Sanglifehrin在hcv中的用途的制作方法

专利名称：Sanglifehrin在hcv中的用途的制作方法
SANGLIFEHRIN在HCV中的用途本发明涉及可与亲环蛋白结合的大环内酯化合物如sanglifehrin类化 合物的新用途。Sanglifehrin是一类最初^Ut线菌(actinomycete)发酵肉汤中分离的多 环大环内酯化合物。已经发现Sanglifehrin显示出结合亲环蛋白的活性，并 且在Sanglifehrin A-D的情况下，显示出免疫抑制活性和对B细胞增殖及T 细胞增殖的抑制活性。然而，与已知的免疫抑制剂和抗炎化合物如环孢菌 素A和FK506不同，sanglifehrin没有FKBP结合活性或钩依赖磷酸酶抑制活 性。因此，就化学结构和不同活性镨而言，Sanglifehrin提供了新的一类药 物物质。Sanglifehrin和用于制备它们的方法在WO 97/02285， WO 98/07743和 US 006124453内描述。 一系列sanglifehrin衍生物，mini-Sanglifehrin,在 / j/w.0^w.5^c 2003， 125 (13)， 3849-3859; J力fg.C^e附.2000， 65， 9255-9260 和jwgew. C7^附.1999， 38(16)， 2443-2446内描述。现在已惊讶地发现亲环蛋白结合性Sanglifehrin对丙型肝炎病毒 (HCV)具有抑制作用。因此，本发明提供亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin用于预防或治 疗丙型肝炎感染、HCV诱导的病症、或抑制肽基脯氨酸顺反异构酶活性、 或与肝脏疾病相关的病况的用途。该活性剂还可以作为例如预防性疗法用 于由HCV感染的母体分娩的新生儿或暴露于该病毒的健康护理工作者或 移植受体例如肝移植受体，以消除移植后可能的复发HCV感染。本发明涉及本文中统称为"Sanglifehrin"的大环内酯类化合物在预防或治疗丙型肝炎感染中的用途。Sanglifehrin自放线菌发酵肉汤分离。通常 已知的Sanglifehrin包括sanglifehrin A至D，例如下式的Sanglifehrin<formula>formula see original document page 6</formula>Sanglifehrin A至D的大环(macrocyclic ring)的特征在于i)位置l至6包 含3-羧基六氢钛溱基(piperidazinyl)羧酸残基，ii)位置7至9包含芳族a-氨基 酸残基，和iii)位置10至12包含脂族a-氨基酸残基。该大环的剩余部分由羟基 羧酸残基组成，从而在Sanglifehrin A至D的情况下，提供了该大环主环内 的另外ll个碳原子。才艮据大环内酯化学中的常规作法，如以上就Sanglifehrin A所示的， 将Sanglifehrin大环主环的原子加以编号，以大环内酯键的羰基基团的碳原 子作为位置l而起始。Sanglifehrin A至D还可以通过在该大环的位置23处经由烃基连接基 团(liker group)连接的新的二环螺系统的存在来表征。可以对Sanglifehrin A至D进行广泛的化学操作以得到Sanglifehrin类 的其它大环内酯。此类操作包括该大环的断裂(特别是在内酯氧基基团处)， 大环内酯与螺环系统之间的连接基团的断裂，和取代基组的操作，例如保 护、衍生化或其它化学修饰；例如如下文所述的操作。其它修饰方法对本 领域技术人员将是显而易见的。根据本发明，已经发现Sanglifehrin就其抗丙型肝炎感染的生物活性 而言具有特征性和完全新颖的活性镨。尤其已发现它们显示出如下文所述 的活性的组合。Sanglifehrin具有与先前已知的免疫抑制剂和抗炎化合物如环孢菌素 类化合物及大环内酯类化合物(例如雷帕霉素和NIM811)不同的活性镨，表 明Sanglifehrin具有不同于这些化合物的作用模式。因此，就结构和活性而 言Sanglifehrin提供了新的一类药物物质，可以预期该药物物质将实质性地 扩大免疫抑制性、抗炎性或抗病毒性疗法的范围；例如以避免或减少先前 免疫抑制性和抗炎性疗法的不受欢迎的副作用和/或改善或扩展此类疗法 以用于新的疾病领域或新的患者类型。Sanglifehrin,例如其中大环内酯环是开环形式的Sanglifehrin，其中 大环内酯与螺环系统之间的烃基连接基团内的位置26和27均被羟基取代的 SangMehrin ，或其中与大环连接的螺残基已被断裂或截断的Sanglifehrin ， 通常缺少Sanglifehrin特征活性的组合中的一些或全部活性。例如，其中螺 残基被断裂的Sanglifehrin典型地具有亲环蛋白结合活性，但是不具有显著 的免疫抑制活性。然而，正如本领域技术人员明了的，这类化合物为制备 其它新的Sanglifehrin提供有价值的成分、中间体或关键结构单元并且因 此进一步拓展了 Sanglifehrin类化合物的治疗潜力。由于二环螺系统的存在看来对例如Sanglifehrin A至D的生物活性具 有实质性意义，故该二环螺系统还可以纟皮视为提供具有关键性生物学意义 的结构成分，可以用作为结构成分用于与产生其它Sanglifehrin有关的进一 步衍生或修饰，或应用于衍生或修饰其它药物物质，例如以修饰该类大环 内酯的其它免疫抑制性药物物质的活性。因此，第一方面，本发明提供游离形式或受保护形式的大环内酯， 或其盐，在该大环内酯中i)大环的位置2至6 (包括位置2和6在内)由六 氢峻溱基羧酸残基提供；和/或ii)大环的位置7至9 (包括位置7和9在内) 由芳族a-氨基酸残基提供；和/或iii)大环的位置10至12 (包括位置10和12在内)由脂族a-絲酸残基提供。适宜地，本发明的大环内酯包含特征性结构特点i)、 ii)和iii)中的2个、 尤其是全部3个特点。所述六氢歧溱基羧酸残基适宜地是M部分占据大环的位置l并且l-氮原子占据大环的位置6的l，2-六氢喊溱-3-羧基-l-基残基，例如式I的残基其中所给出的编号代表该残基的原子在大环中的位置。该残基可以是 环被取代的或未取代的。适宜地，该残基是未取代的。所述芳族a-氨基酸残基的羧基部分适宜地占据大环的位置7，并且a-氨基部分占据位置9。合适地，该芳族a-氨基酸是游离形式、受保护形式或 活化形式的取代的或未取代的苯丙氨酸残基，尤其是被羟基、曱氡基、乙 氧基、OnPr、 OiPr取代。所述脂族a-氨基酸残基的羧基部分合适地占据大环的位置10，并且a-氨基部分占据位置12。合适地，脂族a-氨基酸残基是游离形式、受保护形 式或活化形式的缬氨酸残基。大环的剩余部分合适地包含羟基羧酸残基，其中该残基的氧基部分使 大环内酯键完整并且该残基的羰基部分与位于大环的位置12的a-氨基基团 形成酰胺键。所述羟基羧酸残基合适地具有6至20个、更合适地ll个碳原子 的链长度。它可以是取代的或未取代的和/或沿其链长含有一个或多个不饱 和键，尤其是累积双键。更合适地，大环的剩余部分包含ll-氧基-十一碳 酰基-ll-基，特别是ll-氧基-十一碳-6，8-二烯酰基-ll-基残基，该残基任选地 是取代的，例如在位置2、 3、 4和/或5被取代。更合适地，所述的羟基羧 酸残基是游离形式或受保护形式的式II残基，或其盐<formula>formula see original document page 9</formula>其中Rl是H、 OH或代表额外的键，并且R2是H或代表额外的键； R3是H并且R4是-CO-CH3或-CH(OH)-CH3或R3和R4—起代表式III的结构■c才艮据本发明的优选大环内酯因此是包含游离形式或受保护形式的式IV的大环或其盐的大环内酯<formula>formula see original document page 9</formula>其中X、 Y和Z是如上定义的残基i)， ii)和iii)并且A是如上定义的羟基羧酸残基；特别是包含游离形式或受保护形式的式v的大环或其盐的那些大环内酯<formula>formula see original document page 9</formula>通常在Sanglifehrin中，大环在临近内酯桥的氧基部分的碳原子处被 取代。典型地，该取代基包含游离形式或受保护形式的l-氧杂-7-氮杂-螺 -{5.5}-十一碳-8-酮-2-基残基，例如式VI的残基，或其盐其中-a-b-是-(Me)C-CH-或-(Me)CH-CH(OH)-并且R是H或Me(其中 Me和Et分别代表甲基和乙基)，其中所述残基通过位于螺残基与大环内酯 环之间的连接基团与大环内酯环连接，其中所述的连接基团包含6至11个、 典型地9个碳原子的直链。连接基团可以是取代的或未取代的和/或沿其链长含有 一个或多个不 饱和键，尤其是累积双键。合适地，连接基团可以由甲基取代，例如被两 个曱基基团取代。合适地，连接基团还可以被羟基，例如3个羟基取代基取 代，和/或可以是烯键式不饱和的，例如含有两个碳-碳双键。更合适地， 连接基团包含l，7-二甲基-壬-9-基，尤其是1，7-二甲基-壬-l-烯-9-基或l，7-二 甲基-壬-l，3-二烯-9-基残基，该残基任选地是取代的，例如在位置3、 4和/ 或8上被取代。优选地，连接基团是游离形式或受保护形式的式VII的基团其中c代表与螺残基的键接；d代表与大环的键接并且R6和R7分别是 OH或一起代表额外的键。连接基团通常在紧邻于内酯氧基基团的碳原子处，即当大环包舍ll-氧基-十一碳酰基-ll-基残基时，在该残基的位置ll处与大环连接。因此，本发明提供游离形式或受保护形式的式VIII化合物，或其盐 S-L-M其中S代表如先前定义的螺二环残基；L代表如先前定义的连接基团并且M代表如先前定义的大环内酯环。特别的本发明化合物是游离形式或受保护形式的式IXa和IX的化合 物或其盐，<formula>formula see original document page 11</formula>其中-a-b-如上定义，-e-f-是-CH(OH)-CH(OH)-或-CH-CH-; -g-h-同上对 -3-1>-的定义并且113、 R4和R5如上定义。式I至IX化合物含有不对称碳原子并且因此可以以多种差向异构体形式存在。本发明包括全部这些可能的差向异构体以及其非对映异构混合物。然而，其中的大环内酯环为闭环形式并且其具有合适的立体化学的式VIII 和IX的化合物具有如本文中所提的Sanglifehrin特征性活性。优选具有 sanglifehrin特征活性的差向异构体。通常，例如对于本发明的制药用途， 优选纯形式或基本上纯形式的具有sanglifehrin特征活性的差向异构体(即 不含或基本上不含缺乏sanglifehrin特征活性的差向异构体)，例如包含至少 90%，例如至少95%的活性差向异构体(即包含少于10%，例如少于5%的 无活性差向异构体)。优选地，位于大环的位置1至6的3-氛基六氩歧溱基羧酸残基i)具有如 下构象优选地，位于大环的位置7至9的芳族氨基酸ii)具有L构型，例如如下构型优选地，位于大环的位置10至12的脂族M胞ii)具有L构型，例如如 下构型当大环的剩佘部分包含式II的残基时，该残基优选地具有构型当R3和R4—起时优选地具有如下构型<formula>formula see original document page 13</formula>优选地，1-氧杂-7-氮杂-螺-{5.5}-十一碳-8-酮-2-基残基具有构型<formula>formula see original document page 13</formula>其中当-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-时，-a-b-优选地具有构型缀5当连接基团是式VII时，该连接基团优选地具有构型当R6和R7分别是OH时，位置26和27的构型优选地是26(S)，27(S)或 26(R)，27(R)。当R6和R7—起代表额外的键时，位置26和27的构型优选地是本发明的式IX化合物优选地具有如下构象<formula>formula see original document page 14</formula>其中当-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-时，-a-b-优选地具有构型<formula>formula see original document page 14</formula>当-e-f-是-CH(OH)-CH(OH)-时，-e-f-优选地具有(S)，(S)构型或(R)，(R) 构型；当-g-h-是-(Me)CH-CH(OH)-时，-g-h-优选地具有构型<formula>formula see original document page 14</formula>当-g-h-是-(Me)C-CH-时，-g-h-优选地具有构型并且当R3和R4合在一起时，它们优选地具有构型<formula>formula see original document page 15</formula>、本发明的化合物可以为游离形式或受保护形式，例如T. W. Greene和 P. G. M. Wuts的"Protective Groups in Organic Synthesis",第二版,1991， John Wiley & Sons Inc., New York内所述的受保护形式。尤其，OH基团可 以采取受保护的形式，例如甲硅烷基醚(例如，如在Greene和Wuts同上引 文的第68-86页内的描述)、酯(见例如Greene和Wuts同上引文的第87-103页) 和碳酸酯(见例如Greene和Wilts同上引文的第104-111页)的形式。此受保 护的形式还包括在内部受保护的形式；例如在其中-g-h-是 -CH(CH3)-CH(OH)-的式IX大环内酯的情况中，其中大环的位置14至17包 含式X残基的受保护形式<formula>formula see original document page 15</formula>还例如，存在于Sanglifehrin内的1，3二醇可以#皮保护为适宜的环结构， 例如，Greene和Wuts同上引文的第118-142页所述的环结构。本发明的化合物还可以以盐形式存在。对于在本发明用途中的应用而 言适宜的可药用盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐，根据化合物中存在的 具体取代基酌情具有例如HC1盐形式。如前所述，本发明化合物的大环可以被断裂(尤其在内酯氧基基团 处)，以提供其中大环是开环形式的化合物。通常，内酯氧基基团的断裂通过水解(溶剂解)进行，例如以提供式XI的开环大环化合物: R6 O-X-Y國Z画A-OH S例如式XII的开环大环化合物<formula>formula see original document page 16</formula>其中X、 Y、 Z、 A、 -a-b-、 -e-f-、 -g-h-、 R3、 R4和R5如上所定义并 且R6是H或Cw烷基，例如甲基。此类开环形式为基础的Sanglifehrin大环环系统的修饰提供中间手段 并且也是本发明的一部分。因此在又一方面，本发明提供如前文所定义的开环形式的大环内酯 或其盐，其中所述的开环大环为游离形式或受保护形式；游离形式或受保 护形式的如上所定义的化合物R6 0-X-Y-Z-A-OH，或其盐；游离形式或受 保护形式的化合物R6 O画X-Y画Z-A'-CH(OH)-L-S,或其盐，其中画A'-CH(OH)-是如上所定义的羟基羧酸残基，例如式II的残基并且其它符号如 上所定义；游离形式或受保护形式的式XII'的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>
XII,游离形式或受保护形式的式IX'的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>或其盐。在该方面的具体实施方案中，本发明提供游离形式或受保护形式的式 IX"的化合物或其盐，<formula>formula see original document page 17</formula>其中-a画b画是-(Me)C=CH-或-(Me)CH画CH(OH)画；R8是H或-C(O)-ORIO，其中R10是H或Me ; R9是H ，或者，当-a-b-是 -(Me)CH-CH(OH)-并且RA-C(O)曙OMe时，R9是Me;以及当國N—N-代表在 这两个N原子之间的单键时XAH，或X连同-N--N-代表在这两个N原子之间 的双键。更具体地，本发明提供式W、 Y(开环Sanglifehrin A) 、 S(开环 sanglifehrin B)和T的4匕合物<formula>formula see original document page 19</formula>
本发明还包括游离形式或受保护形式的、其中1-氧杂-7-氮杂-螺-{5.5}-十-碳-8-酮-2-基环系统是开环形式的化合物，例如式XIII的化合物，或其盐Me'。'， 迎 其中a、 b、 L和M如上所定义,构象那样的构象。式XIII化合物的开环螺二环环系统优选地具有如下构象:、OH0, 丽2其中当-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-时本发明尤其提供游离形式或受保护形式的式Z的化合物(Sanglifehrin<formula>formula see original document page 20</formula>或其盐。式IX"、 S、 T、 W、 Y、 XIII和Z的化合物是用于制备Sanglifehrin (— 般地包括闭环形式及环扩展的闭环形式(ring expanded ring closed forms)) 的有用中间体。式IX"化合物可以通过在内酯氧基基团处或其附近断裂闭环的 sanglifehrin (例如SanglifehrinA或B)的大环内酯环而制备。因此，例如， 式Y和T的化合物可以通过在碱性条件下，例如对式III化合物而言在碱金 属氢氧化物存在下，以及例如对式IV化合物而言在甲醇和碱金属碳酸盐存 在下处理sanglifehrin A进行制备。备选地，式IX"化合物可以从产生sanglifehrin的微生物的培养物中作 为分离物得到。例如，式Y和S的化合物可以从如下文所述的链霉菌属物种 (5^e/7to附y"s sp.)A92-308110的培养物中作为分离物得到。在US6124453内描述了从链霉菌属物种A92-308110的培养物中分离 式Y和S的化合物。式Z的化合物可以通过在螺系统的氮原子与中心原子之间断裂该螺 二环环系统而得到。备选地，式Z化合物可以从产生sanglifehrin的微生物 的培养物中作为分离物得到。例如，在US6124453内描述了从链霉菌属物 种A92-308110的培养物中分离式Z的化合物。具有与大环连接的螺二环残基的本发明大环内酯还可以接受对间隔 连接基团的断裂处理，例如就式IX而言，特别在残基26与27之间的键接处 断裂，以产生分开的新螺二环化合物和其它大环内酯。也正如前述，这些化合物可以用作中间体，Sanglifehrin的螺二环部分在该Sanglifehrin类化 合物的生物活性中尤其具有不可缺少的功能作用。因此，本发明提供游离形式或受保护形式的1-氧杂-7-氮杂-螺-{5.5}-十一碳-8-酮-2-基或其盐 <formula>formula see original document page 21</formula>，尤其是游离形式或受保护形式的式VI'化合物或 其盐，其中R7是H、任选地受保护的OH基团、活性官能团或-CH: -CH(OH)-CH(CH3)-CH2 -CH2 -CHO基团或其S内半缩醛等价物。 优选地，式VI'化合物具有构型其中当-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-时，-a-b-优选地具有如先前定义的构型。 <formula>formula see original document page 21</formula>本发明还包括游离形式或受保护形式的开环的l-氧杂-7-氮杂-螺 -{5.5}-十一碳-8-酮-2-基或其盐，尤其是游离形式或受保护形式的式XIII' 化合物或其盐<formula>formula see original document page 22</formula>XIII，其中-3-1>和117如先前定义。式xni'化合物的开环的螺二环环系统优选地具有如下构象<formula>formula see original document page 22</formula>其中当-a-b-是-(Me)CH-(OH)-时，-a-b-优选地具有如先前定义的构型本发明还提供游离形式或受保护形式或开环形式的式XIV大环内酯<formula>formula see original document page 22</formula>XIV其中M是如上定义的大环内酯环，尤其是式XV的大环内酯<formula>formula see original document page 22</formula>XV优选地具有构象其中当-g-h-是-(Me) CH-CH(OH)-时，-g-h-优选地具有如先前定义的 构型并且当-g-h-是-(Me)C-CH-时，-g-h-优选地具有如先前定义的构型并 且当R3与R4合在一起时，它们优选地具有如本文中所定义的构型。本发明还提供特定的式XVI的大环内酯XVI其中X是H、甲氧基、乙錄、OnPr、 OiPr;R14和R15独立地是H、甲基、烷基、(C广C4)烷基、(C广C4)-CO-CH3， 或R14与R15合在一起以形成5至7元取代的或未取代的环烷基选自例如式 XVII;<formula>formula see original document page 24</formula>R16是H或Me或(Cw)烷基；R17是H、 OH、 0-(d-4)烷基，或R14、 R15及R17合在一起以形成式 XVIII的环烷基；<formula>formula see original document page 24</formula>R23是H、支链或直链(Cwo)烷基和/或沿其链长含有一个或多个不饱 和键，特别是累积双键或三键，优选-CH-CH2， -CH2-OH， -CH2-OCH3, -CHO,-COOH，或XIX，合适地，R23可以如本文中所述被取代。在本发明的另一个方面，特定的大环内酯选自式xx在又一方面，本发明包括本发明的大环内酯和化合物，特别是基本纯化形式(例如至少卯％，优选至少95%,尤其至少98%纯形式)的、为天然 产物的大环内酯和化合物。在本发明的一个具体实施方案中，SanglifehrinA、 B、 C和D等分离 自新的链霉菌属物种A92-308110分离。链霉菌属物种A92-308110的样品在 1995年5月3日按照布达佩斯条约保藏于德国布伦瑞克的德国微生物和培养 物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen imd Zelikulturen GmbH, Mascheroder Weg lb， D-38124),并且具有保藏号DSM 9954。在 US6124453内描述了从链霉菌属物种A92-30810的培养物中分离 Sanglifehrin A、 <formula>formula see original document page 25</formula>下文通称作"本发明活性剂"的本发明大环内酯，例如式IX化合物， 例如SanglifehrinA、 B、 C和D，及其可药用盐显示出sanglifehrin特征性活 性，即如下活性的组合具有亲环蛋白结合活性；对肽基脯氨酸顺反异构酶具有抑制活性；具有免疫抑制活性；抑制B细胞增殖和T细胞增殖；但无FK结合蛋白结合活性，并且不抑制钙依赖磷酸酶活性。本发明大环内酉旨(例如式XVI)的生物活性可以在标准体外(/w v/办w)和 体内(/w v/vo)试验方法中，例如按如下方式证实。淋巴细胞对同种异体刺激的增殖性应答可以按如下准备。将来自 Balb/c小鼠(雌性，8-10周)的(2xl()S个)脾细胞与来自CBA小鼠(雌性，8-10 周)的2xl05个脾细胞共孵育4日。同种异体细胞在应答者脾细胞群体中诱 导增殖性应答，该应答可以通过标记的前体在DNA中的掺入来测量。当在 该试验中测试时，本发明的大环内酉旨(例如式IX化合物)及其可药用盐(例如 SanglifehrinA、 B、 C和D)具有约30nM至多到约200nM的ICs。，而环孢 菌素A具有约20 nM的ICso。 (T. Meo (1979) The MLR in the mouse. In: "Immunological Methods", L. Lefkovits和B. Pernis编辑Academic Press, N.Y.第227-239页)将来自CBA小鼠的(2xl()S个)脾细胞与50ng/ml LPS及试验化合物一 起孵育48小时。增殖由标记的前体掺入DNA内加以测量。本发明的大环内 酯(例如式IX化合物)及其可药用盐(例如Sanglifehrin A、 B、 C和D)抑制B 细胞增殖并具有约40微摩尔至多到约100微摩尔的IC50。 (Greaves， M.和J. Janossy， 1972， Elicitation of selective T and B lymphocyte response by cell surface binding ligands， Transplant Rev.， 11:87 Janossy， (i和M. F.Greaves, 1971， Lymphocyte activation, I， Response of T and B lymphocytes to phytomitogens， Clin. Exp. Immunol. 9:483-498)。细胞毒性使用在IFNy (100 U/ml)和LPS(5微克/ml)及试验化合物(不 超过10微摩尔)存在下37。C孵育24至72小时的人单核细胞系THPl(5x104 个细胞/孔)测定。活细胞使用测量活细胞内线粒体脱氬酶的酶活性的比色 读出MTT(colourimetric read-out MTT)定量(Mossman 1983)。在本试验中 孵育24小时后本发明的大环内酯(例如式IX化合物)及其可药用盐(例如 Sanglifehrin A、 B、 C和D)具有约1000-5000 nM的ICs。。 (Mossman T. J. (1983)， Rapid calorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assays, J. Imm. Methods, 65， 55-63)。使用Ficoll-Hypaque密度分离，根据Hansell等(1991)方法从健康志愿 者的外周血中制备单核细胞。在添加刺激物之前，(在含10。/。体积FCS的20030分钟。使用干扰素y (100 U/ml)和LPS (5微克/ml)作为刺激物以诱导外周 血单核细胞释放肿瘤坏死因子a(TNF-a)。在3小时温育后，将细胞离心(1200 转/分钟，10分钟)并收集上清液。存在于细胞上清液内的TNF的量使用商 业可获得的酶联免疫吸附测定试剂盒测定。本发明的大环内酯(例如式IX 化合物)及其可药用盐(例如SanglifehrinA、 B、 C和D)在此试验中测试时具 有约200nm至约1000 nm的IC50。合适的亲环蛋白结合试验是Quesniaux在Eur. J. Immunol. 1987 17 1359-1365中所述的竟争性ELISA试验。在该试验中，将待测试的化合物在 温育亲环蛋白(人重組亲环蛋白A)与已包被BSA的环孢菌素A的期间添加， 然后计算在无竟争物存在下产生50%对照反应抑制作用所需要的浓度 (IC5。)。替代性的试验是由Schneider等在Biochemistry(1994)， 33， 8218-8224 内所述的竟争性结合试验，该试验涉及在温育生物素化的亲环蛋白(人重组 亲环蛋白A)与已包被BSA的环孢菌素A的期间添加试验化合物。在试验化合物存在和不存在下所结合的生物素化亲环蛋白的量通过与链霉抗生物素 偶联的碱性磷酸酶温育而加以测定。当在这些试验中测试时，本发明的大环内酯例如式IX化合物(例如Sanglifehrin A、 B， C和B)具有约10 nM至约 100nM的IC5Q,而环孢菌素A具有约80nM的ICso。可以使用以证实Sanglifehrin的生物学活性的其它体外试验是IL-2报 告基因试验和Con A-刺激的脾细胞试验(指示对T细胞活化的影响)。当在标准试验中测试时，本发明的大环内酯例如式IX化合物(例如 Sanglifehrin A、 B、 C和B)没有FK结合蛋白结合活性并且不抑制钧依赖磷 酸酶活性。本发明的活性剂可用作药物，例如作为免疫抑制剂以及抗炎剂和/或 抗病毒剂。它们尤其可以用于预防与肝炎病毒感染相关的病症，尤其是丙型肝 炎。此外，本发明的活性剂具有抑制与肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活 性有关的病症的治疗性用途。PPIase是一类具有通过催化寡肽内脯氨酸亚 氨基肽键的顺反异构化而加速蛋白质折叠的作用的亲环蛋白。本发明的大 环内酯可以与亲环蛋白结合并抑制PPI的活性。本发明的活性剂还可以用于治疗自身免疫性疾病及治疗炎性病症，尤 其是具有包括自身免疫成分的病因的炎性病症，如关节炎(例如类风湿性关 节炎、慢性累进性关节炎(arthritis chronica progrediente )和变形性关节 炎)和风湿性疾病。在一系列的其它具体或替代性实施方案中，本发明还提供 1.1 用于在有需要的个体中预防或治疗丙型肝炎感染或HCV诱导的病症 如肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌的方法，包括向该个体施用治疗有效 量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin,例如式—的化合物，其中 所述化合物单独施用或与 一种或多种共同活性剂(co-agent)联合施 用。1.2 用于抑制培养基内HCV复制的方法，包括向该培养基施加有效量的 亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin，例如式—的化合物。1.3 用于抑制有需要的患者内的HCV复制的方法，包括向该患者施用治 疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin，例如式—的化合物。1.4 用于预防有需要的移植受体内的HCV感染复发的方法，包括向该受 体施用治疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin，例如式_ 的化合物。2. 亲环蛋白结合性化合物(如sanglifehrin)在制备用于任何如上所述方 法的药物组合物中的用途。3. 用于任何如上所述方法中的药物组合物，其包含亲环蛋白结合性化合 物如sanglifehrin以及一种或多种可药用稀释剂或载体。此外，具有亲环蛋白结合活性的本发明Sanglifehrin可以作为试剂用 于针对环孢菌素和其它亲环蛋白结合性化合物的置换免疫试验 (displacement immunoassays)中，例如，专利申请WO 95/07468所述的试验 方法。该专利申请涉及用于测定血液内抑免疫白结合性药物(例如环孢菌 素)的浓度的方法该方法包括添加可以从血液内的免疫抑制剂-抑免疫白 复合物中置换出所述药物的结合性竟争物；添加可以与所述药物结合但不 与结合性竟争物显著结合的受体；从样品中分离受体-药物复合物；并且测 定药物的量。Sanglifehrin可以在此试验中作为结合性竟争物使用；例如， 以从亲环蛋白中置换出环孢菌素，由此释放环孢菌素以(例如通过对该环孢 菌素特异的单克隆抗体)定量。根据前述内容，本发明在又一个方面提供4. 药物組合，其包含a)亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin(例如式I化合 物)作为第一活性剂，和b)共同活性剂例如，本文中提供的一种或多种 药剂。5. 如上定义的方法，包括(例如同时或依次)共施用治疗有效量的亲环蛋 白结合性化合物如sanglifehrin(例如式I化合物)和共同活性剂(例如本文中提供的一种或多种药剂)本发明的化合物可以通过任何常规途径、尤其是肠道途径，例如口服 (例如以用于饮用的溶液剂、片剂或胶嚢剂的形式)或肠胃外途径(例如以可 注射的溶液剂或混悬剂的形式)施用。优选的药物组合物可以是例如基于如UK 2,222,770 A中描述的微乳剂的那些药物组合物。在另 一个方面，合适的共同活性剂可以在联合治疗或交替治疗中共施 用。如本文中所用的术语"共施用"或"联合施用"等意味着包括向患者施用 这些所选的治疗剂，并且旨在包括其中这些治疗剂不一定经相同的施用途 径或在相同的时间施用的治疗方案。本发明也包括固定的组合。与仅施用 这些药物活性成分中的一种的单一疗法相比，施用本发明的药物组合产生 有益效果，例如协同性或加性治疗效果。适合与本发明化合物共施用的共 同活性剂包括，但不限于(1)干扰素或干扰素的缀合物，如(a) Intron-A , 干扰素a-2b (Schering Corporation, Kenilworth， NJ)，(b) PEG-Intron ,聚乙二醇干扰素a-2b (Schering Corporation, Kenilworth, NJ)，(c) Roferon ,重组干扰素a-2a (Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ)，(d) Pegasys ,聚乙二醇干扰素a-2a (Hoffmann-La Roche, Nutley， NJ)，(e) Berefor ， 可用的干扰素 a2 (Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield， CT)，(f) Sumiferon⑧，纯化的天然a干扰素混合物(Sumitomo, Japan),(g) Wellferon ,类淋巴母细胞干扰素a nl (GlaxoSmithKline), (h) Infergen , 共有a干扰素(InterMune Pharmaceuticals, Inc.,Brisbane, CA和Amgen， Inc., Newbury Park, CA)，(i)Alferon ,天然a干扰素的混合物(Interferon Sciences，和Purdue Frederick Co" CT)，①Viraferon ;(k) 缀合的干扰素包括，例如，与人白蛋白缀合的Albuferon(H Genome Science)。与水溶性聚合物或聚环氧烷均聚物，如聚乙二醇(PEG) 或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物缀合的干扰素。 作为基于聚环氧烷的聚合物的替代物，可以使用有效的非抗原性材料如葡 聚糖、聚乙烯吡咯烷酮类、聚丙烯酰胺类、聚乙烯醇类、基于碳水化合物 的聚合物等。在US 4766106， US 4917888， EPA 0 236 987， EPA 0 510 356和 WO95/130卯内描述了干扰素-聚合物缀合物。由于聚合性修饰充分降低抗 原性应答，此外来的干扰素不需要是完全自体的。用来制备聚合物缀合物 的干扰素可以从哺乳动物提取以制备，如人干扰素、反刍动物干扰素或牛 干扰素，或重组地生产。其它形式的干扰素包括干扰素p、 y、 t和co，如Serono的Rebif (干 扰素p画la)、 Viragen的Omniferon (天然干扰素)或Boehringer Ingelheim 的Omega干扰素；口月l干扰素3口 Amarillo Biosciences的口月艮干扰素a;在另一个方面，干扰素的其它实例包括聚乙二醇化干扰素a，例如 聚乙二醇化干扰素a -2a，聚乙二醇化干扰素a -2b，聚乙二醇化共 有干扰素(consensus interferon )或聚乙二醇化的纯化干扰素-ot 产物。 聚乙二醇化干扰素 a-2a在欧洲专利593,868 (本文中完整引用作为参 考)内描述并且可商业地获得，例如商品PEGASYS (Hoffmann-La Roche)。聚乙二醇化干扰素-a-2b在例如欧洲专利975,369 (本文中完整引 用作为参考)内描述并且可商业地获得，如商品PEG-INTRON A (Schering Plough)。聚乙二醇化共有干扰素在WO M/ll953 (本文中完整引用作为参考)内描述。(2) 抗病毒剂抗病毒剂可以是有效抑制病毒在哺乳动物内的形成和/或复制的化合 物或生物物质。这包括干扰病毒在哺乳动物内形成和/或复制所需要的宿主 机制或病毒机制的活性剂，如来自Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA的三氮唑核普(ribavirin) (l-p-D-呋喃核糖基-lH-l，2,4-三唑-3-酰 胺)、来自Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ的Rebetol 、 和来自Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ的Copegus⑧、开发中的三氮峻核 脊类似物，如Valeant的Levovirin及Viramidine ，以及。米唑立宾单磷酸 盐(Mizoribine Monophosphate);(3) 蛋白酶抑制物HCV NS3-4A丝氨酸蛋白酶的抑制物，如基于底物的蛋白酶抑制物 (Attwood等，爿wftv/m/ /7印ftVfe flfenv^/ves， PCT WO 98/22496, 1998; Attwood等,Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999， 10， 259-273; Attwood等，Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents,德国专利公开DE 19914474; Tung等Inhibitors of serine proteases particularly hepatitis C virus NS3 protease; PCT WO 98/17679)，包括a酮 酰胺类和肼基脲类(hydrazinoureas)，以及在亲电子试剂(如硼酸或膦酸西旨) 中终止的抑制物(Llinas-Brunet等Hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734);用于治疗HCV的美国专利，例如授予Spruce等的美国专利号 6，004，933(该专利公开了 一类用于抑制HCV内肽酶2的半胱氨 酸蛋白酶抑制物)；授予Zhang等的美国专利号5，990，276(该专利 公开了丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成性抑制物)；授予Reyes 等的美国专利号5,538,865内公开的蛋白酶抑制物；在Corvas International, Inc.的WO 02/008251和Schering Corporation的 WO 02/08187和WO 02/008256内公开的作为HCV NS3丝氨酸蛋白酶的抑制物的肽；在Boehringer Ingelheim的美国专利号 6,534,523、 6，410，531和6，420，380以及Bristol Myers Squibb的 WO 02/060926 (这些文献在本文中完整地引用作为参考)内公开的 HCV抑制物三肽；在Schering Corporation的WO 02/48172内 公开的作为HCV NS3丝氨酸蛋白酶的抑制物的二芳基肽；在 Schering Corporation的WO 02/18198和Bristol Myers Squibb的 WO 02/48157 (在本文中完整地引用作为参考)内/>开的作为HCV NS3丝氨酸蛋白酶的抑制物的imidazoleidinone类；Vertex Pharmaceuticals的WO 98/17679和Bristol Myers Squibb的WO 02/48116也7>开了 HCV蛋白酶抑制物(在本文中完整地引用作为 参考)。(4) 非基于底物的NS3蛋白酶抑制物如2,4，6-三羟基-3-硝基-苯曱酰胺 衍生物(Sudo K.等，5/oc/re附/5Tfl/和丑/o/7/rys/cfl/及&sefl/r/r CV 附附mw/ca^/ows， 1997， 238 643-647; Sudo K.等^w,/v/ra/ Or麵勿朋flf C7^歸幼mi/^， 1998, 9,186)，包括RD3-4082和RD3-4078;(5) 菲醌，在SDS-PAGEM射自显影中具有对抗蛋白酶的活性的、 从链霉菌属物种的发酵培养肉汤中分离的菲醌，Sch 68631 (Chu M.等， rcm/^flfrwi丄"teM， 1996， 37， 7229-7232), ( Chu M等，Tetrahedron Letters 37: 7229-7232， 1996);从真菌/^"/"7//"附gW / /v"/n中分离的Sch 351633 (Chu M.等,必/oo/^aw/c tfwdC7^附/y^y jLeftcs 9:1949-1952);基于 大分子水蛭蛋白酶抑制剂c所设计的选择性抑制物，其中所述的水蛭蛋白 酶抑制剂c从水蛭中分离并且是数种丝氨酸蛋白酶(如S.griseus蛋白酶A 和B、 a-胰凝乳蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶及枯草蛋白酶)的有效抑制物 (Qasim M.A.等，"/oc&附/Wo; 36:1598-1607， 1997)。(6) 在Kakiuchi N.等/ FEAS i^股/^ 421， 217-220; Takeshita N.等 Jwfl(^cfl/ B/oc/^wi^o;， J997， 247， 中定义的噢峻烷类和苯甲酰苯 胺类。在反向HPLC分析中显示与NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物有关的抑制作用的漆唑烷衍生物(Sudo K.等，爿/i"V/m/ Ae^flfd， 1996， 32， 9-18)。尤其是化合物，具有被长烷基链取代的稠合的肉桂酰基部分的 RD-16250、 RD4 6205和RD4 6193。(7) HCV NS3-4A丝氨酸蛋白酶抑制物，包括由Boehringer Ingelheim 生产的BILN2061、由Vertex生产的VX-950、由Schering-Plough生产的 SCH-503034和SCH-351633和由GlaxoSmithKline、Bristol Myers Squibb、 Abbot、 Roche、 Merck、 Pfizer及Gilead生产的处于临床前和临床研发中 的其它HCV蛋白酶抑制物；(8) 核苷类似物由Idenix生产的替比夫定(Telbivudine) (US 6444652、 US6596700和 WO0196353)。 HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶的核普抑制物或非核 苷抑制物，如WO 2004/002422所公开的2，-C-甲基-3'-0-L-缬氨酸酯呋喃 核糖基胞苷(NM283, Idenix)。在国际公开号WO 01/90121和WO 01/92282 (这些文献在本文中完整 地引用作为参考)中由Idenix Pharmaceuticals公开的、用于治疗黄病毒(包 括HCV)和痙病毒的、分支的核苷。具体地，在该Idenix出版物中公开了 用于治疗人及其它宿主动物中丙型肝炎感染(以及黄病毒和瘟病毒)的方 法，其中所述的方法包括单独施用或与另外的抗病毒剂组合地施用有效量 的生物活性的1，、 2，、 3，或4，-分支的B-D或B-L核苷或其可药用盐或前 体药物(任选地在可药用载体中)。在公开治疗丙型肝炎病毒的用途的其它专利申请中的核苷类似物包 括由 BioChem Pharma， Inc.,(现为Shire Biochem， Inc.)提交的 PCTCA00/01316 (WO 01/32153 ; 2000年ll月 3 日提交)和 PCT/CAOl/00197 (WO 01/60315; 2001年2月19日提交)；由Merck & Co.， Inc.提交的PCT/US02/01531 (WO 02/057425; 2002年1月18日提交)和 PC1YUS02/03086 (WO 02/057287; 2002年1月18日提交)、由Roche提 交的PCT/EP01/09633 (WO 02/18404; 2001年8月21日7〉开)和由Pharmasset， Ltd.提交的PCT公开号WO 01/79246 (在2001年4月13日 提交)、WO 02/32920 (在2001年10月18日提交)以及WO 02/48165(这些 申请的公开内容在本文中完整地引用作为参考)。在Emory大学的名为"2，-氟核苷"的PCT公开号WO 99/43691 (本文 中完整引用作为参考)中公开的2，-氟核苷类；由Eldmp等公开的r-修饰的核苷类(口头发言V，丙型肝炎病毒，黄 病毒科；第16届国际抗病毒研究大会(2003年4月27日，Savannah, GA));在Bhat等中公开的核苷类似物和2，-修饰的核普类(口头发言V，丙型 肝炎病毒，黄病毒科，2003 (口头发言V，丙型肝炎病毒，黄病毒科；第 16届国际抗病毒研究大会(2003年4月27日，Savannah, Ga); pA75);Olsen等公开的2，-修饰的核苦类(口头发言V，丙型肝炎病毒，黄病 毒科；第16届国际抗病毒研究大会(2003年4月27日，Savannah, Ga)p A76)临床前的4匕合物包括R803 (Rigel)、 JTK-003 (Japan Tabacco)、 HCV-086 (ViroPha醒/Wyeth)、 R曙1479 (Roche);(9) 核普酸聚合酶抑制物和胶霉毒素(Ferrari R.等九"r"fl/W/Wogj;, 1999， 73， 1649-1654)和天然产物浅蓝菌素(Lohmann V.等Wn /ogv， 1998， 249， 108-118);(10) HCV NS3解旋酶抑制物，如由ViroPhama生产的VP_50406和来 自Vertex的化合物，在美国专利号5,633,388和PCT WO 97/36554内公开 的其它解旋酶抑制物；(11) 指向HCV基因组或病毒复制所需要的任何细胞成分的反义分子。与病毒5'非编码区(NCR)内的序列段(Alt M.等，好e/mtofogv, 1995， 22， 707-717)，或包含该NCR的3'末端的核苦酸326-348和位于HCV RNA 的核心编码区内的核苷酸371-388 (Alt M.等，^n^/v^ 6>/ Wra/og);， 1997，142， 589-599; Galderisi U.等，/o"脂/ CW/由油gy， 199， 181， 251-257)互补的硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸类(S-ODN);如由Isis Pharm/Elan生产的ISIS 14803、由Hybridon、 AVI bioPharma和Chugai 生产的反义寡核苷酸、AVI-4065 (AVI BioPharma)或可以增强治疗的效力 的与HCV基因组的任何部分互补的反义序列；(12) IRES依赖性翻译的抑制物(Ikeda N等，/^e^/w幼e /7"vewftV w "m/ Ae/;fl故/s C，日本专利公开JP-08268890; Kai Y等 Prevew&》w flfif/ ,re",附ew/v/ni/ cfcefls^s1, 曰本专矛J公开JP-10101591); :i口 由Isis Pharm/Elan生产的ISIS 14803 、由PTC Therapeutics, Anadys、 Immusol、 RiboTargets和SomaGenics生产的IRES抑制物；(13) 核酶，如抗核酸酶的核酶(Maccjak， D.J.等，好e/mto/ogv l"9， 30， 摘要995)和在Barber等的美国专利号6,043,077和Draper等的美国专利 号5，869，253及5，610，054(这些专利在本文中完整地引用作为参考)内涉及 的那些核酶，如RPI和Sirna Therapeutics Inc.的HEPTAZYME;(l4)在HCV生活周期(包括病毒进入、装配和成熟)中的其它靶的抑 制物，如一种由Migenix生产的糖蛋白加工抑制物Celgosivir(MBI 3253)、 由Trimeris生产的融合抑制物、由Achillion生产的ACH-0137171;(15)免疫调节剂受体激动剂如toll样受体(TLR，)激动剂包括由Anadys生产的 ANA245、 ANA971、 ANA975 (US 5041426、 4880784); CpG-lOlOl， 一种 TLR-9激动剂(Coley Pharmaceuticals); IMPDH抑制物，霉酚酸，其盐 或前体药物霉酴酸钠或mycophenolate mofetil或Merimebodib (由Vertex 生产的VX-497);胸腺素a-l(由SciClone生产的Zadaxin或其组合)；SCV-07 (SciClone)、 Belerofon(由Nautilus生产的改良IFN-a);由NABI生产的 CIVACIR(丙型肝炎免疫球蛋白)，或S1P受体激动剂、例如FTY720或其 类似物(任选地磷酸化的)，例如在EP627406A1、 EP778263A1 、 EP1002792A1、 WO02/18395、 WO02/76995、WO 02/06268、 JP2002316985、WO03/29184、 WO03/29205、 WO03/62252和WO03/62248内所7>开的那 些，这些申请的公开内容在本文中完整地引用作为参考；由3M Pharmaceuticals生产的雷西莫特(resiquimod)[VML600]， 一种咪奮莫特 (imiquimod)类似物，其是干扰素-a及其它细胞因子的有效诱导剂；(16) 抗纤维化剂，如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物、imatinib (Gleevac)、由 Indevus生产的IP誦501和来自InterMune的干扰素y lb、由Intermune、 Marnac、 Shionogi生产的吡非尼酮(Pirfenidone)(多重性TGF p激动剂、 FGF拮抗剂、PDGF拮抗剂)；(17) 由Intercell(治疗性肽疫苗IC41 HCV)、 Epimmune/Genecor、 Merix、 Tripep (Chiron-VacC)生产的治疗性疫苗、由Avant提供的免疫 疗法(Therapore)、由CellExSys提供的T细胞疗法、由STL生产的单克 隆抗体XTL-002、由Anadys生产的ANA 246和ANA 246、由Innogenetics 生产的针对E2的治疗性疫苗、由XTLBio生产的抗E2包膜蛋白的mAb、 GI-5005 (Globelmmune Inc)、 InnoVac-C(WO 9967285, Innogenetics)、 IC-41(Interce11)、干扰素a-n3(Interferon Sciences)、 Engerix B(SmithKline Beecham);(18)其它化合物包括Ursodiol(EP00269516 ， Axcan Pharma)、 HE-2000 (DHEA类似物，Colthurst Ltd)、 EHC-18(免疫调节物，Enzo biochem)、 二盐酸组胺(H2激动剂，WO09104037, Estero-Anstalt)、 1-氨 基-烷基环己烷类(美国专利号6,034,134)、烷基脂类(美国专利号 5,922,757)、维生素E和其它抗氧化剂(美国专利号5,922,757)、胆酸类(美 国专利号5，846，99964)、 N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸(美国专利号 5,830,905)、苯二曱酰胺类(美国专利号5,633,388)、多腺苷酸衍生物(美国 专利号5,496，546)、 2，3，-双脱氧肌苷(美国专利号5，026，687)、苯并咪唑类 (美国专利号5,891,874)、植物提取物(美国专利号5,837,257、美国专利号 5,725，859和美国专利号6，056，961)和哌啶类(美国专利号5，830，905); N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸、苯二曱酰胺类、多腺苷酸衍生物、糖基化抑制物以及阻断由病毒感染所致的细胞损伤的非特异性细胞保护剂；(19) 目前处于临床前开发或临床开发中用于治疗HCV的任何其它化合 物，包括白细胞介素-10 (Schering-Plough)、由Endo Labs Solvay生产的 AMANTADINE (Symmetrel)、由Idun Pharma生产的胱天蛋白酶抑制物 IDN-6556、由Chiron生产的HCV/MF59、由Maxim生产的CEPLENE (二 氯组胺)、由Idun PHARM生产的IDN-6556、由Tularik生产的P-微管蛋 白抑制物T67、由Fujisawa Healthcare生产的FK788、 IdB1016(Siliphos， 口服水飞蓟素-磷脂酰胆碱磷脂复合物(phytosome))、由Immtech生产的 Dication、由Aethlon Medical生产的hemopurifier、由United Therapeutics 生产的UT 231B;由Bayer生产的HepeX-C SMI 、 PPVO-Bay55-8800 (羊 副痘病毒(Parapoxvims ovis));由Angion生产的Refanalin(HGF才莫拟物)、 R803 (Rigel)、 JTK闘003、 JTK曙002和JTK-109 (均来自Japan Tobacco)、 HCV-086 (ViroPharma/Wyeth) 、 ISIS-14803 (ISIS Pharmaceuticals)、 GS-9132 (由Achillion Pharmaceuticals生产的 一种聚合酶抑制物)、 HCV-793 (Pharmasset and Roche) 、 R1626 (Roche)。处于临床前开发中的化合物或药物可以由本领域技术人员例如通过检 索互联网上的临床试验信息和来自各个公司的通讯稿信息而容易地鉴定。(20) 增强组合疗法效力的化合物，包括叶酸拮抗药、5-氟嘧咬(包括 5-氟尿嘧咬)、胞苷类似物如p-L-l，3-二氧戊环基胞苷或j3-L-l，3-二氧戊环 基5-氟胞苦、抗代谢物(包括噤呤抗代谢物、阿糖胞普、fudarabine、氟尿 苷、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤和6-硫代鸟噤呤)、羟基脲、有丝分裂抑制物(包 括CPT-ll、依托泊苷(VP-21)、紫杉醇(taxol)、和长春花生物碱类如长春 花新碱和长春花碱、烷基化剂(包括但不限于白消安、苯丁酸氮芥、环磷酰 胺、ifofamide、 氮芥、抗瘤氨酸(melphalan)和三胺硫磷(thiotepa))、非经 典的烷基化剂、含铂化合物、博来霉素、抗肺瘤抗生素、蒽环类药如多柔 比星(doxorubin)和达诺霉素(dannomycin)、蒽二酮、拓朴异构酶II抑制 物、激素剂(包括但不限于皮质类固醇(地塞米松(dexamethasone)、泼尼松(prednisone)和甲基泼尼松(methylprednisone))、雄激素如氟甲睾酮 (fluoxymesterone)和甲睾酮(methyltestosterone)、 雌激素如己烯雌酚 (diethylstilbesterol)、抗雌激素药如他莫昔芬(tamoxifen)、 LHRH类似物如 亮丙瑞林(leuprolide)、抗雄激素药如氟他胺(flutamide)、氨鲁米特 (aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)和甲羟孕酮 (medroxyprogesterone))、 天冬酰胺酶、卡莫司汁(carmustine)、 洛莫司汁 (lomustine)、六甲基蜜胺(hexamethyl-melamine)、达卡巴漆(dacarbazine)、 米托坦(mitotane)、 链佐星(streptozocin)、 顺铂(cisplatin)、 卡铂 (carboplatin)、 levamasole和亚叶酸(leucovorin)。本发明的4匕合物还可以 与酶治疗剂和免疫系统调节物如白细胞介素、肿瘤坏死因子、巨噬细胞集 落刺激因子和集落刺激因子联合^^用。亲环蛋白结合性化合物或治疗剂如sanglifehrin在治疗如上文所述的 疾病和病症中的用途可以在标准的体外实验或临床试验中予以证实，例如 才艮据如下文所述的方法进行证实。A. 体外本发明的各种Sanglifehrin对HCV基因组复制的影响可以使用HCV 复制子细胞进行检验。HCV复制子细胞系，克隆A，从Apath，LLC得到许可。细胞在含有 10%热灭活胎牛血清(FBS, Gibco)、 2 mM L-谷氨酰胺、lx非必需氨基酸 (Gibco)和l mg/ml G418 (Invitrogen， Carlsbad, CA)的Dulbecco改良Eagle 培养基(DMEM， Gibco)内培养。为确定化合物的抗病毒效应，HCV复制子细胞(克隆A)用在补加 2。/。FBS和0.5。/。 DMSO的DMEM中系列稀释的化合物处理48小时，随后， 提取总细胞内RNA，并且使用HCV特异性引物(5，-TCTTCACGCAGA AAG CGT CTA-3，和5,-CTG GCA ATT CCG GTG TAC T-3) Sequence ID No: l和探针(5，-6-FAM-TCC TGG AGG CTG CAC GAC ACT CAT A-TAMRA-3，) Sequence ID No: 2，通过实时定量RT-PCR(Taqman)确定HCV RNA的水平。对于每个处理，将HCV RNA的量基于提取的总RNA 的量进行标化，其中所述总RNA的量在Quant-iT试验(Molecular Probe) 中确定。得到的每个数据点代表在细胞培养物中六个重复的平均值。IC50 是化合物的如下浓度，在此浓度上复制子细胞内的HCV RNA水平减少 50%。为监测化合物的细胞毒效应，复制子细胞在化合物处理48小时后的 成活力使用基于四氮唑盐化合物(MTS)的试验(CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega， Madison, WI)确定。CC50 是化合物的如下浓度，在此浓度上细胞的成活力减少50%。B.临床试验总计15 30名患有丙型肝炎病毒感染的患者入选2 12周的研究。每名 患者接受治疗有效剂量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin。在治疗进 程中及在2周的随访期内(典型地对全部患者)监测病毒RNA载量的血清 水平。在丙型肝炎患者内实现持续病毒学应答所需要的治疗时长和剂量将 在涉及更大数目的患者和多到12个月的更长治疗时间及6个月随访期的将 来临床试验中确定。在实施本发明方法时需要的日剂量将根据例如所用的亲环蛋白结合 性化合物、宿主、施用模式、待处理的病况的严重性而变动。Sanglifehrin可以作为单独成分施用或者与其它药物一起施用，其中 所述其它药物是例如具有抗HCV活性的药物，例如干扰素a、聚乙二醇 化干扰素a、三氮唑核苷、HCV聚合酶抑制物如NM283或HCV蛋白 酶抑制物如SCH503034和VX-950。所用共同活性剂的日剂量将才艮据例如 与所用化合物的协同效应、宿主、施用模式及待处理的病况的严重性而变 动。
权利要求
1.用于在有需要的个体中预防或治疗丙型肝炎和相关疾病如肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如大环内酯。
2. 根据权利要求l的方法，其中大环内酯是游离形式或受保护形式 的式VIIS國L-M 的sanglifehrin， 或其盐,其中S代表支链或直链(d.m)烷基；L代表包含具有6至11个碳原子的直链的连接基团；并且 M代表大环，其中该大环的位置2至6由取代或未取代的式I的六氢 歧溱基羧酸残基提供；其中该大环的位置7至9由芳族a-氨基酸残基提供， 其中该芳族a-氨基酸残基的羧基部分占据该大环的位置7，并且该芳族a-氨基酸残基的a-M部分占据该大环的位置9;该大环的位置10至12由脂族 a-氨基酸残基提供，其中该脂族a-氨基酸残基的羧基部分占据该大环的位 置IO，并且该脂族a-氨基酸残基的a-氨基部分占据该大环的位置12;大环 的剩余部分包含具有6至20个碳原子链长的羟基羧酸残基，该羟基羧酸残基 的氧基部分完成大环内酯键并且其羰基部分与位于大环的位置12处的a-氨 基基团形成酰胺键。
3. 用于在培养基中抑制HCV复制的方法，包括向该培养基施加有 效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin。
4. 用于在有需要的患者中抑制HCV复制的方法，包括向该患者施 用治疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin。
5. 用于在有需要的移植受体中预防HCV感染复发的方法，包括向该 受体施用治疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin。
6. 亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin在预防或治疗丙型肝炎和 相关疾病如肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌中的用途。
7. 亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin在制备用于根据权利要求l 至6之任一项的方法的药物组合物中的用途。
8. 用在根据权利要求1至6之任一项的方法中的药物组合物，包含亲 环蛋白结合性化合物如sanglifehrin及一种或多种可药用稀释剂或载体。
9. 药物组合，包含a)亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin作为第 一活性剂，和b)具有抗HCV特性的共同活性剂。
10. 根据权利要求1至6之任一项的方法，包括同时或依次地共施 用治疗有效量的亲环蛋白结合性化合物如sanglifehrin和具有抗HCV特性 的共同活性剂。
11. 根据前述权利要求之任一项的方法、用途、组合物或组合，其中 亲环蛋白结合性化合物是下式的化合物其中X是H、曱氧基、乙IL^、 OnPr、 OiPr;R14和R15独立地是H、曱基、烷基、(C广C4)烷基、(d-C4)-CO-CH3， 或R14和R15合在一起形成5至7元取代或未取代的环烷基选自下式R16是H、或Me或(d-4)烷基;R17是H、 OH、 -0-(0:1.4)烷基，或R14、 R15和R17合在一起形成下式 的环烷基<formula>formula see original document page 4</formula>18R23是H、支链或直链(Cw。)烷基和/或沿其链长含有一个或多个不饱 和键，特别是累积双键或三键。
12 根据权利要求ll的方法、用途、组合物或组合，其中R23选自 -CH=CH2、 -CH2-OH、 CH2-OCH3、 -CHO、画COOH，或式XIX，
13.如此前定义并描述的方法、用途、组合物或组合。
全文摘要
本发明公开大环内酯化合物如sanglifehrin用于治疗和预防丙型肝炎和相关疾病如肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌的用途。
文档编号A61P31/00GK101242842SQ200680029768
公开日2008年8月13日 申请日期2006年6月15日 优先权日2005年6月17日
发明者B·魏德曼, K·林, K·齐默尔曼 申请人:诺瓦提斯公司