专利名称：：抗癌药耐性克服剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有黄噤呤氧化酶抑制剂作为有效成分的抗癌药耐性克服剂。
背景技术：
：癌症的化学疗法是癌症治疗中必不可少的手段，出现耐性的情况并不少见。获得耐性的癌细胞通常对治疗中没有使用的抗癌药、或作用机制、结构不同的多种药剂也显示耐性，显示所谓多药耐性。耐性是治疗中的严重问题，其中多药耐性尤为严重，迫切需要开发出多药耐性的克服剂。多药耐性的机制之一是细胞膜上局部存在的P_糖蛋白(ABCB1)及MRP1(ABCC1)等ABC转运体的过度表达。上述ABC转运体由于ATP依赖性地将各种结构的基质(药物、生理活性物质等)从细胞内排出到细胞外，所以其过度表达使细胞内药物浓度降低，引发对抗癌药等各种药物的耐性。BreastCancerResistanceProtein(BCRP/ABCG2)是最近鉴定的ABC转运体。(非专利文献l:DoyleLAetal.:ProcNatlAcadSciUSA.,95:15665—15670(1998)、非专利文献2:AllikmetsRetal.:CancerRes.,58:5337-5339(1998)及非专利文献3:MiyakeKetal.:CancerRes.,59:8-13(1999))BCRP将作为伊立替康活性代谢物的SN-38、米托蒽醌及拓朴替康等抗癌药排出到细胞外，所以作为克服上述抗癌药的耐性的分子靶受到关注。(专利文献l:特开2003-63989)另一方面，已知下述通式(I)或(II)表示的具有二环性杂合稠环的化合物具有抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)的作用。(专利文献2:WO2005/121153，专利文献3:WO03/042185、专利文献4:WO2007/4688)另夕卜，非布索坦(TMX-67)、4-[5—败咬—4一基一1H-[1，2,4]三哇-3-基]畔匕咬-2-甲腈(FYX-051)具有黄噪呤氧化酶(XOD)抑制作用，作为高尿酸血症治疗剂是有用的。但是，未知下述通式(I)或(II)表示的化合物以及TMX-67等对BCRP显示抑制作用。
发明内容本发明的目的在于提供药剂耐性克服剂及抗癌药耐性克服剂。本发明人等发现下述通式(I)及(II)所示化合物或TMX-67等具有黄嘌呤氧化酶抑制作用的化合物对BCRP显示抑制作用，完成了本发明。即，本发明涉分的药剂耐性克服剂R1——X(I)(式中，R/表示碳原子数为2~8的链烯基、或可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~IO的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6~10的芳基或杂芳基，112表示氰基、硝基、曱酰基、羧基、氨基甲酰基或碳原子数为2~8的烷氧基羰基，X表示氧原子、-N(R3)-或-S(O)n-,此处，R3表示氢原子或碳原子数为1~8的烷基，或R1和R3连接成吗啉基、硫代吗啉基或哌嗪基，或表示与上述R^相同的基团，n表示02的整数，Y表示氧原子、硫原子或NH。)另外，本发明涉及含有下述通式(II)表示的化合物或其盐作为有效成分的药剂耐性克服剂。7R2(式中，Ri表示可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、被碳原子数为1~8的烷氧基取代的碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~IO的芳基或碳原子数为6~IO的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6~10的芳基或杂芳基，W表示氰基、硝基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基或碳原子数为2~8的烷氧基羰基，R3表示羟基、氨基、羧基、巯基、OR4、或NHR5,此处，R4及R5表示可以具有选自卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为1~8的烷基，X表示氧原子、-N(R6)-或-S(0)n-,此处，116表示氢原子、碳原子数为1~8的烷基，或表示与上述W相同的基团，n表示0~2的整数，Y表示氧原子或硫原子。)另夕卜，本发明涉及含有非布索坦或4-[5-吡啶-4-基-1H-[1,2,4]三哇-3-基]吡啶-2-曱腈作为有效成分的药剂耐性克服剂。成分的抗癌药耐性克服剂。另外，本发明涉及含有上述通式(II)表示的化合物或其盐作为有效成分的抗癌药耐性克服剂。另夕卜，本发明涉及含有非布索坦或4-[5-吡啶-4-基-1H-[1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-曱腈作为有效成分的抗癌药耐性克服剂。进而，本发明涉及包含选自2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧咬、2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]漆哇并[5,4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞嗤并[5,4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞喳并[5,4-d]嘧啶钾盐及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶钾盐、非布索坦或4-[5-处咬-4-基-1H-[1,2,4]三口坐-3-基]耽咬-2-甲腈的化合物和抗癌药的对显示多药耐性的癌细胞的治疗用药剂。具体实施例方式更详细说明本发明。上述通式(I)所示化合物可以使用专利文献2~4及下述参考例中记载的方法合成。上述通式(I)所示的化合物中，优选下述化合物或其盐。(1-1)R/为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为1~8的被囟原子取代的烷氧基、碳原子数为2-8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为610的芳基或碳原子数为610的芳氧基的基团或原子作为取代基的苯基、萘基、呋喃基、p比咯基、漆吩基、咪咬基、嘧啶基、吡喃基、p比咬基、噻唑基、咪唑基、吲哚基或喹啉基的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-2)W为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为1~8的被卤原子取代的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~IO的芳氧基的基团或原子作为取代基的苯基或吡啶基的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-3)Ri为可以具有选自碳原子数为1-8的烷基、碳原子数为1-8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、或氨基的基团或原子作为取代基的苯基或吡啶基的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-4)R2为氰基或硝基的上述通式(I)表示的化合物或上述(1-1)~(1-3)中的任一个所述的化合物或其盐。(1-5)W为氰基的上述通式(I)表示的化合物或上述(1-1)~(1-3)中的任一个所述的化合物或其盐。(1-6)X为氣原子、NH或硫原子的上述通式(I)表示的化合物或上述(1-1)~(1-5)中的任一个所述的化合物或其盐。(l-7)X为氧原子或硫原子的上述通式(I)表示的化合物或上述(1-1)~(1-5)中的任一个所述的化合物或其盐。(l-8)Y为硫原子或NH的上述通式(I)表示的化合物或上述(1-1)~(1-7)中的任一个所述的化合物或其盐。(l-9)Y为硫原子的上述通式(1)表示的化合物或上述(1-1)~(1-7)中的任一个所述的化合物或其盐。(1-10)W为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基的基团或原子作为取代基的苯基或吡啶基、W为氰基或硝基、X为氧原子或硫原子、Y为硫原子或NH的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-11)Ri为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基的基团或原子作为取代基的苯基或吡啶基、R2为氰基或硝基、x为氧原子或硫原子、Y为硫原子的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-12)Ri为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1-8的被商原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基的基团或原子作为取代基的苯基或吡啶基、R2为氰基或硝基、X为氧原子、Y为硫原子的上述通式(I)表示的化合物或其盐。(1-13)特别优选举出2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5，4-d]嘧啶及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]噻唑并[5，4-d]嘧咬。上述通式(II)所示化合物的合成方法记载于专利文献2中。上述通式(II)所示化合物中，优选下述化合物或其盐。(2-1)W为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、嘧啶基、噻唑基、吡啶基、吲哚基或喹啉基的上述通式(II)所示化合物或其盐。(2-2)W为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的苯基的上述通式(II)所示化合物或其盐。(2-3)Ri为可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、曱酰基、羧基、卣原子、笨基或苯氧基的基团或原子作为取代基的苯基的上述通式(II)所示化合物或其盐。(2-4)R2为氰基或硝基的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-1)~(2-3)中的任一个所述的化合物或其盐(2-5)R"为氰基的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-1)~(2-3)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-6)W为羟基的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-1)~(2-5)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-7)W的取代位置为(二环性)杂合稠环4位的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-l)~(2-6)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-8)X为氧原子、NH或硫原子的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-1)~(2-7)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-9)X为氧原子的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-l)~(2-7)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-10)Y为硫原子的上述通式(II)所示化合物或其盐、或上述(2-1)~(2-9)中的任一个所述的化合物或其盐。(2-12)作为特别优选的有效性成分可举出2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-幾基瘗哇并[5,4-d]嘧咬、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞哇并[5，4-d]嘧咬钾盐及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]_4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶钾盐。作为本发明抗癌药耐性克服剂的对象的抗癌药，可以举出伊立替康、作为伊立替康的活性代谢物的SN-38、米托蒽醌、拓朴替康、甲氨蝶呤、阿霉素、柔红霉素、依托泊苷、吉非替尼、伊马替尼等。12本发明抗癌药耐性克服剂的对象的癌的种类只要是BCRP过度表达即可，没有特别限定，例如可以举出获得耐性的血液癌(造血器官肿瘤)、肝癌、大肠癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宫颈癌、骨肉瘤、脑肿瘤、胰腺癌、前列腺癌等。下面说明本发明的药理效果。"T":+'々；七1;Jr)ODnffl各A世u人yf+Iflil^由表1可以确认，化合物1(2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基噻唑并[5,4-d]嘧啶钾盐)、化合物2(2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]噻唑并[5,4-d]嘧，定)、化合物3(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基噻唑并[5,4-d]嘧啶钾盐)、化合物4(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧啶)、TMX-67及FYX-051均强力抑制BCRP对甲氨蝶呤的运送。另外，下述实施例2是确认对BCRP过度表达细胞(Flp-In-293/BCRP)引起的抗癌药耐性的影响的试验。化合物1及化合物2均浓度依赖性地解除Flp-In-293/ABCG2细胞对SN-38的耐性，5|amol/L时化合物1解除约96%的耐性，化合物2解除约90%的耐性。另外，两种化合物在所研究的lO^mol/L以下的范围内不影响Flp-In-293/ABCG2细胞的生存率。即，确认化合物1及化合物2不显示细胞毒性，显示克服BCRP过度表达细胞的抗癌药耐性的作用。另外，在与实施例2同样的试验中，化合物5(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基瘗哇并[5,4-d]嘧咬)、TMX-67及FYX-051在10pmol/L时不显示细胞毒性，而5|amol/L时化合物5解除96%的耐性、TMX-67解除82。/。的耐性、FYX-051解除39%的耐性。另一方面，公知的具有黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制作用的药物中，别噪呤醇、别噤呤二醇对BCRP运送曱氨蝶呤没有抑制作用，对SN-38也不显示耐性克服作用。进而Y-700(1-[3-氰基-4-(2,2-二曱基丙氧基)苯基]_1H-败峻-4-羧酸)也没有对SN-38显示耐性克服作用。(比较例1,2)因此，具有黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制作用的药物、特别是上述通式(I)或(II)所示化合物、TMX-67、FYX-051作为药剂耐性克服剂、特别抗癌药耐性克服剂的有效成分是有用的。本发明的药剂耐性克服剂及抗癌药耐性克服剂对人可以采用普通的口服给药或非口服给药的适当给药方法进行给药。为了进行制剂化，可以采用制剂
技术领域：
中的常用方法制造片剂、颗粒剂、散剂、胶嚢剂、悬浮剂、注射剂、栓剂等剂型。制造时可以使用通常的赋型剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、色素、稀释剂等。此处，作为赋型剂，可以举出乳糖、D-甘露糖醇、结晶纤维素、葡萄糖等，作为崩解剂，可以举出淀粉、羧曱基纤维素钙(CMC-Ca)等，作为润滑剂，可以举出硬脂酸镁、滑石等，作为粘合剂，可以举出羟丙基纤维素(HPC)、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)等。给药量通常对于成人，为注射剂时，作为有效成分的本发明化合物每l日约O.lmg-100mg，口服给药1日lmg~2000mg，可以根据年龄、症状等进行增减。含有抗癌药耐性克服剂和公知的抗癌药的药剂(配合剂)可以采用通常的配合剂的制造方法得到，也可以将分别制造的药剂同时或间隔对患者进行给药。血液肺瘤及具有全身性转移的固形胂瘤等在给予抗癌药时肿瘤严重坏死，肿瘤细胞内的成分大量释放到血中，诱发高尿酸血症、高K血症、低Ca血症等，有时引发肾功能不全、心脏骤停(肺瘤溶解综合征)。本发明的有效成分除克服抗癌药的耐性外，还具有黄嘌呤氧化酶抑制作用，所以对治疗随肿瘤溶解发生的高尿酸血症也有用。下面列举实施例更详细地说明本发明，但是本发明并不限定下述实施例。实施例参考例1(1)4-氯-N-(4-氯-5-嗜吱基)-3-氰基苯甲酰胺将4-氯-3-氰基苯甲酸(7.01g,38.6mmo1)悬浮在苯(70mL)中，加入亚硫酰氯(3.6mL,49.6mmo1)，加热回流4小时。将该反应液在减压下浓缩，在得到的酰氯化物中加入5-氨基-4-氯嘧啶(5.00g,38,6mmo1)、二氯曱烷(70mL)及他咬(3.6mL,44.5mmo1)，在室温下搅拌7小时。向反应液中加入氯仿(50mL)及水(50mL)，滤出结晶。将得到的结晶用氯仿(20mL)及水(20mL)洗涤后，进行风干，14得到7.35g(收率65%)标题化合物的白色结晶。另外，从母液及洗涤液的混合溶液中得到作为2次结晶的0.62g(收率8%)标题化合物的淡茶色结晶。(总收率73%)kij>:189—190。C.1H—NMR(CDC1:s,40OMHz):S=7*74(1H,d,J=8Hz),8.07(iH,dd,JH,8Hz),8,13O.H，s),8.23(1.H，d,J=2Hz)，8,83UH,s),9.79(1H(2)2-(4-氯-3-氰基苯基)漆峻并[5，4-d]嗜咬将采用上述方法得到的4-氯-N-(4-氯-5-嗜p定基)-3-氰基苯甲酰胺(7.98g,27.2mmol)、劳森试剂(8.25g，20.4mmol)及甲苯(150mL)的悬浮液加热回流8小时后，冷却至室温，过滤析出的结晶。用氯仿(75x2)洗涂后，进行风干，得到7.25g(收率98%)标题化合物的淡黄色结晶。mp:278-280°C(分解)1H—NMR(DMSO—d6,400MHz):S=7,99(1H，d,J=9Hz),8.47UH'",J=2Hz,91.")'8.70(1H,d，JHH:z),9.20UH,s)'9.54UH，s)(3)2-[3-氰基-4-(4-氟苯氣基)苯基]p塞哇并[5,4-d]嗜逸在55%氢化钠U50mg,3.44mmol)和干燥DMSO(7mL)的悬浮液中加入4-氟苯酚(383mg,3.42mmol)，在50。C下加热搅拌30分钟。在该反应液中加入上述2-(4-氯-3-氰基苯基)瘗唑并[5，4-d]嘧啶(776mg,2.85mmo1),在50。C下搅拌4小时。冷却至室温后，在反应液中加入水(35mL)，过滤析出的结晶，用水(20mL)洗涤。风干后，将得到的结晶用硅胶柱色镨(氯仿)精制，用醚(15mL)洗涤后，进行干燥，得到701mg(收率71%)标题化合物的淡黄色结晶。mp:175—1H—NMR(CDC13,40OMH2):S=6.94(1.H,d，J-9Hz),7,1—7,2II,8.44(1H"H,s).IR(KBr)cm-',1119,1011,58,723，702，90，FAB—MS(m/e)(4H,m)'8.18(d,J=2Hz)，9.:2233，1606,1916，893,847,700，650,648,:349(M+1).1H,dd,.1=2Hz,913(1H，s),9.35564,1419，1300829，777,760，7597，526，496，4参考例22-(3-氰基-4-苯氣基苯基)噻唑并[5，4-d]嗜咬在55%氢化钠(23mg，0.53mmol)和干燥DMSO(lmL)的悬浮液中加入苯盼(45mg,0.48mmol),在室温下搅拌30分钟。向该反应液中加入上述2-(4-氯-3-氰基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧啶(120mg，0.44mmol),在6(TC下搅拌4小时。冷却至室温后，向反应液中加入水(5mL),过滤析出的结晶。用水(5mL)、乙醇(lmL)及醚(2mL)依次洗涤后，在减压下于室温进行干燥，得到100mg(收率69%)标题化合物的淡茶色结晶。mp::l54—156t.1H—NMR(DMSO—",400MHz):6=7'08(1H'd，J=9Hz)，7.2—7.4(3H，m),75—7.6(2H,:m)，8-42(1H,'dd,J■=2Ha,9Hz),8.69(1H,d,J=2H2),9,18UH's),9.52UH,s).IR(KBr)cm-1:3037'2227'1605,1587,1560，1525，1504,1470,1369，1365,1257,123S,1190，1171FAB—MS(Jtn/e):331(M+1),实施例1对BCRP运送甲氨蝶呤的作用(试-睑方法)实验中，用表达BCRP的Sf9昆虫细胞制作质膜，使用该膜嚢(Ishikawaetal.:MethodsofEnzymol.，400:485—510(2005))。用使用96孔板的以下方法测定曱氨蝶呤运送活性。反应溶液的配制和组成50pL250mmol/L蔗糖.10mmol/LTris/Hepes(pH7.4)溶液30pL3.33mmol/LATP.33.3mmol/L肌酸磷酸.33.3mmol/LMgCl2溶液(或、33.3mmol/L肌酸磷酸.33.3mmol/LMgCl2溶液)5pL2mg/ml肌酸激酶2pL10mmol/L[3H]曱氨蝶呤(最终浓度200pmol/L)3pL试-睑化合物10uLABCG2表达Sf9细胞膜样品(共50ug蛋白质)共lOOpL将反应溶液在37。C下培养20分钟。然后，将水冷却的250mmol/L蔗糖.2mmol/LEDTA.10mmol/LTris/Hepes(pH7.4)溶液lmL迅速加入到反应溶液中，停止反应。将该混合溶液按每孔270pL注入到Millipore社制Multiscreen的各孔中，进行吸引。然后，用水冷却的250mmol/L蔗糖'10mmol/LTris/Hepes(pH7.4)溶液200pL将各孔洗涤4次。测定各孔的过滤器上捕捉的放射活性。基于该放射活性值，计算进入细胞膜嚢内的曱氨蝶呤的运送量。另外，使用以上的方法求出试验化合物的IC5Q值[将曱氨蝶呤的运送抑制50%的浓度、inhibitoryconcentration(|xmol/L)]。(结果)如表l所示，确认化合物1~4、TMX-67及FYX-051均强力抑制BCRP对甲氨蝶呤的运送。对BCRP运送曱氨蝶呤的作用表1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>FYX-0510.77化合物h2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基p塞嗤并[5,4-d]嘧咬钾盐化合物2:2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]噻唑并[5,4-d]嘧咬化合物3:2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基噻唑并[5,4-d]嘧咬钾盐化合物4:2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧啶比4交例1对BCRP运送甲氨蝶呤的作用(试-睑方法)用与实施例l同样的方法，试^r别嘌呤醇、别噤呤二醇对BCRP运送曱氨蝶呤的作用。(结果)别噤呤醇、别噤呤二醇即使为100i!mol/L也不显示抑制作用。实施例2BCRP过度表达细胞(Flp-In-293/BCRP)对抗癌药耐性的影响(试'验方法)实验中，使用Flp-In-293/ABCG2细胞及Flp-In-293/Mock细胞(Wakabayashietal.:J.Exp.Ther.Oncol.,5:205-222(2006))。细胞使用含有10%FCS、100U/mL盘尼西林、100昭/mL链霉素、250ng/mL两性霉素B、100|iig/mL潮霉素B、2mmol/LL-谷氨酸的DMEM在5%〇02下培养。Flp-In-29细胞的药剂耐性通过MTT分析测定生存细胞进行描述。即，将细胞以2乂103个细胞/孔的浓度播种在96孔培养板中，培养24小时。然后，添加SN-38和化合物1(2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基噻唑并[5,4-d]嘧啶钾盐)或化合物2(2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]p塞喳并[5，4-d]嘧咬)，培养72小时后，加入500pg/mLMTT,再培养4小时。然后，加入lOO^L的10。/。SDS后，整夜培养，将生成的MTT-曱瓒(用MTT的代谢物由生存细胞生成)在570nm和630nm下进行测定。(结果)化合物1及化合物2均浓度依赖性地解除Flp-In-293/ABCG2细胞对SN-38的耐性，5pmol/L时化合物1解除约96%的耐性，化合物2解除约90%的耐性。另外，两种化合物在所研究的10^imol/L以下的范围不影响Flp-In-293/ABCG2细胞的生存率。因此，确认化合物1及化合物2不显示细胞毒性，对BCRP过度表达细胞的抗癌药耐性显示克服作用。(实施4列3及t匕專支^f列2)对BCRP过度表达细胞(Flp-In-293/BCRP)的抗癌药耐性的影响(试纟全方法)用与实施例2同样的方法，试验2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基瘗哇并[5,4-d]嘧咬(化合物5)、TMX-67、FYX-051、别噤呤醇、别噤呤二醇、Y-700对BCRP过度表达细胞(Flp-In-293/BCRP)的抗癌药耐性的影响。(结果)(i)对SN-38的耐性克服度5pmol/L时，化合物5解除96%的耐性，TMX-67解除82%的耐性，FYX-051解除39%的耐性，别噤呤醇及别嘌呤二醇不显示克服作用。另外，Y-700在不显示细胞毒性的浓度下不显示克服作用。(ii)细胞毒性作用化合物5、TMX-67、FYX-051、别嘌呤醇、别嘌呤二醇在10pmol/L的浓度范围不显示毒性作用。Y-700由5itimol/L开始显示细胞毒性。19权利要求1、含有下述通式(I)表示的化合物或其盐作为有效成分的药剂耐性克服剂，式中，R1表示碳原子数为2～8的链烯基、或可以具有选自碳原子数为1～8的烷基、碳原子数为1～8的被卤原子取代的烷基、碳原子数为1～8的烷氧基、碳原子数为1～8的被卤原子取代的烷氧基、碳原子数为2～8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6～10的芳基或碳原子数为6～10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6～10的芳基或杂芳基，R2表示氰基、硝基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基或碳原子数为2～8的烷氧基羰基，X表示氧原子、-N(R3)-或-S(O)n-，此处，R3表示氢原子或碳原子数为1～8的烷基，或R1和R3连接成吗啉基、硫代吗啉基或哌嗪基，或表示与上述R1相同的基团，n表示0～2的整数，Y表示氧原子、硫原子或NH。2、含有下述通式(II)表示的化合物或其盐作为有效成分的药剂耐性克服剂，式中，W表示可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、被碳原子数为1~8的烷氧基取代的碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、曱酰基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6~10的芳基或杂芳基，R"表示氰基、硝基、曱酰基、羧基、氨基曱酰基或碳原子数为2~8的烷氧基羰基，R表示羟基、氨基、羧基、巯基、OW或NHR5,此处，尺4及R5表示可以具有选自卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为1~8的烷基，X表示氧原子、-N(R6)-或-S(0)n-,此处，R6表示氢原子、碳原子数为18的烷基或表示与上述R^相同的基团，n表示0~2的整数，Y表示氧原子或硫原子。3、含有选自2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧咬、2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]p塞嗤并[5,4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞哇并[5,4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞峻并[5，4-d]嘧啶钾盐及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基p塞哇并[5,4-d]嘧啶钾盐的化合物作为有效成分的药剂耐性克服剂。4、含有非布索坦或4-[5-p比，定-4-基-1H-[1,2,4]三唑-3-基]他咬-2-甲腈作为有效成分的药剂耐性克服剂。5、含有下述通式(I)表示的化合物或其盐作为有效成分的抗癌药耐性克服剂，式中，W表示碳原子数为2-8的链烯基、或可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、曱酰基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6-10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6~10的芳基或杂芳基，R"表示氰基、硝基、曱酰基、羧基、氨基曱酰基或碳原子数为2~8的烷氧基羰基，X表示氧原子、-N(R3)-或-S(O)n-，此处，R3表示氢原子或碳原子数为1~8的烷基，或R1和R3连接成吗啉基、硫代吗啉基或哌嗪基，或表示与上述R^相同的基团，n表示02的整数，Y表示氧原子、硫原子或NH。6、含有下述通式(II)表示的化合物或其盐作为有效成分的抗癌药耐性克服剂，式中，W表示可以具有选自碳原子数为1~8的烷基、碳原子数为1~8的被卣原子取代的烷基、碳原子数为1~8的烷氧基、被碳原子数为1~8的烷氧基取代的碳原子数为1~8的烷氧基、碳原子数为2~8的烷氧基羰基、甲酰基、羧基、卣原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~IO的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为6~10的芳基或杂芳基，R"表示氰基、硝基、甲酰基、羧基、氨基曱酰基或碳原子数为2~8的烷氧基羰基，W表示羟基、氨基、羧基、巯基、OR或NHR5,此处，114及115表示可以具有选自卤原子、羟基、硝基、氰基、氨基、碳原子数为6~10的芳基或碳原子数为6~10的芳氧基的基团或原子作为取代基的碳原子数为1~8的烷基，X表示氧原子、-N(R6)_或-S(0)n-，此处，116表示氬原子、碳原子数为1~8的烷基或表示与上述R^相同的基团，n表示0~2的整数，Y表示氧原子或硫原子。7、含有选自2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5，4-d]嘧啶、2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]p塞哇并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞哇并[5,4-d]嘧咬钾盐及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基p塞哇并[5,4-d]嘧啶钾盐的化合物作为有效成分的抗癌药耐性克服剂。8、含有非布索坦或4-[5-他咬-4-基-1H-[1，2,4]三唑-3-基]处咬-2-曱腈作为有效成分的抗癌药耐性克服剂。9、如权利要求5~8所述的抗癌药耐性克服剂，其特征在于，BCRP的过度表达与癌细胞获得对抗癌药的耐性有关。10、含有选自2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5,4-d]嘧咬、2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]p塞唾并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞哇并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基p塞喳并[5,4-d]嘧咬钾盐及2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基p塞哇并[5,4-d]嘧咬钾盐、非布索坦或4-[5-他咬-4-基-1H-[1,2，4]三唑-3-基]吡啶-2-曱腈的化合物和抗癌药的对显示多药耐性的癌细胞的治疗用药剂。全文摘要含有2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]-4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶钾盐、2-[3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基]噻唑并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羟基噻唑并[5，4-d]嘧啶钾盐、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑并[5，4-d]嘧啶、TMX-67及FYX-051等黄嘌呤氧化酶抑制剂作为有效成分的药剂作为抗癌药耐性克服剂的应用。文档编号A61K31/519GK101505755SQ200780031378公开日2009年8月12日申请日期2007年6月22日优先权日2006年6月22日发明者山川富雄,平野益治,石川智久,齐藤光申请人:日本化学医药株式会社