含有奎尼酸类及糖苷类化合物的檵木提取物及其医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药、化学药物领域，具体地，本发明涉及富含奎尼酸衍生物和糖苷类 成分的白花檻木提取物、其制备方法及其在治疗出血性疾病和制备止血药物方面的应用。
【背景技术】
[0002] 出血是许多疾病的临床表现，也是导致患者死亡的重要原因之一。临床上的出血 性疾病是由于先天性或获得性止血机制（包括血管、血小板数量和质量、凝血因子）异常引 起的自发性或创伤造成的出血不止的一类疾病，该类疾病严重威胁着患者的生命和健康。 止血药可通过收缩小动脉及毛细血管、增强血小板功能、加速血液凝固过程、抑制血块溶解 过程而产生止血作用。目前国内临床常用的止血药约有20多种，根据其凝血作用机制可分 为四大类：促凝血因子活性药如血凝酶、去氨加压素、维生素 K类止血药等；降低毛细血管 通透性药如卡巴克洛、卡络磺钠；抗纤维蛋白溶解药如氨基己酸、氨甲苯酸、止血环酸、抑肽 酶等；外用止血药如纤维蛋白胶、胶原蛋白、壳聚糖、可吸收性明胶海绵、氧化纤维素、微纤 维胶原等。现有的止血药物在应用中都存在一定的局限性，如容易导致血栓、不适用于创面 及大手术出血、止血速度慢等。由于上述局限性的存在，新止血药的研发一直受到较多关 注。
[0003] 繼木（Loropetalum chinense)也称为白花繼木，为金缕梅科（Hamamelidaceae) 檻木属（Loropetalum)植物，其味苦、潘，以花、叶和根入药，具有清热解毒、收敛止血的作 用，广泛用于治疗各种出血、烧烫伤、皮肤感染、痢疾腹泻等。现代药理研究发现白花檻木具 有止血、抑菌、抗炎、促愈合和抗氧化等作用。白花檻木中主要含有挥发油、鞣质、黄酮、木脂 素等成分。迄今为止，国内外学者从白花檻木中分离得到了约50余个化合物，主要为鞣质 和黄酮类化合物。
[0004] 在现有的有关檻木的专利中，公开号为CN101153303A的专利为檻木总黄酮 的提取工艺专利，不涉及用途，该专利中的总黄酮定量方法存在较大误差；公开号为 CN101485701A和CN102579524A的专利所涉及的医药用途分别为檻木治疗烧烫伤和促进伤 口愈合，其有效成分并不明确。公开号为CN102134187B的专利公开了一种由檻木中分离得 到的化合物及其抗炎、抗菌的医药用途。公开号为CN102716157A的专利公布了一种檻木总 酚的制备方法及其止血作用，采用乙醇回流提取和大孔树脂分离得到总酚类化合物，但总 酚中的主要成分没食子酸、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚等化合物的止血作用未经过实验 确证，因而上述化合物不能代表檻木止血作用的有效成分。
[0005] 本发明采用丙酮室温浸泡的方法对檻木进行提取，采用与中国专利CN102716157A 中所用的型号不同的大孔树脂分离得到具有明确止血活性的部位，通过对活性部位中的 各类化学成分进行系统分离和活性筛选研究，首次公开了此前并未在檻木中发现的绿原 酸甲酯、绿原酸乙酯、5-0-p-香豆酰奎尼酸甲酯等奎尼酸衍生物和红景天苷、（Z)-3-己 烯基-Ο-α-L-吡喃鼠李糖-(1 - 6)-i3_D-批喃葡萄糖苷、苄基-Ο-α-L-吡喃鼠李 糖-(1 - 6) - β -D-批喃葡萄糖苷、槲皮素-3-0- (6 " -0-没食子酰基）-β -葡萄糖苷等糖 苷类化合物，并且通过动物实验证实了这些化合物的止血作用。国内外相关研究中未见有 从白花檻木中获得止血活性良好的奎尼酸衍生物和糖苷类成分复合物的相关报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的一个方面涉及一种白花檻木提取物，其富含有奎尼酸衍生物类成分 和糖苷类成分。其中，奎尼酸衍生物类成分为绿原酸甲酯、绿原酸乙酯、5-0-p-香豆酰 奎尼酸甲酯的一种或多种；糖苷类成分为红景天苷、（Z)-3_己烯基-Ο-α-L-吡喃鼠李 糖-(1 - 6) - β -D-批喃葡萄糖苷、苄基-0- a -L-吡喃鼠李糖-(1 - 6) - β -D-批喃葡萄糖 苷、杨梅苷、槲皮素-3-0-(6 " -0-没食子酰基）-β -葡萄糖苷的一种或多种。
[0007] 在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，上述奎尼酸衍生物和糖苷 类成分以重量比合计为30% -90%，30-90%，优选为60% -80%。
[0008] 在本发明的一个实施方案中，以提取物的总重量计算，绿原酸甲酯、绿原酸乙酯、 红景天苷、杨梅苷四种成分的含量以重量百分比记分别为：1-5%、0. 6-3%、0. 3-1. 5%、 5-20% ;优选为 1-3. 5%、1-2%、0· 5-1%、5-15%。
[0009] 本发明的另一方面涉及上述的白花檻木提取物的制备方法，包括如下步骤：
[0010] 1)将白花檻木药材以丙酮室温浸泡提取，浓缩后得到粗提物；
[0011] 2)将药材粗提物在水中分散均匀，用低级性溶剂萃取除去低级性成分，得到水溶 性部分；
[0012] 3)水溶性部分浓缩后，过大孔树脂柱，以10%、20%、30%、40%、50%、70%、95% 乙醇-水梯度洗脱，将20%、30%、40%洗脱液减压蒸干，得到不同极性部位。
[0013] 4)将3)所得30%乙醇洗脱物加水溶解，用反相C1S硅胶柱层析，以不同浓度的甲 醇水溶液（1〇%，20%，30%，40%，50%，70%，95% )梯度洗脱，划分成 F1-F46 段。
[0014] F19-20段合并记为组分B，再用反相C1S硅胶柱层析，以不同浓度的甲醇水溶 液（5%，10%，15%，20%，25%，30%，40%，50%，100% )梯度洗脱，划分成 B1-B58。其 中B8-B10合并，用LH-20柱层析，甲醇洗脱，划分成B-8-1至B-8-58,其中组分B-8-16至 B-8-26合并，用硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇：水=9 : 1 : 0.1-8 : 2 : 0.2洗脱，得 到单体化合物红景天苷；组分B-8-27用硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇：水=8 : 2 : 0.2 洗脱，得到单体化合物5-0-p-香豆酰奎尼酸甲酯；组分B-8-29至B-8-33合并，用硅胶柱层 析，以二氯甲烷：甲醇：水=8 : 2 : 0.2洗脱，得到单体化合物绿原酸甲酯；组分B48-B51 合并，用硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇=95 : 5洗脱，得到单体化合物绿原酸乙酯。
[0015] F39-41段合并记为组分I，用硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇：水= 9 : 1 : 0.1-8 : 2 : 0.2洗脱，划分成11-152。其中120-121合并，用LH-20柱层析，甲 醇：水=2 : 1洗脱，得到单体化合物苄基-0- a -L-吡喃鼠李糖-(1 - 6) - β -D-批喃葡 萄糖苷；124-125合并，用LH-20柱层析，甲醇：水=2 : 1洗脱，得到单体化合物（Ζ)-3-己 烯基-0- a -L-吡喃鼠李糖-(1 - 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷；129-132合并，用LH-20柱层析， 甲醇洗脱，得到单体化合物槲皮素-3-0-(6 " -0-没食子酰基）-β -葡萄糖苷。
[0016] F42-44段合并记为组分J，用聚酰胺柱层析，以甲醇：水=1 : 1-9 : 1梯度洗 脱，划分成J1-J71，其中组分J14-J40合并，用LH-20柱层析，甲醇：水=2 : 1洗脱，得到 单体化合物杨梅苷。
[0017] 采用室温冷浸提取时，包括以下步骤：取适量白花檻木药材切为2-3cm小段，加入 固液比为1 : 8-1 : 10的丙酮，室温浸泡提取，然后合并提取液，减压浓缩至干。
[0018] 采用溶剂萃取法除去低级性成分时，包括以下步骤：取药材的粗提物在水中分散， 然后加入体积比为1 : 1-1 : 4的低级性的酯类、烷烃类或醚类溶剂萃取3-5次，以除去其 中的色素等。其中优选的溶剂为石油醚、环己烷、乙酸乙酯。萃取后水层挥干有机溶剂得到 水溶性成分。
[0019] 采用大孔吸附树脂法时，包括以下步骤：将萃取除杂后的水溶性成分减压浓缩至 浓度为200-300g/L的提取液，上大孔树脂柱，树脂柱径高比为1 : 6-1 : 10,上样后用2-4 倍BV的10%、20%、30%、40%、50%、70%、95%乙醇-水梯度洗脱，洗脱流速为3-98￥/11， 收集20%、30%、40%洗脱液减压浓缩至干，得到富含有奎尼酸衍生物类成分和糖苷类成分 的白花檻木提取物。
[0020] 大孔树脂包括非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型的树 月旨，如 HP20、D4020、S-8、HZ-806、D4006、X-5、NKA-II、NKA-9 等，其中优选的为弱极性或中 等极性的树脂HP20、I-IHMOO、D4006、X-5等，更优选为HP20型树脂。
[0021] 本发明的又一方面涉及该提取物制备的药物组合物，该提取