L-抗坏血酸基糖苷类化合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及L-抗坏血酸基糖苷类化合物的新用途，尤其是在制备α -葡萄糖苷酶 抑制剂中的新用途。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是目前危害人类身体健康甚至生命的最严重的慢性疾病之一，据国际糖尿 病联合会统计，2010年全世界有2. 85亿人患有糖尿病，到2030年预计患者数量可能达到 4. 38亿（Cytotechnology 2015, 67, 653)。糖尿病分为I型糖尿病（胰岛素依耐型型）和 II型糖尿病（非胰岛素依耐型），90%以上的患者属于II型糖尿病，目前主要的治疗方式 是通过抑制糖苷水解酶来控制血糖。糖苷酶抑制剂能延缓糖分消化吸收，控制餐后血糖急 剧升高，以达到平衡血糖浓度的目的，目前临床上葡萄糖苷酶抑制剂药物有阿卡波糖、米格 列醇和伏格列波糖，但是这几种药物也存在一定的副作用，会引起腹胀腹泻、腹痛和肝脏损 害（Food Chem. 2016, 190, 207)，因此有必要继续开发新的高效无副作用的抗糖尿病药物， 而从天然产物中发现有效成分是当前医药开发的选择之一。
[0003] 2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸和3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸是一种从 我国传统中药枸杞干果中提取出来的糖苷类化合物，是天然的维生素 C前体类物质，安全 性高。研究表明，2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸表现出比维生素 C更好的抗氧化性， (Biosci. Biotechnol. Biochem. 2008, 72, 1558 ;实用医学杂志 2011，27, 11)，但目前尚未见 此类物质具有糖苷酶抑制活性的研究报道。含L-抗坏血酸基的β -糖苷类化合物在体内只 能被β -葡萄糖苷酶水解（J. Agric. Food Chem. 2004, 52, 2092)，不同于α -葡萄糖苷酶广 泛存在于人体各消化器官中，β-葡萄糖苷酶主要只存在于小肠组织和肝肾的胞浆中（FEBS Lett. 1998, 436, 71)，所以含L-抗坏血酸基的β -糖苷类化合物在人体内水解缓慢，本身对 血糖影响较小，而自身糖苷的结构特点决定其可能具有糖苷酶抑制活性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一类L-抗坏血酸基糖苷类化合物，如2-0-β -D-葡萄糖 基-L-抗坏血酸（ΑΑ-2 β G)，3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸（ΑΑ-3 β G)和2-0- β -D-半 乳糖基-L-抗坏血酸（ΑΑ-2 β Gal)等，作为α -葡萄糖苷酶抑制剂的新用途。
[0005] 本发明的2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸和3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏 血酸可根据文献方法（中国新药杂志，2007，16,689)从枸杞干果中提取，或通过以下方 法合成：3-0-苄基-5, 6-0-异丙叉基抗坏血酸与四乙酰基溴代葡萄糖发生糖苷化反应得 到2-0-β -D-四乙酰葡萄糖基-3-0-苄基-L-抗坏血酸，然后依次在醋酸水溶液中脱除 异丙叉基、催化氢化脱除苄基、甲醇钠脱除乙酰基，最后用酸性阳离子交换树脂酸化得到 2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸。3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸和2-0- β -D-半乳 糖基-L-抗坏血酸通过类似方法制得。三种化合物的结构式如下：
[0007] 我们测试了 2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸，3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸 和2-0- β -D-半乳糖基-L-抗坏血酸对α -葡萄糖苷酶的抑制活性，实验结果表明，三种化 合物对α-葡萄糖苷酶均有显著的抑制作用，极有可能进一步发展为有效的α-葡萄糖苷 酶抑制剂。
【具体实施方式】
[0008] 实施例1
[0009] 2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的制备
[0010] 将3-0-苄基-5, 6-0-异丙叉基抗坏血酸（3. 06g，IOmrnol)和四乙酰基溴代葡萄糖 (4. 94g，12mmol)加入到60mL二氯甲烷和水混合溶剂中，随后加入K2C03(1. 66g，12mmol)和 TBABr (12mm〇l)，室温下搅拌反应5小时。分液，水相用二氯甲烷萃取1次，合并有机相，用 柠檬酸溶液洗涤两次，再用饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干，柱层析 分离得到2-0- β -D-四乙酰葡萄糖基-3-0-苄基-L-抗坏血酸（5. 09g，80 % )。
[0011] 2-0-β -D-四乙酰葡萄糖基-3-0-苄基-L-抗坏血酸（2g，3. 14mmol)溶于50mL 乙酸水溶液，80°C反应1小时。冷却后，在反应体系中加入50mL乙酸乙酯，依次用水、饱和 碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干，溶于乙酸乙酯，加入到盛有 0. 20g 10% Pd/C湿剂的圆底烧瓶中，氢气氛围下室温反应2. 5小时后，减压过滤，滤液旋 干，过柱，得到2-0-β -D-四乙酰葡萄糖基-L-抗坏血酸（I. 43g，90% )。
[0012] 将2-0-β -D-四乙酰葡萄糖基-L-抗坏血酸（0. 51g, Immol)溶于30mL的甲醇中， 加入甲醇钠（21. 6mg，0. 4mmol)，在室温下反应4小时。反应结束加入732阳离子交换树脂室 温搅拌40分钟。减压过滤，滤液浓缩旋干得到2-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸（0. 32g， 95 % )。1H NMR (400MHz，D2O) δ 4. 72 (d，J = 7. 8Hz，1H)，4. 56 (d，J = I. 6Hz，1H)，4. 04 (dt，J =6. 6, I. 6Hz, 1H), 3. 85 (dd, J = 12. 8, I. 6Hz, 1H), 3. 74-3. 70 (m, 3H), 3. 55-3. 48 (m, 1H), 3. 46-3. 40 (m, 3H)。
[0013] 实施例2
[0014] 3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的制备
[0015] 将5, 6-0-异丙叉基抗坏血酸（2. 00g, 9. 26mmol)加入到60mL DMF中，随后加入 K2CO3 (I. 92g，14mmol)和四乙酰基溴代葡萄糖（5. 71g，14mmol)，室温下搅拌反应10小时。停 止反应，反应体系用乙酸乙酯萃取，有机相依次用柠檬酸溶液、饱和食盐水洗涤，然后用无 水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干，柱层析分离得到3-0- β -D-四乙酰葡萄糖基-L-5, 6-0-异 丙叉基抗坏血酸（3. 31g, 65% )。
[0016] 在3-0-β -D-四乙酰葡萄糖基-L-5, 6-0-异丙叉基抗坏血酸（I. 05g)中加入乙酸 溶液65mL，80°C下反应2. 5h。反应停止，向反应体系中加入50mL乙酸乙酯萃取产物，分液， 有机相依次用水、饱和NaHCO3溶液洗涤至有机相为中性，加入MgSO 4干燥，过滤，旋干，柱层 析分离得到化合物3-0- β -D-四乙酰葡萄糖基-L-抗坏血酸（0. 79g，80 % )。
[0017] 将3-〇-β-D-四乙酰葡萄糖基-L-抗坏血酸（0. 15g，0. 291mmol)溶于15mL甲 醇，随后加入甲醇钠（6. 28mg，0. 116mmol)室温下搅拌反应6小时。然后加入阳离子交换 树脂，搅拌约1小时。过滤，收集溶液，旋干，得到3-0- β -D-葡萄糖基-L-抗坏血酸，产率 98%。1H NMR (400MHz，D2O) δ 5.43 (d，J = 7.7Hz，1Η)，5.01 (d，J= 1.6Hz，1Η)