专利名称：：制备包含甾体糖苷的组合物的方法
技术领域：
：本发明概括地说涉及甾体糖普领域。更具体的，其涉及一种从i/oocfe属植物(原来的火地亚(/7ooWa)和亚罗汉(7V/c/zoc(^/ow)属)中制备包含甾体糖苷组合物的方法，该组合物可以用于例如体重管理产品中。
背景技术：
：可获自萝摩C^c/e/^at/aceae)科植物，详细地说是T/ooA'a属(原来的i/oo^a和亚罗汉属)，的萃取物已经表现出具有食欲抑制活性，并且在体重管理产品中是潜在有用的。US6376657(CSIR)公开了这些萃取物包含具有式1的甾体糖苷其中R-烷基；R^H、烷基、曱基巴豆酰基(tiglyol)、苯曱酰基或者任何其它的有机酯基团；R、H或者一种或多种6-脱氧碳水化合物，或者一种或多种2，6-二脱氧碳水化合物，或者葡萄糖分子，或者其组合；并且其中虚线表示任选存在于碳原子C4和C5之间或者碳原子C5和C6之间的另外的键。US'657还公开了从萝摩科植物中萃取式1的甾体糖苷的方法，包剩余部分中分离萃取溶液，从该萃取物溶液中除去溶剂和回收萃取物。该专利还公开了合成不同的甾体糖苷的方法。WO2005/116049(Unilever)公开了可以依靠液态或者超临界二氧化碳，将甾体糖苷从萝摩科W")植物材料中存在的不期望的成分中进行萃取或者分离。将来自T/ooW"gor^w7(丽杯角)的干燥的植物材料研磨成微粉，随后萃取。US2005/0202103公开了紫龙角(Caralluma)萃取物，其中将该紫龙角植物的地上部分荫干(在水泥平台上)。US7008648公开了从豹皮花属(Stapelia)和Orbea属植物中获得植物材料的方法，其中一种合适的干燥和研磨初始生物质的方法包括阳光干燥，随后热空气干燥或者冷冻干燥例如冻干法，或者将该生物质切成小块，例如2-10cm,随后热空气干燥或者冷冻干燥。这里还存在着对于替代的或者提高的制备包含一种或多种甾体糖苷的组合物的方法的需要，特别是为提高在干燥植物中的甾体糖香含量的此类方法。此外，一些特定的甾体糖苷的产量会受到加工条件的不利影响。因此本发明的一个目标是提供一种制备包含一种或多种甾体糖苷的组合物的方法，其不具有上述的一种或多种缺点。现在令人惊讶的发现干燥条件，特别是曝露于UV光，对于甾体糖苷的产量具有重要的影响。发明说明本发明实现了上述和其它目标，本发明包括，其第一方面，一种制备包含一种或多种活性甾体糖普的组合物的方法，其包含步骤(a)收割/foo&cz植物，(b)切碎该收割下的植物，(c)干燥该切割植物，由此避免了在干燥步骤过程中曝露于UV光，使得总UV剂量小于0.5kJ/n^来获得干燥的植物材料。在第二个方面，本发明涉及可获自上述方法的干燥的植物材料，其具有至少1.3重量％的平均总甾体糖苷含量，或者至少1.6%的单个植物总甾体糖苷含量。可获自本发明的干燥的植物材料包含至少0.08重量％(作为平均值计算)的量的式2的甾体糖苷(在下文中进行描述)，或者至少0.08重量％的单个式2的甾体糖苷的含量。在第三方面，本发明涉及包含该甾体糖苷的萃取物和食品。发明详述除了操作和对比实施例，或者这里另有明确指示，否则在该说明中全部的表示原料量或者反应条件、材料的物理性能和/或用途的数值被理解为用措词"大约"来修饰。应当指出的是在指定的任何浓度或者量的范围内，任何具体的较高的浓度可以与任何具体的较低的浓度或者量相组合。为了避免疑义，措词"含有"目的是表示"包括"但是不必定是"由......组成"或者"由......构成"。换句话说，所列出的步骤或者选项不必是无遗漏的。此处使用的"切割"意思是减少植物的尺寸，并且其包括分割，磨粉等等。此处使用的"甾体糖苷"表示一种类固醇(四个稠合的环)，其进一步包含至少一个取代侧基，该侧基是糖普(一种分子，在其中糖基团通过它的异头碳，经由O-糖普键结合到另一基团上)，优选是脱氧或者二-脱氧糖苷，并且包括如在下述的HPLC甾体糖苷分析中所述洗提15分钟之后的全部的甾体糖苷。此处的甾体糖苷量是基于无水植物材料(测定该干燥的植物的含水量，并将甾体糖苷量校正到0%含水量)。此处使用的"平均"意思是至少10个不同的、随机选择的植物的平均甾体糖苷含量。此处使用的"总UV剂量"意思是在干燥期间的积分的红斑UV量。该红扭王UV是通过CIE(CommissionInternationaledel'6clairage，国际照明委员会)作用光谱(E)，使用McKinlay,A.F,和B丄.Diffey("Areferenceactionspectrumforultravioletinducederythemainhumanskin,inHumanExposuretoUltravioletRadiation:Risks和Regulations",第83-87页，Elsevier,阿姆斯特丹，1987)所述的方法来定义当280nm<a<298nm时，E(X)=1,当298nm<a<328nm时，E(X)=100094(298-X)，当328nm〈人〈400nm时，E(i)=100'015(139-"。每日红斑uv剂量是在全天积分的红斑uv量。可以利用展示世界任何位置的该每日的红斑UV剂量的网址(来自EuropeanSpaceAgency的www.temis.nl)。作为选择，还可以使用UV传感器，其测量280-400nm范围内的UV辐射。然后辐射量需要如上所述用红斑作用光谱进行积分。然后该红斑UV量需要在干燥期间进行积分来获得UV剂量。本发明的第一方面是一种制备包含一种或多种甾体糖苷的组合物的方法，特别是这些可获自//oo&a科植物的甾体糖普。更优选，所述的植物选自7>/c/zocaw/owpz7(/^w附，7Wc/zocaw/o"oj^'"力a/e，//ood/acw/ron'/,Z/ooWagoniom7,//ood/a和它们的混合物。gon/om7;^净寺另'J优选的。在该方法的第一步中，将所述的植物进行收割。随后，切割该收割下的植物。该植物可以被切割成任何的形状，如立方体、薄片、julliene等等，只要一个尺寸小于30mm,优选小于20mm，最优选小于15mm就行。对于薄片或者julliene形状，厚度应当小于这些尺寸，对于立方体，全部的尺寸应当小于这些尺寸，等等。可以使用普通的切割装置例如碎木机，盘式切割机(bowlcutter)或者常规的食品切割装置，例如由Urschell提供的机器来形成植物粒子。尺寸越小，干燥时间越快，这降低了微生物生长的可能。可以使用整个的植物，但是为了减少潜在的微生物污染，优选使用无根的植物。该切割植物然后在曝露于UV光最小的条件下干燥。这是违反直觉知识的，因为在植物例如茂盛的地方，太阳是用于干燥加工的最廉价的能量形式。实际上，路易波士茶(Rooibostea)传统上是在南非通过在水泥地上在阳光中干燥该植物来制造的。UV剂量随着地理位置和一年的季节而变化。例如在南非，最大的每日UV剂量是大约7kJ/m、夏天)，在这里最小的UV剂量是大约2kJ/m、冬天)。可以建造遮光结构来屏蔽UV辐射。遮光结构的UV保护可以用UV保护因子(UPF)来量化。15的UPF表示1/15的入射UV被透射，其余的被反射。典型的遮光布具有2-10的UPF。遮光下的剂量主要取决于该遮光结构的类型。此外表面如水、雪、沙子和混凝土反射UV辐射，以致于提高了实际的UV量。例如，混凝土表面提高了UV量。此外当干燥进行两天时，材料曝露的总UV剂量是所述剂10量的两倍。在本发明中，已经发现直接曝露于UV光不应当超过0.5kJ/m2,优选不超过0.35kJ/m2，更优选不超过0.2kJ/m2，最优选不超过0.1kJ/m2。本发明的合适的干燥装置包括直接的和间接的空气干燥机，这里空气是用任何种类的能源(例如电，煤气(gas),石蜡(paraffm),能量(energy)等)进行加热的。用太阳的太阳能加热该空气；该热空气然后被吹入炉子中，在这里所述的材料被干燥，在这种情况中没有UV曝光。此处使用的"干燥"不包括冷冻干燥。典型的，根据本发明的干燥是在35-120。C的温度进行的，为了具有最佳的干燥时间，优选是50-100。C，最优选60-100。C。本发明典型的干燥时间通常是至少1小时，并且可以高到两周，优选l-72小时，最优选3-48小时。该切割植物典型的被干燥到残留水分含量小于15重量％,优选小于10重量％,更优选小于5重量％。该残留水分含量可以使用常规的重量分析技术或者卡尔费希尔(KarlFischer)滴定来测量。所获得的干燥的植物材料，优选处于小块或者薄片形式，具有至少1.3重量％,优选至少1.6重量％的平均总甾体糖苷含量。根据本发明，来自单个植物的该总甾体糖苷含量是至少1.6重量％,优选至少1.8重量％。获自本发明的干燥的植物材料包含至少0.08重量％(作为平均值计算)，优选0.1%的量的式2(在下文中进行描述)的甾体糖香，或者至少0.08重量％,优选0.1%的单个式2的甾体糖苦的总含量。根据一种特别优选的实施方案，该甾体糖普具有结构通式(I)或者其盐或者酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>、其中11=烷基；R^H、烷基、曱基巴豆酰基(tiglyol)、苯曱酰基或者任何其它的有机酯基团；R^H或者一种或多种6-脱氧碳水化合物，或者一种或多种2，6-二脱氧碳水化合物，或者葡萄糖分子，或者其组合；并且其中虚线表示任选存在于碳原子C4和C5之间或者碳原子C5和C6之间的另外的键。特别优选的甾体糖苷是式1化合物的类似物，包括式(2)-式(8)的化合物和它们的混合物(Me^^CH3)。(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(7)其它此处没有明确提及的甾体糖苷可以包括在本发明的产物中。应当理解本发明还包括所述的甾体糖普的异构体、衍生物、盐、酯和类似物(优选生物活性)和它们的混合物。甾体糖苷浓度是使用具有UV检测的高性能液体色谱法(HPLC)在萃取或者溶解之后来测量的。在干燥的植物材料的情况中，将大约5g的原料用大约80ml的沸腾甲醇回流1小时。过滤所形成的萃取物，并将固体材料用曱醇进行清洗。将合并的滤出液和清洗液转移到100ml烧瓶中，并用甲醇调整体积。蒸发干燥lml的滤出液，并重新构成在lml乙腈/水(50/50v/v)中。在萃取物的情况中，将大约20mg的材料通过超声处理IO分钟溶解在50ml的甲醇中。过滤之后，将lml的滤出液蒸发干燥并重新构成在lml乙腈/水(50/50v/v)中。甾体糖苷是通过220nm的LC-UV来测量的。为此目的，将20^1的萃取物注入到250x4.6mm的ZorbaxRX-C8分析柱上，该分析柱用5iam粒子填充并且装备有12.5x4.6mm的用相同的固定相填充的ZorbaxRX-C8保护柱。将柱系统保持在40°C。在41.2%乙腈/曱醇(85/15v/v)和58.8。/o水/甲醇(85/15v/v)，以lml/min的流速开始进行梯度洗提。在30分钟内线性增加到88.2。/o乙腈/曱醇(85/15v/v)和11.8%水/曱醇(85/15v/v)之前，将初始条件保持10分钟。在最后保持5分钟之后，将该系统重新平衡到初始条件。使用任何已知純度的式2的化合物(例如在该情况中为95%)来校准。化合物2可以使用制备液体色谱法从干燥的//0o&agoWom7萃取物中进行分离，或者可以;帔合成(参见例如美国专利6376657，其在此引入作为参考)。在乙腈/水(1/1v/v)中制备100jig/ml的储备溶液，并进一步稀释制备来产生在75、50、20、10和5|ig/ml的另外的校准标准物。使用220nm的UV响应来量化相对于化合物2的校准线。使用基于分子量的相对响应因子来量化甾体糖苷相对于化合物2的校准线。甾体糖苷被定义为在洗提15min之后的全部的峰，其不存在于空白的乙腈/水(l/lv/v)样品中。对于式2-8的化合物，特定的相对保留时间以及响应因子一起汇总在表1中。表1一些甾体糖苷相对保留时间以及响应因子<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>其它的甾体糖苦在洗提15分钟之后的峰具有相对于化合物2为1.081的响应因子。在本发明方法的一种另外的实施方案中，一种或多种甾体糖普是从干燥的植物材料中萃取的。可以使用任何的萃取方法。例如萃取可以如US6376657所述来进行，其在此引入作为参考。特别提到的用来进行萃取的溶剂是亚曱基氯(二氯甲烷)，水，曱醇，己烷，醋酸乙酯或者其混合物中的一种或多种。可选择的，甾体糖苷可以使用液态或者超临界二氧化碳例如如WO2005/116049(Unilever)中所述来萃取。干燥的植物材料或者其萃取物可以用在食欲抑制食品中，这构成了本发明的第三方面。这样的食品的例子是饮料(beverages)，小吃(snacks)，餐棒(bars)，涂在面包上的软质食品(spreads),调味品(dressings),汤(soups)等等,或者是代餐产品(mealreplacementproducts),其可以用于体重管理或者肥胖的饮食控制中。除非另有明确的指示，否则此处使用的全部的量、份数、比例和百分比均按重量计。虽然上面概括了本发明，但是对于本领域技术人员来说，显而易见的是可以进行更改、变化和变换而不脱离此处的所述的和所主张的本发明的范围和主旨。本发明现在将在下面的非限制性实施例中进一步进行说明。实施例1和对比例A这个试验比较了炉子干燥的(在70。C的常规炉)(本发明范围内的实施例1)/foo^'agoniom7和太阳干燥的(在本发明范围之外的实施例A)Z/oo^"goWom7植物的甾体糖苷含量。收割20个相似的植物并分别切割(盘式切割机)和干燥。将10个这些植物用炉子干燥达32小时，直到获得恒重。将其它的10个植物使用盘式切割机切割并在40"C太阳干燥达32小时，直到获得恒重。获得的结果汇总在下表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>从表2中的结果可以看出，根据本发明，通过对UV光曝露进行限制，甾体糖苷含量(总含量和化合物2的含量二者)显著增加。实施例2、3和对比例B这个试验比较了来自炉子、太阳能炉干燥(分别为本发明范围内的实施例2和3)和太阳干燥的(本发明范围之外的实施例B)的Z/ood/a植物的甾体糖苦活性含量。该太阳能炉是一个覆盖有UV防护塑料的装置。该炉子中的空气是通过太阳辐射来加热的，不将植物曝露于UV辐射。收割20个相似的植物并使用盘式切碎机切碎来形成均匀的批料。将该批料分为三份，其以三种不同的方式干燥直到获得恒重。在炉子中，干燥在7(TC进行48小时，对于太阳能炉来说，最大的外部空气温度是37。C并且该干燥进行10天，对于太阳干燥来说，最大的外部空气温度是37。C并进行10天。所获得的结果汇总在表3中。表3实施例2,炉子，0kJ/m2实施例3，太阳能炉，0kJ/m2实施例B,太阳，5.8kJ/m2式2的化合物0.100.100.071总甾体糖香1.61.61.2从表3中的结果可以看出，根据本发明，通过对UV光曝露进行限制，甾体糖苷含量(总含量和化合物2的含量二者)显著增加。显而易见的是，为了商业化，前述工艺步骤可以按比例增加到在具体的或者相关的食品或者农业产业实践中应用的适当的加工和装置规模、类型和标准。应当理解的是此处所举例说明和所述的本发明的特定形式仅仅是代表性的，可以在其中进行一些变化而不脱离所公开内容的清楚的教导。18权利要求1.制备包含一种或多种活性甾体糖苷的组合物的方法，其包含步骤(a)收割Hoodia植物，(b)切碎该收割下的植物，(c)干燥该切割植物，由此避免了在干燥步骤过程中的直接曝露于UV光，使得总UV剂量小于大约0.5kJ/m2来获得干燥的植物材料。2.根据权利要求1的方法，其中所述的切割植物被干燥到残留水分含量小于大约15重量％。3.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该总UV剂量小于大约0.35kJ/m2。4.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该总UV剂量小于大约0.2kJ/m2。5.根据前述权利要求任何一个的方法，其中干燥是用干燥装置来进行的，该干燥装置是空气干燥机。6.根据权利要求5的方法，其中在该空气干燥机中的空气是用选自下面的能源来加热的电、化石燃料、乙醇、煤气、石蜡、太阳能和它们的混合物。7.根据前述权利要求任何一个的方法，其中干燥是在大约35°C-大约120。C的温度进行的。8.根据前述权利要求任何一个的方法，其中所述的植物选自i/ooWagoniom7，//ooc//a,//ood/a/wgarW/和它们的'混合物。9.根据权利要求8的方法，其中该植物是//oo&agoWom7。10.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该干燥的植幼材料包含一种或多种具有下式的甾体糖苷其中R4克基；R^H、烷基、甲基巴豆酰基(tiglyol)、苯曱酰基或者任何的其它有机酯基团；R、H或者一种或多种6-脱氧碳水化合物，或者一种或多种2，6-二脱氧碳水化合物，或者葡萄糖分子，或者其组合；并且其中虚线表示任选存在于碳原子C4和C5之间或者碳原子C5和C6之间的另外的键，或者其混合物。11.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该干燥的植物材料包含选自式(2)-(8)的甾体糖苷及其混合物的甾体糖苷(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(6)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>12.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该干燥的植物材料具有至少大约1.3重量％的平均总甾体糖苦含量，基于无水干燥的植物材料。13.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该干燥的植物材料具有至少大约1.6重量％的平均总甾体糖苷含量，基于无水干燥的植物材料。14.根据前述权利要求任何一个的方法，其中单个干燥的植物材料具有至少大约1.6重量％的总甾体糖苷含量，基于无水干燥的植物材料。15.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该干燥的植物材料包含至少大约0.08重量％的式2的甾体糖苷，基于无水干燥的植物材料。16.可根据前述权利要求任何一个的方法所获得的干燥的植物材料。17.食品，其包含可根据前述权利要求任何一个的方法所获得的干燥的植物材料。18.根据权利要求l-15任何一个的方法，其进一步包含从干燥的植物材料中获得萃取物。19.可根据权利要求18的方法获得的萃取物。20.食品，其包含权利要求19的萃取物。21.根据权利要求20的食品，其处于饮料、小吃、餐棒、涂在面包上的软质食品、调味品、汤或者代餐产品的形式。22.根据前述权利要求任何一个的方法，其中该甾体糖普被用于体重管理或者肥胖的饮食控制中。全文摘要制备包含一种或多种甾体糖苷的组合物的方法，其包含步骤(a)收割Hoodia植物，(b)切碎该收割下的植物，(c)干燥该切割植物，由此避免了在干燥步骤过程中的曝露于UV光，使得总UV剂量小于大约0.5kJ/m<sup>2</sup>来获得干燥的植物材料。文档编号A61K36/27GK101505772SQ200780031483公开日2009年8月12日申请日期2007年7月30日优先权日2006年8月24日发明者C·M·斯温德尔斯,F·M·米尤斯,K·J·波维申请人:荷兰联合利华有限公司