液体，生物液体可以直接汇集在第一病毒灭活袋1中。
病毒灭活袋1、漏斗形袋9和标准血袋20的入口装置1a、11、21各自包括现有技术的管夹1c、11c、21c。
病毒灭活袋1和漏斗形袋9的出口装置6、12各自分别包括现有技术的易碎阀6a、12a。
为了更充分地描述本发明的本质及其实现方式，提供了下面非限定性的实施例。
实施例实施例1使用2％TnBP对1915ml置换血浆进行病毒灭活将来自三份大约650ml献血的置换血浆转移到图1的无菌、单个2000ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内将TnBP溶液用注射器(通过灭活袋的第二端口)缓慢加入血浆中。例如使用血小板浓缩振荡器使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到2％。
加入TnBP溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器或任何其它适宜的装置的温和搅拌下将袋保持在31℃+/-1℃4小时，确保温和持续地混合血浆/SD混合物。
接着将血浆转移到图2含有100ml药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP，在室温下温和晃动15分钟。
接着为了使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离，将漏斗形袋悬挂大约30分钟。
下层依靠重力通过出口装置排到含有150ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着室温下温和晃动大约15分钟。
然后，为了使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离，将第二漏斗形袋悬挂大约30分钟。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排入含有150ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。用设置在第二漏斗形袋的出口装置平面上的UV检测器检测相界面。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，然后室温下温和晃动15分钟。
然后，为了使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离，将第三漏斗形袋悬挂大约30分钟。
最后，通过重力将下面的血浆层通过出口装置排入标准血浆储存袋中。
各种步骤之后，测定血浆中因子VIII活性、因子IX活性和总凝结测试PT(凝血酶原时间)和APTT(激活部分促凝血酶原激酶时间)
结果显示，经过3次油萃取后的血浆与起始血浆相比，保存了通过PT和PTT评价的血浆总凝结活性。类似的，FVIII和FIX的恢复极好。
数据也显示含有2％TnBP的血浆，PT和PTT延长，2次油萃取后正常化，表明除去TnBP。
实施例2在31℃用2％TnBP对200ml回收血浆进行病毒灭活将来自一份大约200ml的回收血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内将TnBP溶液用注射器(通过灭活袋的第二端口)缓慢加入血浆中。例如使用血小板浓缩振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到2％。
加入TnBP溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适宜的装置的温和搅拌下，将袋保持在31℃+/-1℃4小时，确保温和持续地混合血浆/SD混合物。
接着将血浆转移到图2含有10ml药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP，在室温下温和晃动15分钟。
接着悬挂漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
下层依靠重力通过出口装置排到含有10ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着室温下温和晃动15分钟。
然后悬挂第二漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排入含有10ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。用肉眼观察相界面。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，然后在室温下温和晃动15分钟。
然后悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
最后，通过重力将下面的血浆层通过出口装置排入标准血浆储存袋中。
每次萃取步骤后，测量血浆中的TnBP
结果显示，经过3次油萃取后在最终的血浆中没有检测到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测PT、APTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX生理机能
结果显示，3次油萃取后，凝结活性得到良好的恢复，所有分析值都正常化。
实施例3用2％TnBP进行病毒灭活的200ml置换血浆中的蛋白质C、蛋白质S、α2抗纤溶酶和Von Willebrand因子瑞斯托菌素辅因子活性的恢复将来自一份大约200ml的献血的置换血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内用注射器(通过灭活袋的第二端口)将TnBP溶液缓慢加入血浆中。例如使用该袋的血小板浓缩振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到2％。
加入TnBP溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适宜的装置的温和搅拌下，将袋保持在31℃+/-1℃4小时，确保温和持续地混合血浆/SD混合物。
接着将血浆转移到图2含有10ml药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP，在室温下温和晃动15分钟。
然后，为了使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离，将漏斗形袋悬挂大约30分钟。
下层依靠重力通过出口装置排到含有10ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第二漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排到含有10ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。用肉眼观察相界面。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
最后，通过重力将下面的血浆层通过出口装置排入标准血浆储存袋中。
在所有步骤中测定蛋白质C、蛋白质S、α2抗纤溶酶和VonWillebrand因子瑞斯托菌素辅因子活性值
结果显示3次油萃取后，实现生理功能的良好恢复。
实施例4用1％TnBP和1％Triton X-45对200ml回收血浆进行病毒灭活将来自一份大约200ml献血的回收血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将1∶1的纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-45溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内用注射器(通过灭活袋的第二端口)将TnBP/Triton X-45溶液缓慢加入血浆中。例如使用血小板浓缩振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到1％TnBP和1％Triton X-45。
加入TnBP/Triton X-45溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适宜的装置的温和搅拌下，将袋保持在31℃+/-1℃4小时，确保温和持续地混合血浆/SD混合物。
接着将血浆转移到图2含有15ml(即，相对于血浆重量的7.5wt％)药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP和Triton X-45的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP和Triton X-45，在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和TritonX-45的油相分离。
下层依靠重力通过出口装置排到含有15ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼观察相界面。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP和Triton X-45，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第二漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和Triton X-45的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排到含有15ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP和Triron X-45，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和Triron X-45的油相分离。
最后，通过重力将下面的血浆层通过出口装置排入标准血浆储存袋中。
每次萃取步骤后，测量血浆中TnBP和Triron X-45的含量
结果显示，分别经过2次或3次油萃取后，在最终的血浆中没有检测到TnBP和Triton X-45(＜10ppm)。
在所有步骤中也检测PT、PTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX生理功能
结果显示，3次油萃取后凝结活性得到良好的恢复，所有分析的值都正常。
实施例5用1％TnBP和1％Triron X-100对200ml回收血浆进行病毒灭活将来自一份大约200ml献血的回收血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将1∶1的纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-100溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内用注射器(通过灭活袋的第二端口)将TnBP/Triton X-100溶液缓慢加入血浆中。例如使用血小板浓缩物振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到1％TnBP和1％Triton X-100。
加入TnBP/Triton X-100溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适宜的装置温和搅拌下，将袋保持在31℃+/-1℃4小时，确保温和持续地混合血浆/SD混合物。
接着将血浆转移到图2含有15ml(即，相对于血浆重量的7.5wt％)药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP和TritonX-100的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和TritonX-100的油相分离。
下层依靠重力通过出口装置排入含有15ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼观察相界面。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第二漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和少量Triton X-100的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排入含有15ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了进一步用油萃取TnBP和少量的Triron X-100，在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和少量Triron X-100的油相分离。
在第三次油萃取之后，将血浆转移到离心袋中，在20℃下在血库离心机上以3,900rmp离心30分钟。
接着，将血浆在C18层析柱上经柱层析，以除去大量的TritonX-100。
每次萃取步骤之后以及柱层析之后测量血浆中TnBP和TritonX-100的含量。
结果显示经过3次萃取、离心和C18层析之后，最终的血浆中没有检测到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测PT、PTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX生理功能。
结果显示，经过3次油萃取后凝结活性得到良好的恢复，所有测定值都正常化。
实施例6在37℃用2％TnBP对200ml回收血浆进行病毒灭活将来自一份约200ml献血的回收血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至37℃+/-1℃。
将纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内将TnBP溶液用注射器(通过灭活袋的第二端口)缓慢加入血浆中。例如使用血小板浓缩振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按血浆总重量计的最终浓度达到2％。
加入TnBP溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适合的装置温和搅拌以确保温和持续地混合血浆/SD混合物的条件下，将袋保持在37℃+/-1℃4小时。
接着将血浆转移到图2含有10ml药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP的血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，接着为了用油萃取TnBP，在室温下温和晃动15分钟。
接着为了使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离，将漏斗形袋悬挂大约30分钟。
下层依靠重力通过出口装置排到含有15ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。用设置在第一漏斗形袋出口装置的水平面上的UV检测器检测相界面。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着室温下温和晃动大约15分钟。
然后，悬挂第二漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排入含有15ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP的油相分离。
第三次油萃取之后，血浆在20℃以3,700rmp澄清离心(clarifyingcentrifugation)30分钟。
每次萃取步骤后，测量血浆中的TnBP。
结果显示，经过3次油萃取后在最终的血浆中没有检测到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测PT、APTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX生理功能。
结果显示，经过3次油萃取后凝结活性得到良好的恢复，所有测定值都正常化。
实施例7用1％TnBP和1％Triton X-45对200ml无冷凝蛋白血浆进行病毒灭活根据实施例4的方法用1％TnBP和1％Triton X-45处理200ml无冷凝蛋白血浆。
每次萃取步骤后，测量无冷凝蛋白血浆中TnBP和Triton X-45含量。
结果显示，经过3次油萃取后在最终的无冷凝蛋白血浆中检测不到TnBP和Triton X-45(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测PT、APTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX。
结果显示3次油萃取后凝结活性得到良好的恢复，所有测定值都正常化。由于无冷凝蛋白血浆某些凝结因子的减少，PT和APTT的凝固时间比血浆的长是正常的。
实施例8用1％TnBP和1％Triton X-100对200ml无冷凝蛋白血浆进行病毒灭活。
根据实施例5的方法用1％TnBP和1％Triton X-100对200ml无冷凝蛋白血浆进行处理。
将从捐献的一份大约200ml回收血浆中得到的无冷凝蛋白血浆转移到图1的无菌、单个200ml病毒灭活袋中，将所述袋加热至31℃+/-1℃。
将1∶1的纯三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-100溶液预先填充到无菌注射器中。
接着，在30分钟内用注射器(通过灭活袋的第二端口)将TnBP/Triton X-100溶液缓慢加入无冷凝蛋白血浆中。例如使用血小板浓缩振荡器装置使灭活袋轻微晃动，直到按无冷凝蛋白血浆总重量计的最终浓度达到1％TnBP和1％Triton X-100。
加入TnBP/Triton X-100溶液后，为了隔离灭活袋，将入口装置的管热密封。
接着，有力混合30秒，并且在例如使用血小板浓缩振荡器装置或任何其它适合的装置温和搅拌以确保温和持续地混合血浆/SD混合物的条件下，将袋保持在31℃+/-1℃4小时。
接着将无冷凝蛋白血浆转移到图2含有15ml(即，相对于无冷凝蛋白血浆重量的7.5wt％)药用级蓖麻油的漏斗形袋中。为此，将病毒灭活袋的出口装置用漏斗形袋的入口装置的针刺件刺穿，依靠重力转移含有TnBP和Triton X-100的无冷凝蛋白血浆。
有力地晃动油/血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接着在室温下温和晃动15分钟。
接着，悬挂漏斗形袋，以使下层的无冷凝蛋白血浆相与上层含TnBP和少量Triton X-100的油相分离。
下层依靠重力通过出口装置排入含有15ml药用级蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼检测相界面。
有力地晃动第二漏斗形袋内的油/无冷凝蛋白血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第二漏斗形袋，以使下层无冷凝蛋白血浆相与上层含TnBP和少量Triton X-100的油相分离。
下面的血浆层依靠重力通过出口装置排入含有15ml药用级蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃动第三漏斗形袋内的油/无冷凝蛋白血浆混合物，直到形成乳液大约1分钟，为了进一步用油萃取TnBP和少量的Triron X-100，接着在室温下温和晃动15分钟。
然后，悬挂第三漏斗形袋，以使下层的血浆相与上层含TnBP和少量Triron X-100的油相分离。
在第三次油萃取之后，将血浆转移到离心袋中，20℃下在血库离心机中以3,900rmp离心30分钟。
接着，将血浆在SDR层析柱上经柱层析以除去大量的TritonX-100。
每次萃取步骤后以及柱层析后，测定血浆中的TnBP和TritonX-100的含量每次萃取步骤后以及SDR上柱层析后，测量无冷凝蛋白血浆中的TnBP和Triton X-100的含量
结果显示，分别经过3次油萃取和柱层析后，在最终的无冷凝蛋白血浆中没有检测到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测PT、APTT、INR(国际标准比率)、FVII和FIX
结果显示3次油萃取后凝结活性(因子VII和因子IX)得到良好的恢复，SDR层析步骤后所有测定值都正常化。
实施例9在37℃用2％的TnBP对200ml无冷凝蛋白血浆进行病毒灭活根据实施例6的方法用2％TnBP处理200ml无冷凝蛋白血浆。
每次萃取步骤后，测定无冷凝蛋白血浆中的TnBP。
结果显示，经过3次油萃取后在最终的无冷凝蛋白血浆中检测不到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步骤中也测定PT、APTT、INR(国际标准比率)以及FVIII和FIX生理功能
结果显示3次油萃取后因子VII和因子IX的凝结活性得到良好恢复，所有测定值都正常化。
实施例10用1％TnBP和1％Triton X-45对150ml冷凝蛋白质进行病毒灭活根据实施例4的方法用1％TnBP和1％Triton X-45处理150ml冷凝蛋白质。
每次萃取步骤后，测量冷凝蛋白质中TnBP和Triton X-45的含量。
结果显示，经过3次油萃取后在最终的冷凝蛋白质中TnBP和Triton X-45小于10ppm。
在所有的步骤中也检测PT、FVIII、纤维蛋白原，von willebrand因子和FIX的生理功能
结果显示3次油萃取后因子VIII、纤维蛋白原以及von Willebrand因子的活性得到良好的恢复。
实施例11用1％TnBP和1％Triton X-100对150ml冷凝蛋白质进行病毒灭活根据实施例5的方法用1％TnBP和1％Triton X-100处理150ml冷凝蛋白质。
每次萃取步骤后以及柱层析后，测量冷凝蛋白质中TnBP和TritonX-100的含量
结果显示，分别经过3次油萃取和柱层析后，在最终的冷凝蛋白质中检测不到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有步骤中也检测FVIII、纤维蛋白原和VWF的生理功能
结果显示经过3次油萃取后凝结活性得到的良好的恢复。实施例1237℃下用2％TnBP对150ml冷凝蛋白质进行病毒灭活根据实施例6的方法用2％TnBP处理150ml冷凝蛋白质。
每次萃取步骤后，测量冷凝蛋白质中的TnBP。
结果显示，经过3次油萃取后在最终的冷凝蛋白质中检测不到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步骤中也检测FVIII、纤维蛋白原和VWF的生理功能
结果显示经过3次油萃取后凝结活性得到良好的恢复。
权利要求
1.一次性袋成套系统，包括至少一个病毒灭活袋(1)，以及至少一个漏斗形袋(9)和/或柱层析袋(15)，所述病毒灭活袋包括内室(4)以及均与所述内室(4)连接的入口装置(5)和出口装置(6)，所述袋(1)特征在于所述内室(4)具有卵形的横截面，所述不同的袋彼此连接。
2.如权利要求1所述的一次性袋成套系统，特征在于其包括两个病毒灭活袋(1)。
3.如权利要求1或2所述的一次性袋成套系统，特征在于所述内室(4)的横截面为椭圆形。
4.如权利要求1至3中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述病毒灭活袋(1)的入口装置(5)和出口装置(6)设置在所述袋(1)的相对边上。
5.如权利要求3或4中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述病毒灭活袋(1)的内室(4)具有有第一轴(a)和第二轴(b)的椭圆形纵截面，所述第一轴(a)与所述袋(1)的水平边(2)平行，而所述第二轴(b)与所述袋(1)的垂直边(3)平行，且比率a/b大于1。
6.如权利要求1至5中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述内室(4)的体积在50ml至20000ml的范围内，优选在50ml至5000ml范围内，更优选100ml至3000ml，甚至更优选200ml至2000ml。
7.如权利要求1至6中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述漏斗形袋(9)包括内室(10)以及均与所述内室(10)连接的入口装置(11)和出口装置(12)，所述内室(10)具有与所述出口装置(12)相接的漏斗形的下部，所述内室(10)含有分离试剂。
8.如权利要求1至7中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于袋(1、9、15)由医用/药用级聚氯乙烯制成。
9.如权利要求1至8中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于其包括三个连续的其中所述分离试剂为药用级油的漏斗形袋(9)，以及一个其中所述分离试剂为用于柱层析的固定相的额外的漏斗形袋(9)。
10.如权利要求1至9中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述袋以柔性管连接，并且所述病毒灭活袋(1)的出口装置(6)连接第一漏斗形袋(9)的入口装置(11)、所述第一袋(9)的出口装置(12)连接第二漏斗形袋(9)的入口装置(11)，所述第二漏斗形袋(9)的出口装置(12)连接第三漏斗形袋(9)的入口装置(11)，所述第三漏斗形袋(9)的出口装置(12)连接含有所述固定相的漏斗形袋(9)的入口装置(11)。
11.如权利要求1至10中任一项所述的一次性袋成套系统，特征在于所述袋以确保待处理的生物液体无菌的方式连接。
12.一次性病毒灭活袋(1)，包括内室(4)和均与所述内室(6)连接的入口装置(5)和出口装置(6)，所述袋(1)特征在于所述内室(4)具有卵形的横截面，且所述入口装置(5)和所述出口装置(6)设置在所述袋(1)的相对边上。
13.如权利要求12所述的一次性病毒灭活袋(1)，特征在于所述内室(4)具有有第一轴(a)和第二轴(b)的椭圆形横截面，所述第一轴(a)与所述袋(1)的水平边(2)平行，而所述第二轴(b)与所述袋(1)的垂直边(3)平行，且比率a/b大于1。
14.一次性漏斗形袋(9)，包括内室(10)和均与所述内室(10)连接的入口装置(11)和出口装置(12)，所述内室(10)具有与出口装置(12)相接的漏斗形的下部，特征在于所述内室(10)含有分离试剂。
15.对生物液体进行病毒灭活的方法，包括以下步骤a.在权利要求1所述的或权利要求12所述的病毒灭活袋中对生物液体进行病毒灭活，以及任选地b.在权利要求14所述的含有药用级油的漏斗形袋内以油萃取所述生物液体，和/或c.对所述生物液体进行层析分离。
16.如权利要求15所述的病毒灭活方法，特征在于所述生物液体选自哺乳动物血液、血浆、血清、血浆组分、来自血液组分的沉淀物和来自血液分级分离的上清液、贫血小板血浆、无冷凝蛋白血浆。
17.如权利要求15或16所述的病毒灭活方法，特征在于所述病毒灭活法选自S/D(溶剂/除垢剂)法、单独溶剂法、单独除垢剂法、亚甲基蓝处理、核黄素处理、酸性pH处理或辛酸处理。
18.如权利要求17所述的病毒灭活方法，特征在于所述病毒灭活法为S/D(溶剂/除垢剂)法或单独溶剂法。
19.如权利要求18所述的病毒灭活方法，特征在于所述溶剂选自三-(正丁基)磷酸酯、三-(叔丁基)磷酸酯、三-(正己基)磷酸酯、三-(2-乙基己基)磷酸酯、三-(正癸基)磷酸酯、二-(正丁基)磷酸酯、二-(叔丁基)磷酸酯、二-(正己基)磷酸酯、二-(2-乙基己基)磷酸酯、二-(正癸基)磷酸酯、乙基-二(正丁基)磷酸酯或其混合物。
20.如权利要求18或19所述的病毒灭活方法，特征在于所述除垢剂选自包括脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、山梨醇酐的偏酯、非离子的油溶性水除垢剂、去氧胆酸钠和磺基甜菜碱或其混合物的组。
21.如权利要求18或19所述的病毒灭活方法，特征在于步骤a在4至8小时期间完成，优选4至6小时，优选约4小时。
22.如权利要求18至20中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于步骤b被重复1至3次。
23.如权利要求18至21中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于步骤b中的所述药用级油选自蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油、三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆寇酸甘油酯及其组合。
24.如权利要求18至22中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于，步骤b中所述药用级油的用量基于所述生物液体的重量为2％至20％重量比，优选为从5％至15％重量比，更优选为从5％到10％重量比。
25.如权利要求18至23中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于所述生物液体选自血浆、无冷凝蛋白血浆和冷凝蛋白质，所述病毒灭活方法为单独溶剂法，所述溶剂为三-(正丁基)磷酸酯，并且步骤b进行3次。
26.如权利要求18至23中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于所述生物液体选自血浆、无冷凝蛋白血浆和冷凝蛋白质，所述病毒灭活方法为S/D法，溶剂为三-(正丁基)磷酸酯，除垢剂为4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)XOH，X≈5)，并且步骤b进行3次。
27.如权利要求18至23中任一项所述的病毒灭活方法，特征在于所述生物液体选自血浆、无冷凝蛋白血浆和冷凝蛋白质，所述病毒灭活方法为S/D法，溶剂为三-(正丁基)磷酸酯，除垢剂为聚氧乙烯(9-10)对叔辛基苯酚(t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)XOH，X＝9-10)，步骤b进行3次并且在步骤b之后进行步骤c。
28.权利要求1至11中任一项所述的一次性成套袋系统的用途，其用于对生物液体进行病毒灭活，并具有极好的蛋白质恢复。
全文摘要
本发明涉及一次性袋成套系统，其包括至少一个病毒灭活袋(1)，以及至少一个漏斗形袋(9)和/或柱层析袋(15)，所述病毒灭活袋包括内室(4)和均与内室(4)连接的入口装置(5)和出口装置(6)，袋(1)的特征在于内室(4)具有卵形的纵截面，不同的袋彼此连接。本发明还涉及所述一次性袋成套系统的用途，其用于对生物液体进行病毒灭活，且具有极好的蛋白质恢复。
文档编号A61M1/02GK1953728SQ200680000200
公开日2007年4月25日 申请日期2006年2月1日 优先权日2005年2月1日
发明者蒂尔瑞·伯尔诺弗, 马格迪·艾尔-埃吉贝, 哈迪阿方斯·古布兰, 米尔亚纳·拉多塞维奇 申请人:诊断研究基金会