一种氨基糖苷类化合物及其提取分离方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物化学领域，特别涉及一种新的氨基糖苷类化合物及其提取分离方 法。
【背景技术】
[0002]氨基糖苷类化合物(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成 的苷类。有来自链霉菌的链霉素等、来自小单孢菌的庆大霉素等天然氨基糖苷类，还有依替 米星等半合成氨基糖苷类，均属广谱抗生素。
[0003] 氨基糖苷类抗生素对于细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合成，作用点在细胞 30S核糖体亚单位的16SrRNA解码区的A部位。研究表明，此类药物可影响细菌蛋白质合成的 全过程，妨碍初始复合物的合成，诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放，从而 导致细菌死亡。
[0004] 氨基糖苷类抗生素主要用于敏感需氧革兰阴性杆菌所致的全身感染。虽然近年来 有多种cephalosporins和quinolones药物在临床广泛应用，但由于氨基糖苷类抗生素对铜 绿假单胞菌、肺炎杆菌、大肠杆菌等常见革兰阴性杆菌的PAE较长，所以，仍然被用于治疗需 氧革兰阴性杆菌所致的严重感染，如脑膜炎、呼吸道、泌尿道、皮肤软组织、胃肠道、烧伤、创 伤及骨关节感染等。
[0005] 硫酸依替米星(Etimicin sulfate)是我国科研人员自行研制的，拥有自主知识产 权的高效、低毒、抗耐药菌的新一代半合成氨基糖苷类抗生素，是唯一获得国家一类新药证 书的抗感染药物。
[0006] 硫酸依替米星注射液适用于对其敏感的大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆 菌属、枸橼酸杆菌、肠杆菌属、不动杆菌属、变形杆菌属、嗜血流感杆菌、绿脓杆菌和葡萄球 菌等引起的各种感染。临床研究显示本品对以下感染有较好的疗效:呼吸道感染:如急性支 气管炎、慢性支气管炎急性发作、社区肺部感染等。肾脏和泌尿生殖系统感染:如急性肾盂 肾炎、膀胱炎、慢性肾盂肾炎或慢性膀胱炎急性发作等。皮肤软组织和其它感染:如皮肤及 软组织感染，外伤、创伤和手术产后的感染及其他敏感菌感染。
[0007] 硫酸依替米星的制备方法描述在中国专利93112412.3中，其主要步骤为:通过发 酵制备庆大霉素 Cla，进一步制备3，2，6，-三-N-乙酰基庆大霉素 Cla(Pl)，和3，2，，6，-三-N-乙酰基-I-N乙基庆大霉素 Cla(P2)，最终获得I-N-乙基庆大霉素 Cla(依替米星），由于该方 法通过发酵获得的庆大霉素 Cla含有杂质，进一步制备得到的硫酸依替米星中也含有多种 杂质，目前对这些杂质研究的不多，本发明对有关杂质进行了研究，意外的发现一种活性和 毒性都优于依替米星的一种新的化合物，经体外抗菌试验发现，该化合物在常规浓度下即 可有效杀灭大肠埃希菌、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆菌属、枸橡酸杆菌、肠杆菌属、不动杆 菌属、变形杆菌属、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等革兰氏阴性菌和葡萄球菌等。
【发明内容】
[0008] 本发明之目的在于对氨基糖苷类化合物进行深入研究，以其寻找MRSA对其敏感， 耳肾毒性低的新氨基糖苷类抗生素。
[0009] 本发明提供一种6〃-N-乙基庆大霉素 Cla化合物或其药学上可接受的盐。
[0010] 其中，6〃-N-乙基庆大霉素 Cla化合物结构式如下：
[0012]本发明所述药学上可接受的盐，是6〃-N-乙基庆大霉素 Cla化合物和酸形成的盐， 包括与无机酸盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、苯甲酸、富马酸、抗坏血酸、甲磺酸、对甲 苯磺酸等形成的盐，可按常规转化方法制备这些酸加成盐。
[0013 ]本发明的式（I)化合物可以采用如下的制备方法制备：
[0014] 取用中国专利93112412.3实施例1-3的方法制备的依替米星粗品，加水溶解，上样 YPR-II型大孔树脂柱，用浓度为8%，12%，16%，20%乙醇水溶液梯度洗脱，TLC检识(展开 剂:氯仿-甲醇-氨水，1:1:1，取用下层液），合并流份，得到杂质富集流份。分别将杂质富集 流份浓缩，冻干，得到10克固体混合物，取100-200目硅胶300克，用硅胶柱层析分离(氯仿： 甲醇:氨水(3:1:1，取用下层液)和制备液相纯化，得到本发明的式(I)化合物。
[0015] 经核磁共振波谱解析，本发明的式(I)化合物的1H，13C_NMR数据如下表。
[0016] 表1化合物（！）的1H，13C NMR数据
[0019]在1H-NMR谱中，δΗ 5.05(lH，d，3.6HZ)，5.76(lH，d，3.6HZ)分别为糖的端基氢，提示 该化合物中含有两个糖。Sh 2.88(3H，s)为氨基上的取代甲基质子信号，δΗ 1.31(3H，s)则为 一个连在季碳上的甲基质子信号。
[0020] 在13C-NMR谱中，显示δ。lOl.MC-f )，95.4((：-1〃）为糖的端基碳信号，提示化合物 结构中含有两个糖;与文献[1]中小诺霉素(6-N-甲基庆大霉素）的碳谱数据比较，S c 101.4 (C-V ),66.3(02' ),63.5(03' ),69.9(04' ),68.0(05' ),34.55(06' ),21.0(07')可归 属为C环古洛糖胺片段碳信号，δ。95 · 4(C-l〃），49 · 7(C-2〃），25 · 7(C-3〃），20 · 5(C-4〃），74 · 4 (〇5〃），50.2((：-6〃）可归属为4环绛红糖胺片段碳信号，6。48.5((：-1)，27.9((：-1)，48.8((：-1)，77.2((：-1)，65.8((：-1)，83.8((：-1)则为8环碳信号。进一步比较发现多出一组心43.9 (C-7〃），10.4(C-8〃），少了S c 36.1，提示小诺霉素中原来C-6氨基上的甲基变成了乙基，其 余数据可能受到三氟乙酸的影响，与文献比均向高场位移约-2.5ppm。
[0021] 再分析氢谱数据发现，δΗ 4.20(lH，dd，11.0,3.8Hz) ,3.43( lH，d，10·7Ηζ)，3.96 (lH，d，12.8Hz，H-5'a)，3.58(lH，d，12.8Hz，H-5'b)分别为加洛糖胺的H-2'，3'和5'位质子 信号，进一步分析其偶合常数，C环3'位氢的偶合常数为10.7Hz，故2'和3'位的氢都在竖键， V和2M立的偶合常数为3.6、3.8Hz，故IM立氢在横键。B环上4，5，6位氢的偶合常数为8.8、 10、8.8Hz，说明1，3，4，5，6位的氢都在竖键上，与庆大霉素 Cla的相对构型一致[1]。并且庆大 霉素 Cla为合成依替米星的初始原料，在反应中结构异变，杂质来源明确。
[0022]质谱解析(ESI-MS):
[0023] ESI_MS19测定数据及解析结果：
[0024] ESI-MS：m/z 478.4[M+H]+；
[0025] ESI-MS2(478.4):m/z 461，350,322，163。
[0027]化合物（I)的质谱裂解途径
[0028]结论:离子源为电喷雾质谱，正离子模式主要给出样品的分子离子加氢峰。正离子 模式给出的二级质谱的裂解途径见上图。以上ESI-MS2信息，证明样品与推断结构相符。 [0029]综合以上匪R和ESI-MS n解析，有关化合物鉴定为6〃-N-乙基庆大霉素 Cla，为一新 化合物，化合物（I) NMR和ES I -MSn谱图见附图。
[0030] 因此，本发明的化合物(I)命名为:6〃-N-乙基庆大霉素 Cla。
[0031] 英文名：6〃-N-Ethylgentamicin Cla [0032]分子式：C21H43N5O7
[0033] 分子量:477
[0034] 本发明还提供含有本发明的化合物或其药效学上可接受的盐作为活性成分的药 物组合物。药物组合物含有的本发明化合物在组合物中的重量比为0.01-99.9%，药物可接 受的载体在组合物中的重量比为0.01-99.9%。药物组合物以适合药用的制剂形式存在。药 用的制剂为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊 剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液 剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、气雾剂、滴剂、贴剂。
[0035] 本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的发明化合物的有效量为 0.1 mg-1000 mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服 用剂量，如每次服用l〇〇mg。
[0036] 本发明的药物组合物在制备成粉剂