专利名称：：促进多巴胺能神经元神经突生长和存活的方法
技术领域：
：本发明涉及神经学，神经生物学和分子生物学。更具体而言，本发明涉及促进多巴胺能神经元(DA神经元)的多巴胺能神经突再生、生长和存活的方法。此外，本发明涉及通过施用Sp35(LINGO-l)受体拮抗剂治疗具有多巴胺能神经元变性或死亡的疾病的方法。
背景技术：
：特定的神经变性紊乱以多巴胺能神经元的变性为表征。例如，帕金森氏病伴随着中脑的黑质中的多巴胺能神经元渐进性>坡坏。该种^^坏可导致化学递质多巴胺水平的下降。帕金森氏病的生理症状包4舌随意运动的损伤以及"几肉组不受控的节奏性颤才富形成特有的颤抖。帕金森氏病最广泛的治疗是施用多巴胺前体、L-dopa(L-3，4-二羟(基)苯丙氨酸多巴)，后者可在主要被残留多巴胺神经元脱羧基后通过替换缺失的多巴胺间接作用。然而，L-d叩a的使用伴有不良作用。患者常经受如运动障碍、恶心、呕吐、腹胀等副作用和4青神性副作用的4斤磨，且随着时间的4,移患者对L-dopa疗法的响应通常逐渐下降。针对L-dopa治疗的疗效随时间推移而下降，人们提出的理由之一是存活的多巴胺能神经元的数量被耗竭因此无法对施用的L-dopa进行响应。参见IsacsonO""ProblemsandsolutionsforcircuitsandsynapsesinParkinson'sdisease,"Neuron43:165-168(2004)。此夕卜，L-dopa的效力随着因多巴胺能神经元死亡而持续损失的神经元连接(末端或神经4建)而下降。参见同上。采用突触后多巴胺激动剂进行的其它治疗形式同样伴有副作用。此外，尽管L-dopa改善了患者的生活质量，它并不能阻止疾病进展。其他化合物如神经胶质细胞系衍生神经营养因子(GDNF)已显示了通过慢性灌输传递在人类患者中治疗帕金森氏病的希望。例々口,参见Gill等人,，"DirectbraininfusionofglialcelllinederivedneurotrophicfactorinParkinsondisease,"NatureMed.9:589-95(2003)。然而，这些治疗方案仍处在发展早期。^午多其它的疾病和紊舌L可包4舌多巴胺能一申经元的变性。其中包括多系统萎缩、紋状体黑质变性、橄榄脑桥小脑萎缩、Shy-Drager综合症、具有帕金森特4正的运动神经元疾病、3各易体痴呆、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、额颞叶痴呆、具有帕金森病4正的阿尔茨淘:F犬病、Wilson病、Hallervordern-Spatz病、Chediak-Hagashi病、SCA-3脊髓小脑性共济失调、X-连锁的月几张力障碍-帕金森综合征(DYT3)、亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)、朊蛋白病、Jacob-Creutzfeldt病、血管性帕金森综合4正、脑性瘫痪、重复头部外伤、脑炎后帕金森综合症、精神分裂症和神经系梅毒。相应地，有必要对以多巴胺能神经元变性或死亡为特4i的帕金力籴氏病和其它症状采耳又附加治疗方法。
发明内容本发明基于如下发现LINGO-l在中脑多巴胺能(DA)神经元表达，并负向调节DA神经元神经突生长和存活。基于该发现，本发明一般涉及促进多巴胺神经元增殖、存活、修复、生长和再生的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的含Sp35拮抗剂的组合物相接触。此夕卜，本发明一4殳涉及通过施用Sp35拮抗剂治疗各种与多巴胺能神经元变性或死亡相关的疾病、紊乱或损伤。在特定的实施方式中，本发明包括在哺乳动物中促进多巴胺能神经元再生、生长和存活的方法，其包括向有此需要的哺乳动物施用有效量的包含Sp35拮抗剂的组合物。在附加的实施方式中，该哺乳动物经-珍断患有与多巴胺能神经突变性或死亡相关的疾病、紊乱、损伤等症状。在一些实施方式中，该疾病、紊乱、损伤等症状选自由帕金森氏病(PD)、多系统萎缩、紋状体黑质变性、橄榄脑桥小脑萎缩、Shy-Drager综合症、具有帕金l^特4正的运动神经元疾病、^各易体痴呆、进4亍性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、额颞叶痴呆、具有帕金森病征的阿尔茨海默病、Wilson病、Hallervordern-Spatz病、Chediak-Hagashi病、SCA-3脊髓小脑性共济失调、X-连锁的肌张力障碍-帕金森综合征(DYT3)、亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)、朊蛋白病、Jacob-Creutzfeldt病(CJD)、血管性帕金森综合征、脑性瘫痪、重复头部外伤、脑炎后帕金森综合症、神经系梅毒和精神分裂症构成的组合。在上述方法的不同实施方式中，该Sp35拮4元剂可以是任何能干预Sp35效能以负向调节多巴胺能神经元再生、生长或存活的能力的分子。在特定实施方式中，该Sp35拮抗剂选自由可;容性Sp35多肽、Sp35抗体或其片,殳、Sp35拮抗剂多聚核苷酸(例如，RNA干扰)、Sp35适体或两种或多种Sp35拮抗剂构成的组合。在特定实施方式中，该Sp354吉4元剂是可溶性Sp35多肽。本发明的特定可〉容性Sp35多肽包4舌，^f旦不限于，包含或击夹失下列一个或多个结构域的可溶性Sp35多肽(i)Sp35富亮氨酸重复序列(LRR)结构域，(ii)Sp35石咸性区C末端至LRR结构域，以及(iii)Sp35免疫玉求蛋白(Ig)结构域。在一些实施方式中，该可溶性Sp35多肽缺失Sp35Ig结构域、Sp35LRR结构域、跨膜区以及细胞质区。本发明的其它Sp35可;容性多肽包括缺失^争力菱区和细月包质区的多肽。在一些实施方式中，该可〉容性Sp35包含Sp35LRR结构i或并缺失Sp35Ig结构域、Sp35石威性区、跨膜区以及细胞质区。在一些实施方式中，该可;容性Sp35多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸残基34-532或SEQIDNO:2的氨基酸残基36-532。在一些实施方式中，该Sp354吉才元剂为包含了非Sp35部分的融合多肽。在一些实施方式中，该非Sp35部分选自由抗体Ig部分、血清白蛋白部分、靶标部分、才艮告部分以及纯化促进部分构成的组合。在一些实施方式中，该抗体Ig部分为H涟和Fc部分。在替代性实施方式中，该Sp35拮抗剂是与包含了下列一种或多种Sp35结构i或的Sp35多肽相结合的抗体或其片萃殳(i)Sp35富亮氨酸重复序列(LRR)结构域，(ii)Sp35>喊性区C末端至LRR结构域，以及(iii)Sp35免疫球蛋白(Ig)结构域。此夕卜，该Sp35抗体或其片段特异性结合包含此处所述的Sp35多肽片段的多肽中的表位。在其它实施方式中，该Sp35拮抗剂为Sp35拮抗剂多聚核苷酸，如反义多聚核苷酸、适体、小干扰RNA(siRNA)、或小发夹腿A(shRNA)。在W寸力口实施方式中，i亥Sp354吉4元齐J为Sp35适体。Sp35适体为结合Sp35并干扰Sp35效能以负向调节多巴胺能神经元再生、生长和存活的能力的小多肽或多聚核苷酸。本发明的进一步实施方式包括促进多巴胺能神经元再生、生长和存活的方法或是通过体内基因疗法治疗与多巴胺能神经突变性或死亡有关的疾病、紊乱或损伤的治疗方法，其包纟舌在疾病、紊乱或损伤4立点或该^f立点附近向哺乳动物施用为Sp35拮抗剂编石马的核普酸序列，乂人而由该核香酸序列在哺乳动物中的损伤^立点或该位点附近表达其数量足以降低对多巴胺能神经元再生、生长或存活的抑制作用的Sp35拮抗剂。在特定的实施方式中，该载体为选自由腺病毒载体、甲病毒载体、肠道病毒载体、痘疫病毒载体、慢病毒载体、杆状病毒载体、疱渗病毒载体、EpsteinBarr病毒载体、乳多空病毒载体、痘病毒载体、牛痘病毒载体、细小病毒载体以及单纯疱渗病毒载体构成的组合。在一些实施方式中，该载体通过选自由局部施用、目艮内施用、肠胃外施用、鞘内施用、硬膜下施用和皮下施用构成的组合的途径进4亍施用。在一些实施方式中，该疾病、紊乱、损伤等症状选自由帕金森氏病(PD)、多系统萎缩、紋状体黑质变性、橄榄脑桥小脑萎缩、Shy-Drager综合症、具有帕金森特征的运动神经元疾病、^各易体痴呆、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、额颞叶痴呆、具有帕金森病4正的阿尔茨海默病、Wilson病、Hallervordern-Spatz病、Chediak國Hagashi病、SCA誦3脊ft小月亩性共济失调、X-连锁的肌张力障碍-帕金森综合征(DYT3)、亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)、朊蛋白病、Jacob-Creutzfeldt病(CJD)、血管性帕金森综合征、脑性瘫痪、重复头部外伤、脑炎后帕金森综合症、神经系4每毒和斗青神分裂症构成的组合。此外，本发明包括了促进多巴胺能神经元再生、生长和存活的方法，或是哺乳动物体内与多巴胺能神经突变性或死亡有关的疾病、紊乱或损伤的治疗方法，其包括(a)将为Sp35拮抗剂编码的多聚核苷酸导入多巴胺能神经元，以及(b)允许所述Sp35拮抗剂的表达。此外，本发明涉及包4舌(a)向所述哺乳动物施用多聚核苷酸，该多聚核苷酸通过可才喿作连4妄至表达控制序列可对所述Sp35拮抗剂进行编码，以及(b)允许所述Sp35拮抗剂的表达的方法。在一些实施方式中，该培养宿主细胞来自于待治疗的哺乳动物。在特定的实施方式中，该多聚核苷酸通过转染、电穿孔、病毒转导或直接显樣i，注射被导入该宿主细胞或多巴胺能神经元。在特定的实施方式中，该种待治疗的疾病、紊乱、损伤等症状选自由帕金森氏病(PD)、多系统萎缩、紋状体黑质变性、橄榄脑桥小脑萎缩、Shy-Drager综合症、具有帕金森特征的运动神经元疾病、^各易体痴呆、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、额颞叶痴呆、具有帕金森病征的卩可尔茨》每,默病、Wilson病、Hallervordern-Spatz病、Chediak-Hagashi病、SCA-3脊髓小脑性共济失调、X-连锁的肌张力障碍-帕金森综合4正(DYT3)、亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)、朊蛋白病，Jacob-Creutzfeldt病(CJD)、血管性帕金森综合4正、脑性瘫痪、重复头部外伤、脑炎后帕金森综合症、神经系梅毒和精神分裂症构成的组合。在一些实施方式中，本发明的多肽，适体和抗体与聚合物相结合。在一些实施方式中，该聚合物选自由聚烷撑二醇、寿唐聚合物和多肽构成的组合。在一些实施方式中，该聚烷撑二醇为聚乙二醇(PEG)。在一些实施方式中，本发明的多肽和抗体与1,2，3,或4聚合物相结合。在一些实施方式中，该聚合物的总分子量为5,000Da至100,000Da。图l:该图显示了经过载体对照，FL-Sp35(FL-LINGO-l)和DN-Sp35(DN-LINGO-l)转导或经过与无Sp35蛋白的Fc对照(*p<0.003)和慢病毒对照(*p<0.05)相比较的可溶性Sp35-Fc(LINGO-l-Fc)蛋白处理的原代大鼠DA神经元培养物的多巴胺能神经元生长。图2:该图显示了以生产全长Sp35(FL-LINGO-l),显性-阴性Sp35(DN-LINGO-l)的慢病毒或是对照慢病毒感染并以IO^iM的l-甲基-4-苯基吡。定离子(MPP+)或^又以用于施用该MPP+的溶媒组合物处理的培养大鼠腹侧中脑(VM)神经元的存活。当暴露至MPP+时，与DN-SP35孵育的酪氨酸水解酶(TH)神经元的tt量显著高于FL-Sp35和对照Cp0.05,单因素方差分析)。图3:该图显示了以Sp35-Fc(LINGO-l-Fc)或1A7Sp35拮抗剂抗体以及对照Fc或对照抗体处理的VMTH神经元的数量。当暴露至MPP+时以Sp35-Fc或1A7处理可导致比对照Fc或对照抗体更高的神经元数量(对于1A7*p<0.01且对于Sp35-Fc*p<0.05,单因素方差分析)。图4:经DN-LINGO-l、FL-LINGO-1或乂于照專争导后VM原^^大鼠神经元J咅养物中的石粦酸4匕Akt(p-Akt)的Western印迹。在以DN-LINGO-l转导的细月包中可见察到比FL-LINGO-l和对照更高的磷酸化Akt。图5:图示了Sp35敲除小鼠与野生型小鼠相比的运动不对称。向野生型(WT)和敲除(KO)小鼠的左紋状体注射6-羟多巴胺(6-OHDA)后的1,2,3和4周内对运动不对称进行了评估。敲除小鼠的运动不对称显著低于野生型(*p=0.001,双因素方差分析)。图6A至6F:图6A显示了在6-OHDA试-验中野生型和敲除小鼠的无损伤中脑内的TH神经元tt量。图6B显示了在6-OHDA试-睑中野生型和敲除小鼠相对无损伤侧的^t量所规^各化的损伤侧的TH神经元数量。KO小鼠的TH神经元的百分比在统计上大于WT小鼠0^=0,001，非配对t检验)。图6C显示了在1-曱基,4-苯基1,2，3，6-四氢吡啶(MPTP)试-睑中野生型和敲除小鼠的中脑内的TH神经元数量。KO小鼠的TH神经元的百分比在统计上大于WT小鼠(*口=0.002，非配对t验)。图6D为显示了与未暴露至MPTP的小鼠相比暴露至MPTP的WT和KO小鼠中石岸酸4匕Akt(P-Akt)水平的Western印迹。图6E为经盐水和MPTP处理的WT和KOVM中的石粦酸化Akt(p-Akt)、Akt和P-月几动蛋白的Western印迹(每组中n=6)。图6F显示了与MPTP处理的WTCpO.05)和盐水处理的KOVMs(#p<0.05,每组中n=6)相比在第7天MPTP处理的小鼠VMs中的p-Akt水平明显更高。图7A至7G:图7A为经Sp35抗体(lA7)或对照抗体处理的VMTH神经元中P-Akt和表皮生长因子受体(EGFR)表达的Western印迹。图7B为经Sp35-Fc或对照处理的VMTH神经元的EGFR和P-Akt表达的Western印迹。图7C为经Sp35-Fc或Sp35抗体(1A7)处理的VMi咅养物的EGFR、p-Akt、总Akt和|3-月几动蛋白表达的Western印迹。图7D为经Sp35和/或EGFR转染的培养细胞中EGFR和Sp35的共免疫沉淀。+或-显示EGFR和Sp35的存在(+)或缺失(-)。IP指用于免疫沉淀的抗体，而IB指用于Western印迹的抗体。图7E为WT和KOVM中EGFR和LINGO-1的共免疫沉淀。图7F为显示Sp35抗体1A7阻断Sp35与EGFR在共转染细胞系中的结合的Western印迹。此夕卜，另一Sp35抗体2F3不阻断Sp35与EGFR的结合。少突细胞-髓鞘糖蛋白(OMgp)的转染4皮作为对照。图7G显示了分别与对照和Fc片l殳比4交得到的1A7和Sp35-Fc处理的培养物中p-Akt水平的统计学分才斤。图8:该图显示了患有6-OHDA诱导的试验帕金森综合征的WT和KO小鼠中VM的未损伤和损伤侧的TH神经元数量。图9:该图显示了6-OHDA损伤后Sp35蛋白水平的变化。向野生型小鼠紋状体施用6-OHDA3天后Sp35在损伤侧(6-OHDA)较相对侧(对照)得到上调(各时间点n=3，非配对学生t检验，*p<0.05)。图10:该图显示了以盐K(WT:n=7,KOn=8)和MPTP(各组n=10)处理的WT和KO小鼠的黑质致密部(SNc)TH神经元^t量。图11:该图显示了以盐水或MPTP处理的KO和WT小鼠的紋状体多巴胺(DA)水平(ng/ml)。图12:Western印迹显示了以0，1和5MOI表达FL-Sp35的慢病毒转染后2天的COS-7细胞中Sp35和EGFR的表达。图13A-13B:图13A为凝月交，其显示了与乂于照相比帕金森综合征患者(PD)的黑质中Sp35水平明显上升的半定量PCR反应的结果。图13B显示了与对照相比帕金森综合征患者(PD)的黑质中賴L才各化的mRNA水平。图14A-B:图14A为Western印迹，该印迹显示了KO(-/-)和WT(+/+)小鼠(每组中n=6)中多巴胺转运(DAT)水平。图14B显示了WT和KO小鼠中的相对DAT水平。WT和KO小鼠在DAT表达上没有显著区别(非配对学生t检验，p>0.05)。图15A-15C:图15A显示了在暴露至MPTP时与对照相比Sp-35-Fc注射的小鼠的SNc中的TH神经元数量。pO。05，n=9)。图15B显示了在暴露至MPTP时与对照相比Sp35-Fc小鼠的统状体多巴胺水平(*p<0.05,n=9)。图15C显示了在暴露至MPTP时与只于照相比Sp35-Fc注射小鼠的紋状体MPP+水平。发明详述定义除非另刊说明，此处所用的冲支术和^f学术i吾的含义等同于本发明所属领域普通技术人员的普遍理解。在产生沖突的情况下，将受本申请包括定义所支配。除非上下文另行指明，单数形式的术语可包括复数形式，而复凄t形式的术语可包4舌单凄t形式。本i兌明书中所涉及的所有出版物、专利和其它参考文献申请均以各种目的全文引用作为参考，如同将每一个单独的出版物或专利申请均为特定地单独的引用作为参考。于对本发明的实施或测试，下文描述了适用的方法和材料。该材料、方法和事例〗又作阐释目的，并非意在限制。,人具体描述和权利要求来看，本发明的其它特征和优势将显而易见。为进一步明确本发明，4是供了下列术语和定义。应当注意术语"一个"或"一种"实体指一个或多个该种实体；例如，一种"免疫球蛋白分子"应理解为代表一个或多个免疫J求蛋白分子。因此，术语"一个，，(或"一种，，)，"一个或多个"以及"至少一个，，在此处可进行互换。在整个说明书和权利要求中，词语"包含"及其变体指包括了任何所列举的整体或整体组合，但非排除了任何其它整体或整体组合。此处所用的"治疗有效量"指4安^见定剂量并在必要时间周期内其效果足以实现期望中的治疗结果的量。治疗结果可以是，例如，症状的减轻、存活时间的延长、活动性的改善等等。治疗结果不必要为"治愈"。此处所用的术语"治疗"指向动物施用一种药剂以改善或减轻疾病的症状。此夕卜，术语"治疗"指向动物施用一种药剂以预防疾病的发展。此处所用的"预防有效量，，指按规定剂量并在必要时间周期内其岁文果足以实现期望中的预防结果的量。由于预防剂量通常在疾病发生前或疾病早期施用，预防有效量将小于治疗有步丈量。此处所用的"多聚核苷酸"可包含全长cDNA序列的核苦酸序列，包括非翻译的5'和3'序列、编码序列、以及该核酸序列的片段、表位、结构域以及变体。多聚核苷酸可由可以是未修饰RNA或DNA或是^f务饰后的RNA或DNA的4壬4可多聚核4唐核苷酸或多聚脱氧核苷酸《且成。例如，多聚4亥苷g吏可由单链和乂又《连DNA、由单《连和双链区混合得到的DNA、单链和双《连RNA以及由单《连和双链区混合得到的RNA、包含了可能是单链或者更典型为双链或单《连和双J连区混一^.物的DNA和RNA的杂交分子所组成。此外，该多聚核香酸可由包含RNA或DNA或者同时包含RNA和DNA的三链区所组成。多聚核苦酸还可包含为稳定或为其它目的进行^f务饰的一个或多个修饰碱基或者DNA或RNA骨架。"修饰的"碱基包括，例如，三苯甲基化碱基和异常碱基如肌苷。DNA和RNA可进行多种修饰；因此，"多聚核香酸"包括了化学、酶或代谢修饰的形式。在本发明中，"多肽"可由通过肽4建或修饰肽4建(即，肽等排物)结合的氨基酸组成，并可包含20个基因编码氨基酸以外的氨基酸(例如，非天然存在的氨基酸)。本发明的多肽可通过翻译后作用等自然作用，或通过本领域公知的化学修饰技术进行修饰。该^修饰在基本文本和更具体的专著，以及大量的研究文献中有具体的描述。-修饰可在多肽的任何部分发生，包括肽骨架、氨基酸侧链以及氨基或羧基末端。应当可以理解在给定多肽的多个位点可相同或不同程度的出现相同类型的修饰。此外，一种给定多肽可包含多种类型的修饰。多肽可因为泛素化的原因而带有分支，它们也可呈带或不带分支的环状。环状、分支和带分支的环状多肽可通过翻译后自然作用或合成方法形成。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价结合、亚铁血红素部分的共价结合、核苦酸或核苦酸4汙生物的共^介结合、脂质或脂质书f生物的共〗介结合、磷脂酰肌醇的共价结合、交联、环化、形成二硫键、脱甲基、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、曱酰化、gamma-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘处理、曱基化、豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解作用、磷酸化、异戊烯化、外消旋、硒化、硫酸盐化、如精胺酰化等经转移RNA介导向蛋白添力口氛基酉吏，S乏素4b。(Y列^口,参见7Vote/"s画iSVn/c^^e爿"dA/o/ecw/"r/VopeWe51,T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork2ndEd,，(1993);尸os""nmy/加'o"a/Cova/e"/Mc^i/c加'owQ/"尸n^e/m1,B.C.Johnson,Ed.，AcademicPress,NewYork,pgs1-12(1983);Seifter等人.，M"/z五"z戸o7182:626-646(1990);Rattan等人.，*w,y4cWSc/663:48-62(1992》。术语"片段"、"变体"、"衍生物"及"类似物"在指本发明抗剂分子。只要该Sp35拮抗剂仍然能发挥功能，此处所述的Sp35拮抗剂可不受限制地包括其片段、变体或衍生物。本发明的可溶性Sp35多肽可包4舌Sp35水解片l爻、删除片l殳并特别包括「传递至动物时更容易到达作用位点的片段。多肽片段进一步包括包含了天然多肽抗原性或免疫原性表位(包括线性和三维表位)的任意多肽部分。本发明的可溶性Sp35多肽可包括变体Sp35区，包括如上所述的片段，以及具有由氨基酸替换、缺失或插入所得的变更氨基酸序列的多肽。变体可天然存在，例如等位基因变体。"等位基因"指占据了有才几体的染色体上全合定位点的基因的副本。G^wesII,Lewin,B.,ed.,JohnWiley&Sons,NewYork(1985)。非天然存在的变体可通过本领域已知的突变技术制备。可溶性Sp35多肽可包含保守或非保守氨基酸替换、缺失或添加。本发明的Sp35拮抗剂还可包括衍生分子。例如，本发明的可溶性Sp35多肽可包括经过变更后可显示出未在天然多肽上发现的附加特性的Sp35区。其范例包括融合蛋白和蛋白结合物。在本发明中，"多肽片段"指Sp35多肽的短氨基酸序列。蛋白片段可以是"独立式的"或是包含在更大的多肽中(该多肽片段形成部分或域)。本发明的多肽片段的代表性范例包括，例如，包含约5个氨基酸，约10个氨基酸，约15个氨基酸，约20个氨基酸，约30个氨基酸，约40个氨基酸，约50个氨基酸，约60个氨基酸，约70个氨基酸，约80个氨基酸，约90个氨基酸，以及约100个氨基酸或长度更长的片段。在特定的实施方式中，此处所述的方法中所用的Sp35拮抗剂为"抗体"或"免疫球蛋白"分子，或是其免疫特异性的片段，例如，天然存在的抗体或免疫球蛋白分子或是与抗体分子以类似方式结合抗原的工程改造的抗体分子或片段。术语"抗体"和"免疫球蛋白"在此处可以替换使用。此外，本发明的方法中所用的免疫球蛋白分子可也描述为"免疫特异性"或"抗原特异性"或"抗原结合"分子并交替使用以指代抗体分子或其片段。一种抗体或免疫球蛋白至少包含重《连的可变区，并通常至少包含重链和轻链的可变区。脊推动物系统中的基本免疫球蛋白结构已得到较为充分的了解。例如，参见Harlow等人,Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988)，在jt匕引人^f乍为参考。如将在下文更加具体讨论的那样，术语"免疫^求蛋白"包含了能够以生化方式区分的五个大类的多肽。所有五个类别均明确处于本发明范围之内，下述讨论将一般指向免疫球蛋白分子的IgG分类。对于IgG，一个标准的免疫iE求蛋白分子包含了两个相同的分子量约为23,000道尔顿的轻链多肽，以及两个相同的分子量为53,000-70,000的重链多肽。这四条链通常通过二碌4建以"Y，，构型连接，其中轻链自"Y的嘴部支持重链并持续至可变区域。"轻链和重链均被划分为具有结构和功能同源性的区域。术语"恒定"和"可变"具有功能性含义。就此而言，应当理解轻(VO和重(VH)链区的可变区决定了抗原识别和特异性。相反地，轻链(CO和重链(Cnl,CH2orCh3)的恒定区則賦予了重要的生物功能，例如分泌、经胎盘活动性、Fc受体结合、补体结合等。根据惯例恒定区域越远离抗体的抗原结合位点或氨基酸末端，其数量越有所上升。N末端区为可变区而C末端区为恒定区；CH3和C^区实际分别包含了重链和轻链的羧基末端。轻链分为kappa或lambda(k，X)。各重链分类均能与kappa或lambda轻4连的任意一种相结合。一询￡而言，轻链和重《连4皮此共价连接，而两条重链的尾摂部以二好u键彼此共价连接或当免疫球蛋白产自杂交瘤、B细胞或遗传工程改造的宿主细胞时^皮此非共价连接。在重链中，氨基酸序列自Y构型叉端的N末端延续至各《连底部的C末端。本々页域的4支术人员均了解重链分为gamma,mu，alpha,delta,或epsilon,(y，p,a,5,s)，其中还有一些小类(侈'H口，Yl-Y4)。由该链的性质决定了抗体的"类别"分别为IgG,IgM，IgAIgG或IgE。免疫球蛋白小类(同型)如IgG!,IgG2,IgG3,IgG4，IgA!等均得到了4艮好的区分并赋予了功能定位。熟练的技术人员能够轻易辨别这些类别和同型的各修饰型，且它们均在本发明的范围之内。如上文指出，可变区允"^午抗体选才奪性识别并特异性结合抗原上的表位。即，抗体的VL区和VH区结合形成定义三维抗原结合4立点的可变区。该四级抗体结构形成了存在于Y上各臂末端的抗原结合位点。更具体的说，该抗原结合位点可通过各VH和VtJ连上的三个决定簇互补区(CDRs)定义。在一些情况下，例如对于源自骆驼类或基于骆驼类免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子，一个完整的免疫球蛋白分子可能仅由重链组成，而不含轻链。例如，参见Hamers陽Casterman等人，淑群363:446-448(1993)。在自然存在的抗体中，各抗原结合区的六个"决定蔟互补区"或"CDRs"是当抗体在水环境中呈现三维构型时经特别定位形成抗原结合区的非相邻的短序列。抗原结合区的剩余氨基酸称为"框架"区，显示了较低的分子间可变性。框架区大体呈P-折叠构型，而CDRs形成与P-折叠结构连接(在某些情况下形成其一部分)的环形。因此，框架区通过链间非共价相互作用形成了支持CDRs以正确方向定位的支架。由定位CDRs形成的抗原结合区定义了免疫反应性抗原上的表位补体。该互补表面促进了抗体与其同源表位的非共〗介结合。由于已有明确的描述，本领域的普通技术人员可简单地在任何给定重或轻链可变区鉴别该种分别包含了CDRs和框架区的氛基酉臾(参见，"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,"Kabat，E.，等人,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,(1983);以及Chothia和Lesk，J她/.肠/.,，196:901-917(1987),在此全文引用作为参考)。然而在-膝駝类物种中，该重《连可变区(称为VHH)形成了完整的CDR。骆驼类VHH可变区和来自常规抗体(VH)的可变区的主要区别包括(a)与VHH中的相应区域相比，VH的轻链接触表面中具有更多的疏水氨基酸，(b)VHH中具有更长的CDR3,以及(c)VHH中的CDR1和CDR3之间二石克键出现的频率更高。在一种实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含抗体分子的至少一个重l连或轻链CDR。在另一实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少两个CDRs。在另一实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少三个CDRs。在另一实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少四个CDRs。在另一实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少五个CDRs。在另一实施方式中，本发明的方法中采用的抗原结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少六个CDRs。示范性的抗体分子至少包括一个可包含在主体抗原结合分子中的CDR，该示范性分子在本领域已知并在此处得到描述。括，^f旦不限于，多克隆，单克隆，多特异性，人源的，人源化的，灵长动物源化的，或嵌合抗体，单链抗体，表位结合片,爻，如Fab,Fab'和F(ab')2,Fd,Fvs，单链Fvs(scFv),单链#元体，二石危4建连4妄Fvs(sdFv)，包含VL或VH区的片,殳，由Fab表达库制备的片,殳，以及抗独特型(抗Id)抗体(例如，包括此处4皮露的结合分子的^tId抗体)。ScFv分子已为本领域所知，其描述参见USpatent5,892,019等。本发明的免疫球蛋白或抗体分子可以是免疫球蛋白分子的^f壬^可形式(例如IgG,IgE，IgM,IgD，IgA和IgY),类别(例力。IgGl5IgG2,IgG3,IgG4，IgA,和IgA2)或小类。包括单链抗体在内的抗体片段可以^f义单独包含可变区，或是结合铰链区、重链的CH1、CH2和CH3区或是轻《连的CL的全部或部分。本发明还包括了同样包含可变区与4交《连区，CH1,CH2，CH3或C^区任意组合的抗原结合片段。用于此处4皮露的方法的抗体或其免疫特异性片段可来源于包括鸟类和哺乳动物在内的任何动物。该抗体优选人，鼠，驴，兔，山羊，豚鼠，骆驼，羊驼，马或鸡抗体。在另一实施例中，可变区可来自不同的来源(例如，来自鲨鱼)。此处所用的人类摂抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，以及包括从人免疫球蛋白库或从表达一种或多种人免疫球蛋白且不表达内源免疫球蛋白的转基因动物中分离的抗体，3口下文描述，并可参见:ioKucherlapati等人的U.S.Pat.No.5,939,598。此处所用的术语"重链部分"包括来自于免疫球蛋白重链的氨基酸序列。包含重链部分的多肽至少包含CH1区、铰链区(例如，上、中和/或下铰链区)、Ch2区、Ch3区、或其变体或片,殳之一。例如，重链部分可包括含有CHl区的多肽链；含有Ch1区，至少铰链区的一部分，以及Ch2区的多肽链；含有Ch1区和Ch3区的多肽链；含有CH1区，至少铰链区的一部分，以及Ch3区的多肽4连，或含有CH1区，至少铰链区的一部分，Ch2区以及Ch3区的多肽《连。重链部分还可包括含有具有CH3区的多肽链的多肽。此外，本发明中所采用的结合多肽可至少缺失CH2区的一部分(例如，CH2区的全部或部分)。如上所述，本领域的普通技术人员应当可以理解这些区i或(例如，重链部分)可以进4亍^修饰/人而不同于天然存在的免疫球蛋白分子中的氨基酸序列。在此处纟皮露的方法中采用的特定Sp35拮抗剂抗体或其免疫特异性片段中，多聚体的一条多肽链中的重链部分与该多聚体的其它多肽链的重链部分相同。此外，本发明的方法中釆用的含重链部分的单体并不相同。例如，各单体可包含不同的目标结合位点,形成双特异性抗体等产物。此处4皮露的方法中采用的结合多肽的重链部分可来自于不同的免疫^求蛋白分子。例:^，一种多肽的重《连部分可包含了来自IgG!分子的CHl区和来自IgG3分子的铰链区。在另一实施例中，重链部分可包含部分来自于IgG,分子及部分来自于IgG3分子的4交链区。在另一实施例中，重链部分可包含部分来自于IgG!分子及部分来自于IgG4分子的嵌合铰链。此处所用的术语"轻链部分"包括来自于免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。该轻链部分优选至少包含Vl或Cl区之一。通过对免疫球蛋白的核苷酸序列引入一个或多个核香酸替代、添加或删除可生成编码免疫球蛋白多肽(例如，免疫^求蛋白重链区或轻链区)非天然变体的分离核酸分子，从而在编码蛋白中引入一个或多个氨基酸^#换、添加或删除。可通过定点突变和PCR介导突变等标准技术引入突变。优选在一个或多个非必需氨基酸残基上进行保守氨基酸替换。此处披露的方法中采用的抗体或其免疫特异性片段还可才艮据其对本发明多肽的结合亲和性进行描述或iJt明。优选的结合亲和性包4舌解离常凄t或Kd小于5xl0-2M,10-2M，5xl(T3M,10-3M，5xl04M，10-4M，5xl(T3M,10.3M,5xl00M，10陽&M,5xl0々M,10-/M:5xl0-8M,l(T8M,5xl(T9M，10-9M,5xl(T10M，10"。M,5xl(T11M,10-11M，5x10-12M,10-12M,5xl0-13M,l(T13M,5xl(T14M，l(T14M,5xlO"5M或IO"5M的结合亲和性。本文描述了在此4皮露的方法中采用作为Sp354吉^i齐'J^;抗体或其免疫特异性片^:。例如，本发明的方法中采用的抗体作为拮抗剂产生作用，阻断或抑制Sp35多肽的抑制活性。此处所用的术语"嵌合抗体"将用于指代任何免疫反应性区域或^f立点来自于一个种类而(才艮据本发明为完整的，部分的或修饰的)恒定区来自于另一种类的抗体。在特定实施方式中，该目标结合区域或位点来自于非人类来源(例如，小鼠或灵长动物)而恒定区来自人类。此处所用的术语"工程抗体"指一种重链和轻《连中的一个或全部可变区通过^皮来自已知特异性的抗体的一个或多个CDRs至少部分替换，或在需要时通过部分框架区替换和序列更改所<奮饰得到抗体。尽管CDRs可来自于与获得该框架区的抗体相同的类别甚或小类，可设想CDRs将会来自于不同类别的抗体，并优先来自于不同种类的抗体。将一个或多个来自于已知特异性的非人类抗体的"供体"CDRs嫁接至人重链或轻链框架区的工程抗体在此称为"人源化抗体"。无需将来自供体可变区的完整CDRs替换所有的CDRs以将一个可变区的抗原结合能力转换至另一个。事实上仅需要转移那些维持该目标结合位点活性所必需的残基。通过U.S.Pat.Nos,5,585，089,5,693,761,5,693,762和6,180,370等所给出的解释，本领域的技术人员应当能够通过常规试验或试错法获取功能性的工程或人源化抗体。此处所用的术语"连接的"，"融合的"或"融合"可相互3#换。这些术语指通过化学连接或重组才支术等任何方法连4妄两个或多个元素或成分。"框内融合"指以能够维持原始开放阅读框架(ORFs)的正确阅读框的方式连接两个或多个ORFs以形成一个更长的连续ORF。因此，所得重组融合蛋白是一种含有两个或更多与原始ORFs所编码的多肽相应的片段的单独蛋白(在天然状态下，该片段一^t殳不进行该种连接)。尽管该阅读框架在融合片段中彼此连续，该片段可被框内接头序列等序列物理或空间分隔。在有关多肽的上下文中，"线性序列"或"序列"指多肽中的由氨基向羧基末端方向排列的氨基酸，其中序列内彼此相邻的残基在多肽的一级结构内邻近。此处所用的术语"表达"指一种工艺过程，通过该过一呈基因可生产RNA或多肽等生化物质。该过程包括细胞内任何该基因的功能存在的显现，包括但不限于，基因敲除以及瞬时表达和稳定表达。它包括但不限于将基因转录为信使RNA(mRNA),转移RNA(tRNA),小发夹RNA(shRNA)，'J、干扰RNA(siRNA)或^f壬^f可其它RNA产物，以及将mRNA翻译为多肽。如果该最终产物是生4b产物，则表达包括了该生化产物和^f壬〗可前体的生成。"对象"或"个体"或"动物"或"患者"或"哺乳动物"指需要进行诊断、预后或治疗的任何对象，特别是哺乳动物对象。哺乳动物对象包括，但不限于，人类，驯养动物，畜牧动物以及动物园区动物，运动型动物，宠物动物，例如狗，猫，力豕鼠，兔子，大鼠，小鼠，马，牛，母牛等；灵长类动物，例如类人猿、猴、猩猩以及黑猩猩；犬科动物，如狗和狼；猫科动物，如猫，聊以及虎；马科动物，如马，驴以及斑马；食用动物，如牛，猪以及羊；有蹄动物，如鹿和长颈鹿；啮齿动物，如小鼠，大鼠，仓鼠以及"豕鼠等。在特定的实施方式中，该哺享L动物为人类只亍象。术语"RNA干扰，，或"RNAi，，指通过siRNAs来沉默或减少基因表达。双相区对沉默基因序列具有同源性的siRNA启动了动物和植物的序列特异性，转录后基因沉默过程。该基因可以是该有机体的内源或外源基因，整合于染色体或存在于未整合入基因组的转染载体。该基因的表达被完全或部分抑制。也有人认为RNAi可抑制耙RNA的功能；该靶RNA的功能可以是完全或部分的。Sp35(LINGO-l/LRRN6)本发明基于以下发现Sp35拮抗剂促进DA神经元的神经突生长和存活。天然存在的人源Sp35为由614个氨基酸(SEQIDNO:2)组成的糖基化的神经系统特异性蛋白。人源Sp35多肽包含了一种由14个富亮氨酸重复序列(包4舌N和C末端帽子)，Ig区，跨膜区以及细胞质区组成的LRR区。该细胞质区包含了一个规范的酪氨酸磷酸化位点。此外，该天然存在的Sp35蛋白包含了信号序列，介于LRRCT和Ig区的短石威性区，以及介于Ig区和细月包质区的跨膜区。该人源Sp35基因包含了替代的翻译起始密码子，因此Sp35信号序列的N末端可能存在或不存在六个附加氨基酸(MQVSKR;SEQIDNO:3)。表1才艮据SEQIDNO:2的序列并参照氨基酸残基数列出的Sp35区或其它区。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>Sp35在人和大鼠中的组织分布和发育表达已得到研究。Sp35生物学已在实验动物(大鼠)模型中进行研究。经northern印迹和免疫组化染色测定，大鼠Sp35的表达定位于神经系统神经元和脑少突细胞。大鼠Sp35mRNA表达水平受发育调节，在出生后的短时间内(即，约出生后第一日)达到峰值。在大鼠脊髓4黄切损伤才莫型中，经RT-PCR^r测，Sp35在损伤^立点4皮上调。此外，据显示Sp35与Nogo66受体(Nogo受体)相互作用。例如，参见，国际专利申i貪号PCT/US2004/00832，PCT^〉布号WO2004/08564。Sp35(LINGO-l)是Nogo受体-1-75神经营养因子受体复合物的附加成分。参见Mi等人，A^A^wros"'.7:221-228(2004),在此引入作为参考。与Nogo受体l不同，Sp35基因表达在脊髓中的成熟神经细胞暴露至外伤时上升，这意味着Sp35对CNS神经功能具有重要的生物作用。同上。全长Sp35分子的核苷酸序列3口下全长Sp35多肽的多肽序列如下:Sp354吉4元剂的<吏用方法本发明的一个实施方式才是供了促进多巴胺能(DA)神经元的再生、生长或存活的方法，其包括将DA神经元与有效量的Sp35拮抗剂或包含Sp35拮抗剂的组合物相接触，其中该Sp35拮抗剂选39AGCTCCGCCGACGCGCCCCGCAAGTTCAACATGAAGATGATATGA(SEQIDN0:1)'SRGKGNTKHM工EIEYVPRKSDAG工SSADAPRKFNMKM工(SEQIDN0:2),cAGGTG凡TATcGTGcTcc_cGcGccTLE工EQHwpLFpEsDpQsTqRTGIGRMGFREEITsIYINo~R及FYsLQS3Ec&COIT:iFpppopGH自由可溶性Sp35多肽、Sp35抗体、Sp35拮抗剂多聚核香酸、Sp35适体以及两种或多种所述Sp35拮抗剂构成的组合。用于实施本发明的各种示范性Sp35拮抗剂以及获取这些分子的方法和材料已在下文予以描述并且/或者可参见，例如，国际专利申请号PCT/US2004/008323，PCT乂>布号WO2004/085648,其全文在jt匕引用作为参考。可用于本发明的Sp35受体拮抗剂包括，例如，在PCT/US2005/022881,PCT乂>布号WO2006/002437(其全文在此引用作为参考)中描述的Sp35受体拮抗剂。本发明的附加实施方式提供了在患有与DA神经元变性或死亡相关的疾病、紊乱或损伤(例如，帕金力，氏病)的动物(例如，哺乳动物)中治疗该种疾病的方法，该方法包4舌或主要包4舌向有此需要的动物施用治疗有-丈量的Sp354吉^t剂，该Sp354吉抗剂选自由可溶性Sp35多肽、Sp35抗体、Sp35拮抗剂多聚核苷酸、Sp35适体以及两种或多种所述Sp35拮抗剂构成的组合。本发明的进一步实施方式包括促进DA神经元再生、生长或存活以治疗与DA^申经元死亡相关的疾病、紊《L或损伤的方法，其包括在疾病、紊乱或损伤的位点或是该位点附近向哺乳动物施用其数量足以减少对DA神经元再生、生长或存活的抑制的Sp35拮抗剂。在本发明的方法中，Sp35拮抗剂可通过直4妄施用可溶性Sp35多肽、Sp35抗体、Sp354吉^元剂多聚核苷酸、Sp35适体或其组合向患者施用。替代性地，Sp35拮抗剂可通过生产特异性Sp35拮抗剂的表达载体进行施用。在本发明的特定实施方式中，在治疗方法中施用Sp35拮抗剂的方法包4舌:(1)转化或转染具有表达Sp35拮抗剂的核酸(例如，载体)的可移才直宿主细胞；以及(2)将转化宿主细胞在疾病、紊乱或损伤的位点移一直进入哺乳动物。例如，该转化宿主细胞可在多巴胺神经元来源(例如中脑)的特定感染位点或其连接靶标(例如壳核、尾、皮层、苍白球或丘脑底核)进行移植。在本发明的一些实施方式中，该可移才直宿主细胞^皮耳又出哺乳动物，临时培养，以编码Sp35拮抗剂的分离核酸转化或转染，并重新移才直进入原同一哺乳动物。该细月包可以是u旦不要求),人其移才直的同一位点取出。该类实施方式(有时被称为活体外基因治疗)可于短时间内在作用位点^是供连续的Sp35拮抗剂。可通过本发明的方法治疗或改善的疾病或紊乱包括与DA4申经元死亡、变性或是缺乏再生或分4匕相关的疾病、紊舌L或损伤。该种疾病包4舌，^f旦不限于，帕金才架氏病(PD),多系统萎缩，紋状体黑质变性，橄榄脑桥小脑萎缩，Shy-Drager综合症，具有帕金森特征的运动神经元疾病，，路易体痴呆，进行性核上性麻痹，皮质基底神经节变性，额颞叶痴呆，具有帕金森病征的阿尔茨海默病，Wilson病，Hallervordern-Spatz病，Chediak-Hagashi病，SCA画3脊髓小脑性共济失调，X-连锁的肌张力障碍-帕金森综合征(DYT3)，亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)，朊蛋白病，Jacob-Creutzfeldt病(CJD)，血管性帕金森综合征，脑性瘫痪，重复头部外伤，脑炎后帕金森综合症，神经系梅毒和精神分裂症。此处4皮露的方法采用的Sp35拮抗剂(例如，可溶性Sp35多肽、Sp35抗体、Sp35拮抗剂多聚核苷酸或Sp35适体)可作为阻止、减少、预防或抑制Sp35负向调节DA神经突生长、存活或再生的能力的治疗剂进行制备和使用。可溶性Sp35多肽本发明的方法采用的Sp35拮抗剂包括能阻断、抑制或干扰天然存在Sp35的生物功能的多肽。特别地，本发明的可溶性Sp35多肽包括可溶性Sp35多肽的片段、变体或其衍生物。上文表1描述了Sp35多肽的各个区域。可溶性Sp35多肽缺失Sp35多肽的^争月莫区并通常击夬失月包内区例如，特定的可-容性Sp35多肽缺失包含了Sp35的跨膜区的氨基酸552-576和/或缺失包含了Sp35胞内区的氨基酸577-614。此外，特定可溶性Sp35多肽包含了Sp35多肽的LRR区、Ig区、石成性区和/或完整胞外区(对应SEQIDNO:2的氨基酸34至532)。本领域的技术人员可以理解完整的Sp35胞外区可包括存在于胞外区多肽的C末端或N末端中的附加的或更少的氨基酸。因此，本发明的方法中采用的可溶性Sp35多肽包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的41-525，SEQIDNO:2的40-526,SEQIDNO:2的39-527,SEQIDNO:2的38-528，SEQIDNO:2的37-529，SEQIDNO:2的36-530,SEQIDNO:2的35-531,SEQIDNO:2的34-531,SEQIDNO:2的46-520,SEQIDNO:2的45-521，SEQIDNO:2的44-522,SEQIDNO:2的43-523以及SEQIDNO:2的42-524的Sp35多肽，或该多肽的片,殳、变体或4汙生物。Sp35多肽拮抗剂可包括表1所述的区域的任意组合。本发明的方法釆用的其它可溶性Sp35多肽包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的1-33;SEQIDNO:2的1-35;SEQIDNO:2的34-64;SEQIDNO:2的36-64;SEQIDNO:2的66-89;SEQIDNO:2的90-113;SEQIDNO:2的114-137;SEQIDNO:2的138-161;SEQIDNO:2的162-185;SEQIDNO:2的186-209;SEQIDNO:2的210-233;SEQIDNO:2的234-257;SEQIDNO:2的258-281;SEQIDNO:2的282-305;SEQIDNO:2的306-329;SEQIDNO:2的330-353;SEQIDNO:2的363-416;SEQIDNO:2的417-424;SEQIDNO:2的419-493;以及QIDNO:2的494-551的Sp35多肽，或该多肽的片,殳、变体或书亍生物。本发明的方法中采用的可溶性Sp35多肽进一步包括，但不P艮于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的1-33;SEQIDNO:2的l國35;SEQIDNO:2的l誦64;SEQIDNO:2的1-89;SEQIDNO:2的1-113;SEQIDNO:2的1-137;SEQIDNO:2的1-161;SEQIDNO:2的1画185;SEQIDNO:2的l画209;SEQIDNO:2的l陽233;SEQIDNO:2的1-257;SEQIDNO:2的1-281;SEQIDNO:2的1-305;SEQIDNO:2的1-329;SEQIDNO:2的1-353;SEQIDNO:2的1-416;SEQIDNO:2的1-424;SEQIDNO:2的l誦493;SEQIDNO:2的1-551;SEQIDNO:2的1-531和SEQIDNO:2的1-532的Sp35多肽，或该多肽的片段、变体或衍生物。本发明的方法中采用的可溶性Sp35多肽更进一步包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的34-64;SEQIDNO:2的34-89;SEQIDNO:2的34-113;SEQIDNO:2的34-137;SEQIDNO:2的34-161;SEQIDNO:2的34-185;SEQIDNO:2的34-209;SEQIDNO:2的34-233;SEQIDNO:2的34-257;SEQIDNO:2的34-281;SEQIDNO:2的34-305;SEQIDNO:2的34-329;SEQIDNO:2的34-353;SEQIDNO:2的34-416;SEQIDNO:2的34-424;SEQIDNO:2的34-493以及SEQIDNO:2的34-551的Sp35多肽，或该多肽的片,殳、变体或4汙生物。本发明的方法中采用的可溶性Sp35多肽更进一步包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的34-530;SEQIDNO:2的34-531;SEQIDNO:2的34-532;SEQIDNO:2的34-533;SEQIDNO:2的34-534;SEQIDNO:2的34-535;SEQIDNO:2的34-536;SEQIDNO:2的34-537;SEQIDNO:2的34-538;SEQIDNO:2的34-539;SEQIDNO:2的30-532;SEQIDNO:2的31-532;SEQIDNO:2的32-532;SEQIDNO:2的33-532;SEQIDNO:2的34-532;SEQIDNO:2的35-532;SEQIDNO:2的36-532;SEQIDNO:2的30-531;SEQIDNO:2的31-531;SEQIDNO:2的32-531;SEQIDNO:2的33-531;SEQIDNO:2的34-531;SEQIDNO:2的35-531以及SEQIDNO:2的36-531的Sp35多肽，或该多肽的片,史，变体或书f生物。本发明的方法中采用的可溶性Sp35多肽更进一步包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:36的36-64;SEQIDNO:2的36-89;SEQIDNO:2的36-113;SEQIDNO:2的36-137;SEQIDNO:2的36-161;SEQIDNO:2的36-185;SEQIDNO:2的36-209;SEQIDNO:2的36-233;SEQIDNO:2的36-257;SEQIDNO:2的36-281;SEQIDNO:2的36-305;SEQIDNO:2的36-329;SEQIDNO:2的36-353;SEQIDNO:2的36-416;SEQIDNO:36的34-424;SEQIDNO:2的34-493以及SEQIDNO:2的36-551,的Sp35多肽，或该多肽的片段、变体或衍生物。可用于本发明的方法的其它可溶性Sp35多肽包括，但不限于，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的36-530;SEQIDNO:2的36-531;SEQIDNO:2的36-532;SEQIDNO:2的36-533;SEQIDNO:2的36-534;SEQIDNO:2的36-535;SEQIDNO:2的36-536;SEQIDNO:2的36-537;SEQIDNO:2的36-538;SEQIDNO:2的36-539的Sp35多肽，或该多肽的片4殳、变体或4汙生物。其它的可溶性Sp35多肽，其片段、变体或衍生物包括包含了Sp35的Ig区的多肽。例如，包含或主要包含氨基酸SEQIDNO:2的417-493;SEQIDNO:2的417-494;SEQIDNO:2的417-495^SEQIDNO:2的417-496;SEQIDNO:2的417-497;SEQIDNO:2的417-498;SEQIDNO:2的417-499;SEQIDNO:2的417-500;SEQIDNO:2的417-492;SEQIDNO:2的417-491;SEQIDNO:2的412-493;SEQIDNO:2的413-493;SEQIDNO:2的414-493;SEQIDNO:2的415-493;SEQIDNO:2的416-493;SEQIDNO:2的411-493;SEQIDNO:2的410-493;SEQIDNO:2的410-494;SEQIDNO:2的411-494;SEQIDNO:2的412-494;SEQIDNO:2的413-494;SEQIDNO:2的414-494;SEQIDNO:2的415-494;SEQIDNO:2的416-494;SEQIDNO:2的417-494;以及SEQIDNO:2的418-494的Sp35多肽，或该多肽的片,爻、变体或书f生物。用于实施本发明的各种示范性可溶性Sp35多肽以及获取这些分子的方法和材料已在下文描述并且/或者可参见，例如，国际专利申请号PCT/US2004/008323,PCT公布号WO2004/085648,其全文在此引用作为参考。在此描述的本发明方法采用的可溶性Sp35多肽可以呈环状。可溶性Sp35多肽的环化减少了线性肽的构型自由度并形成了更具结构约束性的分子。本领域已知多种肽环化方法，例如，通过肽的N末端和C末端氨基酸残基之间的氨键的形成进行"骨架至骨架"环化。"骨架至骨架"环化法包括在两个OD-碌,氨基酸残基(例如，半胱氨酸，高半胱氨酸)之间二石克桥的形成。本发明的特定可溶性Sp35肽包括在肽的N和C末端进行修饰以形成环状Sp35多肽。该种修饰包括，但不限于，半胱氨酸残基、乙酰化半胱氨酸残基、具有NH2部分和生物素的半胱氨酸残基。肽环化的其它方法可参见Li及Roller.Curr.Top.Med.Chem,3:325-341(2002)，其全文在此引用作为参考。此处描述的可溶性Sp35多肽可进行多种改造，例如替换、插入或删除。例如，替换可包括，^f旦不限于以下替换将SEQIDNO:2的Sp35多肽6号位置上的缬氨酸替换为曱硫氨酸；将SEQIDNO:2的Sp35多肽294号位置上的丝氨酸替换为甘氨酸；将SEQIDNO:2的Sp35多肽348号位置上的缬氨酸替换为丙氨酸；将SEQIDNO:2的Sp35多肽419号位置上的精氨酸替换为组氨酸；将SEQIDNO:2的Sp35多肽456号位置上的精氨酸替换为谷氨酸；以及将SEQIDNO:2的Sp35多肽458号位置上的精氨酸替换为缬氨酸。还预期包4舌与此处所述的SEQIDNO:2的多肽至少具有70%,75%,80%,85%,90%或95%—至丈寸生的可;容寸生Sp35多肽的相应片段。如本领域所知，两个多肽之间的"序列一致性"可通过将一个多肽的氨基酸序列与另一个多肽的序列比4交得到。此处讨i仑的任何特定多肽与另一多肽是否具有至少约70%，75%,80%,85%，90%或95%的一致性可通过本领域已知的方法和计算机程序/软件进4亍测定，例^口，<旦不卩艮于，BESTFIT禾呈序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,Version8forUnix,GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,575ScienceDrive，Madison,WI53711)。BESTFIT采用了应用凄t学进展(AdvancesinAppliedMathematics)2:482-489(1981)中Smith和Waterman的局部同源性算法以发5见两个序列间的最佳同源性片革殳。在采用BESTFIT或4壬何其它序列比对程序测定一个特定序列与本发明所述的参考序列是否具有如95%的一致性时，该参数当然会"i殳定为对参考多肽序列的全长计算相似度百分比且允许最大同源性差距为参考序列中总氨基酸数的5%。本发明的方法采用的可溶性Sp35多肽可包括两种或多种可纟容性Sp35多肽的任意组合。抗体或其抗原结合片段在一个实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂为抗体分子，或其免疫特异性片段。除非特别注明，此处所用的抗体的"片段"指免疫特异性片段，即，抗原特异性片段。在一个实施方式中，本发明的方法中采用的抗体为双特异性结合分子、结合多肽或抗体，例如只于超过一个表^f立(例如，一个以上抗原或在相同抗原中的一个以上表位)具有结合特异性的双特异性抗体、微抗体、区域缺失抗体或融合蛋白。在一个实施方式中，双特异性抗体至少具有一个特异性针对Sp35上至少一个表位的结合区。双特异性抗体可以是具有两个特异性4十^"Sp35表位的目标结合区和两个4十对其它目标的目标结合区的四^介抗体。因此，四伯、乂又特异性抗体可以对各特异性为双价。本发明的方法中采用的Sp35拮4元剂还包4舌作为Sp35活性拮抗剂的Sp35特异性抗体或抗原结合片段、变体或衍生物。例如，特定Sp35抗体与DA神经元上表达的Sp35的结合可阻断对DA神经突生长、分化和存活的抑制。此处所述的方法中采用的特定拮抗剂抗体特异性或优先结合特定的Sp35多肽片段或区域。该Sp35多肽片段包括，但不限于，包含或主要包含SEQIDNO:2的氨基酸34-532;34-417,34-425,34-493,66-532,66-417(LRR区)，66-426，66-493,66-532,417-532，417-425(Sp35碱性区)，417-424(Sp35碱性区)，417-493，417-532,419-493(Sp35Ig区)，或425-532的Sp35多肽；或与SEQIDNO:2的氨基酸34-532;34-417;34-425^34-493;66-532;66-417;66-426;66-493;66-532;417-532;417-425(Sp35碱性区)；417-493;417-532;419-493(Sp35Ig区)或425-532至少有70%,75%,80%,85%,90%或95%的一致性的Sp35变体多肽。抗原结合片段、变体或衍生物的附加Sp35肽片段包括，但不限于，包含或主要包含Sp35的一个或多个富亮氨酸重复序列(LRR)的片段。该片段的范例包括，包含或主要包含SEQIDNO:2的氨基酸66-89;66-113;66-137;90-113;114-137;138-161;162-185;186-209;210-233;234-257;258-281;282-305;306-329或330-353的片段。还预期包括与SEQIDNO:2的氨基酸66-89;66-113;90-113;114-137;138-161;162-185;186-209;210-233;234-257;258-281;282-305;306-329或330-353至少具有70%，75%，80%,85%,90%或95%—致性的变体Sp35多肽的相应片段。与本发明的特定抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物相结合的附加Sp35肽片段包括，但不限于，包含或主要包含Sp35的LRR侧翼的一个或多个富半胱氨酸区的片,殳。该种片,殳包H例如，包含或主要包含SEQIDNO:2的氨基酸34-64(N末端LRR侧翼区(LRRNT))的片段，或是包含或主要包含SEQIDNO:2的氨基酸363-416(C末端LRR侧翼区(LRRCT))的片,殳。还预期包括与SEQIDNO:2的氨基酸34-64和363-416至少具有70%,75%，80%:85%,90%或95%—致性的变体Sp35多肽的相应片,炎。在其它实施方式中，此处所述的方法采用的Sp35拮抗剂包括特异性或优先结合Sp35的至少一个表位的抗体，或其抗原结合片段、变体或衍生物，其中该表位包含或主要包含至少四至五个SEQIDNO:2，至少七个，至少九个，或介于至少约15至约30个氨基酸。所述的SEQIDNO:2的给定表位的氨基酸可以是(但并非必需是)邻近或线性的。在特定的实施方式中，Sp35的至少一个表位包含或主要包含在细胞表面表达的或作为可溶性片,殳的Sp35胞外区形成的(例如，融合至IgGFc区)非线性表位。因此，在特定的实施方式中，Sp35的至少一个表位包含或主要包含SEQIDNO:2的至少4个，至少5个，至少6个，至少7个，至少8个，至少9个，至少10个，至少20个，至少25个，介于至少约15至约30个，或至少10，15,20，25,30,35，40,45,50，55，60,65，70,75,80,85,90，95或100个邻近或非邻近氨基酸，其中非邻近氨基酸通过蛋白折叠形成表位。在其他实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂包括特异性或优先结合Sp35至少一个表位的Sp35抗体，或其抗原结合片段、变体或书亍生物，其中该表位在上述SEQIDNO:2的一个，两个，三个，四个，五个，六个或更多个邻近或非邻近氨基酸的基础上包含或主要包含修饰蛋白的附加部分(例如，可包括糖部分，从而使Sp35抗体能够对修饰目标蛋白以高于未修饰蛋白的亲和性进行结合)。替代性地，该Sp35抗体完全不与未经修饰的该目标蛋白相结合。在特定的实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂包括如下的本发明的抗体，或其抗原结合片段、变体或衍生物特异性结合Sp35至少一个表位的(即，与不相关的或随机表位相比更轻易地与该表位结合)；优先结合上述Sp35或片萃爻或变体的至少一个表位(即，与不相关的，相近的，同源的，或类似表位相比更轻易地与该表位结合)；竟争性抑制本身与上述Sp35或片段或变体的特定表位结合的参考抗体的结合；或以解离常数KD小于约5xl(T2M,约10-2M,约5x10-3M，约10-3M，约5x10-4M,约10，约5xlO-5M，约10-5M,约5xl(r6M，约10-6]^,约5xl(T7M,纟々10隱7M,纟々5xIO.8M,纟々10-8M,纟々5x10-9M，纟々10.9M,约5x10-10M,约l(T10M,约5x10-11M，约l(T11M，约5x10-12M,约10—12M，约5xl(T13M,约l(T13M，约5xl(T14M,约l(T14M，约5x10—15M,约l(T15M表征的亲和性结合上述Sp35或片段或变体的至少一个表4立。在一个特定的方面，该抗体或其片,殳相对鼠Sp35多肽或其片段优先结合人Sp35多肽或其片段。在抗体结合解离常数上下文所用的术语"约"允许了用于测量抗体亲和性的方法的内在变差程度。例如，依据所用4义器的精度，基于所测样本的样本数的标准误差，以及常规误差，术语约"1(T2M"可包4舌，3口/人0.05M至0.005M。在特定实施方式中，本发明的方法中釆用的Sp35拮抗剂包括以小于或等于5Xl(T2/秒，l(T2/秒，5X10-3/秒或10-3/秒的解离速率(k(off))与Sp35多肽或其片段或变体相结合的本发明的抗体，或其抗原结合片段、变体或衍生物。替代性地，本发明的抗体，或其抗原结合片^殳、变体或书f生物以小于或等于5X104/秒，104/秒，5X10-5/秒，或l(T5/秒，5X10-6/秒，IO-6/秒，5X10-7/秒或l(T7/秒的解离速率(k(off))与Sp35多肽或其片段或变体相结合。在其他实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂包4舌以大于或等于1()3m/秒，5x1()3m/秒，1()4m/秒或5x104m/秒的结合速率(k(on))与Sp35多肽或其片段或变体相结合的本发明的抗体，或其抗原结合片段、变体或衍生物。替代性地，本发明的抗体，或其抗原结合片段、变体或衍生物以大于或等于10sm/秒，5X1()5m/秒，1C)6m/秒或5X106膨秒或1()7m/秒的结合速率(k(on))与Sp35多肽或其片,殳或变体相结合。本发明的特定方法包括施用Sp35拮抗剂抗体，或其免疫特异性片段，其中至少一个或多个恒定区域的至少一个部分,皮删除或以其它方式改造从而提供所需的生化性质，例如下降的效应功能、非共价二聚化的能力、提高的肿瘤位点定位能力、下降的血清半衰期、或是与具有大致相同免疫原性的完整、未改造的抗体相比具有4是高的血清半衰期。例如，此处所述的方法中采用的特定抗体为区域缺失抗体，其包含了与免疫球蛋白重链类似的多肽链，但缺失了一个或多个重《连区的至少一部分。例如，在特定的抗体中，修饰抗体的恒定区中的一个完整区域将^l删除，例如，CH2区的全部或部分爿夺;f皮删除。免疫特异性片^殳中，可采用本领域已知4支术对Fc部分进4亍突变以减少-丈应功能。例如，(通过点突变或其它方法)7于恒定区Jt或的删除或灭活可降低循环修饰抗体的Fc受体结合从而提高肿瘤定位。在其它情况下恒定区修饰与本发明的适度互补结合相一致从而减少了血清半衰期以及与结合细胞毒素的非特异性结合。恒定区的另一种修饰可用于修饰二硫键或寡糖部分从而通过提高抗原特异性或抗体灵活性来增强定位。通过修饰得到的生理功能、生物相容性以及其它生化作用(例如肿瘤定位、生物分布以及血清半衰期)可通过公知的免疫技术在不采取附加试z睑的情况下进行检测和定量。此处4皮露的方法采用的抗体或其免疫特异性片,殳的修^饰形式可采用本领域已知的技术由完整的前体或父代抗体制备。本文对示范性的技术进行了更具体的讨论。剂抗体或其免疫特异性片段的可变和恒定区均为完全人源。全人源抗体可通过本领域已知的以及此处描述的4支术进行制备。例如，针进行制备。可用于制备该种抗体的示范性技术参见美国专利6,150,584;6,458,592;6,420,140。其它的#支术已为本领域所知。全人源抗体还可通过各种展示技术(例如噬菌体展示或其它病毒展示系统)进4于制备，本文其它部分将对此作更具体的讨i仑。此处纟皮露的方法中采用的Sp35拮抗剂抗体或其免疫特异性片段可通过本领域已知的技术进行制备或生产。在特定的实施方式中，抗体分子或其片l殳可进4亍"重组生产"，即，采用重组DNA技术进行生产。部分作更详细的讨i仑cjm5t3良3^的万》异性片段包括修饰(例如，通过向该抗体共价连接任何类型的分子，且该种共价连接不阻止抗体特异性结合其同源表位)后的衍生物。例如，但非限制，该抗体书f生物包括通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酰化、酰胺化、通过已知的保护/阻断基团进行衍生化、蛋白水解裂解、与细月包配体或其它蛋白连4妄等方法修^饰得到的抗体。各种化学修饰中的^f壬意一种均可通过已知才支术实现，包括，^旦不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素代i射合成等。此外，该书f生物可能包含一个或多个非传统氨基酸。在优选的实施方式中，此处4皮露的方法中采用的Sp35体内的有害免疫应答。在一个实施方式中，此处4皮露的方法中采用进行修饰以降低其免疫原性。例如，可对抗体进行人源化、灵长源化、去免疫化，或可制备嵌合抗体。这些抗体类型来自于保留或充分保留了父代抗体的抗原结合功能，但在人体内具有更低免疫原性的非人源抗体，通常为鼠或灵长动物抗体。这可通过多种方法实现，包括(a)将完整非人类可变区嫁接至人恒定区以生成嵌合抗体；(b)将一个或多个非人类决定簇互补区(CDRs)的至少一部分嫁接至保留或未保留关键框架残基的人框架和恒定区；或(c)移植整个非人类可变区，但通过替换表面残基以类人切片将其"包覆"。该类方法参见Morrison等人.，Proc.7V<^/.Sc/.57:6851-6855(1984);Morrison等人,J<iv./附附mwo/.44:65-92(1988);Verhoeyen等人,S"'e腳232:1534-1536(1988》Padlan,扁ec./画肌25:489-498(1991);Padlan，Mo/ec./www".31:169217(1994),以及U.S.Pat.Nos,5,585,089，5,693,761,5,693,762和6,190,370，其全文在此引用作为参考。去免疫化还可用于降低一种抗体的免疫原性。此处所用的术语"去免疫化"包括对抗体进行改造以修饰T细胞表位(例如，参见W09852976A1,WO0034317A2)。例如，对来自起始抗体的VH和V^序列进行分析，由各V区"定位"的人T细胞表位显示了与序列内的决定簇互补区(CDRs)和其它关4建残基相关的表位定位。对来自于T细胞表位图谱的单独T细胞表位进行分析，以在不轻易改变终抗体活性的情况下鉴定选择性的氨基酸替代物。经设计得到了一系列包括氨基酸替4义物组合物的Vh和Vl序列，随后这些序列^皮整合进入一系列的结合多肽(例如，Sp35拮抗剂抗体或其免疫特异性片段)以用于此处披露的诊断和治疗方法，并对功能进行测验。通常可生成和测-验12-24个变体抗体。然后将包含^f'务饰后的V区和人C区的完整重链和轻链基因克隆进入表达载体，将该后续质粒导入细月包系进4亍全抗体生产。然后对该类抗体通过适当的生化和生物测定进行比较，并鉴定得到最佳变体。过本领域公知的任何适用技术生成。多克隆抗体可通过本领域7>知的多种方法进行制备。例如，可向多种宿主动物包括，但不限于，兔子、小鼠、大鼠等施用Sp35免疫特异性片段以诱导针对该抗原的含多克隆抗体的血清的制备。依据宿主种类不同，各种佐剂可用于才是高免疫应答，其包括4旦不限于，弗氏试剂(完全或不完全)、矿物凝胶(如氢氧化铝)、表面活性物质如溶血卵磷脂、pluronic多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、匙孔血蓝蛋白、二硝基酚以及潜在有用的人佐剂如BCG(卡介苗)和短小棒状杆菌。该类佐剂也已为本4贞i或熟杀卩。单克隆抗体可通过本领i或已知的多种4支术进4亍制备，包4舌杂交瘤、重组和卩藍菌体展示4支术的应用或其iE合。例如，单克隆抗体可通过本领域已知的杂交瘤技术进行生产，该技术还在许多文献中予以教述,例^口，Harlow等人,Jw"6cxi/e5v爿丄aZonator少Ma"wa/，ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.(1988);Hammerling等人,in:Mowoc/o""/^4油力06Z/esr-Ce////少6"Wo附osElsevier,N'Y.,563-681(1981)(所述文献在此全文引用作为参考)。此处所用的术语"单克隆抗体"不限于通过杂交瘤4支术生产的抗体。术语"单克隆抗体"指由单个克隆(包括真核、原核或噬菌体克隆)得到的抗体，而非它的生产方法。因此，术语"单克隆抗体"不限于通过杂交瘤4支术生产的抗体。单克隆抗体可通过本领域已知的多种技术进行制备，包括杂交瘤、重组和噬菌体展示技术的应用。在一个实施例中，采用本领域认可的方案，可通过多次皮下或腹力空注射相关抗原(例40,纯4t的Sp35纟元原或包含该种抗原的细月包或细月包萃耳又物)和佐剂在哺乳动物体内产生抗体。该免应抗体的免疫应答。尽管可从动物血浆获取所得的抗体以进行多克隆制备，通常可从脾、淋巴结或外周血分离单独的淋巴细胞以进行单克隆抗体(mAbs)的均一制备。该淋巴细胞优选从脾中获取。在该公知方法中(Kohler等人，淑匿256:495(1975)),该取自注射了抗原的哺乳动物的相对短命或终会死亡的淋巴细胞与一个永生肿瘤细胞系(例如，骨髓瘤细胞系)相融合，从而得到了永生的并能生产B细胞的转基因编码抗体的杂交细胞或"杂交瘤"。所得的杂交物通过对包含了能够形成单独抗体的特定基因的单独抹系进行挑选、稀释和再生得到单独遗传抹系。它们可生产4f对目标抗原的相似抗体，并由于其单纯的遗传亲纟彖而一皮称为"单克隆"。将由此制备的杂交瘤细胞在适当的培养基中接种和培养，该培养基优选包含抑制未融合的、亲代骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质。本领域的技术人员均了解用于杂交瘤形成、挑选和培养的试剂、细胞系和介质可从多个来源购买，且已充分建立了标准化的方案。通常对杂交瘤细胞生长的培养基进行分析以测定4十对目标抗原的单克隆抗体的生产。优选地，由杂交瘤细胞生产的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀、》丈射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸收分析(ELISA)等体外分析进行测定。当杂交瘤经鉴定能够生产具有所需特异性、亲和性和/或活性的抗体后，该克隆可通过有限稀释法进4亍亚克隆并以才示准方法来i咅养(Goding，Afo"oc/o"a/爿油'6o(i/e5v尸Ww一/e51a/7(i尸rac"'ce,AcademicPress,pp59-103(1986))。可以进一步理解，由亚克隆分泌的单克隆抗体可乂人培养基、腹水或血浆中通过蛋白-A、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等传统方法进行纯化。识别特定表位的抗体片段可通过已知技术生成。例如，可采用木瓜蛋白酶(生产Fab片段)或胃蛋白酶(生产F(ab')2片段)等酶通过蛋白水解裂解免疫球蛋白分子获得Fab和F(ab')2片段。F(ab')2片段包含了可变区、轻链恒定区和重链Q4区。本领i或冲支术人员还可理解编码抗体或抗体片|殳(例如，抗原结合位点)的DNA还可以从抗体噬菌体库获得。该种喧菌体可特别用于展示由抗体库或组合抗体库(例如，人或鼠)表达的抗原结合区。表达能够结合目标抗原的抗原结合区的噬菌体可通过抗原(例如，釆用标记抗原或者固体表面或^朱子结合或捕获的抗原)进行选择和鉴别。这些方法中常用的噬菌体通常为丝状噬菌体，包括由带有重组融合至谨菌体基因III或基因VIII蛋白的Fab、Fv或二硫键稳定的Fv抗体区域的噬菌体表达的fd和M13结合区。示范寸生方法可参见，例3。，EP368684Bl;美国专利5,969,108,Hoogenboom,H.R。以及Chames,/附附w"o/.7Wqy21:371(2000);Nagy等人7kfei5:801(2002);Huie等人，尸rac.7VaW^cadSc/.USA98:2682(2001》Lui等人，J.Afo/5zo/.315:1063(2002),其全文在ot匕引用作为参考。许多文献(例如，Marks等人，5/o/rec/7"o/ogy10:779-783(1992))均已描述了通过链替换，以及作为构建大型嗟菌体库的策略的组合感染和体内重组对高亲和性人抗体的生产。在另一实施方式中，可采用核糖体展示替代噬菌体作为展示平台(例如，参见Hanes等人，淑肠fec/mo/75:1287(2000);Wilson等人，尸亂淑/.^c^/.USA95:3750(2001);或Irving等人，《//画wrn/248:31(2001))。在另一实施方式中，可通过细月包表面库筛选抗体(Boder等人，Proc.JVw/^c^/,USA97:10701(2000);Daugherty等人，乂/國wwo/.MeAc^243:211(2000)),该类方法可为用于单克隆抗体的分离和后续克隆的传统杂交瘤技术提供替代方法。在噬菌体展示方法中，功能性抗体区一皮展示在携带了对其编码的多聚核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。特别地，可从动物cDNA库(例如，人或鼠'淋巴组织cDNA库)或合成cDNA库扩增编码Vh和Vl区的DNA序列。在特定实施方式中，该编码VH和VL区的DNA在PCR中通过scFv4妄头相连4妻并一皮克隆进入一个喧菌粒载体(例如，pCANTAB或pComb3HSS)。将该载体导入E.coli并以辅助噬菌体感染E.coli。这些方法中常用的嗟菌体通常为包括fd和M13的丝状嗟菌体；Vh或Vl区通常重组融合至谨菌体基因III或基因VIII。表达能够结合目标抗原(即，Sp35多肽或其片段)的抗原结合区的噬菌体可通过抗原(例如，采用标记抗原或者固体表面或珠子结合或捕获的抗原)进行选才奪或鉴别。可用于制备该抗体的噬菌体展示方法的附加示范可参见Brinkman等人，《//画,/.M"/zo<iy752:41-50(1995》Ames等人，/7mmwwo/.M^/w^y184:177-186(1995);Kettleborough等人，￡乂/顯,/.24:952-958(1994》Persic等人，G,757:9-18(1997);Burton等人，W丽薦/顯腳/，57:191-280(1994》PCTApplicationNo.PCT/GB91/01134;PCTpublicationsWO90/02809;WO91/10737;WO92/01047;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;WO95/20401;以及U.S.Pat,Nos.5,698,426;5,223,409;5,403,484;5,580,717;5,427,908^5,750,753;5，821,047j5,571,698;5,427,908;5,516,637;5,780,225;5，658，727;5，733,743和5,969,108;其全文在此引用作为参考。如上述参考文献所述，在p蓝菌体筛选后，可乂人该i寇菌结合片段的完整抗体，并在包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细月包、酵母和细菌的目标宿主中表达。例如，用于重组生产Fab，Fab'和F(ab')2片,殳的技术也可采用本领域已知的技术，例如参见PCTpublicationWO92/22324;Mullinax等人，5/orec/2m々w^12(6):864-869(1992);以及Sawai等人，A/i/34:26-34(1995);和Better等人，5Wewce240:1041-1043(1988)(所述参考文献全文引用作为参考)。可用于生产单链Fvs和抗体的才支术示范可参见U.S.Pat.Nos.4,946,778和5,258,498;Huston等人，M函cx^/"五，mo/ogy203:46-88(1991);Shu等人，尸7V^S90:7995-7999(1993);以及Skerra等人，5We"ce240:1038-1040(1988)。对于某些用途，包4舌抗体在人体的体内应用和体外才企测分析，优选使用嵌合、人源化或人抗体。嵌合抗体是一种抗体的不同部分来自不同动物种类的分子，例如一种包含了鼠单克隆抗体可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。生产嵌合^t体的方^:在已为本^页i或戶斤^口o侈'J^口，参见Morrison,5We"ce229:1202(1985);Oi等人，倫rec/2,腦4:214(1986);Gillies等人，//画,/,125:191-202(1989);U.S.Pat.Nos.5,807,715;4，816，567;和4,816397,其全文在此引用作为参考。人源化抗体指能够与具有一个或多个来自非人类决定簇互补区(CDRs)和人免疫球蛋白分子框架区的目标抗原相结合的由非人类抗体衍生的抗体分子。人框架区的框架残基通常可被CDR供体抗体的相应残基所替代从而改变，并优选改善抗原结合。这些框架替换可通过本领域7>知的方法进行鉴定，例如，可通过对CDR和框架残基的相互作用建模以鉴定对抗原结合重要的框架残基，可通过序列比较鉴定在特定位点的反常框架残基。(例如，参见Queen等人.，U.S.Pat,No.5,585,089;Riechmann等人，iVWwre332:323(1988),其全文在此引用作为参考)。抗体可通过本领域已知的多种4支术进4亍人源化，该才支术包括，例如，CDR-4家4妄(EP239,400;PCTpublicationWO91/09967;U.S.Pat,Nos.5,225,539;5,530,101;和5，585，089),4裏饰或重塑(EP592,106;EP519,596;Padlan,Mo/簡/w/画画/，28(4/5):489誦498(1991);Studnicka等人.，五唯/腳"'wg7(6):805國814(1994);Roguska等人，PNAS91:969-973(1994》,以及链替才灸(U.S.Pat.No.5，565,332，其全文引用作为参考)。完整人类抗体可特别用于人类患者的治疗。人类抗体可通过本领域已知的多种方法制备，包4舌上述采用来自人免疫J求蛋白序列的抗体库进行的噬菌体展示方法。还可参见U.S.Pat.Nos,4,444,887和4,716,111;以及PCTpublicationsWO98/46645,WO98/50433,WO98/24893，WO98/16654，WO96/34096，WO96/33735，和WO91/10741;分别全文引用作为参考。人类抗体还可釆用不能表达功能性内源免疫球蛋白，但能表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠进行生产。例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可随机导入或通过同源重组进入d、鼠胚胎干细胞。可替代地，除人重链和轻链基因外，还可将人可变区、恒定区和多样区导入鼠胚胎干细胞。鼠重链和轻链免疫球蛋白基因可通过同源重组导入的人免疫球蛋白基因座进行单独或同时的非功能性修饰。特别地，JH区纯合子的删除防止了内源抗体的生产。扩增该修饰后的胚胎干细胞并显微注射进入胚泡以生产嵌合小鼠。然后饲养该嵌合小鼠以生产表达人抗体的纯合子型后代。该转基因小鼠以选择抗原(例如，所需目标多肽的全部或部分)通过常头见方式进行免疫。4十对该抗原的单克隆抗体可采用常^L杂交瘤纟支术从免疫后的转基因小鼠中获取。转基因小鼠包含的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化时重排，随后进行类型转换和体细胞突变。因此，通过该种技术可生产治疗有效的IgG,IgA,IgM和IgE抗体。该生产人类寺元体才支术的纟宗述可参见Lonberg禾口Huszariev.7mmw"o/.73:65-93(1995)。有关用于生产人类抗体和人类单克隆抗体的才支术以及生产该类抗体的方案的具体讨论可参见PCT7>布WO98/24893;WO96/34096;WO96/33735;U.S.Pat.Nos.5,413，923;5,625，126;5,633,425;5,569,825;5,661,016;5,545,806;5,814,318和5,939,598等，其全文在此引用作为参考。此夕卜，可委4乇Abgenix,Inc.(Freemont，Calif,)和GenPharm(SanJose,Calif.)等^>司通过与上述类似的技术提供针对选定抗原的人类抗体。识别选定表位的完整人类抗体可通过一种称为"定向选择，，的技术进行生产。在该方法中采用一种选定的非人类单克隆抗体(例如，小鼠抗体)引导识别相同表位的完整人类抗体的筛选。(Jespers等人，5/。/rec/z"o/ogv72:899-903(1988),还可参见，美国专利号5,565,332。在另一实施方式中，编码本发明的方法采用的目标单克隆抗体的DNA可采用常失见方法简单分离和测序(例如，可采用能够特异性结合编码鼠抗体重链和轻链基因的寡核苷酸探针)。分离的亚克隆杂交瘤细月包可用作该DNA的优选来源。该DNA—旦分离后可导入表达载体，随后将后者转染进入不生产免疫球蛋白的原核或真核宿主细胞，例如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞。更具体的说，如1995年1月25曰Newman等人l是交的U.S.Pat.No.5，658,570所述(在此引用作为参考)，该分离DNA(如此处所述，可为合成DNA)可为制备抗体用于克隆恒定和可变区序列。简要而言，将来自该选定细胞的RNA遗传提取物转化为cDNA,然后以Ig特异性引物进行PCR扩增。能够完成该目的的合适引物还可参见U.S.Pat,No。5,658,570。如下文所将详述，可相对大量培养该表达所需抗体的转化细胞以提供临床或商业所需的免疫球蛋白。在特定的实施方式中，该重链和/或轻链可变区的氨基酸序列可通过本领域公知的方法检查以确定决定簇互补区(CDRs)的序列，例如，可通过比较已知氨基酸序列和其它重链和轻链可变区以确定高可变序列区。可采用常^见重组DNA4支术将一个或多个CDRs插入框架区，例如，插入人框架区以将非人类抗体人源化。该框架区可以是天然存在的或为共有框架区，且优选为人框架区(例如，参见Chothia等人.，^fo/.278:457-479(1998)的人框架区列表)。由框架区和CDRs的组合生成的多聚核苷酸优选编码一种能与所需多肽(例如，SP35)的至少一个表位特异性结合的抗体。在框架区内可优选进4亍一个或多个氨基酸替换，该氨基酸^,换优选能够提高抗体与其抗原的结合。此外，该类方法可用于对参与链间二硫键的半胱氨酸残基的一个或多个可变区进行氨基酸替换或删除，从而生成缺失一个或多个链间二硫4建的抗体分子。其它对多聚核苦酸的改造在本发明和本领i或的现有4支术范围内。此外，可采用通过拼、接具有适当抗原特异性的小鼠抗体分子基因和具有适当生物活性的人类抗体分子基因生产"嵌合抗体，，的！支术(Morrison等人，A^/'81:851-855(1984);Neuberger等人，胸訓372:604-608(1984);Takeda等人，淑匿314:452-454(1985))。此处所用的嵌合抗体是一种抗体的不同部分来自不同动物种类的分子，例如包含了鼠单克隆抗体可变区和人免疫5求蛋白恒定区的抗体，如人源^f匕抗体。替代性地，描述用于生产单《连抗体的^支术(U.S.Pat,No.4,694,778;Bird,Sc/騰e242:423-442(1988);Huston等人.，iVoc。A^"Sc/.t/S^85:5879-5883(1988)以、及Ward等人，JVafwre334:544-554(1989))也可用于生成单链抗体。可通过氨基酸桥连才妄Fv区的重链和轻链片段生成单链抗体。也可采用在大肠杆菌内组装功能性Fv片,殳的4支术(Skerra等人，5We"ce242:1038-1041(1988))。Sp35拮抗剂抗体还可以是在不能生成内源免疫球蛋白的转基因动物(例如，小鼠)体内生成的人源或实质人源抗体(例如，参见U.S.PatNos.6，075，181,5，939，598,5,591,669和5,589,369，分别在此引用作为参考)。例如，据描述在嵌合和胚系突变小鼠中的抗体重《连结合区的纯合子缺失可导致内源抗体生产的完全抑制。人免疫J求蛋白基因阵列向该胚系突变小鼠的转移可导致在抗原攻击下的人抗体生产。另一^f吏用SCID小鼠生成人抗体的优选方法可参见U.S.Pat.No.5,811，524,该文献在此引用作为参考。应当可以理解与这些人抗体相关的遗传材料也可以依照此处所述进行分离禾口操作。用于生成重组抗体的另一高岁丈方法可参见Newman,5/o化c/mo/ogy10:1455-1460(1992)。该才支术可特别生成包含了《矣可变区和人恒定序列的灵长动物源4b4元体。该参考文献在此全文引用作为参考。此夕卜，该才支术还可参见共同受让的U.S.Pat.Nos。5,658,570,5,693,780和5，756，096,该文献在此引用作为参考。在另一实施方式中，可通过显微操作选4奪淋巴细胞并分离可变基因。例3口，可乂人免疫哺乳动物分离外周血单核细月包并在体外培养7天。筛选该培养物以获得达到筛选标准的IgGs。可对positivewells的细月包进4亍分离。可通过FACS或补体介导的;容血空斑检测的鉴定分离得到生产Ig的单独B细胞。可通过显微操作将生成Ig的B细力包转移至试管，并可采用RT-PCR等方法扩增Vh和Vl基因。将Vh和V^基因克隆至抗体表达载体并转染进入细胞(例如，真核或原核细胞)以进行表达。替代性地，可采用本领域:技术人员/>知的技术筛选抗体生成细胞系并进行培养。该类技术可/人各种试-睑手册和出版物中得到描述。在此方面，适用于本发明的技术的描述可见下文，并可参见Cw厅e"fiVo/oco/s/附附zmo/ogv,Coligan等人"Eds"GreenPublishingAssociatesandWiley-Interscience,JohnWileyandSons,NewYork(1991)，其内容全文(包括附录)在此引用作为参考。此处4皮露的方法采用的抗体可通过本领域已知的任4可抗体合成方法，特别是化学合成方法或是优选此处所述的重组表达技术进行制备。应当进一步理解本发明的范围进一步包括抗原结合DNA序列所有的等位基因、变体及突变体。众所周知，RNA可通过标准:技术(例如在异石克氰酸胍萃取和沉淀后进行离心或层析)从原始杂交瘤细胞或其它转化细胞分离。在需要时可通过oligodT纤维素层一斤等标准技术乂人总RNA分离mRNA。适用的4支术已为本4页i或熟知。在一个实施方式中，对本发明的方法中采用的抗体轻《连和重链进4亍编石马的cDNAs可参照7>知的方法釆用逆寿争录酶和DNA聚合酶同时或单独制备。可通过共有恒定区引物或基于7>开的重《连和轻链DNA和氨基酸序列的更具特异性的引物启动PCR。如上文讨论，PCR还可用于分离编码该抗体轻链和重链的DNA克隆。在此处可用共有31物或更具同源性探针如鼠恒定区探针篩选该库。DNA，通常是质粒DNA，可采用本领域已知4支术乂人细月包分离，并参考才示准的，7>知才支术(例如，其具体内容可参见前述有关重组DNA技术的参考文献)获得限制性酶图谱和测序。当然，该DNA可在分离过禾呈或后续分才斤中参照本发明在任意点进4亍合成。抗体，或其片段、衍生物或类似物(例如作为Sp35拮抗剂的的抗体重或轻链)的重组表达需要构建一种包含了编码该抗体的多聚核苷酸的表达载体。一旦获得编码本发明抗体分子或者抗体的重链或轻《连，或其部分(优选包含该重链或轻《连可变区)的多聚核香酸，可通过本领域/>知的重组DNA技术制备生产该抗体分子的载体。因此，此处描述了通过表达包含抗体编码核苷酸序列的多聚核普酸制备一种蛋白的方法。可采用本领域4支术人员/>知的方法构建包含抗体编码序列和适当的转录和转译控制信号的表达载体。这些方法包4舌，例如，体内重组DNA才支术、合成l支术以及体内遗传重组。因此，本发明提供了包含可操作地连接至启动子的编码本发明抗体分子，或其重《连或轻《连，或重《连或轻《连可变区的核苷酸序列的可复制载体。该类载体可包含编码该抗体分子恒定区的核普酸序歹'J(例如，参见PCT公布WO86/05807;PCT乂>布WO89/01036以及U.S.PatNo.5，122，464),且该抗体的可变区可一皮克隆进入该种载体以表达完整的重或轻《连。该表达载体通过常规技术转入宿主细胞，然后以常头见明包4舌宿主细月包，该宿主细J包则包含可"t喿作i也连^妄至一种外源启动子的编码本发明抗体，或其重或轻链的多聚核苦酸。在针对表达双链抗体的优选实施例中，如下文详述，同时编码重和轻《连的载体可在宿主细胞中共表达以表达完整免疫球蛋白分子。可采用多种宿主表达载体系统来表达用于此处所述方法的抗体分子。该种宿主表达系统代表了可生产和后续纯化目标编码序列的载体，还代表了在以适当核苷酸编码序列进行转化或转染后原位表达本发明抗体分子的细胞。其包括〗旦不限于樣史生物，如以包含了抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转染的细菌(例如，大肠杆菌，枯草芽孢杆菌)；以包含抗体编码序列的重组酵母表达载体转染的酵母(例如，毕赤酵母)；以包含抗体编码序列的重组病毒表达载体(杆状病毒)感染的昆虫细月包系统；以包含抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，花浙卩菜花叶病毒，CaMV;烟草花叶病毒，TMV)感染或重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转染的植物细胞系统；或包含了带有哺乳动物细月包基因组启动子(例如，金属碌u蛋白启动子)或哺乳动物病毒启动子(例:io,^泉病毒H免期启动子；牛痘病毒75k启动子)的重纟且表达构建体的哺乳动物细月包系统(例如，COS，CHO,BLK，293,3T3细胞)。优选地，可使用细菌细胞如大肠杆菌，更优选^f吏用真核细胞表达重组抗体分子，特别是完整重组抗体分子。例如，结合来自人细胞巨化病毒的中间早期基因启动子元件等载体的哺乳动物细胞如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是一种有效的抗体表达系统(Foecking等人.，45:101(1986);Cockett等人.，所o/Tec/zwo/ogv8:2(1990》。在细菌系统中，根据被表达的抗体分子的目标用途，可方便地选择多种表达载体。例如，当需要生产大量该种蛋白，以得到一种抗体分子的药物组合物时，可采用能够引导高水平表达易纯化融和蛋白产物的载体。该类载体包括，但不限于，大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等人，五^B(97:2:1791(1983)),其中该抗体克隆序列可在与lacZ编码区同框的情况下单独连接至该载体从而生产鬲虫禾口i白；pIN载^(^(Inouye和Inouye,7W/c/ez'cJc/^iy73:3101-3109(1985);VanHeeke和Schuster,C/ze肌24:5503-5509(1989));等等。pGEX载体也可用于将外源多肽以谷胱甘肽S转移酶(GST)融和蛋白的形式进行表达。一般而言，该种融和蛋白具有可溶性，并能通过吸附，结合至基质谷胱甘肽-琼脂糖5朱，然后在自由谷胱甘肽存在下洗脱进行简单的纯化。通过设计该包括了凝血酶或Xa因子蛋白酶裂解位点的pGEX载体，从而使该克隆的目标基因产物可以乂人GST部分释力丈。在昆虫系统中，通常4吏用苜蓿尺*芰核多角体病毒(AcNPV)作为表达外源基因的载体。该病毒生长于草地夜蛾细胞中。该抗体编码序列可单独克隆进入该病毒的非必须区(例如多角体蛋白基因)并处于AcNPV启动子(例如该多角体蛋白启动子)的控制下。在哺乳动物宿主细月包中，可采用一系列基于病毒的表达系统。当采用人&泉病毒作为表达载体时，可将目标抗体编码序列连接至腺病毒转录/翻译控制复合物如晚期启动子和三联先导序列。然后可通过体外或体内重组将该嵌合基因插入腺病毒基因组。插入病毒基因组的非必须区(例如，E1或E3区)将形成有活力的并能在感染宿主中表达抗体分子的重组病毒(例如，参见Logan及Shenk，AA""爿cadSc/.t/S^81:355-359(1984))。插入抗体编码序列的有效翻译还将需要特定的启动信号。这些信号包括ATG起动密码子和邻近序列。此外，该起动密码子应当与目标编码序列的阅读框架同框以确保整个插入物的翻译。这些外源翻i奪控制信号和起动密码子可来自于多种天然和合成来源。表达的效率可通过包含适当的转录增强原件，转录终止子等得到提高(参见Bittner等人.，Md/70(is^五"zj腳/.753:51-544(1987》。此夕卜，还可选择以必需的特定形式调节插入序列表达，或々务饰和处理基因产物的宿主细月包4朱。对该蛋白产物的该种》务饰(例如，糖基化)和处理(例如，裂解)可对该蛋白的功能非常重要。不同的宿主细胞可对蛋白和基因产物的翻译后处理和修饰均有不同的特性和特殊的机制。可选4奪适当的细胞系或宿主系统以确保表达的外源蛋白的正确^务饰和处理。为此，可4吏用具有正确处5里基因产物的初级转录、糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。该种哺乳动物宿主细力包包纟^f旦不限于CHO,VERY,BHK,HeLa,COS,293,3T3,WI387，并净争另'J包4舌侈'J^口BT483,Hs578T,HTB2，BT20以及T47D等乳&袈癌细月包系以及例如CRL7030和Hs578Bst等正常乳&泉细月包系。可采用稳定表达以进行重组蛋白的长期高产量生产。例如，可通过工程改造得到稳定表达该抗体分子的细胞系。宿主细胞可通过由适当表达控制元件(例如，启动子，增强子，序列，转录终止子，聚腺苷酸化位点等)和选择性标记控制的进行转化，而非使用包含病毒复制起始区的表达载体。在导入外源DNA后，将工程细胞在富集培养基中培养1-2天，然后转入选择性培养基。重组质粒中的选择性标记可带来对选4奪因素的耐受并4吏细月包将该质粒稳定整合进入其染色体，然后生长得到可进行后续克隆并扩展入细胞系的病灶。该方法可用于工程改造可稳定表达抗体分子的细胞系。多种选择系统可供使用，包括但不限于单纯疱渗病毒胸苷激酶(Wigler等人，Ce〃11:223(1977)),次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸4t冲唐4争移酶(Szybalska和Szybalski，iV<^/.USA48:202(1992))，以及腺噤呤磷酸核糖转移酶(Lowy等人.，Cell22:8171980)基因，并可分别应用于tk-,hgprt-或aprt-细月包。此夕卜，抗代谢物抗性可用作下列基因选4奪的基础具有对氨曱喋呤的抗性的dhfr(Wigler等人.，7Va〃.爿cadUSA77:357(1980);O'Hare等人，iVoc.A^/.JcadUSA78:1527(1981));具有对麦考酚酸的抗'l"生的gpt(Mulligan&Berg,7Va"^cadUSA78:2072(1981));具有对氨基#唐香G-418的抗性的neo(C7/w/ca/尸/zaf7waqy72:488-505;Wu和Wu,肠A簡/^3:87-95(1991);Tolstoshev,^肌iev.尸/za，"co/.rox,co/.32:573-596(1993);Mulligan,5Wewce260:926-932(1993);以及Morgan禾口Anderson,(52:191-217(1993);,TIBTECH11(5):155-215(1993年5月);具有对潮霉素的抗性的hygro(Santerre等人.，Gewe30:147(1984)。本领域/>知的可供<吏用的重组DNA才支术可参见Ausubel等人.(eds.),Cwrewf尸ro/oco/sMo/ecw/ar丑/o/ogy，JohnWiley&Sons,NY(1993);Kriegler，Gewe7hm^rEbcpmsw'ow,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY(1990);以及Dracopoli等人.(eds)，/Votoco/si/wwawGe"Wcs，JohnWiley&Sons,NY(1994);Colberre-Garapin等人，《/^fo/.150:1(1981)，在此全文引用作为参考。抗体分子的表达水平可通过载体扩增得到提高(其综述参见Bebbington和Hentschel,T7ewsevec/or516ose<igeweZ)7Vz4c/om'wg,AcademicPress,NewYork,Vol.3.(1987))。当表达抗体的载体系统中的标记可进行扩增时，宿主细胞培养中抑制剂水平的提升可提高标记基因拷贝数。由于扩增区与抗体基因关联，因而抗体的产量也会得到提高(Grouse等人，Mo/.Ce〃.S/o/.3:257(1983))。该宿主细胞可被本发明的两个表达载体共转染，该第一载体编码一种重链衍生多肽而该第二载体编码一种轻链衍生多肽。这两种载体可包含相同的能使重和轻链多肽同等表达的可选才,标记。一#性地，也可4吏用一种同时编码重和轻《连多肽的单独载体。在该种情况下，该轻4连纟皮4尤先》丈置在重4连之前以防止过量的无毒重链(Proudfoot,7Va似re322:52(1986);Kohler,7Vw/.Sc/.USA77:2197(1980))。该重和轻《连的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。当本发明的抗体分子被重组表达后，可通过本领域已知的任意免疫球蛋白分子纯化方法对其进行纯化，例如，层析(例如，离子交换层析、亲和层析、特别是对蛋白A特异性抗原的亲和层析、筛分柱层析)、离心、微分溶出、或通过任何其它蛋白纯化标准技术。替代性地，提高本发明抗体亲和性的优选方法参见US20020123057Al。在一个实施方式中，本发明的方法中釆用的结合分子或抗原结合分子包含了一种合成恒定区("区域缺失抗体")，其中一个或多个区;或4皮部分或全部删除。在特定实施例中的相容性修-饰抗体包含了整个CH2区被去除的区域缺失构建体或变体(DCH2构变区的灵活性和自由移动性。本领域的4支术人员将可以理解由于CH2区对抗体分解率的调节属性，因而特别优选该构建体。在特定的实施方式中，本发明披露的方法中釆用的修饰抗体为樣i抗体。；f鼓抗体可通过本领i或已描述的方法进^f亍制备(例3口，参见，美国专矛J5,837,821或WO94/09817A1)。在另一实施方式中，本发明4皮露的方法中采用的^f奮饰抗体为本领域已知的CH2区缺失抗体。区域击夹失构建体可通过编石马IgGl人源恒定区的载体(例如，来自BiogenIDEC公司)获得(例如，参见WO02/060955A2和WO02/096948A2)。这些示范性载体经工程改造缺失了CH2区并提供了表达区域缺失IgGr度定区的合成载体。在一个实施方式中，本发明所4皮露的方法中采用的Sp35拮抗剂抗体或其片段含了一种具有能支持单体亚基间结合的数个或者甚至单个氨基酸缺失或替换的免疫球蛋白重链。例如，在CH2区选定部位的单个氨基酸突变可足以降j氐Fc结合并/人而增强肿瘤定位。类似地，可能^f又需要删除控制带调节效应功能(例如，补体结合)的一个或多个恒定区。该恒定区的部分缺失可能4是高该抗体的选定特性(血浆半衰期)，同时保留其它与对象恒定区相关的所需功能的完整性。此外，如上文指出，所4皮露抗体的恒定区可通过对增强所得构建体作用的一个或多个氨基酸的突变或*#换进行合成。就此而言，可以在石皮坏保守结合位点(例如，Fc结合)的活性的同时充分保留修饰抗体的构型和免疫原性作用。另一实施方式包含了向恒定区添加一个或多个氨基酸以增强所需的特性(例如效应功能)或者4是供更多细胞毒素或糖附着。在该类实施例中可能需要插入或复制来自选定恒定区的特定序列。本发明还提供了包含此处所述的抗体分子(例如，VH区和或区)的变体(包括衍生物)，主要由其组成，或由其组成的抗体的用途，该抗体或其片段免疫特异性结合Sp35多肽。本领域:技术人员已知的标准才支术可用于在编码结合分子的核苷酸序列引入突变，包括但不限于，可导致氨基酸替换的定点突变和PCR介导的突变。优选地，该变体(包括衍生物)相对参考Vh区，VhCDRI,VhCDR2，VhCDR3，Vl区，VLCDR1,VLCDR2或VLCDR3编码少于50个氨基酸替换，少于40个氨基酸替换，少于30个氨基酸替换，少于25个氨基酸替换，少于20个氨基酸替换，少于15个氨基酸替换，少于10个氨基酸替换，少于5个氨基酸替换，少于4个氨基酸替换，少于3个氨基酸替换，或少于2个氨基酸替换。"保守氨基酸替换"是以具有类似电荷侧链的氨基酸残基替换其中一个氨基酸残基。本领域内已经定义了有类似电荷侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸，精氨酸，组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸，谷氨酸)，未带电才及性侧《连(例如，甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酸，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)，无极性侧链(例如，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸)，beta分支侧链(例如，苏氨酸，缬氨酸，异亮氨酸)和芳香侧链(例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，组氨酸)的氨基酸。此外，该突变可沿全部或部分编码序列进4于(例如饱和突变)，对所得的突变进行生物活性筛选以鉴定保留活性的突变体。例如，可以^又在抗体分子的框架区或CDR区引入突变。所引入的突变可以是同义或中性4晉义突变，即对抗体结合抗原的能力没有或具有4艮少的影响。这些类型的突变可能对优化密码子用途或提高杂交瘤的抗体生产非常有用。然而非中性错义突变可改变一种抗体结合抗原的能力。多数同义和中性错义突变的位点可能在框架区中，而多数非中性错义突变的位点可能在CDR中，尽管这并非绝对。本领域的4支术人员均能"i殳计和测试具有所需属性的突变分子，该所需属性如未改变抗原结合活性或改变了结合活性(例如，提高了抗原结合活性或改变了抗体特异性)。突变后可对编码蛋白进行常失见表达，编码蛋白的功能性和/或生物活性可通过此处所述的技术或本领域已知的常规修饰技术进行测定。局限于一种分离抗体或其抗原结合片段，其与由201',3A3，3A6,1A7，1G7，2B10，2C11，2F3，3P1D10.2C3，3P1E11.3B7，3P2C6.3G10.2H7，3P2C9.2G4，3P4A6.1D9,3P4A1.2B9,3P4C2.2D2，3P4C5.1D8，3P4C8.2G9，30-C12(LiOl),38-DOl(Li02),35-E04(Li03),36-C09(Li04),30-A11(Li05)，34-F02(Li06),29-E07(Li07),34-G04(Li08)，36-A12(Li09),28-D02(LilO)，30-BOl(Lill),34-B03(Lil2)，Lil3,Li32,Li33,Li34,3383(Lla.l),3495(Lla.2)，3563(Lla,3)，3564(Lla.4)，3565(Lla.5),3566(Lla.6),3567(Lla.7),3568(Lla.8),3569(Lla.9)，3570(LIa,lO),3571(Lla.ll)，3582(Lla.12)，以及1968(Lla,13)构成的组合选出的参考单克隆抗体的相同Sp35表位能够特异性结合，以上抗体均在美国临时专利申请60/697,336,60/771,990和60/814,522中予以描述，其全文在此引用作为参考。融合蛋白以及结合多肽和抗体此处4皮露的方法采用的Sp35拮抗剂多肽、适体和拮抗剂抗体可进一步在N-或C-末端重组融合至外源多肽或化学结合(包:括共1"介或非共^f介结合)至多肽或其它组合物。例如，Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可重组融合或结合至可用于4全测测定标记的分子或外源多肽、药物、放射性核素或毒素等效应分子。例如，参见PCT公布WO92/08495;WO91/14438;WO89/12624;U.S.PatentNo.5,314,995和EP396,387。此处纟皮露的方法采用的Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体包括修饰后的衍生物，即，通过向该抗体共价连接任何类型的分子，且该种共4介连接不阻止该Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体抑制Sp35的生物功能。例如，^旦非限制，本发明的Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可通过糖基化，乙酰化，聚乙二醇化，磷酰化，磷酸化，酰胺化，通过已知的保护/阻断基团进行衍生化，蛋白水解裂解，与细胞配体或其它蛋白连接等方法进行^修饰。各种化学^务饰中的4壬意一种均可通过已知技术实现，包括，但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素代谢合成等。此外，该衍生物可能包含一个或多个非传统氨基酸。此处4皮露的方法采用的Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可由通过肽4建或修饰肽键(即，肽等排物)彼此连接的氨基酸所组成，并可包含20个基因编码氨基酸以外的氨基酸。Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可通过转i奪后作用等自然作用，或通过本领3或/>知的化学^f奮饰:技术进^^务饰。该-修饰在基本文本和更具体的专著，以及大量的研究文献中得到了具体的描述。Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体的任何部位均可进行修饰，包括肽骨架，氨基酸侧《连以及氨基或羧基纟冬端，或在寿唐等部分上。应当可以理解在纟合定Sp354吉才元剂多肽、适体和抗体的多个位点可出现相同或不同程度的相同类型的修饰。此外，一种给定Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可包含多种类型的》》饰。Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可因为泛素化等原因而带有分支，它们也可呈带或不带分支的环状。环状、分支和带分支的环状Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体可通过转-泽后自然作用或合成方法形成。修饰包括乙酰化，酰化，ADP-核糖基化，酰胺化，黄素的共价结合，亚铁血红素部分的共价结合，核苷酸或核苷酸衍生物的共价结合，脂质或脂质衍生物的共价结合，磷脂酰肌醇的共价结合，交联，环化，形成二-克键，脱甲基，共价交联的形成，半胱氨酸的形成，焦谷氨酸的形成，曱酰化，gamma-羧化，糖基化，GPI锚形成，羟基化，碘处理，曱基化，豆蔻酰化，氧化，聚乙二醇化，蛋白水解作用，磷酸化，异戊烯化，外消旋，硒化，硫酸盐化，如4青胺酰化等经转移RNA介导向蛋白添加氨基酸，泛素化。(侈寸"^口，参见/Vc^e/ws-5VrMC^/厂eA/o/ecw/ari^opeW/es,T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork2ndEd.,(1993);Pos"nms7aO'o"a/Co"ra/ew/Mot/i/c加'owQ/"尸roto7w,B.C.Johnson,Ed.，AcademicPress,NewYork,pgs1-12(1983》Seifter等人.,M函五"z拜o/182:626-646(1990);Rattan等人.，J朋AO"Jem/Sc/663:48-62(1992》。本发明还提供了包含或主要包含有抑制Sp35功能的Sp354吉4元剂多月太、适体或才元体鬲虫合的禺虫合蛋白。4尤选;也，与i亥Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体融合的外源多肽可用于靶向Sp35拮抗剂例如包含LRR区、Ig区或完整月包外区(对应SEQIDNO:2的氨基酸34至532)的Sp35多肽，被融合至外源多肽部分以形成Sp35拮抗剂融合多肽。Sp35拮抗剂融合蛋白、适体和抗体可用于实现多种目的，例如，提高血清半衰期，改善生物相容性，体内靶向特定器官或组织类型，提高重组表达效率，提高宿主细胞分泌，简化纯化，以及获得更高的亲和性。根据待实现的目标不同，该外源部分可呈惰性或具有生物活性。另外，它可选择稳定融合至Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体或者在体外或体内裂解。实现这些目标的外源性部分已为本领i或所知。作为Sp35拮抗剂融合多肽、适体或抗体表达的替代，也可选才奪外源性部分并化学结合至该Sp35拮抗剂多肽、适体和抗体。在多数情况下，选定的外源部分在融合或结合Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体时均具有类似的功能。因此，在下列对外源氨基酸序列的讨论中，除非另行指明，应当理解该外源序列可作为融合蛋白或化学结合物的形式与Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体结合。具有药理活性的多肽如Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体通常在体内显示出快速的清除，从而需要大剂量以在体内达到治疗有效浓度。此外，小于约60KDa的多肽有可能被肾小球滤过，这有时可导致肾毒性。可通过融合或结合相对小的多肽如Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体以减少或避免该种肾毒性的风险。已知有多种外源性氨基酸序列(即，多肽部分或"载体")可提高治疗性多肽的体内稳定性(即，血清半衰期)。基本全长人血清白蛋白(HSA)或HSA片段由于其半衰期长，体内分布广，且不具有酶或免疫功能而常^皮用作外源部分。通过如Yeh等人，尸rac.JVW/.^c^/.USA89:1904-08(1992)和Syed等人，B/ood89:3243-52(1997)等所示的方法与材泮+，HSA可用于形成显示由Sp35部分带来的药理活性同时显示显著4是升的体内稳定性(例如，高10倍至100倍)的Sp35拮抗剂融合多肽、适体、抗体或多肽/抗体结合物。HSA的C末端可融合至可溶性Sp35部分的N末端。由于HSA是一种天然分泌的蛋白，可开发HAS信号序列以当融合蛋白在真核(例如，哺乳动物)表达系统生成时将可溶性Sp35融合蛋白分泌进入细胞培养基。在特定的实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片段进一步包含靶向部分。靶向部分包括引导定位至身体特定部位(如脑部或其分区)的蛋白质或肽。在特定的实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片段与脑部耙向部分结合或融合。该脑部輩巴向部分一皮共^f介连4妄(例如，引导，转i奪融合，或者直4妾或通过可选择性裂解的间隔分子进行化学连4妄)或非共〗介连4妄(例如，通过抗生物素蛋白，生物素，蛋白A,IgG等进行可逆相互作用)。在其他的实施方式中，本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片段与另一脑部輩巴向部分结合。在附加的实施方式中，该脑部靶向部分与本发明的方法中采用的多个Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片,殳相结合。与Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片,殳相连接的脑部靶向部分增强了该Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片,殳的脑部传递。据描述多种多肽在融合至蛋白或治疗剂时可将该蛋白或治疗剂传递通过血脑屏障(BBB)。非限制范例包4舌单i或抗体FC5(Abulrob等人.(2005)从A^wroc/^m.95,1201-1214);mAB83-14，一种针对人胰岛素受体的单克隆抗体(Pardridge等人.(1995)尸/zar附aco/.i仏12,807-816);结合至人铁传递蛋白受体(hTfR)的B2，B6和B8肽(Xia等人.(2000)J.Virol.14,11359-11366);结合至人铁传递蛋白受体的OX26单克隆抗体(Pardridge等人.(1991)乂尸/zwmaco/.r/zw.259，66-70);以及U.S.PatentNo.6,306,365的SEQIDNOs:1-18。上述参考文献的全文在此引用作为参考。Sp35组合物增强的脑部传递可通过本领域所建立的多种方法进4于测定。例如，向动物施用连4妄至脑部輩巴向部分的一种i文射标记的Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片,殳；冲企测脑部定位；与未连接脑部輩巴向部分的同等》文射性标记的Sp35拮抗剂多肽、适体、抗体及其抗体片段比较定位。其它检测增强耙向的方法参见上述参考文献。该信号序列为编码启动蛋白跨越内质网膜的运输的氨基酸序列的多聚核苷酸。可用于构建免疫融合素的信号序列包括抗体轻链^f言号序列，例如抗体14.18(Gillies等人.，//wmwo/.Me仇125:191-202(1989)),抗体重链信号序列，例如MOPC141抗体重链信号序列(Sakano等人.，7V^w286:5174(1980))。替代性地，也可采用其它信号序列。例如，参见Watson，A^c/.Jc/&i仏72:5145(1984)。该信号肽通常在内质网内腔中净皮信号肽酶裂解。由此可获得含Fc区和可;容性Sp35部分的免疫融合素蛋白分泌物。在一些实施方式中，该DNA序列可在分泌表达单元和可溶性Sp35部分之间编码蛋白水解裂解位点。该裂解位点可提供，例如编码融合蛋白的蛋白水解裂解，从而将Fc区从目标蛋白中分离。有用的蛋白水解裂解位点包括包括被胰蛋白酶、血浆酶、凝血酶、Xa因子或是肠激酶K等蛋白水解酶识别的氨基酸序列。该分泌表达单元可一皮整合进入可复制表达载体。有用的载体包括线性核酸、质粒、噬菌粒、粘粒等。示范性的表达载体为pdC,其中免疫融合素DNA的转录受人细月包巨化病毒增强子和启动子的4空制。例如，参见Lo等人,，5/op/2w.爿"a1088:112(1991);以及Lo等人，iVo化/w五"g/"eeh"g77:495-500(1998)。可通过编码可溶性Sp35多肽的DNA转化或转染适当的宿主细胞并用于可溶性Sp35多肽的表达和分泌。通常采用的宿主细胞包括永生杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞、293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细月包，以及COS细月包。在一个实施方式中，可溶性Sp35多肽^皮融合至4交链区和Fc区，即，Ig重链恒定区的C末端部分。Sp35-Fc融合的潜在优点包括可溶性，体内稳定性，以及多价性，例如，二聚化。所采用的Fc区可以是IgA,IgD或IgGFc区(4交链-CH2-CH3)。^^4戈性地，它可以是IgE或IgMFc区(4^^-Ch2-Ch3-Ch4)。通常可采用IgGFc区，例如，IgGiFc区或IgG4Fc区。在一个实施方式中，在融合中可采用在化学定义IgGFc(即，才艮据Kabat系统，以重《连恒定区的第一残基为114时的残基216)的木瓜蛋白酶裂解位点或其它免疫球蛋白的类似位点上游的铰链区起始的序列。进行融合的确切位点并非关4建；特定的位点已众所周知并可通过选"t奪优化分子的生物活性、分泌或结合特性。构建和表达编码Fc融合物的DNA的材泮牛和方法已为本领域所知，并可不经失当的试验进行釆用以获得可溶性Sp35融合物。本发明的一些实施方式采用如Capon等人的美国专利5,428,130和5,565,335所述的Sp35融合蛋白。完整的I予生型Fc区显示了岁丈应功能，该岁支应功能在本发明的方法采用的Fc融合蛋白中通常不必要且不需要的。因此，通常在该分泌表达单元构建过程中从Fc区删除特定的结合位点。例如，由于不需要与轻链共表达，可从IgE的Fc区的CH2区中删除重链结合蛋白的结合4立点Bip(Hendershot等人，/mmwwo/.Tbdqy5:111-14(l987)),/人而4吏该位点不干护0免疫融合素的有岁文分泌。^争月莫区序列(例如存在于IgM的该序列)也通常净皮删除。IgGiFc区最为常用。^,^性i也，免疫J求蛋白gamma的其它小类(gamma-2，gamma-3以及gamma-4)的Fc区可用于分;必表达单元。免疫^求蛋白gamma-1的IgG!Fc区通常用于分泌表达单元并包括至少部分铰《连区、CH2区以及Ch3区。在一些实施方式中，免疫球蛋白gamma-1的Fc区为Ch2-缺失-Fc，其包括部分的4交链区和CH3区，但不包括CH2区。对Ch2-缺失-Fc的描述可参见Gillies等人，(1990)//m肌X打"6oc/.Hybridomas1:47。在一些实施方式中采用了IgA，IgD，IgE或IgM之一的Fc区。Sp35-Fc融合蛋白可构建为多种不同的构型。在一种构型中可溶性Sp35部分的C末端^皮直4妄融合至Fc4交链部分的N末端。在一个略微不同的构型中，在融合物中可溶性Sp35部分的N末端和Fc部分的C末端之间整合了短多肽如2-10氨基酸。该种接头才是供了构型灵活性，从而在某些情况下可^C高生物活性。如果Fc部分保留了充分的铰链区部分，Sp35-Fc融合物将二聚化，从而形成二价分子。单体Fc融合物的均一群将带来单特异性、二价二聚体。两种具有不同特异性的单体Fc融合物的混合物将带来双特异性、二价二聚体。多种包含相应氨基反应性基团和石克醇反应性基团的交联接头中的任意一种均可用于连接Sp35拮抗剂多肽和血清白蛋白。适用接头的范例包括插入石克醇反应性马来酰亚胺(例如，SMCC,AMAS，BMPS，MBS，EMCS,SMPB，SMPH，KMUS以及GMBS)的胺反应性交联接头。其它适用的接头插入硫醇反应性卣乙酸基团，例如，SBAP,SIA，SIAB。可对与巯基基团的反应提供保护或非保护石克醇的以生成可还原4建的接头包括SPDP，SMPT,SATA以及SATP。该种i式剂可乂人市场上购4f(例i口PierceChemicals)。结合物不一定需要包含可溶性Sp35多肽的N末端或血清白蛋白的硫醇部分。例如，可溶性Sp35-白蛋白融合物可通过遗传工程技术获得，其中可溶性Sp35部分被融合至血清白蛋白的N末端、C末端，或同时融合至两个末端。可溶性Sp35多肽可被融合至外源肽，以促进该Sp35部分的纯4匕或鉴定。例如，可3夺组氨酸标签融合至可溶性Sp35多肽，以促进通过商用色谱介质进行纯化。在本发明的一些实施方式中，可溶性Sp35融合物构建体可用于促进可溶性Sp35部分在细菌中的生成。在该构建体中，在可溶性Sp35多肽的N末端融合^火伴上通常采用高水平表达和/或分泌的细菌蛋白。例如，参见Smith等人，67:31(1988);Hopp等人,5z'o/ec/mo/ogy6:1204(1988);LaVallie等人，5/o/ec/2"o/ogy77:187(1993)。通过在适当的融合伙伴的氨基和羧基末端融合可溶性Sp35部分可获得可溶性Sp35多肽的二4介或四1^介形式。例如，可将可溶性Sp35部分融合至Ig部分的氨基和羧基末端以生成含有两个可溶性Sp35部分的二价单体多肽。在这些单体的二聚化后，可通过Ig部分获得可溶性Sp35蛋白的四价形式。该种多价形式可用于提高对目标的结合亲和性。可溶性Sp35的多价形式还可通过串联可溶性Sp35部分形成串联体(可单独采用或融合至Ig或HAS等融合伙伴)获得。结合的聚合物(多肽除外)本发明的一些实施方式涉及可溶性Sp35多肽、Sp35适体，或Sp35抗体，其中一种或多种聚合物被结合(共价连接)至Sp35多肽、适体或抗体，以供本发明的方法采用。适用于该种结合物的聚合物的范例包括多肽(已在上文讨论)、适体、糖聚合物以及聚烷撑二醇链。通常，^f旦不尽然，可通过将聚合物结合至可溶性Sp35多肽、适体或Sp35抗体以改善下列一种或多种性质可溶性、稳定性，或生物相容性。通常用于结合Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体的聚合物类别为聚烷撑二醇。最为常用的是聚乙二醇(PEG)。可将PEG部分(例如，1,2，3，4或5PEG聚合物)结合至各Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体，从而相对单独的Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体提高血清半衰期。PEG部分无抗原性，且基本呈生物惰性。本发明实施中采用的PEG部分可以带分支或不带分支。与Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体结合的PEG部分的数量以及单独PEG的分子量不尽相同。总体而言，聚合物的分子量越高，与多肽结合的聚合物链越少。与Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体结合的总聚合物量通常介于20kDa至40kDa。因此，当一个聚合物链被结合时，该链的分子量通常为20-40kDa。如果结合了两条链时，各链的分子量通常为10-20kDa。如果结合了三条链，该分子量通常为7-14kDa。如PEG等聚合物可通过多肽上的任何适用的、暴露的反应性基团连接至Sp35将拮抗剂多肽、适体或抗体。该种暴露的反应性基团可以是，例如，内部赖氨酸残基的N末端氨基基团或epsilon氨基基团中的一种或两种。活化的聚合物可与Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体上任何自由氨基基团进行反应和共价连接。Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体(如有)的自由羧基基团、适当活化的羰基基团、羟基、胍基、咪唑、氧化糖部分以及巯基基团也可用作聚合物结合的反应基团。根据多肽浓度的不同，在结合反应中每摩尔的多肽通常可采用约1.0至约IO摩尔活化聚合物。该比例的选择通常代表了在使反应最大化的同时使能损害该Sp35拮抗剂多肽或抗体目标药理活性的副反应(通常为非特异性的)最小化之间的平^f衧。优选地，至少^呆留Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体50%的生物活性(例如，在本领域已知或本文所述的任意测定所证实)，最优选保留接近100%的活斗生。该聚合物可通过常头见化学方法结合至Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体。例如，聚烷撑二醇部分可被偶合至Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体的赖氨酸epsilon氨基基团。可通过如PEG3虎珀酰亚胺丁二酸酯(SS-PEG)和琥珀酰亚胺丙酸酯(SPA-PEG)等N-轻基琥珀酰亚胺(NHS)活化酯与赖氨酸侧链进行连接。适用的聚烷撑二醇部分包括，例如，羧曱基-NHS和正亮氨酸-NHS,SC。这些试剂可从市场上购得。其它的胺-反应性PEG接头可用于替代琥珀酰亚胺部分。其中包括，例如，异硫氰酸，硝基苯基碳酸盐(PNP),环氧化物，苯三唑碳酸盐，SC-PEG,磺酸酯，醛，环氧化物，羰基咪峻以及石友酸PNP。通常可对条件进4亍优化以〗吏反应的选4奪性和程度最大化。该种反应条件的优化属于本领域的普通技术。可通过本领域已知的任何聚乙二醇化反应进行聚乙二醇4匕。例3口，参见，FocmowOowA3:4-10(1992)，以及E欠洲专利申i青EP0154316和EP0401384。可通过与反应性聚乙二醇分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷化反应进4亍聚乙二醇化。通过酰化进行的聚乙二醇化通常包括与聚乙二醇的活性酯书f生物进行反应。任何反应性PEG分子均可用于进行聚乙二醇化。PEG酯化的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)是一种常用的活化PEG酯。此处所用的"酰化"包括但不限于下列治疗性蛋白和水溶性聚合物(如PEG)之间的键类型酰胺、氨基甲酸酯、聚氨酯等。例如，参见5/oco"j'MgWeC/ze附.5:133-140,1994。可只于反应参凌丈进4亍一4殳选择以避免对可溶性Sp35多肽、适体或抗体造成损伤或灭活的温度，溶剂以及pH条件。—般而言，该连4妄4建为酰胺，且通常至少95%的所4寻产物#皮单-,双-或三-聚乙二醇化。然而还可形成具有更高聚乙二醇化程度的种类，其数量取决于所采用的特异性反应条件。纯化的聚乙二醇化种类可采用常失见的纯化方法(包4舌，例如，透析、盐4斤、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水交换层析以及电泳)选择性地从混合物(特别是未反应的种类)中分离。通过酰4匕进4亍的聚乙二醇化通常包4舌在还原剂存在下PEG的N末端醛4汙生物与Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体的反应。此外，人们可对反应条件进行调节4吏得实际上4叉在Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体的N末端氨基基团进4亍聚乙二醇化，即，得到单-聚乙二醇化蛋白。对于单-聚乙二醇化或多-聚乙二醇化，PEG组通常通过-CH2-NH-基团与蛋白结合。特别对于-CH2-基团，该种类型的键被称为"烷"键。聚乙二醇化产物可利用可供衍生化的不同类型伯胺基基团(N末端赖氨酸)的不同反应性。该反应可在特定pH下进行，该pH可允许人们利用赖氨酸残基的epsilon-氨基基团和蛋白的N末端氨基基团之间的pKa差异。通过该种选择性衍生化可控制包含反应性基团(例如，醛)的水溶性聚合物与蛋白的结合与聚合物的结合主要发生在蛋白的N末端，且未发生对其它反应性基团(例如，赖氨酸侧链氨基基团)的明显修饰。该用于酰化和烷化方法的聚合物分子可选自水〉容性聚合物。所选的聚合物通常可经过^f奮饰以具有单独的反应性基团(例如用于酰化的活性酯或用于烷化的醛)，从而可如同本方法一样控制聚合程度。反应性PEG醛的范例之一为水中稳定的聚乙二醇丙醛，或单CI-CIO烷氧基或其烷氧基衍生物(例如，参见Harris等人.，U.S.Pat.No.5,252,714)。该聚合物可带有或不带有分支。对于酰化反应，所选的聚合物通常具有单独反应性酯基团。对于还原性烷化反应，所选的聚合物通常具有单独反应性醛基团。一般而言，水溶性聚合物不会选自天然存在的糖基残基，因为它们通常更方便由哺乳动物重组表达系统生成。制备聚乙二醇化可溶性Sp35多肽、适体或抗体的方法通常包括下列步骤:(a)将Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体与聚乙二醇(例如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应,在该反应条件下该分子可与一个或多个PEG基团连接,以及(b)获取反应产物。一般而言，酰化反应的最佳反应条件将才艮据已知参tt和目标结果进行个别确定。例如，PEG与蛋白的比例越大通常可生成更大比例的聚-聚乙二醇化产物。还原性烷化可用来生成充分均匀的单-聚合物/可溶性Sp35多肽、Sp35适体或Sp35抗体群，其通常包括以下步骤(a)将可溶性Sp35蛋白或多肽与反应性PEG分子在还原性烷化条件下反应，反应pH适于对多肽或抗体的N末端氨基基团进行选择性修饰；以及(b)获得反应产物。对于充分均匀的单-聚合物/可溶性Sp35多肽、Sp35适与多肽或抗体的N末端选择性结合的条件。该反应条件通常提供了赖氨酸侧链氨基基团和N末端氨基基团之间的pKa差异。为达成本发明的目的，该pH通常在3-9的范围内，典型在3-6的范围内。可溶性Sp35多肽、适体或抗体可包括标签，例如，可通过蛋白水解充分释放的部分。因此，该赖氨酸部分可进行如下选择性修饰首先与以低分子量接头(例如可同时与赖氨酸和N末端反应的Traut试剂(Pierce)M奮饰的His-tag反应，然后释》文该His-tag。然后该多肽将包含可用含硫醇-反应性头基(例如马来酰亚胺基团、乙烯石风基团、卣乙酸基团，或者自由或保护SH)的PEG选择性{务饰的自由SH基团。Traut试剂可通过能建立PEG连接特定位点的任何接头进4亍3#^^。例如，Traut试剂可用SPDP，SMPT,SATA或SATP(Pierce)进行替代。类似地，可将蛋白与插入马来酰亚胺(例如，SMCC，AMAS，B證S,MBS,EMCS,SMPB，SMPH,KMUS或GMBS)，卣乙酸(SBAP,SIA,SIAB)，或乙烯石风基团的胺-反应性接头反应，并将所得的产物与包含自由SH的PEG反应。在一些实施方式中，该聚烷撑二醇部分被偶合至本发明的方法中采用的Sp35拮抗剂多肽、适体或抗体的半胱氨酸基团。可通过如马来酰亚胺基团、乙烯石风基团、卣乙酸基团或石危醇基团等基团形成该偶合。该可溶性Sp35多肽、适体或抗体可选择性地通过易分解的键与聚烷撑二醇部分结合。该易分解的键可在如生化水解、蛋白水解或是巯基裂解中断裂。例如，该键可在体内(生理)条件下断裂。该反应在任何用于将生物活性材料与惰性聚合物反应的方法中发生，通常pH约为5-8，例如，当反应性基团在N末端的alpha氨基基团上时pH为5,6，7或8.通常该过程包括制备活化的聚合物，然后使蛋白与该活化聚合物反应以生成适用于制剂的可溶性蛋白。Sp35多聚核香酸拮抗剂本发明的方法中Sp35拮抗剂包括由特异性结合编码Sp35的多聚核苷酸的核酸分子组成的Sp35多聚核苷酸拮抗剂。该Sp35多聚核苦酸拮抗剂可防止Sp35的表达(抑制)。Sp35多聚核香酸拮抗剂包括，^f旦不限于，反义分子、核酶、siKNA、shRNA、RNAi。该种结合分子通常单独向动物施用(例如，参见O'Connor,J.A^wroc/7e附.56:560(1991))，^f旦该种结合分子也可在体内通过一皮宿主细月包才聂取的多聚才亥香酸体内表达。也可参见Oligodeoxy露leotidesasAntisenseInhibitorsofGeneExpression,CRCPress,BocaRaton,FL(1988)。RNAi指干4尤目标mRNA表达的RNA的表达。该RNAi可特别通过siRNA(短干4尤RNA)与特定mRNA(例如，Sp35)相互作用而沉默目标基因。然后可輩巴向该dsRNA复合物以通过细胞降解。其它的RNAi分子包括短发夹RNA(shRNA);以及短干扰发夹。shRNA分子包含了来自目标基因并由环连接的正义和反义序列。该shRNA由细月包核,皮运llr至细月包质，并随mRNA#1降解。PolIII或U6启动子可用于为RNAi表达RNAs。在本发明的一些实施方式中，该shRNA从慢病毒载体(例如，pLL3.7)中表达。RNAi可通过对其"目标"mRNAs具有序列特异性同源性的双4连RNA(dsRNA)分子进4亍介导(Caplen等人，尸rac7V"dUSAP5:9742-9747,2001)。对果蝇无细月包溶解物的生化研究显示RNA依赖性基因沉默的介导物为21-25核苷酸"小干扰"RNA双链体(siRNAs)。相应地，在本发明的方法中，siRNA分子可方侵J也采用。siRNA可在称为DICER的RNA酶对dsRNA的处理过禾呈中获4f(Bernstein等人，A^^re409:363-366，2001)。可以看到si脂A只又链体产物被招募进入名为RISC(RNA诱导沉默复合物)的多蛋白siRNA复合物中。不希望受限于任何特定的理论，据认为RISC被导向目标mRNA,其中的siRNA双《连体进4亍序列特异性相互反应以通过〗崔化方式介导裂解(Bernstein等人，Atoi/re409:363-366,2001;Boutla等人，Cwrrg/o/71:1776-1780,2001)。RNAi已#皮用于通过非限制性样本神经元等途径(Krichevsky等人，尸rac淑/USA29:11926-11929，2002)分析基因功能以及鉴定哺乳动物细胞中的必要基因(Elbashir等人，M"/7oA26:199-213,2002;Harborth等人，JCe〃114:4557-4565，2001)。人们评^介了RNAi的治疗形态，例如对病毒(包"fe〗旦不限于脊髓灰质炎病毒(Gitlin等人，A^w"418:379-380,2002)和HIV(Capodici等人，J/mmwwo/169:5196-5201,2002))的感染、复制和/或生长的抑制和阻断，以及减少致癌基因的表达(例如，bcr-abl基因；Scherr等人，101(4):1566-9,2002)。RNAi已被用于调节哺乳动物(小鼠)和两栖动物(爪蟾)胚胎(分别为Calegari等人，尸rocA^/JcadSc/USA99:14236-14240,2002;以及Zhou，等人，7Vwc/e/c爿c/A30:1664-1669,2002)以及出生后小鼠中的基因表达，并用于诱导成年转基因小鼠中的转基因表达(McCaffrey等人:418:38-39，2002)。在细胞i咅养和体内4企测siRNAs岁支力和特异寸生的方；去已有4苗述(侈'B口，参见Bertrand等人，5/oc/zew5/op/zj^C麵應w296:1000-1004,2002;Lassus等人，Sc/5TiCE2002(147):PL13，2002;以及Leirdal等人，肠c&m肠//zwbC鍾画w295:744-74%，2002)。介导RNAi的分子(包4^f旦不限于siRNA)可通过化学合成(Hohjoh，i^^S丄e"521:195-199，2002)，dsRNA水解(Yang等人，尸削淑/爿c^USA99:9942-9947，2002),以T7RNA聚合酶体外转录(Donzeet等人，jczvfe30:e46,2002;Yu等人,ProcNatlAcadSciUSA99:6047-6052，2002),以及采用如大肠详干菌RNA酶III等核酸酶水解乂又链脂A(Yang等人，iVocTV^/Sc/USA99:9942-9947，2002)进行体夕卜制备。siRNA分子还可通过对两个寡聚核苷酸相互退火形成，通常具有下列一般结构，其中同时包4舌了双链和单《连部分I~~/——I1-~x~-15,-XXXXXXXXXXXXNN!NKN-3，(SEQIDNO:4)3，-NNNNNYYYYYYYYYYYY-5,(SEQIDNO:5)其中N,X和Y为核苷酸，X与Y通过氢4建连接；""表示两个石成基之间的氢4建；jc为介于1和约100之间的自然凄t;而w和w为介于0和约100之间的相互独立的整H在一些实施方式中，N,X和Y各自为A,G,C和T或U。特别对于合成siRN(即，两个寡聚核苷酸的退火产物)，可能存在非天然存在的^咸基和核香酸。该双链中心区被称为"核心"并以碱基对(bp)作为测量单位；该单链部分悬挂，并以核苷酸(nt)作为测量单位。所示的悬挂为3'悬端，但具有5'悬端的分子同样在本发明的范围之内。没有悬挂的siRNA分子(即，附=0且w=0),以及l又在核心一侧具有悬挂的分子(例如，附=0且">1，或与之相反)同样在本发明的范围之内。RNAi」技术最初并未显示出可方侵j也应用于哺乳动物系统。这是因为在哺乳动物中，dsRNA激活的dsRNA-活化蛋白激酶(PKR)可导致凋亡级耳关和细月包死亡(Der等人，iVoc.Sc/,USA94:3279-3283，1997)。此夕卜，人们4艮久以前《更知道dsRNA可在哺乳动物细胞中激活干4无素级耳关，/人而还可导致细力包生理学的改变(Colby等人，j騰.細.25:333，1971;Kleinschmidt等人.,iev.5/oc/e附.41:517,1972;Lampson等人.,Jcad5W。USA58L782,1967;Lomniczi等人.，J">o/.8:55,1970;以及Younger等人.，J5a"eno/.92:862，1966)。然而，dsRNA介导的PKR激活和干扰素级联需要长度超过约30个石成基对的dsRNA。相对地，据证明长度小于30个石威基对的dsRNA可引起哺乳动物细月包中的脂Ai(Caplen等人.，/Voc.M^/.^c^/.USA98:9742-9747，2001)。因此，可期待通过制备基本没有更长dsRNAs的短RNA来避免更长dsRNA分子带来的有害的、非特异性的作用。有关siRNA的参考文献Bernstein等人,，409:363-366，2001;Boutla等人，C鮮飾/11:1776-1780,2001;Cullen，淑/画,/.3:597-599，2002;Caplen等人，尸謡淑/USA98:9742-9747,2001;Hamilton等人，5We腳286:950-952，1999;Nagase等人，册jM.6:63-70,1999;Napoli等人，PWCe〃2:279-289,1990;Nicholson等人，她画.G，we13:67-73,2002;Parrish等人，Mo/Ce〃6:1077-1087，2000;Romano等人，MolMicrobiol6:3343-3353，1992;Tabara等人，Ce〃99:123-132，1999;以及Tuschl,C/ze油-oc/z艮2:239-245,2001。Paddison等人.(Genes&Dev.16:948-958,2002)曾将小RNA分子折叠发夹以引起RNAi。相应地，该短发夹RNA(shRNA)分子同样可被本发明的方法方便采用。功能性shRNAs的主干和环的长度各不相同；在不影响沉默活性的前4是下，主干长度可介于约25至约30nt，而环的大小可介于4至约25nt。不希望受任何特定理i仑的束缚，l居i人为这些shRNAs类似于DICERRNA酶的dsRNA产物，且在任意情况下具有相同的抑制特定基因表达的能力。反义l支术可通过反义DNA或RNA,或通过三螺》走构型控制基因表达。反义才支术的讨^r可参见，例如，Okano,7Vewrac/2，，56:560(1991);OligodeoxynucleotidesasAntisenseInhibitorsofGeneExpression,CRCPress,BocaRaton,FL(1988)。三虫茅j走才勾型的"i寸i仑可参见，<列^口，Lee等人-iVwc/e/c」c/<isiesearc/76:3073(1979);Cooney等人，241:456(1988);以及Dervan等人，251:1300(1991)。该方法基于多沖亥香酸与互4卜DNA或RNA的结合。例如，编码Sp35的多核苷酸的5'编码部分可用于^:计长度介于约10至40碱基对的反义RNA寡聚核苷酸。DNA寡聚核苦酸经i殳计与涉及转录的基因区i或互补，从而可以阻止转录和目标蛋白的生产。反义RNA寡聚一亥苷酸在体内与mRNA杂交并阻断mRNA分子翻i奪成为目标多肽。在一个实施方式中，针对Sp35基因的反义核酸可通过由外源序列转录在胞内生成。例如，通过转录载体或其部分生成反义核酸(RNA)。只要该载体可通过转录生成目标反义RNA,它可呈游离态或与染色体整合。该载体可通过本领域重组DNA才支术的标准方法进行构建。载体可以是可用于在脊推动物细胞中复制和表达的质4立、病毒或其它本领域已知物质。该反义分子可通过本^页i或已知的<壬<可作用于脊一偉动物、优选人类细力包的启动子(例如见本文其它部分的描述)进行表达。尽管优选反义分子的绝对互补，^f旦对此不作要求。至少与编码Sp35的RNA中的一部分互补的指其互补性足以与RNA进4亍杂交，形成稳定双4连体的序列；或可4企测到三l连体形成。杂交的能力将取决于互补的程度以及反义核酸的长度。一般而言，杂交核酸越大，它可在包含更多碱基错配的情况下依然形成稳定的双链体(或在某些情况下形成三链体)。本领域的技术人员可通过标准步骤确定错配的容忍度以确定杂交复合物的熔点。与信使RNA的5'端(例如至AUG起动密码子或包括AUG起动密码子的5'非翻i,序列)互补的寡聚核苷酸在抑制翻译方面具有最高的效率。然而，据显示与mRNAs的3'非翻i,序列互补的序列也能有效抑制mRNAs的翻i奪。一4殳可参见Wagner，R.，Nature372:333-335(1994)。因此，与5'-或3'-非翻i斧、非编石马区互补的寡聚核苷酸可用于抑制Sp35翻译的反义过程。与mRNA的5'非翻译区互补的寡聚核苷酸应当包括AUG起始密码子的补体。与mRNA编码区互补的反义寡聚核苦酸在抑制翻译方面的效率较低，但可参照本发明进行使用。反义核酸的长度至少应为六个核苦酸，优选长度介于6至约50个核苷酸的寡聚核苷酸。在某些方面该寡聚核苷酸具有至少10个核苷酸，至少17个核苷酸，至少25个核香酉吏或至少50个才亥苦酉吏。在另一实施方式中，此处4皮露的方法中采用的反义寡聚核苦酸为a-异头寡聚核苷酸。a-异头寡聚核苷酸可与互补RNA形成特定的双链杂交体，并且与通常的情况相反，其中链相互平行(Gautier等人.，iVwc/.爿c/Ai仏15:6625-6641(1987))。该寡聚核苷酸为2'-0-曱基核并唐核香酸(Inoue等人。，〗Vwc/.^c/AA仏15:6131-6148(1987))，或嵌合RNA-DNA类4以物(Inoue等人.，F五55"丄饥215:327-330(1987》。此处4皮露的方法采用的多聚核苷酸组合物进一步包括催化性RNA,或核酶(例如，参见PCT国际申请WO90/11364,于1990年10月4日公布；Sarver等人，5We"ce247:1222-1225(1990))。优选采用锤头状核酶。锤头状核酶可在与目标mRNA形成互补碱基对的侧翼区决定的位点裂解mRNAs。唯一的要求是具有下列两个石咸基(5'-UG-3')的序列的目标m認A。4垂头状核酶的构建体和产物已为本4贞3或/>^口并在Haseloff和Gerlach,A^/wre334:585-591(1988)有更为完全的描述。优选地，可对该核酶进行改造从而使裂解识别位点接近目标RNA的5'端；即，提高效率并使非功能性mRNA转录物的胞内积累最小化。在反义过程中，本发明披露的方法中采用的核酶可由修饰后的寡聚核苦酸(例如，为提高稳定性，可进行靶向等)组成并传递至体内表达Sp35的纟田胞。编码核酶的DNA构建体可以与上述导入反义编码DNA同才羊的方式导入细月包。优选的传递方法包括采用在"编码"受强构建型启动子(例如，polIII或polII启动子)控制的核酶的DNA构建体，从而使转染细胞生成足够数量的核酶以破坏内源性Sp35信息并抑制翻译。与反义分子不同，由于核酶具有催化性，其产生效果所需的胞内浓度也更低。此处4皮露的方法采用的多聚核脊酸(包4舌下文描述的适体)可以是单链或双链的DNA或RNA或其嵌合混合物或衍生物或4务饰形式。该多聚核苷酸可在碱基部分、糖部分，或磷酸盐骨架进行修饰，从而提高如分子、杂交物稳定性等。该多聚核苷酸可包括其它附加基团，例如肽(例如，为在体内靶向宿主细胞受体)，或是促进跨域细胞膜(例如，参见Letsinger等人，/Voc.爿o^/.Sc/.U.S.A.5(5:6553-6556(1989);Lemaitre等人，尸roc.A^/.^cac/.SW84:648-652(1987));于1988年12月15日乂>布的PCT^>布WO88/09810)或是血脑屏障(例如，参见于1988年4月25日公布的PCT公布WO89/10134)进行运输的试剂，杂交触发裂解剂(例如，参见Krol等人，6:958-976(1988))或是嵌入剂(例如，参见Zon，5:539-549(1988))。为实现该目标，可将该多聚核苷酸结合至另一分子，例如，肽、杂交触发交联剂、运输剂、杂交触发裂解剂等。此处4皮露的方法采用的多聚核苷酸(包4舌适体)可包括至少一个选自以下组合的修饰碱基部分，该组合包括，但不限于，5-氟尿嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-氯尿嘧啶，5-》典尿嘧，定，次黄噤呤，黄嘌呤，4-乙酰胞嘧啶，5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶，5-羧基甲基氨基曱基-2-硫尿核苷，5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶，二羟尿嘧咬，P-D-半乳糖Q核苷，肌苷，N-6-异戊烯腺噪呤，l-甲基鸟噤呤，1-甲基肌苷，2，2-二曱基鸟嘌呤，2-甲基腺噪呤，2-甲基鸟噤呤，3-甲基胞嘧啶，5-甲基胞嘧啶，N-6-腺噪呤，7-甲基鸟噪呤，5-甲基氨基甲基尿嘧啶，5-甲氧基氨基甲基-2-石克尿嘧啶，P-D-甘露糖Q核香，5'曱氧基羧基曱基尿嘧啶，5-甲氧基尿嘧啶，2-甲基疏-N-6-异戊烯腺噤呤，尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)，怀丁氧苷(wybutoxosine)，假尿嘧咬，Q核苷，2-疏胞嘧啶，5-甲基-2-硫尿嘧啶，2-硫尿嘧咬，4-硫尿嘧咬，5-甲基尿嘧啶，尿嘧啶-5-氧基乙酸曱酯，尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)，5-甲基-2-石危尿嘧咬，3(3-氨基-3-N2-羧基丙基)尿嘧咬，3-(3-氨基-3-羧基-丙基)w，以及2，6-二氨基嘌呤。此处4皮露的方法采用的多聚核苷酸(包4舌适体)还可包括至少一个选自包括，但不限于，阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木酮糖以及己糖的组合的修饰糖部分。在另一实施方式中，此处4皮露的方法采用的多聚核苷酸(包括适体)至少包含一个选自以下组合的修饰磷酸盐骨架，该组合包括，^旦不限于，石危代磷酸盐、二石危代磷酸盐、^i^琉代磷酸酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、甲基磷酸酯、烷基磷酸三酯，以及缩醛鍵或其类似物。本发明的方法采用的多聚核苷酸(包括适体)可通过本领域已知的标准方法合成，例如，可采用自动化DNA合成器(可从Biosearch,AppliedBiosystems等公司购得)。例如，疏代磷酸寡聚核苷酸的合成方法可参见Stein等人.，M/c/.^c/A7"16:3209(1988),甲基磷酸寡聚核苷酸可采用可控孔度玻璃高分子载体进行制备(Sarin等人，尸亂胸/.^c^.U.S.A.55:7448-7451(1988)),等等。适体在另一实施方式中，本发明的方法采用的Sp35拮抗剂为适体。适体可以是具有独特序列的，具有对所需靶标(例如，多肽)具有结合特异性的并且是给定靶标的特异性配体的核普酸或多肽。本发明的核苷酸适体包括结合Sp35的双链DNA和单链RNA分子。核酸适体可通过本领域已知的方法进行选4奪，例如，可通过指数富集的配体系统进化(SELEX)过程进行选择。SELEX是一种能高度特异性结合目标分子的核酸分子的体外进化方法，其描述可参见，例如U.S.Pat.Nos.5,475,096，5,580,737，5,567,588，5,707,796，5,763,177,6,011,577以及6,699,843,其全文在此引用作为参考。另一鉴定适体的筛选方法可参见U.S.Pat.No.5，270，163(同样在此引用作为参考)。SELEX过程基于核酸形成一系列二和三维结构的能力，以及核苷酸单体实际上能作为任何单体或聚合形式的化合物(包括其它核酸分子和多肽)的配体(形成特异性结合对)的多功能性。任何大小的分子或组合物可用作靶标。SELEX法包括从候选寡聚核苷酸混合物中进行选才,，并采用相同的选择方案逐步循环结合、区分和扩增以获得所需的结合亲和性和选4奪性。该SELEX法以核酸混合物(优选包含随一几序列的片段)起始，包括以下步骤将混合物和靶标在利于结合的条件下相接触；将未结合核酸和与靶标分子特异性结合的核酸进行区分；分离核酸-靶标复合物；扩增从核酸-靶标复合物分离的核酸以获得核酸的配体富集混合物。根据需要重复结合、区分、分离和扩增步骤以获得针对靶标分子的高特异性高亲和性核酸配体。核香酸适体可用作i貪断工具或作为抑制剂来分一斤月包内4言号4争导和运丰lr途4至(James(2001)Cwm6|pz>2.尸/za/7waco/.1:540-546)。核普酸适体的高亲和性和特异性使它们成为药物研发的良好候选物。例如，毒素蓖麻毒素的适体拮抗剂已被分离并具有纳摩尔级的IC504直(HesselberthJR等人，(2000)/C&m275:4937-4942)。核苷酸适体还可用以抵抗传染性疾病、恶性肿瘤以及病毒表面蛋白以降^f氐细月包4专染斗生。本发明的方法采用的核普酸适体可按此处所述的对其它多聚核香酸的》务饰方法进^^f务饰(例如，修饰骨架或石威基或与肽结合)。釆用Sp35的蛋白结构并通过SELEX过程来筛选作用于Sp35的适体可只于4中制Sp35介导的过禾呈(侈'B口，Sp35介导的寿由突再生抑制)的适体进行鉴别。本发明的方法采用的多肽适体为才艮据其结合并因此阻断Sp35作用的能力选才奪的4壬意肽。多肽适体可包4舌在两端与蛋白支架连接的短可变肽区。这种双结构限制大大提升了肽适体的结合亲和性，达到了与抗体相当的水平(纳摩尔级)。例如，参见Hoppe-SeylerF等人.(2000)JMo/Med78(8):426-430。4豆可变肽的长度通常约为10至20个氨基酸，该支架可以是任何具有良好溶解性和相容性的蛋白。支架蛋白的一个非限制性范例为细菌蛋白硫氧还蛋白-A。例如，参见CohenBA等人.(1998)尸7V^S95(24):14272-14277。此外，本发明的方法采用的多肽适体的一个非限制性范例为配体调节肽适体(LiRPA)。该LiRPA支架可由三个蛋白区组成FK506结合蛋白(FKBP)、FRBP-雷帕霉素结合区(FRB)以及谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。例如，参见BinkowskiBF等人.，(2005)C7zew&Ao/12(7):847-855，在此51用作为参考。多肽适体为可作为蛋白功能显性抑制剂的肽或小多肽。肽适体特异性结合目标蛋白，阻断其功能(Kolonin等人.(1998)iVoc.JV^/.Jcad95:14,266-14,271)。以高亲和性和特异性结合目标蛋白的肽适体可通过本领域已知的多种技术进行分离。肽适体可通过酵母双杂交筛选(Xu,C.W.，等人.(1997)A^"爿cadSc/.94:12,473-12,478)或通过核lt体展示(Hanes等人.(1997)7VW/.Sc/.94:4937-4942)乂人随才几肽库中分离得到。它们还可从p羞菌体库(Hoogenboom,H.R.，等人.(1998)/附附Mwo&c/2"o/ogy4:l-20)或是化学生成肽库中分离得到。尽管由于肽适体合成專支为困难，其使用比多聚核苷酸适体更为复杂，但它们具有无限的化学多样性。本发明的方法采用的肽适体可参照本文别处描述的其它多肽的修饰方法进行修饰(例如，与聚合物结合或与蛋白融合)。载体包含编码Sp35拮抗剂的核酸的载体也可用于生成本发明的方法采用的拮抗剂。与该种核酸可操:作连4妄的载体和表达控制序列的选4奪依赖于所需的功能(例如，蛋白表达)以及待转化的宿主细胞。'可用于调节可操作连接的编码序列表达的表达控制元件已为本领域所知。其范例包括，-f旦不限于，i秀导型启动子、组成性启动子、分泌信号以及其它调节元件。在采用诱导型启动子时，它可通过宿主细力包培养基中营养状态的改变或是温度的改变进行控制。载体可包括原核复制子，即，能够引导细菌宿主细胞中染色体外重组DNA分子自主复制和维4寺的DNA序列。该种复制子已为本领域公知。此外，包含原核复制子的载体还可包含其表达可带来可测标记(例如耐药性)的基因。细菌耐药性基因的范例为可对氨比西^木或四环素形成^元性的基因。包含原核复制子的载体还可包纟舌原核或喧菌体启动子，以引导编码基因序列在细菌宿主细胞中的表达。与细菌宿主相容的启动子序列通常可在含有可插入4寺表达DNA片,爻的常失见限制性位点的质粒载体中予以l是供。该种质冲立载体的范例为pUC8，pUC9，pBR322以及pBR329(BioRad),pPL和pKK223(Pharmacia)。任何适用的原核宿主均可用于表达编码本发明的方法中采用的蛋白的重《且DNA分子。可采用多种表达载体系统实现本发明目的。例如，一类利用来自动物病毒(例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、^N犬病毒、逆转录病毒(RSV,MMTV或MOMLV)或SV40病毒)的DNA元件的载体。其它包括了具有内部核糖体结合位点的多顺反子系统的应用。此外，将该DNA整合至其染色体的细胞可通过导入一个或多个支持转染宿主细胞选择的标记进行选4%。该标记可向一种营养缺陷型宿主提供原营养、耐受抗微生物剂(例如，抗生素)或耐受铜等重金属。该选择性标记基因既可直接连接至待表达的DNA序列，也可通过共转化导入相同的细胞。新霉素磷酸转移酶(neo)基因便是选才奪性标记基因的一个范例(Southern等人，J.MotAnal.Genet,1:327-341(1982))。为4尤4匕mRNA的合成可負fe还需要附加元件。这些元件可包括信号序列或剪接信号，以及转录启动子、增强子，以及终止信号。在一个实施方式中可采用一尔为NEOSPLA(美国专利6,159,730)的BiogenIDEC,Inc.的专有表达载体。该载体包含了细胞巨化病毒启动子/增强子、小鼠beta球蛋白主启动子、SV40复制起始区、牛生长激素多聚腺香酸化序列、新霉素磷酸转移酶外显子1和外显子2、二氢叶酸还原酶基因和前导序列。才居发J见该载体可在转染进入CHO细胞，并经过含G418培养基中选择和甲氨蝶呤扩增后可导致极高水平的表达。当然，任何能在真核细胞引发表达的表达载体均可用于本发明。适用载体的范例包括，^f旦不限于质粒pcDNA3，pHCMV/Zeo,pCR3.1，pEFl/His,pIND/GS,pRc/HCMV2，pSV40/Zeo2，pTRACER-HCMV,pUB6/V5画His,pVAXl和pZeoSV2(可乂人Invitrogen,SanDiego，CA购买)，以及质斗立pCI(可乂人Promega,Madison,WI购买)。其它的真核细力包表达载体已为本领i或所知并可在市场上购4寻。该种载体通常包含可4翁入目标DNA片,殳的常^见限制性位点。示范性载体包4舌pSVL和pKSV-10(Pharmacia),pBPV-1,pml2d(InternationalBiotechnologies),pTDTl(ATCC31255),逆转录表达载体pMIG和pLL3.7，腺病毒穿4炎载体pDC315以及AAV载体。其它示范性载体系统可参见U.S.Patent6,413,777。—般而言，从大量的转染细胞中筛选表达适当高水平拮抗剂的细胞是一种常规实验，其可通过机器人系统等形式开展。针对哺乳动物宿主细胞表达的常用调节序列包括在哺乳动物细胞中引导高水平的蛋白表达的病毒元件，例如来自于逆转录LRTs、细胞巨化病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猿病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如，腺病毒主晚期启动子(AdmlP))、多瘤的启动子和增强子以及天然免疫J求蛋白和月几动蛋白启动子等强哺乳动物启动子。对病毒调节元件及其序歹'J的进一步4苗述可参见，侈'H口Stinski,U.S.Pat.No.5,168,062;Bell，U。S.Pat.No.4，510,245以及Schaffher，U.S'PatNo.4,968,615。重组表达载体可携带调节载体在宿主细胞中复制(例如，复制起始区)的序列和选择性标记基因。选择性标记可帮助选4奪未导入载体的宿主细l包(例如，参见Axel，U.S.PatNos.4,399,216;4,634,665以及5,179,017)。例如，该选4奪性标记基因通常可赋予导入了该载体的宿主细胞对药物(例如G418,潮霉素或氨甲喋呤)的耐受性。常用的选择性标记基因包括二氬叶酸还原酶(DHFR)基因(针对dhfr-宿主细胞在氨曱喋呤选择/扩增中的使用)和neo基因(针对G418选择)。转化可通过任何适用方法进行。将外源性DNA导入哺乳动物细胞的方法已为本领域公知并包括葡萄糖介导转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导转染、原生质体融合、电穿孔、通过在脂质体中包封多聚核苷酸进行转染以及直接将DNA显微注射进入细胞核。此外，还可通过病毒载体将核酸分子导入哺乳动物细胞。还可通过包含待转入哺乳动物细胞的外源性DNA的重组病毒转导哺乳动物细胞。宿主细胞转化可通过载体和宿主细胞适用的常^L方法实现。对于转化原核细月包，可采用电穿孔和盐处理法(Cohen等人，ZVoc.7V""爿cadUSA69:2110-14(1972))。对于转化脊4,动物细胞，可采用电穿孔、阳离子脂质体或盐处理法。例如，参见Graham等人，P7ro/og752:456-467(1973);Wigler等人，TV"".爿c"d5W.USA7(5:1373-76(1979)。该用于蛋白表达的宿主细月包系最优选来源于哺乳动的特定宿主细月包系的能力。示范性宿主细月包系包4舌，^旦不限于，NSO，SP2纟田胞，幼仓鼠肾(BHK)细胞，猴肾细胞(COS),人肝癌细月包(例浊口，HepG2)，A549细月包DG44和DUXB11(中国仓鼠卯巢细胞系，DHFR-),HELA(人子宫颈癌)，CVI(猴肾细胞系)，COS(带有SV40T抗原的CVI书亍生物)，Rl610(中国仓鼠纤维原细月包)BALBC/3T3(小鼠纤维原细月包)，HAK(仓鼠肾细月包系)，SP2/0(小鼠骨髓瘤)，P3x63-Ag3.653(小鼠骨髓瘤)，BFA-lclBPT(牛内皮细胞)，RAJI(人淋巴细胞)以及293(人肾)。通常可乂人商业服务才几构、美国纟且织i咅养寸呆藏中心(AmericanTissueCultureCollection)或7i^开文献获耳又。生产细胞系中的多肽表达可通过已知技术进行增强。例如，谷氨酰胺合成酶(GS)系统常用于特定条件下的表达增强。例如，参见EuropeanPatentNos.0216846,0256055和0323997以及EuropeanPatentApplicationNo.89303964.4.宿主细胞本发明的方法采用的表达Sp35拮抗剂的宿主细胞可以是原核或真核细胞。示范性的真核细胞包括，但不限于，酵母和哺乳动物细胞，例如，中国仓鼠卯巢(CHO)细胞(ATCC编号CCL61)、瑞士小鼠胚胎细胞NIH-3T3(ATCC编号CRL1658)以及幼仓鼠肾细胞(BHK)。其它有用的真核宿主细胞包4舌昆虫细胞和植物细月包。示范性的原核宿主细胞为大肠杆菌和链霉菌。基因治疗Sp35拮抗剂可通过基因治疗方法在哺乳动物(例如，人类患者)体内生成，以治疗与DA神经元变性、死亡或再生缺失相关的疾病、紊乱或损伤。这涉及施用可才喿作连4妄至适当表达控制序列的编石马适当Sp354吉4元剂的4亥酸。一般而言，该序列^皮整合进入病毒载体。用于该种基因治疗的适当病毒载体包4舌l^病毒载体，曱病毒载体，肠道病毒载体，瘟疫病毒载体，慢病毒载体，杆状病毒载体，疱渗病毒载体，EpsteinBarr病毒载体，乳多空病毒载体，痘病毒载体和牛痘病毒载体，^4目关病毒以及单纯疱渗病毒。该病毒载体可以是复制缺陷型病毒载体。通常可采用El基因或E3基因缺失的腺病毒载体。当釆用腺病毒载体时，该载体通常不具有选才奪性标记基因。药物组合物本发明的方法采用的Sp35拮抗剂可制成药物组合物以向哺乳动物(包括人)施用。本发明的方法中采用的药物组合物包含了药学可接受的载体，例如包括离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白(例如人血清白蛋白)，緩冲物质(例如磷酸盐，氨基乙g吏，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物，水，盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白，磷酸氪二钠，磷酸氢二钟，氯化钠，锌盐，硅胶，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，基于纤维素的物质，聚乙烯乙二醇，羧曱基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙烯乙二醇和羊毛脂)。本发明的方法釆用的组合物可通过任何适用方法(例如，肠胃夕卜，心室内，经口，通过吸入喷雾，局部，直肠，鼻腔，口腔，阴道或通过植入药盒)给药。此处所用的术语"肠胃外给药"包4舌皮下，,争月永内，月几肉内，关节内，滑液内，胸骨内，鞘内，肝内，病灶内和颅内注射或灌IIN支术。如前文所述，本发明的方法采用的Sp35拮抗剂作用于神经系统以促进少突细胞的存活、再生和分化以及神经元的髓鞘形成。相应地，在本发明的方法中，该Sp35拮抗剂以可以穿越血脑屏障的方式进行施用。这种穿越可通过Sp35拮抗剂分子本身固有的物理化学属性，药物制剂中的其它成分，或通过可到达血脑屏障的仪器设备(如针、套管或外科器具)得以实现。当该Sp35拮抗剂是一种不能天然穿越血脑屏障的分子时，例如，与帮助穿越的部分相融合时，适用的给药途径为，例如鞘内或颅内注射，例如直接注射至MS的慢性病灶。当该Sp35拮抗剂是一种能够天然穿越血脑屏障的分子时，其给药途径可以是下述多种途径中的一种或多种。本发明的方法采用的《且合物的无菌可注射形式可以是水或油悬浮液。这些悬浮液可参照本领域的已知技术，采用适当的分散剂或湿润剂以及悬浮剂进行制备。该无菌、可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌、可注射溶液或悬浮液，例如1,3-丁二醇中的悬浮液。可供采用的可4妄受的::容j泉和溶剂可以是水、Ringer〉容液以及等;参氯化钠溶液。此外，无菌、固定油常可用作溶剂或悬浮介质。为达到该种目的，可釆用任何温和固定油，包括合成的单-或二-甘油酯。与天然的药学可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙基化产物)类似，油酸及其甘油酯书f生物等脂肪酸可用于制备可注射剂，这些油溶液或悬浮液还可包含长链醇稀释剂或分散剂，例如羧曱基纤维素或是常用于制备包括乳剂和悬浮剂的药学可接受剂型的类似分散剂。其它在制备药学可接受固体、液体或其它剂型中常用的表面活性剂(例如，Tweens,Spans)以及其它乳化剂或生物相容性强化剂也可用于该制剂目的。肠胃外剂型可以是单剂量、灌输或在负荷剂量后加以维持剂量。这些ia合物可以固定或可变的间隔(例3。，一天一次，或"按需"给药)给药。本发明的方法所采用的特定药物《且合物可通过可4妄受剂型(例如，胶嚢，片剂，水悬浮液或溶液)进行口服给药。特定的药物纟且合物还可通过鼻"空喷雾或吸入的方式纟会药。该种纟且合物可制备成盐溶液、采用苯曱醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂(以增加生物相容性)和/或其它常规增溶或分散剂。Sp35拮抗剂可与载体材料结合以制备单剂型，该Sp35拮抗剂量随治疗宿主、所用的拮抗剂类型以及施用的特定才莫式的变化而不同。该组合物可以单剂量、多剂量或在一定时间,殳内以灌输的方式施用。还可对《会药方案进^f亍调整以获得最佳的目标响应(例^口，治疗或予贞卩方响应)。本发明的方法采用"治疗有效量，，或"预防有效量，，的Sp35拮抗剂。该种治疗或预防有效量可因个体的疾病状态、年龄、性别以及体重等因素而不同。治疗或予贞防有岁文量还可以是治疗有益效果超越毒性或有害效果的量。对任意特定患者的具体剂量和治疗方案取决于多种因素，包括所用的特定Sp35拮抗剂，患者年龄，体重，总体健康，性别，以及饮食，给药时间，排泄率，药物组合，以及具体的待治疗疾病的严重性。医疗看护者对该类因素的判断属于本领域的普通技术。该给药量还取决于待治疗的个体患者，给药途径，剂型，所用化合物的性质，疾病的严重性，以及所需的效果。该《会药量可采用本领域/>知的药理和药代动力学原理进行制定。在本发明的方法中该Sp35拮抗剂通常经脑室或鞘内直接施用于神经系统，例如施用至MS的慢性病灶。才艮据本发明的方法施用的组合物可制成制剂，/人而可以按照0.001-10mg/kg体重/天的剂量施用Sp35拮4元剂多肽。在本发明的一些实施方式中，该剂量为0.01-1.0mg/kg体重/天。在一些实施方式中，该剂量为0,001-0.5mg/kg体重/天。在采用Sp35拮抗剂抗体进行治疗时，该剂量相对宿主体重可以为，例如，/人约0.0001至100mg/kg,更通常为0.01至5mg/kg(例如，0.02mg/kg,0.25mg/kg，0.5mg/kg，0.75mg/kg,lmg/kg，2mg/kg等)。例如，该剂量可以是lmg/kg体重或10mg/kg体重或在l-10mg/kg范围内，优选至少lmg/kg。上述范围的中间剂量也在本发明的范围之内。对象给药可釆取每天给药，隔日给药，每周给药或根据任何其它通过实证分析得到的进度给药。一种示范性的治疗需要在较长的期限内(例如，至少六个月)进行多剂量给药。一种示范性的治疗方案采用每两周施用一次或每月施用一次或每3至6个月施用一次。示范性的剂量《会法包4舌连续每天l-10mg/kg或15mg/kg，隔日30mg/kg或每周60mg/kg。在一些方法中只于具有不同结合特异性的两种或多种单克隆抗体同时给药，其中各抗体的给用剂量均在指示的范围之内。在特定的实施方式中，可采用编码Sp35拮抗剂多聚核香酸的核酸分子治疗对象。核酸的剂量范围为每个患者约10ng至lg,100ng至100mg,l吗至10mg，或30-300吗DNA。传染性病毒载体的剂量在每剂10-100或更多病毒体。本发明的方法采用的组合物还可结合辅助活性4匕合物。例如，可溶性Sp35多肽或融合蛋白可与一种或多种附加治疗剂共同制剂或共同施用。的任意适用传递方法，包括水溶液的弹丸注射或控释系统的才直入。控制植入减少了重复注射的需求。本发明的方法采用的Sp35拮抗剂可直接灌输入脑部。已知有多种直接向脑部灌输化合物的方法，且这些方法对于向患有神经紊乱的人类患者传递治疗化合物非常有效。这些方法包括适用泵向脑部慢性灌输、立体定向灌输、临时间质导管、永久颅内导管灌输以及外科手术植入的可生物降解的灌输。例如，参见Gill等人，同前文；Scharfen等人，"HighActivityIodine-125InterstitialImplantForGliomas,"7a<i/a"owS/o/.尸/y^.24(4》583-591(1992);Gaspar等人，"Permanent1251ImplantsforRecurrentMalignantGliomas,"/"AOico/ogyJ5/o/.P/yAy.45(5):977-982(1999);chapter66,pages577-580,Bellezza等人，"StereotacticInterstitialBrachytherapy,"inGilderiberg等人,TextbookofStereotacticandFunctionalNeurosurgery,McGraw-Hill(1998);以及Brem等人,"TheSafetyofInterstitialChemotherapywithBCNU-LoadedPolymerFollowedbyRadiationTherapyintheTreatmentofNewlyDiagnosedMalignantGliomas:PhaseITrial,"LNeuro國O扁logy26:111-23(1995)。该组合物还可包括一种Sp35拮抗剂，该拮抗剂分散于作为该化合物适当传递或支持系统的生物相容载体材料中。緩释载体的适当范例包括成形(例如栓剂或胶嚢)的半透性聚合物基质。可才直入的或是孩O交囊状的纟爰释基质包i舌具乳酸(U.S.PatentNo.3,773,319;EP58,481),L-谷氨酸和gamma-乙基-L-谷氨酸酯共聚物(Sidman等人，Biopolymers22:547-56(1985));聚(2-羟乙基-异丁烯酸酉旨)，乙烯醋酉臾乙丈希(Langer等人，J^foter.15:167-277(1981);Langer，C/2艮Tec/2.2:98-105(1982))或聚画D画(-)-3羟基丁酉臾(EP133,988)。在本发明的一些实施方式中，Sp35拮抗剂通过直4矣灌输至脑部适当区域的方式施用至患者。例如，参见Gi11等人.，"DirectbraininfusionofglialcelllinederivedneurotrophicfactorinParkinsondisease,"NatureMed.9:589-95(2003)。此外还存在其它才支术并可用于施用本发明所述的Sp35拮4元剂。例如，可采用Riechert-Mundingeri殳备和ZD(Zamorano-Dujovny)多用途定位i殳备实现立体定向安置导管或植入物。一种对比增强计算机断层摄影术(CT)扫描(注射120ml欧乃派克，350mg硪酒/ml,层厚2mm)可支持三维多层治疗计划(STP,Fischer,Freiburg,Germany)。该4支术支持在^兹共4展影^f象研究的基础上进行计划，融合CT和MRI目标信息以进行明确的目标确认。经改造后可配合l吏用GECT扫描4义(GeneralElectricCompany,Milwaukee,WT)的Leksell立体定向系纟克(DownsSurgical,Inc.,Decatur,GA)以及Brown-Roberts-Wells(BRW)立体定向系纟充(Radionics,Burlington,MA)可用于该种用途。因此，在灌llr初期，可将BRW立体定向冲医架的环状底座圈附着在患者的头骨上。可以3mm的间隔通过带有夹在底盘上的石墨棒定位框的(目标组织)区域获取连续CT层。计算机治疗计划程序可以在VAX11/780计算机(DigitalEquipmentCorporation,Maynard，Mass。)上运行,该计算机采用石墨棒成像的CT坐标在CT空间和BRW空间之间绘图。此处所述的治疗紊乱的方法，要得到目标治疗或预防活性，通常可在人体l吏用前先进行体外试-验，然后在可4妻受的动物模型中进行体内试验。合适的动物模型(包括转基因动物)可为本领域普通技术人员所知。例如，此处所述的验证Sp35拮抗剂分化和存活作用的体外测试。Sp35拮抗剂对于轴突骨it鞘形成的作用可参照实施例描述进行体外测试。最后，可通过构建表达Sp35拮抗剂的转基因小鼠或通过向此处描述的小鼠或大鼠施用Sp35拮抗剂进行体内试验。本发明的实施将采用(除非另4亍指出)细J包生物学，细胞培养，分子生物学，转基因生物学，孩t生物学，重组DNA,以及免疫学的常规技术，其均在本领域的技术范围之内。该类技术在文献中得到了充分的解释。例如，参见MolecularCloning:ALaboratoryManual(3-VolumeSet),J.Sambrook，D,W.Russell,ColdSpringHarborLaboratoryPress(2001);GenesVm,B.Lewin，PrenticeHall(2003);PCRPrimer,CW,Dieffenbach及G.S.Dveksler,CSHLPress(2003);DNACloning,D.N.Glovered.，VolumesIandII(1985);OligonucleotideSynthesis:MethodsandApplications(MethodsinMolecularBiology),P.Herdewijn(Ed.),HumanaPress(2004);CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique,4thedition,R.I.Freshney,Wiley-Liss(2000》OligonucleotideSynthesis,M,J,Gait(Ed.)，(1984);Mullis等人.U.S.Pat,No:4,683,195;NucleicAcidHybridization,B.D.Hames&S.J.Higginseds.(1984);NucleicAcidHybridization,M.L.M.Anderson,Springer(1999》AnimalCellCultureandTechnology,2ndedition,M.Butler,BIOSScientificPublishers(2004);ImmobilizedCellsandEnzymes:APracticalApproach(PracticalApproachSeries),J.Woodward,MPr(1992);TranscriptionAndTranslation,B.D.Hames&S.J.Higgins(Eds.)(1984》CultureOfAnimalCells,R.I.Freshney,AlanR.Liss,Inc.,(1987);ImmobilizedCellsAndEnzymes,IRLPress,(1986);APracticalGuideToMolecularCloning,3rdedition,B.Perbal，JohnWiley&SonsInc.(1988);thetreatise,MethodsLiEnzymology，AcademicPress,Inc.,N.Y.;GeneTransferVectorsForMammalianCells,J.H.MillerandM.P.Caloseds,,ColdSpringHarborLaboratory(1987);MethodsInEnzymology,Vols.154and155，Wu等人.(Eds.);ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology,MayerandWalker,(Eds,),AcademicPress,London(1987);HandbookOfExperimentalImmunology,VolumesI-IV，D.M.Weir和C.C.Blackwell(Eds.),(1986);ImmunologyMethodsManual:TheComprehensiveSourcebookofTechniques(4VolumeSet),1stedition,I,Lefkovits,AcademicPress(1997);ManipulatingtheMouseEmbryo:ALaboratoryManual,3rdedition,ColdSpringHarborLaboratoryPress(2002);以及Ausubel等人,,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989)。4元体工禾呈的——;l殳原、贝'J参见AntibodyEngineering:MethodsandProtocols(MethodsinMolecularBiology),B丄.Lo(Ed.),HumanaPress(2003》Antibodyengineering,R.KontermannandS.Dubel(Eds.),SpringerVerlag(2001);AntibodyEngineering,2ndedition,C.A.K.Borrebaeck(Ed.),OxfordUniv.Press(1995)。蛋白工禾呈的一般原、贝'j可参见ProteinEngineering,APracticalApproach,Rickwood,D.，等人,Eds.,IRLPressatOxfordUniv.(Eds,),IRLPressatOxfordUniv.Press,Oxford,Eng.(1995)。^t体^口4元体-半4元原结合的一4殳原、则可参见Antibodies:ALaboratoryManual,E.Harlow,口D,Lane,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1988);Nisonoff,A.,MolecularImmunology,2ndedition,SinauerAssociates,Sunderland,MA(1984);andSteward,M.W.，Antibodies,TheirStructureandFunction,Chapman和Hall，NewYork,NY(1984).此外，本领i或已知^f旦未具体描述的免疫学标准方法可参照CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley&Sons,NewYork;Stites等人.(Eds.)，ImmunochemicalProtocols(MethodsinMolecularBiology),2ndedition,J,D.Pound(Ed,)，HumanaPress(1998)，Weir'sHandbookofExperimentalImmunology,5thedition,D.M。Weir(Ed.),BlackwellPublishers(1996)，MethodsinCellularImmunology,2ndedition,R.Fernandez-Botran,CRCPress(2001);BasicandClinicalImmunology,8thedition,Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)andMishellandShiigi(Eds.),SelectedMethodsinCellularImmunology,W,H.FreemanandCo,，NewYork(1980)。阐述了免疫学基本原理的标准参考著作包括CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley&Sons,NewYork;Klein,J,;KubyImmunology,4thedition,R.A.Goldsby，等人.,H.Freeman&Co.(2000);BasicandClinicalImmunology,M,Peakman，等人。，ChurchillLivingstone(1997);Immunology,6thedition,I.Roitt,等人.，Mosby，London(2001》CellularandMolecularImmunology,5thedition;A.K.Abbas,A.H.Lichtman，Elsevier-HealthSciencesDivision(2005);ImmunologyMethodsManual:TheComprehensiveSourcebookofTechniques(4VolumeSet),1stedition,I.Lefkovits，AcademicPress(1997)Immunology,5thedition,R,A.Goldsby,等人.，W.H.Freeman(2002);MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,3rdEdition,J.W.Goding，AcademicPress(1996》Immunology:TheScienceofSelf-NonselfDiscrimination,JohnWiley&Sons,NewYork(1982);Kennett,R.,等人.(Eds.),MonoclonalAntibodies,Hybridoma:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,PlenumPress,NewYork(1980》Campbell,A.,"MonoclonalAntibodyTechnology"inBurden,R.,等人.(Eds.)，LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology,Vol.13,Elsevere,Amsterdam(1984).前参考.具体实施例方式实施例1.Sp35(LINGO-1)在大鼠中脑多巴胺能(DA)神经元中得到表达Sp35的表达可通过免疫组化和/或原位杂交在出生后7日(P7阶段)于大鼠脑部、成年大鼠脑部以及大鼠原代胚胎培养(El5)中进行评估。可用处于上述P7和成年阶段的大鼠制备冷冻大鼠脑部切片。可釆用下列方案并参照Mi等人.A^wosc/.7:221-228(2004)的描述制备脑部切片以供原位杂交。^使用002将动物处死。快速耳又出脑部并以10%中性1￡冲福尔马#木固定48小时。以含30%蔗糖的PBS平衡脑部以进行冷冻保护和连续切片。对随机选择的包含总腹侧中脑的每第6个的切片系列进行原位杂交。以地高辛标记的Sp35反义和正义RNA#冢测脑部切片。参照生产商说明使用荧光性TSA和抗地高辛结合抗体试剂盒(PerkinElmer)对切片染色。然后以DAPI(Sigma)和抗酪氨酸羟化酶(TH)抗体(Chemicon)对切片染色。在P7阶萃殳，Sp35mRNA在中脑酪氨酸羟化酶(TH)-阳性DA神经元适度表达。才艮据之前的报导，在小脑中还有强烈的Sp35mRNA表达，而在紋状体中有4交弱的表达。参见Mi等人.7Vewroyc,'.7:221-228(2004)。然而，在成年中月亩中，TH阳性DA神经元中的Sp35mRNA表达相刈-4交少。原代胚胎腹侧中脑(VM)培养物可参照Lin,L.等人.M/.Ce〃脸w層c/.28:547-555(2005)的描述从E15SpragueDawley大鼠中分离得到。简单的说，在含有热灭活马血清(10%)、葡萄糖(6.0mg/ml)、青霉素(10,000U/ml)、链霉素(10mg/ml;Sigma)和谷氨酰胺(2mM;Gibco)的冷Dulbecco改良EAGLE培养基(DMEM;Gibco，NY)中用抛光巴斯德移液管积4成石皮石争脑组织。在培养基中重新悬浮2xl()5细月包，并4妄种至24孔盘(Falcon)中各樣t孔的以15mg/ml聚-L-鸟氨酸(Sigma)和1mg/ml纤维连接蛋白(Sigma)预涂的盖玻片上。可参照Lin，L.等人7kfo/,CW/.A^"rosc/.28:547-555(2005)的描述对脑部切片和VM原代培养物进行荧光免疫组化。简单地说，以100/o普通山羊血清(JacksonLaboratories,Maine)和含0.1%TritonX-100的0.1M磷酸盐緩冲液溶液(PBS)在室温下处理约含2xl()S细胞的盖玻片30分钟。随后，将盖玻片与一抗在4'C下孵育过夜，然后与直接结合荧光的适当二抗在室温下孵育1小时。可采用以1:300稀释的针对酪氨酸羟化酶(TH)的抗体(Chemicon)(—种DA3申经元标记)。可釆用以1:500的浓度与Alexa488(MolecularProbes)结合的二抗。缺少一抗或以过量抗原预孵育的抗体可用作对照。可通过共焦成像系统(LSM510META,CarlZeiss,NY)才企查荧光信号。在原代VM培养物中，可在Sp35和TH染色共存的DA神经元观察到Sp35。当Sp35特异性抗体与过量Sp35蛋白预孵育时未4企测到染色。Sp35还可在人黑质和啮齿动物中脑的非TH神经元中表达。这些试马全显示Sp35在胚胎中脑(E15)和P7DA神经元中表达，在成年VM中以專交小程度表达。免疫组化研究还显示Sp35蛋白不仅在神经突中表达，还在中脑原代培养的DA神经元的质膜中表达。实施例2.Sp35(LINGO-l)拮抗剂促进DA神经突体外生长和存活Sp35的细胞质区包含了规范的EGFR样酪氨S臾磷酸化位点，因而具有直接或间接参与信号转导的潜力。为评估细胞质区的重要性，可构建缺失细月包质区(SEQIDNO:2的氨基酸34-581或34-548)的截短型Sp35(DN-Sp35)。据显示缺失了细胞质区的截短型Sp35可通过与Nogo受体l(NgRl)和p75NTR和/或如TAJ/TROY等其它受体形成复合物作为显性阴性(DN)分子阻止信号转导。参见Shao等人，7Ve腳w45:353-359(2005)以及Park等人.7Vew謂45:345-351(2005)。表达全长(FL)-Sp35(SEQIDNO:2的氨基酸34-614)或显性阴性(DN)-Sp35的慢病毒可采用下列方法以及Mi等人.Neurosci.7:221-228(2004)的描述进行构建。将全长和截短型(DN-Sp35)人Sp35的cDNA序列亚克隆至pSECTAG-A(Invitrogen)以表达HA标i己的融合蛋白，然后连4妻至HRST-IRESeGFP载体。将慢病毒构建体和水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)及包装载体delta8.9参照Wang等人.Nature417:941-944(2002)的描述共转染进入293T细胞以生成重组慢病毒。以生成FL-Sp35、显性DN-Sp35的'l"曼病毒或以载体对照转导大鼠原代VM神经元培养物。各病毒组以1或5的感染复凄t(MOI)添加入VM一申经元i咅养物中。将细月包i咅养24小时，然后以含4%的多聚曱醛的PB(pH7.4)在室温下固定30分钟。在这些感染神经元中检查神经突的生长。为检查神经突延长或细胞数量，可釆用全能Axioskop2显孩吏4竟(CarlZeiss,NY)和Steroinvestigator图#4甫才足设备和软件(MicroBrightField,VT)从各个樣t孔捕才足多个碎见野。DN-Sp35感染的TH-阳性神经元中的神经突的生长得到了促进。相反的，TH-阳性神经元在以FL-Sp35转导时未显示神经突长度的差异。这些观察显示DN-Sp35扰乱了内源性Sp35的功能，乂人而促进了DA神经突生长。参见图1。Sp35-Fc蛋白(与Fc区融合的SEQIDNO:2的氨基酸长用作FL-Sp35功能的拮抗剂。对照-Fc和Sp35-Fc可参照Mi等人，7W^A^wnwc/.7:221-228(2004)的描述进4亍制备。简单;也"i兌，4夺人Sp35的氨基酸1-532融合至人IgGl的铰链和Fc区。在CHO细胞中表达Sp35-Fc多肽并在蛋白A琼脂糖(Pharmacia)上进行纯化。通过在还原条件下于SDS-PAGE凝月交上进行凝月交电泳并与已知蛋白标准对照测得纯化后蛋白(>95%纯)的分子量为90kDa。在非还原条件下于SDS-PAGE凝胶上进4亍凝胶电泳并与已知标准对照测得该蛋白的分子量为180kDa。向VM神经元的培养物外源4是供纯化Sp35-Fc多肽。神经突生长可通过添加过量Sp35-Fc得到促进。参见图1。外源才是供的对照IgG多肽未能促进DA神经突生长。此外，还对以表达DN-Sp35的慢病毒处理的培养物的TH神经突长度进行了检测。以DN-Sp35和Sp35-Fc处理的培养物显著长于以对照慢病毒(p〈0.05，单因素方差分析)和对照Fc处理的培养物(p0.003)。DN-Sp35的作用还在以1-曱基-苯基吡啶离子(MPP+)处理的原代VM培养物中得到了测-睑。MPP+通常i秀导细月包原代DA神经元细胞的细胞死亡，并且是研究PD的成熟才莫型系统。参见Gille等人，Jm27Vl^c"d5W1018:533-540(2004)。参照上文描述以十曼病毒感染VM神经元。在第4日将i咅养细月包对10jiMMPP+暴露48小时，然后(第6日)进行固定。DN-Sp35在大鼠中脑原代培养中对暴露至10(iMMPP+TH-阳性神经元加以^呆护。参见图2。在暴露至MPP十时DN-Sp35转导细胞中的TH神经元的数量明显高于FL-Sp35和对照转导神经元(p0.05,单因素方差分析)。此外，如美国临时专利申请60/697,336所描述(其全文在此引用作为参考)，暴露至MPP+的原代VM培养物可通过暴露至Sp35-Fc和Sp35拮抗剂、抗体1A7而防止细月包死亡。以Sp35-Fc和1A7抗体处理的细月包与Fc或对照IgG处理的培养物相比，前者具有对抗TH-阳性神经元的MPP+毒斗生的显著的j呆4户4乍用(1A7的p<0.01,Sp35-Fc的p<0.05,单因素方差分析)。参见图3。这些结果显示抑制内源性Sp35可使DA神经元在MPP+神经毒素暴露中得到保护。实施例3.阻断Sp35活性豫导Akt磷酸化Akt是PI3激酶存活途径的下游效应物。Williams及Doherty7kfo/.Ce〃.A^wrosc/.13:272-280(1999)。大鼠原^VMi咅养物中的普通Akt》粦酸化水平可通过Western印迹分4斤进4亍评估。实施例2中已经描述了采用表达FL-Sp35或DN-Sp35(HA-标记)的慢病毒转导大鼠原代VM神经元。在48小时后收集转导的大鼠原代VM神经元，并在500pl溶解緩冲液(50mMHEPES(pH7.5);150mMNaCl;1.5mMMgCl2;lmMEDTA;1%TritonX-100以及10%甘油)中于4。C下溶解30分钟。在4-20%SDS-PAGE凝月交(Bio-Rad，CA)中将上清液电泳，转移至免疫印迹力莫并以抗-HA亲和基质(Roche,Switzerland)或^t画石粦Akt4元体(Cel1Signaling,MA)或4元-总、Akt抗体(CellSignaling,MA)进行:探测。与通过表达FL-Sp35或对照载体的f曼病毒转导的大鼠原代VM神经元相比，以表达DN-Sp35的慢病毒转导的大鼠原代VM神经元的Akt^岸酸化显著上升。参见图4。这些结果显示DN-Sp35通过参与PI3/Akt信号转导途径部分影响TH-阳性神经元的存活。实施例4.Sp35敲除小鼠的构建如Schiemann等人.(Science293:2111-2114(2001)所述，Sp35敲除小鼠可通过靶向Sp35的完整、单个外显子编码序列的GFP/Neo(绿色荧光蛋白/新霉素)置换性载体进行构建。从lambda基因组库(Stratagene#946313)分离小鼠基因组129/SvJDNA。将14.6-kbEcoRV片段亚克隆进入pBSK+，然后通过同源性重组在细菌内孝巴向以在起始ATG插入eGFPQ40才艮告基因。最终的构建体删除了Sp35的单独外显子编码序列的完整1-1841核苷酸。该构建体可用于在D3(129/Sv)胚胎干细胞中靶向Sp35位点。正确靶向的细月包可通过对EcoRI-消4匕的胚胎干细J包DNA的Southern印迹进行鉴定，将该正确靶向的细胞注射进入C57B1/6胚嚢以生成嵌合小鼠。将嵌合体杂交进入C57B1/6小鼠以生成杂合子首建小鼠。通过尾DNA的三引物PCR测定基因型。在35次循环反应中(94。C反应20s,65°C反应30s，72°C反应30s)，利用正向引物5'-CTATCCAAGCACTGCCTGCTC-3'(SEQIDNO:6)和两个反向引物5'-GAGTTCTAGCTCCTCCAGGTGTG-3'(SEQIDNO:7)及5'画GATGCCCTTCAGCTCGATGCG-3'(SEQIDNO:,8)分别4寻到了275bp野生型和356bp突变等位基因产物。参见Mi，S.等人.A^f.A^/royc/.7:221228(2004)。Sp35基因缺失可通过Southern印迹、RT-PCR和norther印迹分冲斤进4亍-睑i正。在野生型小鼠的northern印迹和RT-PCR中测得了明显条带，而在敲除小鼠中则发现条带完全缺失。杂合子的Southern印迹同时显示了野生型和修饰的Sp35等位基因。Sp35敲除小鼠表现正常，未有明显的生理异常或行为、运动或繁殖力上的变化。杂合子Fl后代同胎仔畜的大小各不相同。Sp35敲除小鼠的构建可参见Mi等人.Ato.A^^wc/ewce7:221-228(2004),在此引用作为参考。实施例5.Sp35敲除小鼠中DA神经元存活和再生的体内6-OHDA测定检查Sp35敲除小鼠以测定没有Sp35的小鼠其损伤后的脑中多巴胺能途径中的神经元存活和功能恢复是否得到提高。使用克他命和甲苯噻，秦(分别为100和10mg/kgip)麻醉13只Sp35敲除小鼠和13只野生型同胎4子畜对照小鼠，并置于立体定向4义以接受单侧紋状体6-羟多巴胺盐酸(6-OHDA)注射。以优碘和乙醇才察才式手术位置，形成0.5cm的中线径向切口以暴露前囟。在注射^f立点上的颅骨上形成小钻孔，并在AP+04、侧面1.5mm、中线侧面、头骨表面的腹侧DV-2。5mm的坐标处将溶解了10吗6-OHDA的0.02%抗坏血商臾/盐水(Sigma)注射入左紋状体。釆用26规^各的10jil汉密尔顿注射器以0,5(il/min的速率灌llr6-OHDA达2分多钟。在灌输6-OHDA后，将套管留在原处2分钟，然后緩l曼拔出。-使用自动夹闭合切口，将小鼠;改置在电热垫上直至乂人麻醉中恢复。在小鼠故状体注射6-OHDA可使DA轴突和神经元逐渐减少，这是研究PD的成熟才莫型系统。参见Brundin等人.5ra/wi仏366:346-349(1986)。在6-OHDA灌输后1,2,3和4周后进行i走转测试。为力走转测试，以0.4mg/kg的剂量皮下注射含有阿朴吗啡的0.02%抗坏血酸。计算30分4中内相乂于损伤侧的凝^争。"旋转行为"指对黑质紋状体多巴胺途径单侧损伤的动物施用如阿朴吗啡等多巴胺激动剂或如苯丙胺等多巴胺释》文剂时所显示的行为。动物将反复旋转以远离脑部受紋状体多巴胺受体刺激更大的一侧。旋转响应的量级(即，进行旋转的数量)与黑质紋状体多巴胺途径受损的程度成正比。例如，参见Fuxe等人，P/w厂画co/.rto.2:41-47(1976)。在》走转4亍为测定至少24小时后将小鼠通过C02窒息处死。快速耳又出脑部并以10%中性緩冲福尔马林固定48小时。以含30%蔗糖的PBS平衡脑部以进行冷冻保护和连续切片。对随机选择的包含总腹侧中脑的每第6个切片的切片系列进行常规ABC免疫组化。将切片用抗-酪氨酸羟化酶(TH)(1:300，PelFreez,AK)在4。C下孵育过夜，然后分别用生物素化的山羊抗-绵羊二抗(l:300,VectorLaboratories,CA)和纟连霉亲和素-生物素复合物在室温下孵育1小时。通过4臬增强的3,3'-二氨基联苯胺溶液(VectorLaboratories,CA)孵育对染色可视化。将一抗缺失作为对照。采用全能Axioskop2显微镜(CarlZeiss,NY)和Steroinvestigator图<象4甫才足i殳备和4欠件(MicroBrightField,VT)对染色切片进行体4见学研究。采用光组分探测对TH阳性细月包进4亍计lt。通过Microbrightfield寿欠4牛获4寻估计的细胞总数。可通过研究者盲选群组治疗进行体视学分析。在4企测的各时间点上，敲除小鼠的运动不对称显著{氐于野生型同胎^f子畜对照(pO.OOl,双因素方差分析)。参见，图5。在6-OHDA注射32天后的尸体解剖分析显示损伤中脑里的TH神经元数量明显减少。体视学分析显示野生型和敲除小鼠的中脑里的TH神经元的数量并无不同(p〉0.05，非配对t才t验)。参见图6A。为了校正由基因型产生的差异，各动物损伤中脑的TH神经元数量被表示为未损伤侧数量的百分比。统计学分析显示敲除小鼠比野生型小鼠中具有更高比例的TH神经元(口=0.002,非配对t冲企-验)，/人而证明了与野生型同胎仔畜对照相比敲除小鼠在6-OHDA模型中得到了保护。参见图6B。在腹侧被盖区(VTA，A10区)和黑质致密部(SNc,A9区)区i或采用Blum，M.,A^3/.A^i^c^c/.1:374-377(1998)中描述的无偏光分离法对TH神经元的数量进行体视学计数。KO和WT小鼠的TH神经元数量上并无区别(Fi48=1.321,p>0.05)。然而，损伤和未损伤侧的TH细胞数量明显不同(Fw^27.53,p〈0.0001)，且损伤和未损伤侧的TH细胞数量明显受到基因型的影响(基因型和脑侧之间的相互作用)(F^8二4,34，pX).05)。参见图8。将各动物的损伤侧的神经元数量通过未损伤侧的神经元数量归一化以防止基因型的影响。统计学分析显示KO小鼠的TH神经元数量(平均土s.e.m.:79%±4.5%)高于WT小鼠(56%±5.5%)(非配对学生t才企-睑，t(24)=3.34;p=0.003)，这证明了敲除在这些小鼠中的神经保护作用。在6-OHDA诱导的试-验性帕金森综合症才莫型的野生型小鼠中，损伤3日后紋状体中的Sp35蛋白有所上升。参见图9。在野生型小鼠紋状体施用6-OHDA3日后，与对照侧(对照)相比损伤侧(6-OHDA)的Sp354寻到上调。在各个时间点上(第0,3,7和15日)4企查3只小鼠(非配，十学生t4全马全，p<0.05)。实施例6Sp35敲除小鼠中DA神经元存活和再生的体内MPTP测定为进一步确认无Sp35的小鼠是否提高了损伤后的脑中多巴胺能途径中的神经元存活和功能恢复，还可在PD的MPTP模型中评估小鼠。以MPTP盐酸(Sigma)腹腔注射13只WT和14只Sp35敲除小鼠四次，各注射间隔两小时。例如，参见BattagliaG等人.，脸腳//2"，歸一45:155-166(2003)。所有的动物在注射后7日处死。将小鼠通过C02窒息处死。快速取出脑部并以10%中性緩沖福尔马林固定48小时。以含30%蔗糖的PBS平4lf脑部以进行冷冻保护和连续切片。采用全能Axioskop2显樣i镜(CarlZeiss,NY)和Steroinvestigator图^f象4乾才足i殳备和寿欠^f牛(MicroBrightField，VT)只于染色切片进行体视学研究。采用光组分探测对TH阳性细胞进行计数。通过Microbrightfield软件获得估计的细胞总数。可通过研究者盲选群组治疗进行体视学分析。在MPTP处理7天后的尸体解剖体^L学分析显示KO小鼠的中脑中的TH神经元数量高于WT小鼠。参见图6C。在另一试-验中，采用PD的MPTP才莫型对10只KO小鼠和10只WT同胎仔畜进行了评估。以盐水注射的WT(r^7)和KO(r^8)小鼠作为对照。在MPTP处理7天后的尸体解剖体视学分析显示黑质致密部(SNc，A9区)中的TH细胞数量与对照WT和KO小鼠之间并无区别。然而，与;容J某处理WT和KO小鼠相比，以MPTP处理的WT小鼠的SNc中TH一申经元ft量有所减少(分别为Kruskal-Wallis才企-验，p<0.001)。参见图10。对照和MPTP处理的KO小鼠的TH神经元H量并无统计学差异。同才羊4企测了对照和MPTP处理的KO和WTd、鼠的紋状体多巴胺水平。在冷冻的0.1M高氯酸(PCA,约100nl/mg组织)中将切开的紋状体超声并离心。参照Yang,L.等人，Exp.Neurol.191:86-93(2005)的描述耳又上清液进^f亍多巴胺4企测。简单地i兌，采用含有0.1MLiH2P04,0,85mM1-辛基石黄酸和10。/。(v/v)甲醇的流动相通过80x4.6mmCl8柱(ESA,Inc.,Chelmsford,MA)等度洗脱15上清液，并用双通道CoulochemII电化学才企测器(ESA,Inc.，Chelmsford,MA)进行4企测。多巴胺的浓度表示为纳克/毫克蛋白。采用Bradford法(Bio-RadLaboratories,Hercules，CA)和PerkinElmerBioAssayReader(Norwalk，CT)才企测组织勻浆中的蛋白浓度。MPTP处理的WT中的紋状体多巴胺水平{氐于对照WT小鼠(Kruskal-Wallis才企-验，pO.Ol)和对照KO小鼠(p0.05)。参见图11。对照和MPTP处理的KO小鼠多巴胺水平并无统计学差异，这与6-OHDA范例中同辨^见察到的4申经〗呆护相一致。为测定Sp35基因切除是否改变MPTP毒素:J聂耳又和代ii射，可在MPTP处理90分钟后测定Sp35KO和WT(各组均为n=6)中的紋状体MPP+水平。为测定MPP+，可于0.1MPCA中将紋状体组织超声并离心，并将等分的上清液注射至META250x4.6C18柱(ESA，Inc.,Chelmsford,MA)。以含有3mM四丁基石克酸氩4妄、0.25mM1-庚基石黄酸和10%异丙醇的20mM硼酸/硼酸钠》爰沖液(pH7.75)等度洗脱样本。以i殳置为激发295nm和发射375nm的荧光才全测器4企测MPP+。在MPTP处理后，KO和WT中的MPP+水平并无显著区别(非配只于学生牙企马全，"10一1.69;p〉0.05，平均士s.e.m"WT为39.68±3.92且KO为62.06±12.67)。Western印迹分析还显示Sp35KO小鼠中的多巴胺运输(DAT)水平未改变。见图14。此夕卜，还对暴露至MPTP和对照的KO和WT小鼠的VM组织溶解产物进4亍了Western印迹。在500pl溶解《爰冲'液中溶解小鼠组织[50mMHEPES,pH7,5，，150mMNaCl，1.5mMMgCl2，1mMEDTA,1%Tritonx-lOO，10%甘油，含完全蛋白酶抑制剂(Roche，Basel,Switzerland)和石粦酉臾酶承卩制剂(Sigma)]。^夸上清液在4画20%或10%SDS-PAGE凝月交(Bio-Rad,Hercules,CA)中电泳，并以抗-磷國Akt和抗Akt以及抗國EGFR抗体(CellSignaling,Beverly,MA)进行免疫印迹。可发现与暴露至MPTP的WT同胎仔畜对照相比，暴露至MPTP的KO小鼠的腹侧中脑中的磷酸化Akt有所上升。参见图6D-6F。此外，还向C57BL/6小鼠(>1=9)的紋状体单侧注射了作为显性-阴性分子的截短型Sp35—Sp35-Fc蛋白(6。5iag4il,总计2jal)。小鼠在手术后6日接受MPTP,然后继续存活7天。这些动物中TH神经元数量的尸体解剖分析显示同侧SNc比相对侧SNc的数量更高(非配对学生t抬二睑；《16)=2.114;p<0.05)。参见图15A。Sp35國Fc注射的脑部具有更高的紋状体多巴胺水平(Mann-Whitney验,pO.05)，从而显示了神经保护作用。参见图15B。此夕卜，在脑部Sp35-Fc注射侧和相对侧中，MPTP注射后90分钟才企测的紋状体MPP+水平并无区别。参见图15C。实施例7.RNAi阻4中'隄病毒的生成Sp35特异性RNAi可用于消除DA神经元中的Sp35表达，/人而4企查Sp35如何促进DA神经突存活、再生和分化。以携带了按下文制备的Sp35-特异性RNAi序列或对照RNAi的慢病毒感染DA-中经元i咅养物。比较鼠和大鼠Sp35DNA序列以发现可用作候选小发夹RNAs(shRNA)的同源区。用于Sp35RNAi十曼病毒表达的CH324可通过将寡核苷酸LV1-035和LV1-036退火并连4妻至Hpal和Xhol消化的pLL3.7进行构建。关于该pLL3,7载体、附加方法及病毒生产可参见Rubi励n等人，Nat.Genet.33，401-06(2003)。Sp35RNAi寡聚核苦g交可/人MWG购4寻并具有如下序列LV1-035C正义寡聚)-5'-TGATCGTCATCCTGCTAGACTTCAAGAGAGTCTAGCAGGATGACGATCTTTTTTC-3'(SEQIDNO:9)以及LVl-036(反义寡聚)5'-TCGAGAAAAAAGATCGTCATCCTGCTAGACTCTCTTGAAGTCTAGCAGGATGACGATCA-3'(SEQIDNO:10).除以小写字母显示的核苷S吏替换外，对照RNAi具有相同的寡聚核苷酸序列5'-TGATCcTCATcCttCTAtACTTCAAGAGAGTgTAGCAGGATGAcGATCTTTTTTCTCGA-3'(SEQIDNO:11)以及5'-TCGAGAAAAAAGATCGTCATCCTGCTAGACTCTCTTGAAGTaTAGaAGGATGACGATCA-3'.(SEQIDNO:12).在生成慢病毒前，来自pLL3.7的DNA或pLL3.7中的候选shRNA将与鼠Sp35-HA标记质粒以5比1的比例共转染至6孔板中的CHO细胞。可通过对转染CHO细胞溶解产物的Sp35-HA标签进行Western印迹才企测或对由重复孩i孔制备的总RNA的northen印迹进4亍阻氺卩分一斤。i亥印迹以Sp35cDNA片,殳进^f亍4罙观'J。分析在转染后48小时进行。与预计相同，CH324RNAi-处理的CHO细月包中的Sp35mRNA比对照处理细月包少l(H咅。实施例8.Sp35表达的Sp35-特异性RNAi阻抑可以促进DA神经元存活和分化为^r测DA神经元中Sp35表达缺失的影响，可采用如实施例7描述的消除Sp35表达的表达RNAi分子的慢病毒感染大鼠原4气VM神经元。可参照Rubinson等人和实施例7的描述生成携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒。用对照或Sp35RNAi以1-5的感染复数(MOI)来感染大鼠原代VM神经元培养物。GFP阳性细胞指示了'f曼病毒感染的DA神经元。Sp35抑制的作用可通过DA神经元延伸和存活进4于4企测。实施例9.Sp35-Fc和Sp351A7抗体才是高了MPP+处理的VM培养物中的EGFR表达和Akt磷酸化为才全查MPP+处理的VMi咅养物中Akt的石粦酸4t以及Sp35和EGFR之间的相互作用，可乂人E15或E16SpragueDawley大鼠(CharlesRiver，MA)的腹侧中脑获取DA神经元的原代培养物。参见Shah等人，JCe〃P/z^w'o/inpress.简要地说，在含有热灭活马血清(10%)、葡萄#唐(6。0mg/ml)、青霉素(10，000U/ml)、4连霉素(10mg/ml;Sigma)-口谷氨酰胺(2mM;Gibco)的冷Dulbecco文良EAGLE:晤养基(DMEM;Gibco，NY)中用抛光巴斯德移液管4几械石皮石争组织。在培养基中重新悬浮2xl()S细胞，并接种至24孔盘(Falcon)中各微孑L的以15mg/ml聚画L陽鸟氨酸(Sigma)和1mg/ml纤维连接蛋白(Sigma)预涂的盖3皮片。在第4天吸出未贴壁的细月包，并添力口lml含10pg/ml的LINGO-1-Fc、1A7,对照IgG或对照-Fc的新鲜i告养基。8小时后，将培养细胞暴露至10pMMPP+48小时。在500jal溶解纟爰冲液中溶解培养的VM细月包[50mMHEPES,pH7.5，，150mMNaCl，1.5mMMgCl2,1mMEDTA,1%Tritonx-100，10%甘油，含完全蛋白酶抑制剂(Roche，Basel,Switzerland)和石粦酸酶4中制剂(Sigma)]。将上清液在4-20%或10%SDS-PAGE凝月交(Bio-Rad，Hercules,CA)中电'泳，并以#元-石粦-Akt和4元Akt以及4元-EGFR4元体(CellSignaling,Beverly,MA)或抗-月几动蛋白抗体进4亍免疫印迹。与1A7抗体和Sp35-Fc蛋白孵育的MPP+处理的VM神经元培养物分别比对照IgG和对照-Fc蛋白孵育的培养物具有更高的EGFR和Akt磷酸化(F3，12=23.645;lA7p<0.001;F3,12=18.89,Sp-Fcp<0,001)。参见图7A-7C以及7G。jt匕夕卜，全长Sp354是高了EGFR表达。^口实施侈'J2戶斤述，采用FL-Sp35慢病毒在2天内以0，1和5的MOI转染COS7细胞。才全测各MOI下转染细月包中的EGFR蛋白表达。如图12所示，EGFR的表达水平以剂量依赖形式下降。可采用抗-Sp35(lA7或2F3)或抗-EGFR抗体进行免疫沉淀-验证来自WT和KO小鼠的培养细月包和VM脑组织中Sp35和EGFR之间的直接相互作用(参见图7D-7F)。以Sp35,EGFR和Sp35/EGFR转染COS-7或HEK293细月包(100mmi咅养皿)。在48小时后采集细胞，并在lml溶解緩沖液(50mMHEPES，pH7.5，150mMNaCl,1.5mMMgCl2，1mMEDTA,1%Tritonx-100,10%甘油)或RIPA丟爰冲液(50mMTRIS,pH7.2，1%TritonX國IOO，0.5%脱氧月旦酸钠，0.1%SDS，150mMNaCl，10mMMgCl2,5%甘油)中于4。C下溶解30分钟。以14，000xg离心15分钟后，将上清液与蛋白A/G-琼脂斗唐5朱(SantaCruzBiotechnology)在4。C下孵育l小时，然后一夺200pl预清除的〉容解产物与抗隱EGFR(SantaCruzBiotechnology)或抗-Sp35抗体(Biogenldee，参见美国临时专利申i青60/697,336,其内容在此全文引用作为参考)在4。C下孵育1小时，然后以蛋白A/G-琼脂4唐J朱进^f亍处理。以溶解《爰冲液洗涤多朱子3次，在Laemmli样本緩沖液中煮沸，上样至4-20%SDS-PAGE，并采用抗-EGFR抗体或抗-Sp35抗体进4亍Western印迹分片斤。以抗-兔IgG-HRP显示EGFR和Sp35抗体。参照上文描述，在RDPA緩冲液中溶解Sp35KO或WTVMs并以蛋白A/G-琼脂糖珠进行预清除。然后采用抗-Sp35对lmg的腹侧中脑萃取物于4。C下免疫沉淀过夜，然后以蛋白A/G-琼脂糖^M浮育1小时。在腹侧中脑培养物中还^L察到Sp35和EGFR之间的直4妄相互作用。参见图7E。此夕卜，在与Sp35和EGFR共转染细月包系的IP试-睑中，抗-Sp35抗体1A7阻断了Sp35与EGFR的结合，而抗-Sp35抗体2F3未阻断结合。参见图7F。该试验中OMgp被用作抗体结合的对照。实施例10.对来自帕金森疾病(PD)死亡患者的黑质的存活多巴胺能神经元中的Sp35表达进行了检测。死后组织的获取得到了哈佛脑组织资源中心的同意。下文的表2包含了有关本实施例中描述的i式马全中所用的PD患者以及同龄只于照《且的4言息。表2有关PD患者和同龄对照组的信息<table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage124</column></row><table>通过原位杂交对来自上述患者的存活多巴胺能神经元中的Sp35表达进行了4企测。将SN组织包埋于最佳切削温度(OCT)化合物中按照Mi等人.Ato.A^wmsc/.7:221-228(2004)的描述，进行冷冻切片的制备、处理和以地高辛标记的Sp35反义和正义RNA探测。参照生产商说明使用荧光性TSA和抗地高辛结合抗体、试剂盒(PerkinElmer,Wellesley，MA)对切片染色。然后以抗画TH(Chemicon,Temecula,CA)和DAPI(Sigma)只于切片染色。PD死后组织(11=6)的SN中的存活多巴胺能神经元的Sp35相对同龄对照组(r^6)纟寻到了上调。还可采用半定量PCR对表2中所述患者的Sp35表达进行检观'J。参照生产商说明使用AbsolutelyRNAminiprepkit试剂盒(Strategene)从人SN组织萃取mRNA。采用Sp35正向引物-5'-AGAGACATGCGATTGGTGA画3'(SEQIDNO:14)和反向引物5'-AGAGATGTAGACGAGGTCATT画3'(SEQIDNO:15)扩增Sp35mRNA。如图13A所示，PD死后《且织的SN中的存活多巴胺能一申经元的Sp35相对同龄对照组得到了上调。PDSN中的Sp35mRNA水平统计地显著高于对照组(非配对学生t4全验；/(10)=2,280;p<0.05)。参见图13B。*氺*本发明中的特定实施例意在对本发明的某一方面进行单独阐述，并非对本发明进行限制，且任意功能性相同的组合物或方法亦在本发明范围之内。事实上，通过前述和附图，在本文所示和所述的调整之外对本发明所进行的各种调整对本领域的纟支术人员而言是显而易见的。该种调整意在落入权利要求的范围之内。为参考，其引用程度如同每一个单独的出版物或专利申请均为特定的单独的引用作为参考。权利要求1.一种促进多巴胺能神经元再生、生长或存活的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的包含选自以下组合的Sp35拮抗剂的组合物相接触(i)可溶性Sp35多肽；(ii)Sp35抗体或其免疫特异性片段；(iii)Sp35拮抗剂多聚核苷酸，(iv)Sp35适体；以及(v)两种或多种所述Sp35拮抗剂的组合。2.—种在哺乳动物中促进多巴胺能神经元再生、生长和存活的方法，其包括向有此需要的哺乳动物施用有效量的包含选自以下组合的Sp35拮抗剂的组合物(i)可溶性Sp35多肽；(ii)Sp354元体或其片,殳；(iii)Sp35拮抗剂多聚核苷酸，以及(iv)Sp35适体；以及(v)两种或多种所述Sp35拮4元剂的《且合。3.如4又利要求2所述的方法，其中所述的哺乳动物患有与多巴胺能神经元变性相关的疾病、紊乱或损伤。4.如权利要求3所述的方法，其中所述的疾病、紊乱或损伤选自由帕金森氏病(PD)、多系统萎缩、紋状体黑质变性、橄榄脑桥小脑萎缩、Shy-Drager综合症、具有帕金森特4i的运动神经元疾病、^各易体痴呆、进^f亍性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、额颞叶痴呆、具有帕金森病4正的阿尔茨海默病、Wilson病、Hallervordern画Spatz病、Chediak-Hagashi病、SCA-3脊骨逸'J、月亩性共济失调、X-连锁的肌张力障碍-帕金森综合征(DYT3)、亨廷顿舞蹈病(Westphal变体)、朊蛋白病、Jacob-Creutzfeldt病(CJD)、血管性帕金森综合征、脑性瘫痪、重复头部外伤、脑炎后帕金森综合症、神经系梅毒和精神分裂症构成的组合。5.如权利要求4所述的方法，其中所述的疾病、紊乱或损伤为帕金才架氏病(PD)。6.如斥又利要求1至5任意一项所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂包含可溶性Sp35多肽。7.如权利要求6所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽包含选自以下组合的Sp35区域(i)Sp35Ig结构域或其片段、变体或衍生物，(ii)Sp35LRR结构i或或其片,殳、变体或书亍生物，(iii)Sp35细胞质区或其片段、变体或衍生物，(iv)Sp35跨膜区或其片段、变体或衍生物，(v)Sp35石咸性区C末端至LRR区或其片,殳、变体或书f生物，以及(vi)(i)至(v)至少两个所述Sp35区i或或其片革殳、变体或书f生物的组合。8.如权利要求6所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽缺失选自以下组合的Sp35区域(i)Sp35Ig结构i或，(ii)Sp35LRR结构域，(iii)Sp35细月包质区，(iv)Sp35跨膜区，(v)Sp35石成性区C末端至LRR结构域，以及(vi)(i)至(v)至少两个所述Sp35区域的组合。9.如片又利要求8所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽击夹失Sp35^争月莫区和Sp35细月包质区。10.如权利要求6至94壬意一项所述的方法，其中所述的可〉容性Sp35多肽包含(i)Sp35LRR结构域或其片段、变体或衍生物，(ii)Sp35碱性区C末端至LRR结构域或其片,殳、变体或书亍生物，以及(iii)Sp35免疫球蛋白(Ig)结构域或其片段、变体或衍生物。11.如权利要求8或9所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽至少包含Sp35LRR结构域的一部分，但缺失Sp35Ig结构域、Sp35碱性区、Sp35跨膜区和Sp35细胞质区。12.如权利要求1至11任意一项所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽包含选自以下组合的多肽片段(i)SEQIDNO:2的氨基酸1至33;(ii)SEQIDNO:2的氨基酸1至35;(iii)SEQIDNO:2的氨基酸34至64;(iv)SEQIDNO(v)SEQIDNO(vi)SEQIDNO(vii)SEQIDNO(viii)SEQIDNO(ix)SEQIDNO(x)SEQIDNO(xi)SEQIDNO(xii)SEQIDNO(xiii)SEQIDNO(xiv)SEQIDNO(XV)SEQIDNO(xvi)SEQIDNO(xvii)SEQIDNO(xviii)SEQIDNO(xix)SEQIDNO(XX)SEQIDNO(xxi)SEQIDNO(xxii)SEQIDNO(xxiii)SEQIDNO(xxiv)SEQIDNO(XXV)SEQIDNO(xxvi)SEQIDNO:2的氨基@吏36至64;:2的氨基酉复66至89;:2的氨基酸90至113;:2的氨基酉臾114至137;:2的氨基酸138至161;:2的氨基酸162至185;:2的氨基酸186至209;:2的氨基fr复210至233;:2的氛基酉史234至257;:2的氛基酉臾258至281;:2的氨基酸282至305;:2的氨基酸306至329;:2的氨基酸330至353;:2的氨基酸363至416;:2的氨基酸417至424;:2的氛基酸419至493;:2的氨基酸494至551;:2的氨基酸1至64;:2的氨基酸1至89;:2的氨基酉吏1至113;:2的氨基酸1至137;:2的氨基酸1至161;:2的氨基酸1至185;(xxvii)SEQIDNO:2的氨基酸]至209;(xxviii)SEQIDNO:2的氨基酸].至233;(xxix)SEQIDNO:2的氨基酸].至257;(xxxx)SEQIDNO:2的氨基酸].至281;(xxxxi)SEQIDNO:2的氨基酸],至305;(xxxxii)SEQIDNO:2的氨基酸〗.至329;(x;xxxiii)SEQIDNO:2的氨基酸]—至353j(xxxxiv)SEQIDNO:2的氨基酸〗.至416;(xxxxv)SEQIDNO:2的氨基酸〗.至424.,(xxxxvi)SEQIDNO:2的氨基酸]至493;(xxxxvii)SEQIDNO:2的氨基酸至551;(xxxxviii)SEQIDNO:2的氨基酸]至531;(iL)SEQIDNO:2的氨基酸—至532;(Li)SEQIDNO:2的氨基酸2;4至89;(Lii)SEQIDNO:2的氨基酸34至113;(Liii)SEQIDNO:2的氨基酸34至137;(Liv)SEQIDNO:2的氨基酸34至161;(Lv)SEQIDNO:2的氨基酸34至185;(Lvi)SEQIDNO:2的氨基酸34至209;(Lvii)SEQIDNO:2的氨基酸34至233;(Lviii)SEQIDNO:2的氨基酸34至257;(Lix)SEQIDNO:2的氨基酸34至281;(Lx)SEQIDNO:2的氨基酸34至305;SEQIDNO:2的氨基酸34至329;(Lxii)SEQIDNO:2的氨基酸34至353;(Lxiii)SEQIDNO:2的氨基酸34至416;(Lxiv)SEQIDNO:2的氨基酸34至424;(Lxv)SEQIDNO::2的氨基酸34至493;(Lxvi)SEQIDNO::2的氨基酸34至551;(Lxxi)SEQIDNO::2的氨基酸34至530;(Lxxii)SEQIDNO::2的氨基酸34至531;(Lxxiii)SEQIDNO:2的氨基酸34至532;(Lxxiv)SEQIDNO::2的氨基酸34至533;(Lxxv)SEQIDNO::2的氨基酸34至534;(Lxxvi)SEQIDNO::2的氨基酸34至535;(Lxxvii)SEQIDNO::2的氨基酸34至536;(Lxxviii)SEQIDNO:2的氨基酸34至537;(Lxxix)SEQIDNO::2的氨基酸34至538;(Lxxx)SEQIDNO::2的氨基酸34至539;(Lxxxi)SEQIDNO:2的氨基酸30至532;(Lxxxii)SEQIDNO:2的氨基酸31至532;(Lxxxiii)SEQIDNO:2的氨基酸32至532;(Lxxxiv)SEQIDNO::2的氨基酸33至532;(Lxxxv)SEQIDNO::2的氨基酸34至532;(Lxxxvi)SEQIDNO::2的氨基酸35至532;(Lxxxvii)SEQIDNO::2的氨基酸36至532;(Lxxx、SEQIDNO(Lxxxix)SEQIDNO(Lxxxx)SEQIDNO(Lxxxxi)SEQIDNO(Lxxx》ii)SEQIDNO(Lxxx〉dii)SEQIDNO(Lxxx>dv)SEQIDNO(Lxxx〉v)SEQIDNO(Lxxx》vi)SEQIDNO(Lxxx》vii)SEQIDNO(Lxxx)rviii)SEQIDNO(Lxxxxvc)SEQIDNO(c)SEQIDNO(ci)SEQIDNO(cii)SEQIDNO(cm)SEQIDNO(civ)SEQIDNO(cv)SEQIDNO(cvi)SEQIDNO(cvii)SEQIDNO(cviii)SEQIDNO(cix)SEQIDNO(cx)SEQIDNO2的氛基酉吏30至531;2的氨基酸31至531;2的氨基酸32至531;2的氨基酸33至531;2的氨基酸34至531;2的氨基酉臾35至531;2的氛基酉臾36至531;2的氛基酉臾36至89;2的氨基酉臾36至113;2的氨基酸36至137;2的氨基酸36至161;2的氨基酸36至185;2的氨基酸36至，;2的氨基酸36至233;2的氨基酸36至257;2的氨基酸36至281;2的氨基酸36至305;:2的氨基酸36至329;:2的氛基酉吏36至353;2的氨基酸36至416;:2的氨基酸36至424;:2的氨基酸36至493;:2的氨基酸36至551;(cxi)SEQIDNO:2的氨基酸36至530;(cxii)SEQIDNO:2的氨基fr复36至531;(cxiii)SEQIDNO:2的氨基酸36至532;(cxiv)SEQIDNO:2的氨基酸36至533;(cxv)SEQIDNO:2的氨基酸36至534;(cxvi)SEQIDNO:2的氨基酸36至535;(cxvii)SEQIDNO:2的氨基酸36至536;(cxviii)SEQIDNO:2的氨基酸36至537;(cxix)SEQIDNO:2的氨基酸36至538;(cxx)SEQIDNO:2的氨基酸36至539;(cxxi)任意所述多肽片段的变体或衍生物，以及(cxxii)至少两个任意所述多肽片,殳或其变体或书f生物的组合。13.如权利要求12所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸残基34-532或SEQIDNO:2的氨基酸36-532。14.如权利要求6-134壬意一项所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽包含Sp35Ig结构域或其片段、变体或衍生物。15.如权利要求6所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸417-493。16.如权利要求6至15任意一项所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽进一步包含非Sp35部分。17.如权利要求16所述的方法，其中所述非Sp35部分为融合至所述可溶性Sp35多月太的多肽。18.如权利要求17所述的方法，其中所述非Sp35部分选自由抗体Ig部分、血清白蛋白部分、靶标部分、报告部分以及纯化促进部分构成的组合。19.如权利要求18所述的方法，其中所述的非Sp35部分为抗体Ig部分。20.如^又利要求19所述的方法，其中所述的抗体Ig部分为4交链和Fc部分。21.如权利要求17所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽与聚合物相结合。22.如权利要求21所述的方法，其中该聚合物选自由聚烷撑二醇、糖聚合物和多肽构成的组合。23.如权利要求22所述的方法，其中该聚合物为聚烷撑二醇。24.如权利要求23所述的方法，其中该聚烷撑二醇为聚乙二醇(PEG)。25.如权利要求23所述的方法，其中所述的可溶性Sp35多肽与1，2，3，或4聚合物相结合。26.如权利要求25所述的方法，其中该聚合物的总分子量为5,000Da至100,000Da。27.如权利要求1至5任意一项所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂包含Sp35抗体或其片段。28.如权利要求27所述的方法，其中所述Sp35抗体或其片萃殳特异性结合基本由选自以下组合的多肽片段组成的表位(i)SEQIDNO:2的氨基酸66至89;(ii)SEQIDNO:2的氨基酸66至113;(iii)SEQIDNO:2的氨基酸66至137;.(iv)SEQIDNO:2的氨基酸90至113;(v)SEQIDNO:2的氨基酸114至137;(vi)SEQIDNO:2的氨基酸138至161;(vii)SEQIDNO:2的氨基酸162至185;(viii)SEQIDNO:2的氨基酸186至209;(ix)SEQIDNO:2的氨基酸210至233;(x)SEQIDNO:2的氨基酸234至257;(xi)SEQIDNO:2的氨基酸258至281;(xii)SEQIDNO:2的氨基酸282至305;(xiii)SEQIDNO:2的氨基酸306至329;(xiv)SEQIDNO:2的氨基酸330至353;(xv)SEQIDNO:2的氨基酸34至64;(xvi)SEQIDNO:2的氨基酸363至416;(xvii)任意所述多肽片段的变体或衍生物；以及(xviii)两个或多个4壬意所述多肽片,殳或其变体或书f生物的组合。29.如权利要求1至5任意一项所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂包含Sp35拮抗剂多聚核苦酸。30.如权利要求29所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂多聚核苦酸选自以下组合(i)反义多聚核苷酸；(ii)核酶；(iii)小干4尤RNA(siRNA);以及(iv)小发夹RNA(shRNA)。31.如权利要求30所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂多聚核普酸为反义多聚核芬酸，其包含了与Sp35mRNA编码部分互补的至少10个石咸基。32.如4又利要求30所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂多聚核苦酸为核酶。33.如权利要求30所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂多聚核苦酸为siRNA。34.如权利要求30所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂多聚核香酸为shRNA。35.如权利要求34所述的方法，其中所述的shRNA包含核香酸序歹'J:UGAUCGUCAUCCUGCUAGACUUCAAGAGAGUCUAGCAGGAUGACGAUCUUUUUUC(SEQIDNO:13)。36.如权利要求1至35任意一项所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂通过弹丸注射或慢性灌输进行施用。37.如权利要求36所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂^皮直接施用至中枢神经系统。38.如权利要求1至37任意一项所述的方法，其包括(a)将多聚核苷酸导入所述多巴胺能神经元，该多聚核苷酸通过可操:作连才妄至表达控制序列编码所述Sp35拮抗剂，以及(b)允许所述Sp35拮抗剂的表达。39.如4又利要求38或394壬意一项所述的方法，其中所述的多聚核香酸通过选自以下组合的方法导入所述多巴胺能神经元(a)转染；(b)电穿孔；(c)4t导；以及(d)直4妻显樣i注射。40.如一又利要求2至37任意一项所述的方法，其包括(a)向所述哺乳动物施用多聚核香酸，该多聚核苷酸通过可#:作连4妄至表达控制序列编码所述Sp35拮抗剂，以及(b)允许所述Sp35拮抗剂的表达。41.如权利要求39所述的方法，其中所述的多聚核苷酸在能够表达所述多聚核苦酸的i咅养宿主细月包中进4亍施用。42.如^又利要求38至41^壬意一项所述的方法，其中所述的多聚核苷酸作为表达载体进4亍施用。43.如权利要求42所述的方法，其中所述的表达载体为病毒载体。44.如4又利要求38至41-f壬意一项所述的方法，其中所述的多聚核苷酸在该一中经系统疾病、紊^L或损伤〗立点或该^立点附近一皮导入所述哺乳动物。45.如4又利要求41所述的方法，其中所述的培养宿主细月包通过以下方法制备，其包括(a)以权利要求40所述的多聚核苷酸或者权利要求42或43所述的载体转化或转染受体宿主细月包，以及(b)培养所述转化或转染宿主细胞。46.如^l利要求41至45^壬意一项所述的方法，其中所述的宿主细月包来自于4寺治疗的哺乳动物。47.如权利要求1至464壬意一项所述的方法，其中所述的Sp35拮抗剂的表达量足以减少对存在于神经系统疾病、紊乱或损伤位点或该位点附近的多巴胺能神经元再生、生长或存活的抑制。48.如权利要求43所述的方法，其中该病毒载体选自由腺病毒载体、甲病毒载体、肠道病毒载体、瘟疫病毒载体、慢病毒载体、杆状病毒载体、疱渗病毒载体、乳多空病毒载体、细小病毒和痘病毒载体构成的组合。49.如4又利要求48所述的方法，其中所述的疱渗病毒载体选自由单纯疱渗病毒载体和EpsteinBarr病毒载体构成的纟且合。50.如权利要求48所述的方法，其中所述的痘病毒载体为痘苗病毒载体。51.如权利要求48所述的方法，其中所述的慢病毒载体为pLL3.7。52.如权利要求48所述的方法，其中所述的细小病毒为腺相关病毒(AAV)。53.如权利要求43或48-52任意一项所述的方法，其中所述的载体的施用途径选自由局部施用、目艮内施用、肠胃外施用、鞘内施用、硬膜下施用和皮下施用构成的组合。54.—种在多巴胺能神经元中承p制EGFR和Sp35相互作用的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的包含选自以下组合的Sp35拮抗剂的组合物相接触(i)可溶性Sp35多肽；(ii)Sp35抗体或其片l殳；(iii)Sp35拮抗剂多聚核香酸；(iv)Sp354吉4元剂适体；以及(v)两种或多种所述Sp35拮抗剂的组合。55.—种^是高多巴胺能神经元中Akt磷酸化的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的包含选自以下组合的Sp35拮抗剂的组合物相4妻触(i)可溶性Sp35多肽；(ii)Sp354元体或其片革殳；(iii)Sp35拮抗剂多聚核苷酸，(iv)Sp35拮抗剂适体；以及(v)两种或多种所述Sp35拮抗剂的组合。56.—种提高多巴胺能神经元中EGFR表达的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的包含选自以下组合的Sp35拮抗剂的组合物相4妄触(i)可溶性Sp35多肽；(ii)Sp35#元体或其片萃殳；(iii)Sp35拮抗剂多聚核苷酸，(iv)Sp35拮抗剂适体；以及(v)两种或多种所述Sp35拮抗剂的组合。全文摘要本发明一般涉及促进多巴胺能神经元再生，生长和存活的方法，其包括将所述多巴胺能神经元与有效量的含Sp35拮抗剂的组合物相接触。此外，本发明一般涉及通过施用Sp35拮抗剂治疗各种与多巴胺能神经元变性或死亡相关的疾病、紊乱或损伤。文档编号A61K38/00GK101355955SQ200680050427公开日2009年1月28日申请日期2006年11月3日优先权日2005年11月4日发明者奥利·艾萨克森,莎米申请人:比奥根艾迪克Ma公司;麦克莱恩医院