一种PET显像剂前体TsOP-(+)-DTBZ及其光学异构体的分离测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种PET显像剂前体TsOP?(+)?DTBZ及其光学异构体的分离测定方法，属于分析化学领域。本发明的分离测定方法为采用Pirkle型手性固定相色谱柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分离。采用本发明的方法，能简单、快速、准确地分离检测出此种PET显像剂前体及其光学异构体，有效控制前体TsOP?(+)?DTBZ的质量。
【专利说明】
一种PET显像剂前体TsOP-(+)-DTBZ及其光学异构体的分离测 定方法
技术领域
[00011本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种PET显像剂前体TsOP-(+)-DTBZ及其光学 异构体的分离测定方法。
【背景技术】
[0002] 帕金森病(PD)是一种常见的中枢神经系统退化性疾病，老年人多见，其症状主要 表现为:震颤、抖动、肌僵直、步态语言障碍，记忆力减退等，严重影响人们的正常工作与生 活，由于人们对早期症状不熟悉，等到确诊已错失治疗最佳时机，故早期诊断和早期治疗极 其重要。ro的发病机制目前仍不清楚，黑质纹状体多巴胺能神经元变性是ro的主要病理特 征。研究认为，基因或环境因素造成的中枢囊泡单胺转运体(VMAT2)减少是ro发病的重要决 定因素，因此利用分子影像学技术，监测脑内VMAT2水平的正电子发射断层成像(PET)和单 光子发射计算机断层成像(SPECT)显像剂的研制是ro研究中较为热门与前沿的领域。
[0003] 18F-FP-( + )-DTBZ(18F-AV133)是一种优良的18F标记的PET显像剂，与脑组织内的 VMAT2特异性结合，可直观地衡量脑内VMAT2水平，与脑中VMAT2具有良好的亲和性、较高的 脑初摄取、较快的脑清除、较高的靶/非靶比，有望成为用于ro早期诊断和监测其进程的PET 显像药物，目前，美国正在进行临床研究。
[0004] TsOP-( + )-DTBZ(化学名称为( + )-2-羟基-3-异丁基-9-(3-(对甲苯磺酰氧基)氟丙 氧基)_1〇_甲氧基 _1，2，3，4，6，7-六氢-1 lbH-苯并[a]喹嗪，化学结构式见下式)是制备18F-AV133的标记前体。由于18F半衰期仅为llOmin，临床上使用 18F-AV133必须由前体化合物 TsOP-( + )-DTBZ现场制备。因此，TsOP-⑴-DTBZ的纯度关系到18F-AV133的产率和纯度，从而 影响临床应用的安全性及有效性，为此，必须要严格控制其标记前体TsOP-( + )-DTBZ的光学 异构体杂质的含量，以获得高纯度的标记前体TsOP-( + )-DTBZ。
[0006] 标记前体TsOP-( + )-DTBZ具有3个手性中心，理论上存在8个光学异构体，但结合其 合成方法及反应机理分析最有可能存在的只有一个光学异构体杂质，即为TsOP-(-)-DTBZ， 该杂质可通过后续标记反应，残留在PET显像剂 18F-AV133中，影响药物质量。因此，控制 TsOP-( + )-DTBZ中光学异构体杂质的含量，对提高18F-AV133的质量，保证广大患者用药的安 全及有效性具有重大意义。
[0007] 实现标记前体TsOP-( + )-DTBZ与其光学异构体的有效分离在其原料药和制剂的质 量控制中具有重要的意义，为了有效控制此标记前体的质量，需要发明一种能将TsOP-( + )-DTBZ与其光学异构体有效分离的高效液相测定方法。
[0008]目前尚未有标记前体TsOP-( + )-DTBZ与其光学异构体分离检测方法的报道。
【发明内容】
[0009]因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中尚未有标记前体TsOP-( + )_ DTBZ与其光学异构体分离检测方法的缺陷，从而提供一种PET显像剂前体TsOP-( + )-DTBZ及 其光学异构体的分离测定方法，进而实现前体及其光学异构体的分离测定。
[0010]本发明的技术方案如下：
[0011] 一种PET显像剂前体TS〇P-( + )-DTBZ及其光学异构体的分离测定方法，为采用 Pirkle型手性固定相色谱柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法;这两个技术特征的 结合能有效的实现PET显像剂前体TsOP-( + )-DTBZ及其光学异构体的分离测定。
[0012] 所述Pirkle型手性固定相色谱柱为Chirex手性色谱柱。该色谱柱可以获得更好的 分析分离效果。
[0013] 所述的正相混合溶剂为正己烷、1，2_二氯乙烷、无水乙醇的混合溶剂，或正己烷、 1，2_二氯乙烷、无水乙醇的混合溶剂再与三氟乙酸和三乙胺中一种或两种进行混合的溶 剂。本发明中所选的这些流动相中无水乙醇除了能调节流动相极性外，由于其较强的质子 给予和接受能力，可与溶质和固定相形成强的氢键作用力，因而乙醇含量的改变对分离度 影响较大。而加入不同量的酸性或/和碱性添加剂后，峰对称性更好，分离度有了较大的提 高，本专利中酸性或/和碱性添加剂对光学异构体的分离起了重要作用。
[0014] 所述溶剂中正己烷、1，2_二氯乙烷、无水乙醇、三氟乙酸与三乙胺的体积比例为50 ~80:15~40:2~10:0~0 · 2:0~0 · 1。考虑到溶剂的互溶性、TsOP-( + )-DTBZ及其光学异构 体的分离度和分析速度，选择流动相组成范围效果最佳。
[0015] 色谱条件如下:流动相流速为0.4~1.2mL/min，色谱柱柱温为20~40°C，检测器采 用紫外检测器，检测波长为254-280nm。增加流动相的流速，光学异构体的保留时间都明显 缩短，但分离度略有降低;提高色谱柱温度，保留时间变化并不十分明显，在常温范围内可 以得到比较稳定的分离结果。
[0016] 色谱条件如下：流动相流速为0.8mL/min;色谱柱柱温为25°C ;紫外检测器的检测 波长为280nm。此条件可使光学异构体得到更有效的分离检测，得到最佳的分离度。
[0017] 上述分离测定方法，按照以下步骤实现：
[0018] (1)用流动相溶解PET显像剂前体TsOP-( + )-DTBZ原料药或制剂，配制成每lmL含有 前体TsOP-(+) -DTBZ 0.5~1.5mg的样品溶液；
[0019] (2)采用Pirkle型手性固定相色谱柱；
[0020] (3)取（1)的样品溶液2~20yL注入色谱仪，记录色谱图。
[0021] 流动相流速为0.4~1.2mL/min，检测采用紫外检测器，检测波长为254~280nm，色 谱柱柱温为20~40 °C。
[0022] 紫外检测器的检测波长为280nm〇
[0023] 上述分离测定方法的应用。
[0024]为保证前体TsOP_( + )_DTBZ原料药以及制剂产品的质量，本发明经过反复试验，最 终发现采用Pirkle型手性固定相色谱柱，并采用适当的有机溶剂进行洗脱，可以有效分离 前体TsOP-( + )-DTBZ原料药及其光学异构体。
[0025]本发明的有益效果:采用本发明的方法，峰对称性较好，能简单、快速、准确地分离 检测出PET显像剂前体TsOP-( + )-DTBZ及其光学异构体，有效控制前体TsOP-( + )-DTBZ的质 量。
[0026]本发明的分离检测方法对TsOP-( + )_DTBZ及其异构体的分离，其分离度均大于 1.5〇
【附图说明】
[0027]为了更清楚地说明本发明【具体实施方式】或现有技术中的技术方案，下面将对具体 实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的 附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前 提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1是实施例1高效液相色谱图；
[0029] 图2是实施例2高效液相色谱图；
[0030] 图3是实施例3高效液相色谱图；
[0031]图4是实施例4高效液相色谱图；
[0032]图5是实施例5高效液相色谱图；
[0033]图6是实施例6高效液相色谱图；
[0034]图7是实施例7高效液相色谱图；
[0035] 其中，图1中的流动相为正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙酸-三乙胺= 65: 33:2:0.01:0.005;图2中的流动相为正己烧_1，2_二氣乙烧-无水乙醇-二氣乙酸-二乙胺 = 64.6:32.3:3.1:0.01:0.005;图3中的流动相为正己烷-1,2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙 酸-二乙胺=64:32:4:0.01:0.005;图4中的流动相为正己烧 -1，2-二氣乙烧-无水乙醇-二 氟乙酸-三乙胺= 63.33:31.67:5:0.01:0.005;图5中的流动相：正己烷-1,2-二氯乙烷-无 水乙醇_二氣乙酸=50:40:10:0.2;图6中的流动相:正己烧 -1，2-二氣乙烧-无水乙醇-二乙 胺= 80:15:5:0.1;图7中的流动相:正己烷-1,2-二氯乙烷-无水乙醇= 70:20:10。
【具体实施方式】
[0036] 提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方 式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其 他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的 保护范围之内。
[0037] 实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验 步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得 的常规试剂产品。
[0038]本发明所使用的试剂均可以从市场上购得。
[0039] 本发明中使用的仪器与色谱柱的规格为：
[0040] 美国Waters 1525型高效液相色谱系统及工作站；
[0041 ] 色谱柱为Chirex手性色谱柱；
[0042] 紫外检测的波长为254-280nm。
[0043] 本发明实施例中虽然只列出了 Chirex手性色谱柱，并不代表其他的Pirkle型手性 固定相色谱柱不能实现本发明的发明目的，实施方式中的Chirex手性色谱柱不对本发明的 内容和保护范围构成限制，发明人在本发明申请日前也做过其他Pirkle型手性固定相色谱 柱的实验，效果与本发明实施例中的Chirex手性色谱柱相近，在此不再--列举。
[0044] 实施例一
[0045] 仪器与条件
[0046] 流动相：正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙酸-三乙胺= 65:33:2:0.01: 0.005
[0047] 流速:0.8mL/min
[0048] 柱温：25 Γ
[0049] 进样体积:20yL
[0050] 紫外检测波长280nm [0051 ] 实验步骤：
[0052] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各5mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分 析，记录色谱图。
[0053]结果见附图1，可以看出该条件下TsOP-( + )_DTBZ及其异构体达到基线分离，高效 液相色谱仪显示分离度为2.5。
[0054] 实施例二 [0055]仪器与条件
[0056] 流动相：正己烧-1，2-二氣乙烧-无水乙醇 -二氣乙酸-二乙胺=64.6:32.3:3.1: 0.01:0.005
[0057] 流速:0.8mL/min
[0058] 柱温：30 Γ
[0059] 进样体积:20yL
[0060] 紫外检测波长280nm [0061 ] 实验步骤：
[0062] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各10mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分 析，记录色谱图。
[0063]结果见附图2,表明本发明的分离检测方法可以把TsOP-( + )_DTBZ及其异构体分 开，高效液相色谱仪显示分离度为2.2。
[0064] 实施例三 [0065]仪器与条件
[0066] 流动相：正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙酸-三乙胺=64: 32 :4:0.01: 0.005
[0067]流速:0.8mL/min
[0068] 柱温：25 Γ
[0069] 进样体积：20yL
[0070] 紫外检测波长280nm
[0071] 实验步骤：
[0072] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各5mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液1。另精密称取TsOP-( + )-DTBZ原料药10mg，置 10mL棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液2。
[0073]取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。 [0074]图3证明，本法可以用于TsOP-( + )_DTBZ原料药的质量检测，高效液相色谱仪显示 分离度为2.0。
[0075]实施例四 [0076]仪器与条件
[0077] 流动相：正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙酸-三乙胺= 63.33 :31.67:5: 0.01:0.005
[0078] 流速:0.8mL/min
[0079] 柱温：25Γ
[0080] 进样体积：20yL [0081 ] 紫外检测波长280nm
[0082] 实验步骤：
[0083] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各5mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液1。另精密称取TsOP-( + )-DTBZ制剂10mg，置10mL 棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液2。
[0084]取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图4。 [0085]图4证明，本法可以用于TsOP-( + )_DTBZ制剂的质量检测，高效液相色谱仪显示分 离度为2.4。
[0086] 实施例五 [0087]仪器与条件
[0088] 流动相:正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三氟乙酸=50:40:10:0.2
[0089] 流速：1.0mL/min
[0090] 柱温：35 Γ
[0091] 进样体积:2yL
[0092] 紫外检测波长270nm
[0093] 实验步骤：
[0094] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各15mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分 析，记录色谱图。
[0095] 结果见附图5,表明本发明的分离检测方法可以把TsOP-( + )_DTBZ及其异构体分 开，高效液相色谱仪显示分离度为1.6。
[0096]实施例六
[0097] 仪器与条件
[0098] 流动相：正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇-三乙胺=80:15:5:0.1
[0099] 流速：1.2mL/min
[0100] 柱温:40°c
[0101] 进样体积：15yL
[0102] 紫外检测波长260nm
[0103] 实验步骤：
[0104] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各12mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分 析，记录色谱图。
[0105] 结果见附图6,表明本发明的分离检测方法可以把TS〇P-( + )-DTBZ及其异构体分 开，高效液相色谱仪显示分离度为1.7。
[0106] 实施例七
[0107] 仪器与条件
[0108] 流动相:正己烷-1，2-二氯乙烷-无水乙醇=70:20:10
[0109] 流速:0.4mL/min
[0110] 柱温：20 Γ
[0111] 进样体积:10yL
[0112] 紫外检测波长254nm
[0113] 实验步骤：
[0114] 分别精密称取TsOP-( + )-DTBZ及其异构体各8mg，置10mL棕色容量瓶中，加流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液按上述条件进行高效液相色谱分 析，记录色谱图。
[0115] 结果见附图7,表明本发明的分离检测方法可以把TsOP-( + )_DTBZ及其异构体分 开，高效液相色谱仪显示分离度为1.8。
[0116]显然以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前 述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各 实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。这里无需也 无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替 换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种PET显像剂前体TS〇P-( + )-DTBZ及其光学异构体的分离测定方法，其特征在于， 为采用Pirkle型手性固定相色谱柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法。2. 根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，所述Pirkle型手性固定相色谱柱 为Chirex手性色谱柱。3. 根据权利要求2所述的分离测定方法，其特征在于，所述的正相混合溶剂为正己烷、 1，2_二氯乙烷、无水乙醇的混合溶剂，或正己烷、1，2_二氯乙烷、无水乙醇的混合溶剂再与 三氟乙酸和三乙胺中一种或两种进行混合的溶剂。4. 根据权利要求3所述的分离测定方法，其特征在于，所述溶剂为正己烷、1，2_二氯乙 烷、无水乙醇、三氟乙酸与三乙胺的体积比为50~80:15~40:2~10:0~0.2:0~0.1的混合 溶剂。5. 根据权利要求4所述的分离测定方法，其特征在于，色谱条件如下： 流动相流速为0.4~1.2mL/min，色谱柱柱温为20~40°C，检测器采用紫外检测器，检测 波长为 254-280nm〇6. 根据权利要求5所述的分离测定方法，其特征在于，色谱条件如下： 流动相流速为〇. 8mL/min;色谱柱柱温为25°C ;紫外检测器的检测波长为280nm。7. 权利要求1-6任一所述分离测定方法，按照以下步骤实现： (1) 用流动相溶解PET显像剂前体TsOP-( + )-DTBZ原料药或制剂，配制成每lmL含有前体 TsOP-(+)-DTBZ 0·5~1 ·5mg的样品溶液； (2) 采用Pirkle型手性固定相色谱柱； (3) 取步骤（1)的样品溶液2~20yL注入色谱仪，记录色谱图。8. 根据权利要求7所述的分离测定方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.4~ 1.2mL/min，检测采用紫外检测器，检测波长为254~280nm，色谱柱柱温为20~40 °C。9. 根据权利要求8所述的分离测定方法，其特征在于，紫外检测器的检测波长为280nm。
【文档编号】G01N30/02GK106018575SQ201610296354
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】李晓敏, 陈正平, 刘春仪, 唐婕, 薛丹露, 曹丽华, 徐栋
【申请人】江苏省原子医学研究所