包括灵芝物种的提取物及提取方法

专利名称：：包括灵芝物种的提取物及提取方法
技术领域：
：本发明涉及灵芝物种(ganodermaspecies)的揭_取物、采用连续的提取步骤来制备灵芝物种提取物的方法、以及对灵芝物种的提取物进行处理的方法。
背景技术：
：蘑菇被认为是一种特殊的食品，由于蘑菇具有独特的质地和风味，所以它们尤其被i人为是一种"美味食品"。然而，直到二十世纪，当人们从霉菌中获得抗生素(青霉素)时，真菌潜在的医药价值才引起了西方科学社会的注意。已经表明，菇类子实体(fruitingbody)中的化学成分的多种化学、生物和生物化学性质具有许多生理和医药方面的益处。几千年来，在全世界范围内，特别是在亚洲，高等担子菌菇类一直被作为草药使用。在中国、日本和其他亚洲国家，灵芝物种(特别是赤芝(G./wc/^m)(在中国称为"灵芝"而在日本称为"Reishi"或"Mannentake")和松山树芝(G.已经广泛用于促进健康和长寿。在所培育的菇类中，灵芝物种是独特的，这是因为灵芝物种的药用价值胜于营养价值，因而极为重要。大量的赤芝产品可用于诸如药粉、膳食补充剂和饮料之类的多种形式中。这些产品是由菇类的不同部分(包括菌丝体、子实体和孢子)制得的。然而，由于灵芝原料中化学成分的变化较大，导致所述产品中的化学成分的含量是不不定的。与许多植物性药材相似，菌体材料中的化学成分取决于多种变化因素，可列出(包括)遗传漂移、培养方法、温度、pH、湿度、生长培养基、所用的基质，但这些只是一少部分。灵芝物种，即，灵芝科，是具有双壁担孢子的多孔担子真菌。在所有的灵芝物种中，灵芝科中的219种物种属于灵芝属，在灵芝属中，赤芝为代表种。由于灵芝物种的表型的可塑性高，所以据信，对于用于提取产品的原料而言，灵芝系统学中的形态学特征在鉴定灵芝物种方面的价值是有限的。最近，在灵芝的研究中已经使用了生物化学(三萜成分研究)方法、遗传学(杂交研究)方法和分子(rDNA多态性研究)方法。虽然传统中药(TCM)因其推定的药用价值而被使用，但是，在美国，TCM被作为营养品，并被归类为营养或膳食补充剂(由膳食补充剂健康与教育法(DSHEA)规定)。对于任何治疗而言，核心问题之一是产生所需的治疗效果、但不会产生有害的副作用的有效剂量。在2000多年的时间中，灵芝物种一直被用作药用真菌。但是，在标准的配制剂、化学成分的组成、与其剂量有关的指导方针、化学成分和配方方面却没有取得一致。建议剂量为每天0.5gm至30gm的市售的赤芝子实体的干态提取物。即使人类食用了极多量的这种提取物，也没有报道说这种提取物具有明显的毒性。已经报道的是偶尔的且轻度的消化不良以及在敏感个体中出现了皮渗。所述提取物的毒性剂量(TD)和致死剂量(LD)极高，在30天中向实验室小鼠施用高达5g/kg的所述提取物的情况下以及单次经腹膜注射剂量为38g/kg的所述提取物的情况下，小鼠都能够良好地耐受。因此，灵芝物种的提取产物没有明确地限定临床用量。因此，重要的是确定明确有效的剂量(ED)以及灵芝物种的化学成分对健康的益处的科学证明。与大多数的菇类相似，灵芝物种包括大约90重量％的水。根据科学文献，对由干重％表示的赤芝化学成分的总结列于表1和2中。赤芝子实体的特征之一是苦味，该味道可随着菌抹、培养方法、菌龄和多种其他因素的变化而变化。产生这种苦味的化学成分是三辟烯(triteipene),并且这种化学成分已经被用作用于对^是取产物进^f亍药理学评价的标志物。两种主要的且生理和医药活性已知的灵芝物种的化学成分为三萜烯和多糖。表l.根据文献，赤芝的化学成分主要生物活性物质*_干重％挥发类物质/精油类物质2-8%薛类化合物*三辟烯*(T)(>100高度氧化的羊毛甾烷类三萜系化合物(triterpenoids))灵芝酸(GA)A,B,C,C1,C2,D….T赤芝酸(LA)A，B，C，C2，D,Di,K，E,El，F,G,H,I,J,K丹芝酸(GLA)C,D灵芝醇(G)赤芝酮(LC)A,D赤芝醇(LCM)A，Bganodermenonol(G)灵芝二醇(Ganodermadiol)(GD)灵芝三醇(Ganodermatriol)(GT)灵芝嗣二酉f(Ganodermanondiol)(GDD)灵芝酉同三醇(Ganodermanontriol)(GDT)类固醇维生素苯酚核苷酸蛋白质(Pr)7-8%糖蛋白碳水化合物26-28%多糖气P)(杂聚物-葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖、海藻糖等)(P-D-葡聚糖，特别是p-(1^3)-D-葡聚糖)多聚糖A,B和C纤维32-59%灰分8-10%矿物10.2%锗(Ge)(489pg/g)表2.本发明所用的赤芝子实体原料的化学组成<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*挥发油被估测为在70。C和500巴的条件下釆用C02提取所达到的最高提取率。三萜系化合物是通过用无水甲醇进行提取来估测的。多糖和蛋白质是通过用水提取来估测的。辟类化合物是一类天然形成的物质。它们的碳主链是由异戊二烯C5单元构成的。许多萜类化合物是烯烃，但可以含有其他官能团，并且许多辟类化合物是环状的。已经发现，一些植物性辟类化合物具有诸如抗炎、抗癌、降血脂和其他健康促进活性之类的性质。三碎烯是萜类化合物的一个亚类，并且三萜烯具有C30的基础主链。在灵芝物种中，三薛烯的化学结构是以羊毛甾烷为基础的，羊毛甾烷是羊毛甾醇的代谢产物，其中羊毛甾醇的生物合成基于罝烯的环化。灵芝物种中三辟烯的提取通常通过使用曱醇、乙醇、丙酮、氯仿、醚或这些溶剂的混合物来进行溶剂提取的。已经报道，在灵芝物种中合成了100多种化学组成和分子构造已知的三辟烯。在这些三薛烯中，发现，多数是灵芝物种所特有的。大部分的灵芝三萜烯为灵芝酸和赤芝酸，但是还鉴定出诸如灵芝醛(ganodeml)、灵芝醇(ganoderiols)和灵芝酸(ganodermicacids)之类的其他三碎蹄。已经报道，由多种植物中获得植物性多糖具有免疫增强、抗炎、抗溃疡、抗病毒和抗癌的作用。灵芝物种因产生多种高分子量的多糖而不同寻常。发现，这些多糖存在于所述菇类的所有部分中，并且在所述菇类的所有的生长阶段中，都合成这些多糖。来自灵芝物种中的多糖已经从子实体、菌丝和孢子中提取出来。此外，在发酵罐中存在有由菌丝产生的胞外多糖。在灵芝物种的多糖中，葡萄糖是主要糖类。然而，灵芝物种的多糖是杂聚物，在不同的构型(包括1-3,1-4,1-6-连接的p，及a-D-(或L)-多糖)中，其还包含不同构型的木糖、甘露糖、海藻糖。通常，多糖是用热水进行提取的，然后用醇将其沉淀出来。多糖还可以用热水和石咸来提取。复杂的纯化步骤可以得到诸如葡萄糖聚合物GL-1(98%为葡萄糖)之类的纯化多糖。已经由灵芝物种分离到的、并且部分表征的多糖物质包括灵芝多糖(ganodemns)A、B和C。最近，已经分离到其他的灵芝物种的灵芝多糖。这些多糖物质中的一部分多糖物质已经显示出显著的免疫刺激活性和抗癌活性。还已经报道的是，灵芝物种的蛋白质(其含量比其他真菌中的蛋白质含量低)有助于灵芝物种的化学成分的药用活性。例如，灵芝物种中的蛋白质可以表现出免疫抑制活性。在多数有医药价值的植物性药材中，挥发油和精油类化学成分对植物化学成分的生物活性起到主要的贡献作用。然而，在科学文献中，灵芝物种的这些化学成分似乎已经被忽视。推定的健康益处并且没有毒性使得灵芝物种的化学成分可理想地用于研发可有效治疗的提取物。虽然几千年来灵芝物种的提取物一直被用于治疗多种疾病，但是，仅在近年来，才对灵芝物种的提取物和化学成分进行了客观的科学的研究。为了简要地概括灵芝物种的化学成分的治疗益处，近期的科学实验和临床研究已经证明灵芝物种(特别是赤芝)的多种化学物质、化学级分以及总提取物具有以下治疗效果，包括免疫增强作用(P、Pr、水4是取物，其为简写，参见表1)[1-4];免疫抑制、抗移植排斥、抗免疫疾病(Pr)[5,6];抗炎、抗关节炎、抗类风湿、抗红斑狼疮、抗过I文(T、GA、乙酸乙酯^是取物、醇提取物、水提取物)[7-10];抗氧化(T,P-T+P协同作用、有机溶剂提取物、水提取物)[9,11，12];抗血小板聚集(GA,溶于水的提取物)[1314];抗低血糖、抗糖尿病(P-灵芝多糖A、B&C,4是取物)[9，15];抗高血压(溶于水-不溶于乙醇的提取物、粗提取物)[16,17];抗高胆固醇血症(三薛烯、粗提取物)[18];预防心血管疾病(T、P、粗提取物)[5-18〗；护肝(T、GA、P、水以及水-醚提取物)[19,20];抗病毒治疗、抗单纯疱渗、抗HIV、抗带状疱渗、抗B型肝炎(P-蛋白质结合多糖、T、可溶于醇和水的^是取物)[21-24];抗细菌活性(T、P、醇和水^是取物)[9，25];以及预防和治疗癌症(P、T、热水和醇4是耳又物)[9,26-28]。所需要的是新型的可再现的灵芝物种提取物，该提取物包含纯化的精油化学成分、三碎烯化学成分、蛋白质化学成分、以及多糖类化学成分，其中所述的这些化学成分可以以标准可靠的剂量制得，所述剂量使得具有生理和药用益处的灵芝物种的化学成分间能够相互协同作用。发明概述在一个方面中，本发明涉及灵芝物种的提取物，其包含具有如图6至29中任意一幅所示的实时直接分析(DART)质语图的级分。在另一个实施方案中，所述提取物包含选自精油、三萜烯、多糖和它们的组合中的化合物。在另一个实施方案中，所述精油选自9，12-十八碳二烯酸、反亚油酸、正十六酸、辛酸、十四酸、十五酸、9-十/\酸、十/^酸、2-丙烯酸、十三烷醇酯、l-十一醇、l-十二醇、l-十四醇、l-十六醇、1-十七醇、1-二十醇和它们的组合。在另一个实施方案中，精油的量大于8重量％。在另一个实施方案中，精油的量为25重量％至90重量%。在另一个实施方案中，精油的量为50重量％至90重量％。在另一个实施方案中，精油的量为75重量％至90重量％。在另一个实施方案中，所述三萜烯选自灵芝酸(ganodericacid)、赤芝酸(lucidenicacid)、单芝酸(ganolucidicacid)、灵芝醇(ganoderiol)、赤芝酉同(lucidone)、赤芝醇(lucidumol)、ganodermenonol、灵芝二酉孚(ganodermadiol)、灵芝三醇(ganodermatriol)、灵芝酉同二西孚(ganodermanondiol)、灵芝酉同三醇(ganodermanontriol)和它们的组合。在另一个实施方案中，三辟烯的量高于2重量％。在另一个实施方案中，三碎烯的量为25重量％至90重量％。在另一个实施方案中，三辟烯的量为50重量％至90重量%。在另一个实施方案中，三辟烯的量为75重量％至90重量％。在另一个实施方案中，所述多糖选自葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、木糖醛酸和它们的组合。在另一个实施方案中，多糖的量为高于15重量％。在另一个实施方案中，多糖的量为25重量％至90重量％。在另一个实施方案中，多糖的量为50重量％至90重量％。在另一个实施方案中，多糖的量为75重量％至90重量％。在另一个实施方案中，所述提取物包括2重量％至99重量％的精油、5重量％至88重量％的三辟烯、以及2重量％至95重量％的多糖。在另一个方面中，本发明涉及包含本发明灵芝物种提取物的食品或药品。在另一个方面中，本发明涉及制备具有至少一个预定特征的灵芝物种提取物的方法，该方法通过以下过程来连续地提取灵芝物种的植物体，从而得到精油级分、三碎烯级分和多糖级分，所述过程为a)通过超临界二氧化碳提取方法来提取灵芝物种的植物体材料，从而得到精油和第一残余物；b)通过醇提取来提取由步骤a)所得的第一残余物，从而得到三碎烯级分和第二残余物；c)通过水提取和用醇使多糖沉淀的方法来提取由步骤b)所得的第二残余物，从而得到多糖级分。在另一个实施方案中，所述步骤a)包括l)向提取容器中装入经研磨的灵芝物种的植物材料；2)在超临界条件下加入二氧化碳；3)使灵芝物种的植物材料与二氧化碳接触一段时间；以及4)在收集容器中收集精油。在另一个实施方案中，所述方法还包括通过使用超临界二氧化碳分级分离系统对精油级分进行分级，从而改变精油化合物的比例的步骤。在另一个实施方案中，超临界条件包括在温度为35。C至90。C时，压力为60巴至800巴。在另一个实施方案中，超临界条件包括在温度为40。C至80。C时，压力为60巴至500巴。在另一个实施方案中，所述的一段时间为30分钟至2.5小时。在另一个实施方案中，所述的一段时间为l小时。在另一个实施方案中，所述步骤b)包括l)使由步骤a)所得的第一残余物与醇溶剂接触一段足以提取出三辟烯的化学成分的时间；2)釆用液-液溶剂提取工艺来纯化三辟烯化学成分。在另一个实施方案中，一种溶剂为氯仿，另一种溶剂为饱和的NaHC03水溶液。在另一个实施方案中，所述醇溶剂为乙醇。在另一个实施方案中，步骤1)是在30。C至100。C下实施的。在另一个实施方案中，步骤1)是在60。C至100。C下实施的。在另一个实施方案中，所述时间为1至10小时。在另一个实施方案中，所述时间为1-5小时。在另一个实施方案中，所述时间为2小时。在另一个实施方案中，所述步骤c)包括l)使灵芝物种植物材料或由步骤b)所得的第二残余物与水接触一段足以提取出多糖的时间；以及2)通过醇沉淀法使多糖从水中沉淀。在另一个实施方案中，所述的水为70。C至90°C。在另一个实施方案中，所述的水为80。C至90。C。在另一个实施方案中，所述时间为l-5小时。在另一个实施方案中，所述时间为2-4小时。在另一个实施方案中，所述时间为2小时。在另一个实施方案中，所述醇为乙醇。在另一个方面中，本发明涉及通过本发明的方法制备的灵芝物种提取物。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含麦角固醇(ergosterol)、占麦角固醇的25重量％至35重量％的丹芝酸(ganolucidicacid)A、占麦角固醇的10重量％至20重量％的丹芝酸B、以及占麦角固醇的30重量％至40重量％的丹芝酸H。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸(ganodericacid)H和占灵芝酸H的25重量％至35重量％的丹芝酸。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的5重量％至15重量。/o的赤芝酸(lucidenicacid)B、占灵芝酸H的1重量％至10重量％的赤芝酸A/H、以及占灵芝酸H的35重量％至45重量％的丹芝酸A。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H和占灵芝酸H的5重量％至15重量％的灵芝醛。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的35重量％至45重量％的丹芝酸八、占灵芝酸H的10重量％至20重量％的丹芝酸B、以及占灵芝酸H的30重量％至40重量％的酵母甾醇(cerevisterol)。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的10重量％至20重量％的丹芝酸B、以及占灵芝酸H的5重量％至15重量％的灵芝醛。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的10重量％至20重量％的丹芝酸8、占灵芝酸H的20重量％至30重量％的曱氧基酵母甾醇、以及占灵芝酸H的20重量%至30重量％的酵母甾醇。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含麦角固醇、占麦角固醇的30重量％至40重量％的丹芝酸A、占麦角固醇的5重量％至15重量％的丹芝酸B、以及占麦角固醇的65重量％至75重量Q/。的灵芝酸H。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的30重量％至40重量％的丹芝酸B、占灵芝酸H的40重量％至50重量％的曱氧基酵母甾醇、以及占灵芝酸H的35重量%至45重量％的酵母甾醇。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含麦角固醇、占麦角固醇的1重量％至10重量％的丹芝酸A/B、占麦角固醇的1重量％至10重量％的灵芝醇F、以及占麦角固醇的50重量％至60重量％的羊毛甾醇。在另一个方面中，本发明涉及灵芝物种提取物，包含灵芝酸H、占灵芝酸H的60重量％至70重量％的丹芝酸A、占灵芝酸H的25重量％至35重量％的丹芝酸B、以及占灵芝酸H的10重量％至20重量％的赤芝酸A/N。本发明的提取物可用于提供生理和药物作用，包括(但不限于)免疫增强作用、免疫抑制、抗移植排斥、抗氧化剂活性、抗炎活性、抗关节炎、抗类风湿、抗自体免疫疾病、抗过敏、抗血小板聚集、抗j氐血^f唐活性、抗4唐尿病活性、抗高血压、抗高月旦固醇血症、预防心血管疾病和中风、抗突变活性(预防癌症)、抗致癌活性(治疗癌症)、抗病毒、抗HIV、抗单纯疱渗、抗带状疱渗、抗B型肝炎、抗细菌活性、护肝、以及治疗肝硬化。通过以下发明详述、附图和权利要求，所公开的这些实施方案、其他的实施方案、以及它们的特征和特性将显而易见。图1示出了用于制备精油级分的示例性方法。图2示出了用于进行乙醇浸出提取的示例性方法。图3示出了用于纯化三辟烯级分的示例性方法。图4示出了用于纯化三碎烯级分的示例性方法。图5示出了用于水浸出工艺和多糖沉淀的示例性方法。图6示出了由本发明方法的步骤6制得的灵芝物种多糖级分的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图7示出了由本发明方法的步骤6制得的灵芝物种多糖级分的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图8示出了由赤灵芝幼嫩的子实体制得的灵芝物种提取物的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图9示出了在40。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图10示出了在40。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图11示出了在70。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图12示出了在80。C和100巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图13示出了在80。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图14示出了在40。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图15示出了在70。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图16示出了在70。C和100巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质语(阳离子模式)图。图17示出了由赤灵芝幼嫩的子实体得到的灵芝物种乙醇粗提物(三辟系化合物粗品)的AccuTOF-DART质语(阳离子模式)图。图18示出了由赤灵芝幼嫩的子实体得到的最终的三辟烯的AccuTOF-DART质谱(阳离子模式)图。图19示出了由赤灵芝幼嫩的子实体得到的灵芝物种提取物的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图20示出了在40。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图21示出了在40。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图22示出了在70。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图23示出了在80。C和100巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图24示出了在80。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图25示出了在40。C和300巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图26示出了在70。C和500巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图27示出了在70。C和100巴下，采用SCC02方法提取的灵芝物种精油的AccuTOF-DART质i普(阴离子模式)图。图28示出了由赤灵芝幼嫩的子实体得到的灵芝物种乙醇粗提物(三萜系化合物粗品)的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。图29示出了由赤灵芝幼嫩的子实体得到的最终的三辟烯的AccuTOF-DART质谱(阴离子模式)图。发明详述定义词语"a"和"an"在本文中是指该词语的语法对象为一个或多于一个(即，至少一个)的情况。例如，"an元件"是指一个元件或多于一个的元件。术语"灵芝物种"还可以与灵芝、reichi或mannentake互换使用，并指它们的植物体、克隆、变体、芽变等。如本文所用，词语"一种或多种化合物"是指至少一种化合物，例如l-十七醇(灵芝物种的脂溶性精油化学成分)、或灵芝酸(灵芝物种的溶于水且可溶于水-乙醇的三辟烯)、或灵芝物种的可溶于水但不溶于乙醇的多糖分子，例如(但不限于)灵芝多糖A;或者指多于一种化合物，例如1-十七醇和灵芝酸A。如本领域所知，术语"化合物"不是指单个的分子，而是指多个或多摩尔的一种或多种化合物。如本领域所知，术语"化合物"是指具有确切的化学和物理性质的、特定的化学成分，而"一种或多种化合物"是指一种或多种化学成分。如本文所用，术语"级分"是指提取物，包括由某些物理化学性质、物理性质或化学性质表征的一组特定的化学化合物。如本文所用，精油级分这一术语包括由灵芝物种得到的或衍生的、可溶于脂质但不溶于水的化合物，包括(但不限于)可归类为l-十七醇、2-丙烯酸、十三烷醇酯、正十六酸、(Z)-9-十八烯-l-醇、l-二十醇、(Z,Z)-9，12-十八碳二烯酸和反亚油酸的化学化合物。如本文所以，术语"三辟烯级分"包括由灵芝物种得到的或衍生的、可溶于水并且可溶于乙醇的三萜烯，其还包括(但不限于)诸如灵芝酸、赤芝酸、丹芝酸、灵芝醇、赤芝醇和灵芝三醇之类的化合物。如本文所用，术语"多糖级分，，包括由灵芝物种得到的或衍生的、可溶于水但不溶于乙醇的多糖类化合物。在上述提取物级分中，还可以存在灵芝物种的其他化学成分。如本文所用，术语"纯化的"级分是指包含由某些物理化学性质、物理性质或化学性质表征的一组特定化合物的级分，其中所述的化合物被浓缩至占所述级分的化学成分的高于50%。换言之，纯化的级分所包含的、不能由用于限定该级分的某些所需的物理化学性如本文所用，术语"含量比(profile)"是指在提取物级分中，所述化学化合物的重量百分比，或者指在最终的灵芝物种的提取物中，在三种灵芝物种级分的化学成分中，每种化学成分的重量百分比。如本文所用，"原料"通常是指未加工的植物材料，包括单独的整个植物，或者包括一个或多个植物的构成部分的组合、或植物的一个或多个生长阶段的(包括子实体、菌丝和孢子)组合，其中所述的植物或其构成部分可以包括未经加工的、千燥的、经蒸汽处理的、加热的、或采用其他方法进行物理加工从而有利于加工处理的材料，该材料可以进一步包括完整的、切割的、剁碎的、切碎的、碾碎的、磨碎的、或采用其他方法进行加工从而改变了植物材料的大小和物理完整性的材料。少数情况下，术语"原料"可用于表征即将作为另一提取工艺的原料源使用的提取产物。如本文所用，术语"灵芝物种成分"将用来指在灵芝物种中发现的化学化合物，并且将包括所有上述确定的那些化学化合物(包括但不限于精油化学成分、三萜烯、蛋白质和多糖)以及在灵芝物种中发现的其他化合物。提取物本发明包括这样的提取物，该提取物包含在灵芝及相关物种中发现的一种或多种化学成分的级分。本发明还包括含有提取物的、可消化的产物，其中所述提取物包含在本文中所教导的灵芝及相关物种提取物。例如，本发明包括可构成快速溶解药片的多种提取物，其含有灵芝或相关物种提取物，其中精油级分、精油亚级分、三萜烯级分或多糖级分中的至少一者的重量百分含量，相对于其在天然植物材料中所发现的或相对于目前在已知的灵芝物种物种提取物中所发现的重量百分含量而言，已经大幅提高。精油级分采用超临界二氧化碳(SCC02)提取技术，提取出純度高于95%的灵芝精油。发现，在温度为70。C、压力为500巴下，最高提取率为1.22%。采用气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法，共鉴定出75种化合物。在灵芝精油中发现的主要化合物为Cll-C20脂肪酸。最丰富的脂肪酸为C18脂肪酸类，即，9,12-十八碳二烯酸(Z，Z)-(CAS:60-33-3)(化合物59)和反亚油酸，即，(E，Z)-异构体(化合物60)，这二者为立体异构体。反亚油酸(即，(E,Z)-异构体)为在植物糖苦中广泛存在的双键不饱和脂肪酸。在哺乳动物的营养学中，反亚油酸为必需脂肪酸，并用于前列腺素和细胞膜的生物合成。第二丰富的化合物为C16饱和脂肪酸正十六酸(CAS:57-10-3)(化合物46)。其他脂肪酸包括辛酸(08111602，CAS:124-07-2)、十四酸((314112802,CAS:544-63-8)、十五酸(<:15>13。02，CAS:1002-84-2)、9隱十八酸(C18H3402，CAS:112-80-1)和十八酸(C18H3602，CAS:57-11-4)。第二类主要的化合物为醇类，其包括l-十一烷醇(CnH240，CAS:112-42-5)、1-十二烷醇((1211260，CAS:112-53-8)、l-十四烷醇(C14H3。0,CAS:112-72-1)、1-十六烷醇((1611340，CAS:36653-82-4)、l-十七烷醇(CnH360，CAS:1454-85-9)、1-二十烷醇(0:2()11420,CAS:629-96-9)等。这些脂肪醇保持不变，并且不会转变成酯。通过采用超临界二氧化碳提取，概括出灵芝精油的化学组成，并将总结的结果列于表3中。表3.在不同的SCC02条件下获得的灵芝精油的化学组成的概况<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>脂肪酸的含量比可以在54%至85%之间。在总脂肪酸中，化合物59(即，9,12-十八碳二烯酸(Z,Z)-)和化合物60(即，反亚油酸)占75质量重量(massweight)%-95质量重量％。醇的含量比可以在10%至36%之间。至于灵芝精油中存在的其他少量化合物，酯类的含量比可以在2.5%至6%之间，醛类的含量比可以在0.37%至2.55%之间。在高压下，可以获得较高浓度的脂肪酸，在100巴的低压和80。C的高温下，可以获得较高浓度的脂肪醇。三辟烯级分灵芝三辟蹄是用乙醇提取的，并通过液-液纯化方法纯化的，其中所述的液-液纯化方法利用了通过pH的变化而使得三碎酸及其盐的溶解度发生变化的现象。在最终纯化的三辟烯级分中，三碎烯的总的纯度由原料中的0.6%和乙醇粗提物中的19.9%升高至87.5%。根据市售可得的灵芝酸A、灵芝酸F和灵芝三醇的三碎烯HPLC参照标准品，这三种化合物在灵芝的总的三辟烯中仅占约4%。多糖级分灵芝多糖是用蒸馏水提取的，并用60-80%的乙醇沉淀的。产率为1.5%-2%。基于葡聚糖参照标准品，多糖的纯度随着葡聚糖分子量的不同而处于50%-80%之间。沉淀的多糖-糖蛋白的平均分子量为953377，该分子量是由不同分子量的灵芝多糖和糖蛋白形成的，其中51%是分子量高达1.6M的多糖和糖蛋白。沉淀的多糖-糖蛋白还可以通过Accu-TOFDART质谱来表征。该质谱图如图6和7所示。上述提取物的一种实施方案含有预定浓度的、所提取的和纯化的化学成分级分，其中灵芝物种物种精油级分/三碎烯级分、精油级分/多糖级分、以及三辟烯级分/多糖级分的含量比(干重％)(比率)大所;寻到的上述相应的含量比。在^独的灵芝物种中，有益化学成分的浓度关系(化学含量比)的改变会产生独特的或新型的灵芝物种提取产物的配方，其中所述的提取产物被设计用于特殊的人类状况或疾病。例如，与在灵芝天然植物材料中或在所知的普通提取产物中得到的各个级分相比，用于免疫增强作用的新型有效的灵芝提取物具有更高质量重量％的纯化多糖级分以及更低质量重量％的精油级分和三辟烯级分。与此不同的是，与在灵芝天然植物材料中或在所知的普通提取产物中得到的各级分相比，用于抗病毒活性和抗流感活性的新型灵芝提取物具有更高质量重量％的纯化三辟烯级分和纯化多糖级分以及更低质量重量％的精油级分。与在天然的灵芝植物材料中或在所知的普通灵芝提取产物中得到的含量比相比，用于抗炎活性的新的灵芝提取物含量比的另一个实施例为具有更高纯度的精油级分、更高纯度的三萜烯级分和更高纯度的多糖级分的含量比。本发明的另一实施方案为含有新型精油化学成分的亚级分的提取物，其中特定化学组分(例如但不限于醇或脂肪酸)的浓度在新的提取产物中都有一定程度的升高或降低。与天然灵芝相关的提取物有多种实施方案包括这样的灵芝及相关物种的提取物，在该提取物中，精油浓度、三萜烯的浓度或多糖浓度中的至少一种浓度高于在天然灵芝及相关物种的植物材料、或当前可用的灵芝物种提取产物中所得的该种浓度。有多种实施方案还包括这样的提取物，其中发现，一个或多个级分(包括精油、三碎烯或多糖)的浓度高于在天然灵芝物种的植物材料中该级分的浓度。有多种实施方案还包括这样的提取物，其中发现，一个或多个级分(包括精油、三碎烯或多糖)的浓度低于在天然灵芝物种的植物材料中该级分的浓度。将生物活性化学成分级分的量(参见表l)已知的灵芝物种作为本发明的实施例。例如，本发明的提取物包含以下几级分其中精油的浓度为天然灵芝物种的精油浓度的0.001至80倍的级分，和/或其中三碎烯的浓度为天然灵芝物种的三碎烯浓度的0.001至100倍的级分，和/或其中多糖的浓度为天然灵芝物种的多糖浓度的0.001至70倍的级分。本发明的提取物包含以下几级分其中精油的浓度为天然灵芝物种的精油浓度的0.01至80倍的级分，和/或其中三萜烯的浓度为天然灵芝物种的三碎烯浓度的0.01至IOO倍的级分，和/或其中多糖的浓度为天然灵芝物种的多糖浓度的0.01至70倍的级分。此外，本发明的提取物包含精油化学成分的亚级分，其含有在天然植物材料的精油中存在的至少一种或多种化学化合物，并且该化学化合物的量高于或低于在天然灵芝植物材料的精油化学成分中发现的该化学化合物的量。例如，取决于SCC02的提取条件，酯、2-丙烯酸、十三烷醇酯的浓度为占所述的精油亚级分的0.22-2.53质量重量％,浓度提高了12倍。与此不同的是，在所述的精油亚级分中，脂肪酸(即，正十六酸)的浓度为4.00-9.86质量重量％，降低2.5倍。此外，这两种精油化合物的比例可以为1/15-1/3。如表3所述，不同的精油亚级分可以含有许多种不同的化学成分，并且化学成分的比例也不同。本发明的提取物包含这样的级分，其中与天然的灵芝精油化学成分的特定化学化合物相比，在所述的新型精油亚级分中，该特定化学化合物的浓度提高约1.1倍至6倍，或者降低约0.1倍至6倍。例如，本发明的提取物包含以下级分其中精油化学成分的浓度为天然灵芝植物材料中该成分浓度的0.001至100倍的级分，和/或其中三碎烯的浓度为天然灵芝植物材料中三辟烯浓度的0.0001至100倍，和/或其中多糖的浓度为天然灵芝植物材料中多糖浓度的0.001至100倍。在制备混合提取物的过程中，可以使用约0.001mg至约200mg的精油级分。此外，可以使用约O.OOlmg至约500mg的三辟烯级分。此外，可以使用约O.OOlmg至约500mg的溶于水但不溶于乙醇的多糖级分。提取方法
技术领域：
：本发明的方法包括提供用于治疗和预防人类疾病的新型灵芝提取物。例如，与在灵芝物种的天然植物材料中或在已知的普通提取产物中发现的各个级分相比，用于免疫增强活性的新型灵芝物种提取物可以具有浓度得到提高的多糖级分以及浓度被降低的精油和三碎烯级分，其中浓度以重量％计。与在天然的灵芝物种的植物材料中或在已知的普通提取产物中发现的各个级分相比，用于预防和治疗病毒性疾病的新型灵芝物种提取物可以具有浓度得到提高的三薛烯和多糖级分以及浓度被降低的精油级分，其中浓度以重量％计。与在天然的灵芝物种的植物材料中或在已知的普通提取产物中发现的各个级分相比，用于预防和治疗癌症的新型灵芝物种提取物的另一个实施例包含浓度得到提高的三萜烯级分、浓度得到提高的多糖级分以及浓度得到提高的精油级分。其它实施方案包括这样的提取物，该提取物包含其含量比(比率分布)的、与在天然植物材料中或当前可用的灵芝类提取产物中发现的含量比相比，发生改变的灵芝物种的化学成分。例如，相对于三萜烯和/或多糖的浓度，精油的浓度可以升高或降低。相似地，相对于其他提取成分的级分，三辟烯或多糖可以增多或减少，从而使得提取物的成分化学比是新的，由此达到特定的生物效果。下文中所教导的方法可以单独使用或者可以与已7>开的方法或本领域的技术人员所知的方法联合使用。用于提取的起始材料为来自一种或多种灵芝物种的植物材料。该植物材料可以是植物的任何部分，但是子实体或菌丝体是最优选的起始材料。可以使灵芝物种的植物材料经历预提取步骤，从而将该材料形成任何特定的形式，并且在本发明中，用于提取的任何形式都可以考虑。所述的预提取步骤包括(但不限于)其中将材料剁碎、切碎、撕碎、磨碎、磨成粉末、切割或撕开并且在预提取之前将起始材料干燥或使植物材料保持新鲜的步骤。一个优选的预提取步骤包括将灵芝物种的植物材料研磨和/或粉碎成细粉末。可以使起始材料或预提取之后的材料干燥或向其中加入水分。一旦灵芝物种的植物材料形成提取物形式，就可以考虑本发明的提取方法。益的生物活性化学成分级分和一些l要的i物活性化学化合物。表4.在灵芝原料中发现的主要的且有益的生物活性化学成分<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>体可溶的化合物进行浓缩(纯化)和计算含量比。本发明包括将灵芝中液体可溶的化学成分分级成(例如)高纯度(精油化学成分的浓度高)的精油。此外，本发明包括这样的SCC02方法，在该方法中，提取物级分中的各种化学成分的化学成分比或含量比发生改变。例如，对精油级分中的化学成分进行SCC02分级分离，使得能够对某些精油化合物进行更好的提取(相对与其他精油化合物而言)，如此可以得到其中某种化合物的浓度高于其他化合物的浓度的精油提取物亚级分。采用本发明所教导的scco2方法来提取灵芝物种中的精油化学成分消除了使用有毒有机溶剂的需要，并提供了对提取物进行同时分级的处理。二氧化碳是天然且安全的生物产物，并且是许多食物和饮料的成分。图1-5示出了提取川芎属(Ligusticum)物种中具有生物活性的化学成分的方法的示意图。提取方法通常为(但不限于)4步骤。就本文中的参考标号而言，当粗体数字出现在括号(如[x])中时，该括号中的数字是指图1-5中的数字。本发明提取方法中使用的分析方法在举例说明的级分中示出。步骤l:灵芝精油的超临界流体二氧化碳提取由于精油的疏水性，所以非极性溶剂(包括(但不限于)SCC02、己烷、石油醚和乙酸乙酯)可用于该提取方法中。由于精油的某些成分具有挥发性，所以还可以将蒸汽蒸馏法用作提取方法。对用scco2由灵芝物种的根茎中提取精油化学成分的概括性说明以用图表示的方式显示于图I-步骤IA和IB中。将灵芝物种的子实体原料[10干燥研磨(约140目)。提取溶剂[210为纯的二氧化碳。可以将乙醇用作共溶剂。将所述原料加入到SFE提取容器[20中。在经过吹扫和渗漏测试后，所述方法包括将由储存容器经冷却器流向C02泵的C02液化。将C02加压至所需的压力，并使其流经装在提取容器中的原料，其中所述提取容器的压力和温度被保持在所需的水平。用于提取的压力为约60巴至800巴，温度为约35。C至约90°C。本发明所教导的SCC02提取方法优选在压力为至少100巴、温度至少为35。C下进行，更优选为在压力为约60巴至500巴、温度为约40°C至约80。C下进行。用于单个提取阶段的提取时间为约30分钟至约2.5小时，至约1小时。对于每一次的SCC02提取物而言，溶剂对原料比通常为约60:1。C02是循环的。然后，将经提取、纯化和计算出含量比的精油化学成分[30]收集到收集器或分离器中，存放在光保护性玻璃瓶中，然后储存在4。C的黑暗的冰箱中。可以在一个步骤的方法(参见图1,步骤1A)中或在多个阶段(参见图1,步骤1B)中对灵芝原材料[10I进行提取，在采用一个步骤的方法的情况下，将所得的经提取和纯化的灵芝精油级分[30收集在一个收集器SFE或SCC02系统[20中，在采用多个阶段进行提取的情况下，将经提取、纯化和计算出含量的灵芝精油亚级分50，60，70，80分别依次收集在一个收集器SFE系统20中。可供选用的，象在可分级的SFE系统中那样，采用scco2进行提取的灵芝原料可以被分离到多个收集容器(分离器)中，这样在每个收集器中，在每份所收集的经纯化的精油亚级分中，精油化学成分提取物的相对百分含量(含量比)都是不同的。收集残余物(剩余物)40，将其储存并用于进一步加工，从而得到纯化的灵芝物种的三碎烯和多糖级分。本发明的一种实施方案包括采用多阶段的SCC02提取方法，在压力为60巴至500巴、温度为35。C至90。C之间来提取灵芝物种的原料；以及在各个阶段后收集所提取的灵芝材料。本发明的第二种实施方案包括采用分级SCC02提取方法，在压力为60巴至500巴、温度为35。C至90。C之间来提取灵芝物种的原料；以及在预定条件(压力、温度和密度)和预定间隔(时间)下，收集装在不同收集容器中的经提取的灵芝材料。可以将在多阶段提取器的每一阶段的提取器中或在不同的收集容器(分级系统)中得到的经提取和纯化的精油亚级分单独地收回和使用，或者可以将这些精油结合起来，从而形成一种或多种灵芝精油提取物，该提取物中的精油化学成分具有预定的浓度，该浓度高于或低于在天然植物材料或在普通的灵芝提取产物中所得到的浓度。通常，采用单步骤的、最大程度的SCC02提取方法，由灵芝物种得到的精油级分的总提取率为约1.8重量％(精油化学成分>95%)，即，精油化学成分的纯度占提取物的95质量重量％以上。该提取方法的实施例和结果列于下表5和6中。过程在实施例1中示出。表5.采用SCC02方法在不同条件下得到的赤芝提取物的GC-MS峰的面积百分率<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>芳香化2541.52合物0.112642,15酉享0.082744.09酉g0.070.22844.79酯0.32.532945.11烷烃0.050.153045.56醛0.030.083147.73脂肪酸0.13247.90醇3348.66癸烷0.083448.97醛0.073549.14醇0.073649.68醛3749.770.230.453850.07醛3950.54脂肪酸0.170.184050.69酯0.10.14151.11醇5,357.444252.23醛0.050.044352.56醇0.034452.93脂肪酸0,140.084553.20脂肪酸0.20.094653.64脂肪酸8.338.34753.84酯4854.46酯4954.71烯烃0.050.085055.32酯5155.63烯烃5256.21醇0.065356.36酯5457.13醇5.596.980.060.160.060.10.150.220.070.3(、0"化0.680.190.090.110.050.090.080.270.20.110.090.10.070.030.140.080.160.290.280.210.440.20.010.090.150.390.070.060.091.629.072.700.040.080.050,110.040.080.230.344.004.6110.399,860.180.080.070.160.070.130.220.030.090.040.190,090.230.253.136.9]13.443.75<image>imageseeoriginaldocumentpage33</image>着温度的升高提取率降低。该发现归因于当将压力控制在溶剂的临界点附近时，溶剂的密度发生了较大的变化(在4(TC下，C02的密度为0.64g/cc;在80。C下，C02的密度为0.227g/cc)。另一方面，在300巴和500巴的高压下，当温度升高时，提取率升高。该发现归因于由于C02的密度没有随着温度的变化发生较大变化使得温度对溶质的蒸汽压产生了影响。在所研究的实验范围内，可以清楚地表明，对于灵芝菇类体系而言，密度和压力似乎对提取率没有产生较大的影响。但是，温度具有实质性的影响。压力和温度对提取动力学都产生影响。温度的升高有助于化合物蒸汽压的升高，从而有利于提取。此外，扩散系数的增大以及溶剂粘度的降低还有助于在温度和压力升高至较高的值时，从草质的多孔基质中提取化合物。综上，从动力学和提取率方面来看，高温和高压可用于最大程度地进行SCC02提取。如表4和5所示，在灵芝类子实体原料中发现的主要化合物是Cll-C20脂肪酸类。最丰富的脂肪酸为高级醇C18脂肪酸类、9，12-十八碳二烯酸(Z,Z)-和反亚油酸(E，Z)-。这二者为立体异构体。反亚油酸(E,Z)-异构体为二不饱和脂肪酸，并在植物糖普中广泛存在。在精油级分中发现的第二组主要的化合物为醇类。这些醇中最丰富的是高级的C17、C18和C20醇类。这些脂肪醇在提取物中保持不变，并且不能形成酯。在灵芝物种原料的SCC02精油提取物级分中，存在有高纯度的挥发油化合物。此外，可以采用SCC02对灵芝物种精油提取物级分进行含量比计算(参见表3)。例如，在较高的提取温度(例如80。C)和较低的压力(例如100巴)下，可以得到较高浓度的醇。与此形成对比的是，在40-70。C的温度和诸如500巴之类的高压下，可以得到较高浓度的C18脂肪酸异构体。在溶剂/原料(S/F)比为180、温度为40-80。C以及压力为100-500巴下，灵芝物种的SCC02的提取率为占原料的约0.6-1.2质量重量％(参见表6)。表6.在不同的提取时间下，温度和压力对SCC02精油提取产率(占原料的质量重量％)的影响。34T=40°CT=70°cT=80°Cp(巴)100300500500100300密度(g/cc)0.6400.9150.9960.9090,2270.751t=5分钟0.150.280.330.6410分钟0.200.400.500.570.490.6415分钟0.450.680.660.6720分钟0.500.570.800.790.680.6830分钟0.690.640.840.960,690.7760分钟0.820.780.851.220.710.8290分钟0.870.780.851.220.710.83步骤2:用于提取三萜烯粗品级分的乙醇浸出方法在一个方面中，本发明包括提取和浓缩活性三辟烯化合物。对该步骤的概括性说明以用图表示的方式显示于图2-步骤2中。该步骤2的提取方法为溶剂浸出方法。用于该提取方法的原料为灵芝物种的天然原料[10]或在采用scco2提取方法提取出精油化学成分之后所得的残余物[40。提取溶剂[220可以是含水乙醇、乙醇或其他醇类。在本方法中，将灵芝物种残余物和提取溶剂加入提取容器1001中，并进行加热和搅拌。可以加热至90°C、至约80°C、至约70。C、至约60°C、或至约60-80°C。提取可进行约1-10小时、约1-6小时、约1-3小时或约l-2小时。将所得的流体提取物离心[120。收集滤液(上清液)作为产物[120，并测量滤液体积和固含量(干重)。保留固体提取残余物材料[130，并将其储存起来以用于进一步加工(参见步骤4)。可以根据必须或所想要的结果来多次重复提取过程。可以重复2次或2次以上、3次或3次以上、4次或4次以上等。例如，图l-步骤2示出了三阶段方法，其中第二阶段和第三阶段采用了相同的方法和条件。该提取步骤的一个实施例在实施例2中示出，并且结果示于表7-9中。表7.在乙醇浸出的提取物粗品和最终纯化的三薛烯的提取物组<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表8.在曱醇中乙醇浸出的浓度为1.89mg/ml的灵芝三辟烯提取物粗品级分的HPLC分析结果<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表9.在曱醇中浓度为1.5mg/ml的经纯化的灵芝三辟烯提取物级分的HPLC分析结果<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>歩骤3.三碎烯级分的纯化对灵芝物种的三碎烯提取物粗品中的三萜烯级分进行提取和纯化的概括性说明以用图表示的方式显示于图3-步骤3(参见附录1)中。原料[120为由步骤2的三阶段乙醇浸出方法得到的三萜烯提取物粗品。溶剂[230]为氯仿和饱和的碳酸氢钠(NaHC02)水溶液(10%)[240]。在该方法中，将三辟烯提取物粗品原料[120]和第一提取溶剂[230]加入到提取容器[100中，并进行搅拌，使得三碎烯级分溶解于溶剂中。将氯仿溶剂引入分离器系统[320]中。然后，将第二提取溶剂[240]加入装在分离器体系中的溶液中，再进行混合和排气，然后将混合物静置，从而使水基溶剂(上层)与氯仿溶剂(下层)分离。收集水基溶液层[400，测量其体积以及固含量(干重)。可以保留氯仿(下层)残余物溶液[340，以进一步用于NaHC02提取阶段。可以根据必须或所想要的结果来多次重复NaHC02提取过程。可以重复2次或2次以上、3次或3次以上、4次或4次以上等。例如，图3-步骤3A示出了使用NaHC02的三阶段方法，其中第二阶段和第三阶段采用了相同的方法和条件。将由每个提取阶段收集到的水基溶液[400+410+420]结合[430]。将结合溶液酸化。酸为HC1[250]。该溶液的最终pH可以为约3-5、或约4。然后，采用溶剂分离器系统[320]，用溶剂氯仿[260]来提取[340]酸化的溶液。收集含有所需三萜系化合物的氯仿溶液层，并将其储存起来[450]。可以根据必须或所想要的结果来多次重复氯仿提取过程。例如，图3-步骤3B示出了使用氯仿的二阶段方法，其中第二阶段采用了相同的方法和条件。在提取结束后，丢弃水基残余物。在减压条件下，采用旋转蒸发方法使多个阶段中的氯仿溶剂[480]蒸发，并循环[3卯]。将纯化的三辟烯级分干燥[395]，从而除去剩余的氯仿，并将干燥的三碎烯级分作为纯化的三萜烯级分[500]储存起来。该提取步骤的一个实施例在实施例3中示出，并且结果示于表4中。纯化的三萜烯级分的总提取产率占起始的灵芝原料的0.6质量重量％,并且三辟烯的纯度为约88%，比三辟烯提取物粗品级分的纯度提高了4倍。因此，三薛系化合物的提取率比在起始灵芝原料中存在的三辟系化合物高65%。HPLC色谱图显示出许多未知的峰，鉴于已经从赤芝植物材料中分离到超过130种高度氧化的三辟烯及相关化合物，所以上述未知的峰已经被预料到了。三种参照标准品(即，灵芝酸A、灵芝酸F和灵芝三醇)的总浓度为约4%,从而证实了对总的三辟系化合物进行检测对于在商业生产纯化的三辟烯级分的质量控制中的重要性。步骤4.水浸出方法和多糖沉淀科学文献中已经将灵芝物种的化学成分中的多糖提取物级分定义为"可溶于水但不溶于乙醇的提取物级分"。对采用水溶剂浸出及乙醇沉淀方法来从灵芝物种的提取物中提取多糖级分的概括'l"生说明以用图表示的方式显示于图4-步骤4中。原料[10]或[1201为天然的灵芝物种的植物材料粉末或由步骤2的乙醇浸出提取方法得到的固体残余物。在2个阶段中，对该原料进行浸出提取。溶剂为蒸馏水[270。在该方法中，将灵芝物种原料[10或[120以及提取溶剂[270加入提取容器[700中，并进行加热和搅拌。可以加热至IO(TC、至约60。C或至约70-80。C。提取可以进行约1-5小时、约2-4小时或约2小时。可以根据必须或所想要的结果来多次重复提取过程。将多个阶段的提取溶液[700+720混合，并将浆料过滤[610、离心[620，然后收集上清液并进行蒸发[630以除去水，直到溶液中的化学化合物[640的浓度提高约8倍为止。然后使用无水乙醇[280，重新形成体积为起始体积的溶液，使得最终乙醇的浓度为60-80%。观察到大量沉淀[650]。将溶液离心[660，并进行倾析[6701,所得的上清液残余物[750可储存起来以用于进一步的加工或者将该残余物丢弃。干燥[680]后的沉淀产物[740为纯化多糖级分[760]，通过使用分子量为5,000、50,000和410,000的右旋糖酐作为参照标准品采用比色法来分析该多糖级分中的多糖。使用3种不同分子量的右旋糖酐作为标准品测定的、经提取的多糖级分的纯度分别为约80%、59%和52%,相对于起始天然灵芝原料的总提取率为2质量重量％。将使用3种右旋糖酐标准品得到的纯度测量值相结合显示纯度高于95%，其为极高的纯度水平。主要杂质似乎为所需的凝集素蛋白(其为3质量重量％),该凝集素蛋白也具有有益的生物活性。实施例4中进一步教导了本发明的方法。其结果显示于表10中。此外，采用AccuTOF-DART质谱测定法来进一步计算含有纯化多糖级分的化合物的分子量。所得结果示于图6和7中。表10.水浸出提取和乙醇沉淀的多糖级分的多糖分析和蛋白质分析<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>*提取率为相对于初始灵芝原料的质量重量％。灵芝多糖的提取产率为起始灵芝植物原料的约2质量重量％。多糖级分的纯度为520-800mg/g右旋糖酐标准当量，表明多糖级分中灵芝多糖化学成分的纯度〉90%。基于大量实验方法所得的结果，可以非常合理地得出这样的结论2%提取产率的级分几乎100%地为天然灵芝物种原料中的溶于水但不溶于乙醇的多糖。此外，该级分中的主要杂质似乎为所需的凝集素蛋白，其占纯化多糖级分的约3质量重量％。对于除去溶液中的醇的方法，有许多方法是本领域已知的。如果需要保留醇以用于循环使用，则可以在提取之后在通常的气氛压力或减低的气氛压力下通过蒸馏来除去溶液中的醇。醇可以纟皮再生。此外，还有许多本领域已知的方法用于除去溶液(水溶液或已经除去醇的溶液)中的水。所述的方法包括(但不限于)在合适的载体(例如(但不限于)碳酸镁或糊精)上将水溶液进行喷雾干燥，或者，可供选用的方式是，通过冷冻干燥或折射窗干燥将液体进行干燥。提取物的纯度在实施之前所述的提取方法的过程中，发现在精油SCC02提取物级分(参见步骤1A)中，可以以50-99质量重量％的产率提取出精油化学成分，而该精油化学成分在灵芝物种的起始干态灵芝树皮状原料中的纯度高于95%。采用步骤IB中所教导的方法(SCC02提取和分级方法)，由于精油的化学成分被分级成高纯度(>90%)的精油亚级分，所以精油的产率降低。此外，本发明所教导的SCC02提取和分级方法使得含有精油化学成分级分的单种类的化学化合物的比例(含量比)被改变，从而可以得到含量比独特的精油亚级分来用于特殊的医药用途。例如，醇类精油化学成分的浓度可以升高，同时降低脂肪酸化合物的浓度，反之亦然。采用本发明步骤2所教导的方法，可以以3质量重量％的产率由三萜烯化学成分的浓度为20%的起始灵芝物种原料中得到乙醇浸出的三薛烯粗品级分。这相当于在天然灵芝物种的植物材料中得到产率为约66%的三碎烯的相关化学成分。采用本发明步骤3(三萜烯级分的纯化)所教导的方法，可以得到纯度为超过提取物85干质量％的三萜烯级分。由水醇浸出的提取物原料中可以提取出几乎100%的三碎烯。这相当于在天然灵芝物种的植物材料中得到产率为约66%的三碎酸化学成分。采用本发明步骤4所教导的方法，可以以1.5-2.0质量重量％的产率由含有纯度高于90%多糖的起始灵芝物种原料中得到纯化的多糖级分。多糖产率为几乎100%，所述多糖为存在于天然灵芝物种原料中的溶于水但不溶于乙醇的多糖。该级分中主要的非多糖化学成分似乎为凝集素蛋白，该凝集素蛋白占多糖级分的约3质量重量％。这些蛋白质似乎与多糖协同起作用，从而增强了该级分的有益的生物活性。最后，本发明所教导的方法使得灵芝物种的新型精油化学成分级分、新型精油级分亚级分、新型三萜烯级分和新型多糖级分的纯度(浓度)高达精油级分中所需化学成分的99质量重量％,高达三萜烯级分中所需化学成分的87质量重量％,高达多糖级分中所需化学成分的95质量重量％。所采用的具体的提取环境、提取速度、溶剂和提取技术取决于原始材料的起始化学成分的含量比和最终提取产物所需的纯度水平。本领域的技术人员仅使用常规的实验方法便可以容易地确定本发明所教导的具体方法，其中所述的常规的实验方法通常对实验过程进行一定的调整以便适合样品的变化，该变化是对起始材料的属性而言的，而所述的起始材料将被加工成具有特定属性的产品材料。例如，在非常多的灵芝物种的植物材料中，可以采用本领域的技术人员所知的方法来测定精油化学成分、三碎烯和多糖的起始浓度，如本发明所教导的那样。采用本文所公开的提取方法，本领域的技术人员可以确定例如精油化学成分的起始浓度到最终提取产物中精油化学成分的预定的量或分配情况(含量比)之间的变化量，从而在最终的灵芝物种提取产物中达到所需的含量和/或化学含量比。食品和药物关于本发明的食品的形式，可以制成任何可选的形式，例如细粒状、颗粒状、糊状、凝胶状、固态或液态。在这些形式中，可以可选地含有多种本领域的技术人员所公知的、可加入到食品中的化合物，例如，粘结剂、分解剂、增粘剂、分散剂、再吸收促进剂、矫味剂(tastingagent)、緩冲剂、表面活性剂、溶解助剂、防腐剂、乳化剂、等渗剂、稳定剂、pH控制剂等。对加入食品中的接骨木提取物的量没有特别限定，例如，其可以为每天加入约10mg至5g、优选为50mg至2g作为重约60kg的成人所吸收的量。特别是，当作为用于保护健康的食品、功能性食品等时，优选的是含有本发明的有效成分，其用量为可以使本发明的预定效果充分地显示出来。根据通常所知的方法，可以可选地将本发明的药剂制成(例如)固体制剂，例如片剂、颗粒剂、粉剂、胶嚢剂等；或液体制剂，例如注射剂等。可以向这些药剂中配制多种通常使用的材料，例如粘结剂、分解剂、增粘剂、分散剂、再吸收促进剂、矫味剂、緩冲剂、表面活性剂、溶解助剂、防腐剂、乳化剂、等渗剂、稳定剂、pH控制剂等。药剂中有效成分(灵芝提取物)的施用量可以根据药剂的种类、剂型以及待使用患者的年龄、体重或症状等的不同而变化，例如，当采用经口给药时，对于体重为约60kg的成年人而言，每天可以给药1次或多次，给药量为每天约10mg至5g，优选为每天约50mg至2g。有效成分可以是灵芝提取物中的一种或多种组分。为了有效地治疗急性或慢性疾病，每天可以施用新型灵芝物种提取物1次或多次。本发明的一种方法包括每天至少1次施用含有灵芝物种成分化合物的提取物。本发明的方法还包括每天施用这种提取物1次以上、每天施用2次以上、每天施用3次以上以及每天施用1至15次。在几天、几周、几个月或几年的时间内，可以连续地每天都进行上述给药行为，或者在特定的时间进行上述给药行为，从而治疗或预防特殊的疾病。例如，在几年的时间内，每天至少l次给予某人灵芝物种的提取物，从而增强免疫系统，或者治疗心血管疾病和中风，或者预防或治疗炎性疾病和关节炎，或者治疗高血压，或者预防和治疗普通感冒、流感或其他病毒性疾病，或者预防或治疗细菌性疾病，或者治疗糖尿病，或者治疗高胆固醇血症，或者预防或治疗癌症。上述描述包括了目前预计的本发明的最佳实施方式。进行如此描述是为了说明本发明的基本原理，并且不应该被理解为有限定的意思。通过以下实施例进一步对本发明进行说明，无论如何，这些实施例都不能被解释为限定了本发明的范围。相反，应该清楚地理解可以采用多种手段来变化成本发明的其他实施方案、修改方式以及等价物，在阅读了此处的说明书之后，上述实施方案、修改方式以及等价物可以向本领域的技术人员表明它们没有脱离本发明的精神。经过慎重考虑，本文所用的所有术语都被解释为本领域的技术人员通常接受的用法。专利及专利申请或者本文所引用的参考文献都以引用方式全文并入本文。实施例材泮牛和方法植物性材料购买得到赤芝(GL)干菇。市内测定原料中活性化合物的浓度，并列于表11中。.赤芝菇的化学组成<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>1精油被估测为在70。C和500巴下采用SCC02提取所达到的最高产率。2三辟系化合物是通过甲醇提取来估测的。3多糖和蛋白质是通过水提取来估测的。有机溶剂丙酮(CAS:67匿64-1),299.5%，ACS试剂(179124);乙腈(CAS:75-05-8)，用于HPLC,梯度>99.9%(GC)(000687);己烷(CAS弁:110-54-3)，95+%，分光光度级别(248878);乙酸乙酯(CAS弁141-78-6),99.5+%,ACS级(319902);乙醇(CAS:64-17-5)，用4.8%的异丙醇变性(02853);乙醇(CAS:64-17-5)，无水乙醇，(02883);曱醇(CAS弁:67-56-1)，99.93%,ACSHPLC级别,(4391993);氯仿(CAS弁:67-66-3),》99.0%(GC),水(CAS弁7732-18-5),HPLC级别，(95304)。所以这些均购自Sigma-Aldrich公司。酸和碱乙酸(64-19-7)，99.7+%，ACS试剂(320099);盐酸(7647-01-0),滴定标准的1.0N的水溶液(318949);碳酸氢钠(S263-1,Lot#:037406)，购自Fisher公司。Bradford试剂(ProductNumberB6916)，购自sigma7>司。化学参照标准品血清白蛋白(9048-46-8),细胞培养检测用牛血清白蛋白(BSA)(级分V)粉末(A9418)，购自sigma公司；灵芝酸A(lot弁07057-022)、灵芝酸F(Lot弁07068-037)和灵芝三醇(Lot弁07060-128),购自sigma公司。根据DIN鉴定的右旋糖肝标准品5000(00269)、50,000(00891)和410,000(00895),购自fluka公司。这些标准品的结构示于表12中。表12.用于赤芝的三辟系化合物参照标准品的化学结构灵芝酸A灵芝酸FMe,''、II三O^^j/"^OMeM^]^J〕O^A^j^^OMeMeT丁1Mel\4ejT^irx^e、。MeM'e灵芝三醇Me、>^、0HMe丄LMe丄lJ_1JfT]f"MeMeHPLC方法色谱系统装配有LC10ADVP泵和SPD-M10AVP光电二极管阵列检测器的Shimadzu高效液相色语LC-10AVP系统。在反相JupiterC18柱(250x4.6mmI.D.,5|u,300A)(Phenomenex,部件#:00G-4053-E0,系列号2217520-3，批号5243-17)上对所得的乙醇提取的产物进行测定。注入体积为10pl，流动相的流动速率为lml/min。柱温为25°C。流动相由八(2.5%含水乙酸，v/v)和B(乙腈)构成。梯度程序如下头12分钟，8的浓度保持在30%;第12-30分钟，溶剂B由30%至65%线性升高；第30-40分钟，B的浓度保持在65%;第40-45分钟，B的浓度由65%至85%线性升高。通过将称重定量的标准品化合物溶于5mg/ml的乙醇中来制备表12中列出的3种标准品的曱醇储液。然后，将混合的参照标准品溶液逐步稀释，从而得到最终浓度分别为2、1、0.5、0.1和0.05mg/ml的一系列溶液。所有的储液和工作溶液都在7天内使用，并储存在+4。C的制冷器中，并且在使用前使其恢复至室温。使用上述溶液来鉴定赤芝提取物中的各种化合物并进行定量。灵芝酸A、灵芝酸F和灵芝三醇的保留时间分别为约13.33、21.63和34.42分钟。发现，线性拟合为0.01至20|Lig。回归方程和相关系数如下灵芝酸A:峰面积=790642xC(貼)—23406，R2=0.9994(N=6);灵芝酸F:峰面积=513374xC(ng)—12458，R2=0.9999(N=6);灵芝三醇峰面积=753902xC((ig)—29095，R2=0,9997(N=6)。HPLC的结果示于表B中。通过基于峰面积的相应的标准曲线，采用插值法来计算各样品中参照标准品的含量。表13.在乙醇中浓度为1mg/ml的赤芝三萜系化合物参照标准品的HPLC分析结果ID保留时间(分钟)峰面积(mAu.min)峰高(mAu)峰宽(分钟)起始时间(分钟)停止时间(分钟)理论塔板数灵芝酸A13.3332091756709591.4412.814.241371灵芝酸F21.6321448041805030.8221,3822.211134灵芝三醇34.42128509191535951.5133.9635.488314i通过以下方法计算理论塔板数N=16x(tR/w)2。tR为保留时间w为峰宽，https:〃www.mn-net.com/web%5CMN-WEB-HPLCKatalog.nsf/WebE/GRUNDLAGEN。GC-MS分析在ShimadzuGCMS-QP2010系统中进行GC-MS分析。该系统包括高效气相色语仪、直接连用的GC/MS界面、具有独立的温度控制装置的电子轰击(EI)离子源、四极质谱计等。所述系统受GCMS溶液第2版软件的控制，来用于获取数据和进行运行后分析。在AgilentJ&WDB-5石英玻璃毛细管柱(30mx0.25mm内径，膜厚度为0.25pm)(商品目录:1225032,系列号US5285774H)中，采用以下温度过程进行分离操作。初始温度为60。C，保持2分钟；然后以4。C/分钟的速度将温度升高至120°C，保持15分钟；然后以4°C/分钟的速度将温度升高至200°C，保持15分钟；然后以4。C/分钟的速度将温度升高至240°C,保持15分钟，总的运行时间为92分钟。样品注射温度为250°C，使用自动注射器以不分流的模式在1分钟内注入lpl样品。载气为氦气，并通过60KPa的压力控制流动速率。在这种压力下，流动速率为1.03ml/min,线性速度为37.1cm/min。MS离子源的温度为230。C,GC/MS界面温度为250。C。MS检测器以1000AMU/秒的扫描速度在50m/z至500m/z之间扫描。溶剂截止温度为3.5分钟。采用紫外(UV)分光法对三碎系化合物进行快速定量仪器ShimazuUV-Vis分光光度计(具有UV探针的UV1700:S/N:A1102421982LP)标准口P在饱和碳酸氢钠(NaHC03)溶液中，制备浓度为0.2mg/ml的三萜系化合物标准品一灵芝酸F的溶液。使用饱和的碳酸氩钠溶液将上述溶液分别稀释成0,2、0.1、0,05、0.025和0.0125mg/ml。记录在257nm下的吸光率。结果示于表14中。表14.采用UV分光法，以灵芝酸F作为标准品来对总的三辟系化合物进行的快速定量<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>多糖分析(Dubois1956)仪器ShimazuUV-Vis分光光度计(具有UV探针的UV1700:S/N:A1102421982LP)标准口tr采用比色法来进行多糖分析。在蒸馏水中制备浓度为0.1mg/ml的右旋糖酐(Mw二5000、50,000和410，000)储液。分别取0.08、0.16、0.24、0.32和0.40ml的储液，并用蒸馏水将它们的体积补充至0.4ml。然后加入0.2ml的5%苯酚溶液和lml的浓硫酸。使混合物静置10分钟，然后进行UV扫描。发现，最大的吸光率为488nm处。然后，将波长设定在488nm处，再测量每个样品的吸光率。所得结果示于表15中。获得了如下所示的针对每种右旋糖酐溶液的标准品标准曲线右旋糖酐分5K的吸光率=0.01919+0.027782COg),R2=0.97(N=5);右旋糖酐50K的吸光率=0,0075714+0.032196C((ig)，R2=0.96(N=5);右旋糖酐410K的吸光率=0.03481+0.036293C(|ag),R2=0.98(N=5)。表15.用右旋糖酐作为参照标准品来对多糖进行的比色分析<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>多糖分子量分析在装配有RID-10A折光率检测器的HPLC系统中进行多糖分子量分析。将流动速率设定为0.6ml/min。使用300x7.8mmI.D.TSK-GELG4000PWxL柱(粒径为10|am，孔径为300A,Tosoh公司，Minato-ku,Tokyo,Japan。商品目录号08022,柱号H3463)进行所述分析。流动相为蒸馏水，并且注射体积为lOjil。柱温为35°C,RID池温为40。C。分析时间为40分钟。通过将称重定量的右旋糖酐标准品化合物以5mg/ml的浓度溶解于蒸馏水中来制备分子量不同的右旋糖酐标准品的蒸馏水储液。右旋糖酐5k、右旋糖酐25k、右旋糖酐50k、右旋糖酐270k和右旋糖酐410k的的保留时间分别为约15.70、13.82、12.93、11.08和10.76分钟，如表16所示。通过测定保留时间(X轴)与LogMw(Y轴)的关系，得到线性曲线拟合。所得回归方程为Log(Mw)=9.669-0.3817xRt(R2=0.99859)。通过测定样品的保留时间，并通过上述方程可以计算出未知样品的分子量。表16.右旋糖酐参照标准品的HPLC-RID的分析结果<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>实时直接分析(DART)的质镨法仪器使用JOELAccuTOFDARTLC飞行时间(timeofflight)质谱仪(JoelUSA,Inc.,Peabody，Massachusetts,USA)。该飞4亍时间(TOF)质谱仪技术不需要任何的样品制备过程，并且可以得到精确至0.00001质量单位的质量。对各级分进行分析的方法用于捕获和分析各级分的仪器的设定方式如下对于阳离子模式而言，DART喷针电压为3000V,加热元件为250°C,电极1为100V,电极2为250V，氦气流速为7.45升/分钟(L/min)。对于质语而言，孔1的电压为10V,环状透镜的电压为5V,孑L2的电压为3V。将峰值电压设定为600V以便获得起始值为约60m/z的分辨能力，而且能够在较大的质量范围内进行充分分辨。将微通道板型探测器(MCP)的电压设定为2450V。每天上午在引入样品前，要使用0.5M的咖啡因溶液标准品进行校准(Sigma-AlrichCo.,St.Louis,USA)。校准公差保持为<5mmu。用无菌镊子将样品引入DART氦等离子中，使得样品的表面积最大程度地暴露于氦等离子束下。为了将样品引入到等离子束中，采用了扫动方式(sweepingmotion)。这种扫动^f吏得冲羊品以约0.5秒/次扫动的速度通过前后划动而纟皮反复地暴露出来，并且防止样品发生高温分解。重复这种扫动，直到在探测器中观察到可评估的总离子(TIC)流信号为止，然后移开样品，使得基线/背景正常化。对于阴离子才莫式而言，将DART和AccuTOFMS转换为阴离子模式。喷针电压为3000V，加热元件为250°C,电极1为100V,电极2为250V，氦气流速为7.45L/min。对于质谱而言，孑L1为-20V，环状透镜为-13V,孑L2为-5V。峰值电压为200V。MCP电压被设定为2450V。样品的引入方式与阳离子模式中的完全一样。使用仪器所才是供的MassCenterMain软件包进行所有的数据分析。实施例1步骤1A的实施例采用单步骤的SFE进行的灵芝精油级分的最大程度的提取以及纯化4吏用购自SupercriticalFluidTechnologies公司(Newark,DE)的SFT250进行实验，该SFT250的压力和温度分别被设计为最多690巴和200。C。该装置允许在超临界状态下进行简单有效的提取，并且允许在动态模式或静态模式下灵活地操作。该装置主要由三个模块构成烘箱、泵和控制器、以及收集模块。烘箱具有一个预热柱和一个100ml的提取容器。泵模块装配有由压缩空气驱动的泵，其恒定流量为300ml/min。收集才莫块为40ml的玻璃^f瓦，其用盖和隔片来密封回收的提取产物。所述装置设有微调阀和流量计。提取容器的压力和温度受到监测，并控制在土3巴和±1。C的范围内。将5克经研磨的幼嫩赤灵芝子实体粉末加入到100ml的提取容器中，以用于各个实验，其中采用筛网(140目)过篩测量得到的所述粉末的大小为105|um。将玻璃棉放置在预热柱的两端，从而遮蔽了任何可能存在的固体材料。将烘箱预热到所需的温度，然后放置被塞满的容器。在将该容器连接到烘箱中之后，通过用C02对系统加压(850psig)来测试提取系统的渗漏情况，并对提取系统进行吹扫。封闭系统，并用空气驱动的液泵将该系统加压至所需的提取压力。然后，使系统静置3分钟以使其平衡。对取样瓶(40ml)称重，并使取样瓶与取样口连通。通过使C02以5SLPM(IOg/min)的速度流动来进行提取，该过程由计量阀控制。产率被定义为总的提取物与供入原料的重量比。产率被定义为提取出的精油与初始加入到提取器中的原料的重量百分比。整个提取方案采用的是将温度从40。C升至80。C以及将压力从100巴升至500巴。实施例2步骤2的实施例三碎烯粗品级分的乙醇浸出提取采用3个阶段对灵芝物种的三辟烯化学成分进行溶剂提取的典型实施例如下原料为25gm由采用SCC02提取精油的步骤1(40°C，300bar)中得到的经研磨的灵芝物种子实体的SFE残余物。溶剂为500ml乙醇。在本方法中，将原料和500ml乙醇分别加入到1000ml的提取容器中，并在70。C的热水浴中混合2小时。使用颗粒保留尺寸为4-8pm的FisherbrandP4滤纸来过滤4是取溶液，然后在2000rpm下离心IO分钟。收集滤液(上清液)以用于计算产率和HPLC分析。采用上述方法，将阶段1的颗粒残余物提取2小时(阶段2)，再将阶段2的残余物提取2小时。将由3个阶段的提取过程中得到的上清液流体提取物混合，采用减压旋转蒸发法将乙醇蒸发，并将其循环使用。将提取物在50。C下真空干燥12小时。测量干态三辟烯提取物粗品级分的质量平衡，采用总的三辟系化合物检测方法测量总的三辟烯的含量，并采用HPLC进行分析。收集由3个阶段的提取过程中得到的最终的残余物，并储存起来以用于进一步提取(参见下文)。在3个阶段的乙醇浸出过程中，三薛烯提取物粗品的总的产率基于三萜系化合物的总纯度为约20%的灵芝物种原料重量为约3质量重量％。为了得到高更纯度的三碎类化学成分，需要进行其他加工过程(参见实施3)。实施例3步骤3的实施例三辟烯级分的纯化乙醇浸出的粗品级分中三薛烯的纯化过程的典型实验例如下在室温下，将lg由步骤2所得的乙醇浸出的三辟烯粗品级分溶解于装在提取容器中的50ml氯仿中，并搅拌5分钟。将该澄清溶液倒入200ml分液漏斗中。将40ml的饱和NaHC03(10%)水溶液加入氯仿溶液中。将该混合物强力摇动15秒钟，释放压力，再强力摇动第二个15秒钟。总体混合操作少于30秒钟就足以使得溶质在氯仿相和水基溶液相之间达到平衡。由于在该过程中产生了大量的C02,所以必需特别注意要释放压力。将分液漏斗静止放置，直到两个溶液层明显分开为止(约30分钟)。然后，打开分液漏斗的旋阀，将下层氯仿层排入到单独的瓶中，并储存起来以用于另外2个NaHC03溶剂提取阶段中。将剩余的水基溶液从漏斗的上部倒出，并储存起来。采用相同的方法进行另外2个氯仿溶液的NaHC03提取阶段。将3个阶段的NaHC03提取溶液(120ml)合并，并用6N的HC1(约3ml)酸化至pH为4。将酸化的溶液倒入200ml干净的分液漏斗中。在2个阶段中将50ml的氯仿引入分液漏斗中，从而将三碎烯从酸化的水基溶液中提取出来。上述方法在室温下进行。收集两个氯仿层，将它们合并并储存起来。将剩余的水基溶液丢弃。在减压条件下，采用旋转蒸发的方法使含有纯化的三萜烯化学成分的合并氯仿溶液蒸发，并将氯仿循环使用。将纯化的三萜烯提取级分在50。C的烘箱中干燥，从而除去剩余的氯仿。通过质量平衡法计算提取产率，采用总的三辟系化合物UV分光检测法测定总的三薛烯的含量，并采用HPLC进行分析。实施例4步骤4的实施例多糖级分的提取灵芝物种中可溶于水但不溶于乙醇的纯化多糖级分化学成分的溶剂提取和沉淀过程的典型实验例如下原料为25gm由采用SFE提取的步骤1和采用乙醇浸出提取的步骤2所得的固体残余物。在2个阶段中，在70T下用500ml的蒸馏水将所述原料提取2个小时。将2份提取溶液合并，并用FisherbrandP4滤纸(孔径为4-8ium)过滤所得浆料，再在2,000rpm下离心20分钟。收集上清液。采用旋转蒸发将澄清的上清液提取物溶液由1000ml浓缩至200ml。然后，加入600或800ml的无水乙醇，由此最终的乙醇浓度为60或80%。使溶液静止1小时，并观察到沉淀。在2，000rpm下，将提取物溶液离心20分钟，并将上清液倒出，或者储存起来以用于进一步的加工处理或者将其丟弃。在沉淀前和沉淀好分别进行质量平衡，从而计算出多糖和蛋白质的提取产率。收集沉淀，并在50。C的烘箱中干燥12小时。对干态多糖级分进行称重，并将其溶解于水中，以便分别采用比色法和Bradford蛋白质检测法来分析多糖和蛋白质的纯度，其中在实施比色法的过程中，采用右旋糖酐作为参照标准品。实施例5将以下组分混合制成配制物赤芝子实体的提取物150.0mg精油级分(10mg,6.6干重％)多酚级分(120mg，80干重％)多糖(40mg，26.6干重％)甜菊糖苷(甜菊提取物)12.5mg羧甲基纤维素35.5mg乳糖77.0mg总计275.0mg新型的灵芝物种提取物包含精油级分、三萜烯级分和多糖级分，其中这些化合物的质量重量％大于在天然灵芝物种的植物材料中或在常规的提取产物中得到的这些化合物的质量重量％。所得的配制物可以被制成任何口服制剂的形式，并且可以根据生理、心理和医疗效果(免疫增强作用、治疗糖尿病、抗血小板聚集和抗血栓、预防和治疗心血管疾病和脑血管疾病、抗动脉硬化症、抗高胆固醇血症、抗高血压、抗炎、抗过敏、抗关节炎、抗风湿、抗自体免疫疾病、抗病毒(包括但不限于普通感冒病毒、流感病毒、mv、单纯疱渗病毒、带状疱渗病毒和B型肝炎病毒)、抗细菌以及预防和治疗癌症)的需要来每天给药1次至每天给药15次,实施例6将以下组分混合制成配制物赤芝子实体的提取物精油级分(30mg，20干重％)多酚级分(60mg,40干重％)多糖(60.0mg，40干重％)维生素C三氯半乳蔗糖绿豆粉10:1摩卡咖啡香料巧克力香料150.0mg15.0mg35.0mg50.0mg40.0mg10.0mg总计300.0mg新型的灵芝物种提取物包含精油、三薛烯和多糖化学成分级分，其中这些化合物的质量重量％大于在天然植物材料中或在常规的提取产物中得到的这些化合物的质量重量％。所得的配制物可以被制成任何口服制剂的形式，并且可以根据生理、心理和所需医疗效果的需要来安全地每天给药最多15次(参见上述实施例1)。所引用的参考文献1.WangYY等人，BioorgMedChem10:1057-1062，2002.2.SoneY等人，AgricBiolChem49:2641-2653，1985.3.BaoX等人，CarbohydrRes336:127-140,2001.4.BaoX等人，Phytochemistry59:175-181，2002.5.VanDerHornL等人，Transplantation60:438-443,1995.6.MiyasakaN等人，BiochemBiophyResCommun186:385-390,1992.7.StreeperRT&SatsangiN.SUPELCO14:1-3,1995.8.Giner-LarzaEM等人，JEthnopharmacol73:61-69,2000.9.Wachtel-GalorS等人,In:HerbalandTraditionalMedicine.MolecularAspectsofHealth(PackerL,OngCN,HalliwellB，eds)，MarcelDekker,NewYork,2004,pp179-228.10.KohdaH等人，ChemPharmBull33:1367-1374,1985.11.LeeJM等人，PhytotherRes15:245-249，2001,12.ZhuM等人，PhytotherRes13:529-531,1999.13.ShimizuA等人，ChemPharmBull33:3012-3015,1985.14.SuCY等人，ThrombRes9:135-145，2000.15.JongSC&BirminghamJM.AdvApplMicrobiol37:101-134,1992.16.LeeSY等人，ChemPharmBull38:1359-1364,1990.17.KammatsuseK等人，YakugakuZasshi105:942-947,1985.18.KomodaY等人，ChemPharmBull37:531-533，1989.19.ShiehYH等人，AmJChinMed29:501-507,2001.20.ParkEJ等人，BiolPharmBull20:417-420,1997.21.EoSK等人，JEthnopharmacol68:129-136,1999.22.KimYS等人，JEthnopharmacol72:451-458,2000.23.OhKW等人，JEthnopharmacol72-221-227,2000.24.El-MekkawyS等人，Phytochemistry49:1651-1657,1998.25.NostroA等人，LettApplMicrobiol30:379-384,2000.26.WuBS等人，JNatProd64:1121-1122,2001,27.ZhangQH等人，IntJMushrooms1:207-215，1999.28.LuH等人，OncolRep8:1341-1345,2001，29.BradfordM.Anal.Biochem72:248-254，1976.30.DuboisM等人，AnalyticalChem28:350-356,1956.31.PharmacopoeiaofthePeople'sRepublicofChina.PartII.TheStatePharmacopoeiaCommitteeofthePeople'sRepublicofChina,BeijingChemicalIndustryPress,200.权利要求1.一种灵芝物种提取物，其包含具有图6至29中任意一幅所示的实时直接分析(DART)的质谱图的级分。2.权利要求1所述的灵芝物种提取物，其中所述提取物包括选自精油、三辟烯、多糖和它们的组合中的化合物。3.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述精油选自9，12-十八石友二烯酸、反亚油酸、正十六酸、辛酸、十四酸、十五酸、9-十八烯酸、十八酸、2-丙烯酸、十三烷基酯、l-十一醇、l-十二醇、l-十四醇、l-十六醇、l-十七醇、1-二十醇和它们的组合。4.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述三萜烯选自灵芝酸、赤芝酸、丹芝酸、灵芝醇、赤芝嗣、赤芝醇、ganodermenonol、灵芝二醇、灵芝三醇、灵芝酮二醇、灵芝酮三醇和它们的组合。5.权利要求2所述的灵芝物种，其中所述多糖选自葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、木糖醛酸和它们的组合。6.权利要求2所述的灵芝物种，其中所述精油的量为大于8重量％。7.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述精油的量为25重量％至90重量％。8.权利要求2所迷的灵芝物种提取物，其中所述精油的量为50重量％至90重量％。9.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述精油的量为75重量％至90重量％。10.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述三辟烯的量为大于2重量％。11.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述三辟烯的量为25重量％至90重量％。12.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述三辟烯的量为50重量％至90重量％。13.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述三辟烯的量为75重量％至90重量％。14.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述多糖的量为大于15重量％。15.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述多糖的量为25重量％至90重量％。16.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述多糖的量为50重量％至90重量％。17.权利要求2所述的灵芝物种提取物，其中所述多糖的量为75重量％至90重量％。18.权利要求1所述的灵芝物种提取物，其中所述提取物包含2重量％至99重量％的精油，5重量％至88重量％的三辟烯，以及2重量％至95重量％的多糖。19.含有权利要求1所述的灵芝物种提取物的食品或药剂。20.—种制备具有至少一个预定特征的灵芝物种提取物的方而得到精油级分、三萜烯级分和多糖级分a)通过超临界二氧化碳提取方法来提取灵芝物种植物材料，从而得到精油级分和第一残余物；b)通过醇提取来提取由步骤a)所得的第一残余物，从而得到三萜烯级分和第二残余物；以及c)通过水提取来提取由步骤b)所得的第二残余物和用醇使多糖沉淀，从而得到多糖级分。21.权利要求20所述的方法，其中步骤a)包括1)向提取容器中装入经研磨的灵芝物种植物材料；2)在超临界条件下加入二氧化碳；3)使所述灵芝物种植物材料与所述二氧化碳接触一段时间；以及4)在收集容器中收集精油级分。22.权利要求20所述的方法，其进一步包括通过使用超临界二氧化碳分级分离系统对所述精油级分进行分级，从而改变所述精油化学化合物比率的步骤。23.权利要求21所述的方法，其中超临界条件包括在温度为35。C至90。C下，压力为60巴至800巴。24.权利要求21所述的方法，其中超临界条件包括在温度为40。C至80。C下，压力为60巴至500巴。25.权利要求21所述的方法，其中所述时间为30分钟至2.5小时。26.权利要求21所述的方法，其中所述时间为l小时。27.权利要求20所述的方法，其中步骤b)包括1)使由步骤a)所得的第一残余物与醇溶剂接触一段足以提取出三萜烯化学成分的时间；2)采用液-液溶剂提取方法来纯化所述三辟烯化学成分。28.权利要求27所述的方法，其中一种溶剂为氯仿，另一种溶剂为饱和的NaHC03水溶液。29.权利要求27所述的方法，其中所述醇溶剂为乙醇。30.权利要求27所述的方法，其中步骤1)是在30。C至100°C下实施的。31.权利要求27所述的方法，其中步骤l)是在60。C至100。C下实施的。32.权利要求27所述的方法，其中所述时间为1小时至10小时。33.权利要求27所述的方法，其中所述时间为1小时至5小时。34.权利要求27所述的方法，其中所述时间为2小时。35.权利要求20所述的方法，其中步骤c)包括1)使灵芝物种植物材料或由步骤b)所得的第二残余物与水接触一段足以提取出多糖的时间；以及2)通过醇沉淀使多糖从水溶液中沉淀出来。36.权利要求35所述的方法，其中所述的水为70。C至90。C。37.权利要求35所述的方法，其中所述的水为80。C至90°C。38.权利要求35所述的方法，其中所述时间为1小时至5小时。39.权利要求35所述的方法，其中所述时间为2小时至4小时。40.权利要求35所述的方法，其中所述时间为2小时。41.权利要求35所述的方法，其中所述的醇为乙醇。42.—种采用权利要求20所述的方法制备的灵芝物种提取物。43.—种灵芝物种提取物，其包含麦角固醇、占所述麦角固醇的25重量％至35重量％的丹芝酸A、占所述麦角固醇的10重量％至20重量％的丹芝酸B、以及所述占麦角固醇的30重量％至40重量%的灵芝酸H。44.一种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H和占所述灵芝酸H的25重量％至35重量％的丹芝酸A。45.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的5重量％至15重量％的赤芝酸B、占所述灵芝酸H的1重量％至10重量％的赤芝酸A/N、以及占所述灵芝酸H的35重量％至45重量％的丹芝酸A。46.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H和占所述灵芝酸H的5重量％至15重量％的灵芝醛。47.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的35重量％至45重量％的丹芝酸A、占所述灵芝酸H的10重量％至20重量％的丹芝酸B和占所述灵芝酸H的30重量％至40重量％的酵母甾醇。48.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的10重量％至20重量％的丹芝酸B和占所述灵芝酸H的5重量％至15重量％的灵芝醛。49.一种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的10重量。/。至20重量y。的丹芝酸B、占所述灵芝酸H的20重量％至30重量y。的曱氧基酵母甾醇和占所述灵芝酸H的20重量％至30重量％的酵母甾醇。50.—种灵芝物种提取物，其包含麦角固醇、占所述麦角固醇的30重量％至40重量％的丹芝酸A、占所述麦角固醇的5重量％至15重量％的丹芝酸B、以及占所述麦角固醇的65重量％至75重量%的灵芝酸H。51.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的30重量％至40重量％的丹芝酸B、占所述灵芝酸H的40重量％至50重量％的曱氧基酵母甾醇、以及占灵芝酸H的35重量％至45重量％的酵母甾醇。52.—种灵芝物种提取物，其包含麦角固醇、占所述麦角固醇的1重量％至10重量％的丹芝酸A/B、占所述麦角固醇的1重量％至10重量％的灵芝醇F、以及占所述麦角固醇的50重量％至60重量％的羊毛甾醇。53.—种灵芝物种提取物，其包含灵芝酸H、占所述灵芝酸H的60重量％至70重量％的丹芝酸A、占所述灵芝酸H的25重量％至35重量％的丹芝酸B、和占所述灵芝酸H的10重量％至20重量%的赤芝酸A/N。全文摘要本发明涉及采用超临界CO₂提取方法制备的灵芝物种的植物材料的提取物。文档编号A61K36/00GK101410129SQ200780010470公开日2009年4月15日申请日期2007年3月23日优先权日2006年3月23日发明者D·李,G·W·塞佩特,R·S·阿尔伯特,R·T·高申请人:草药科学新加坡私人有限公司