聚氨基酸在连续脂相中的分散体的制作方法

专利名称：聚氨基酸在连续脂相中的分散体的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于延长释放一种或多种活性成分(尤其是蛋白质和肽活 性成分)的基于水性胶体悬浮液或水性分散体的新型药物制剂。本发明进 一步涉及这些药物制剂的应用，尤其是治疗学上的应用。这些活性药物制 剂既用于治疗人体又用于治疗兽类。
背景技术：
在药物活性成分，特别是治疗用蛋白质的延长释放领域中，许多情况 下需要尽量确保病人的治疗用蛋白质或治疗用肽的血浆浓度与健康受试者 的值接近。
这个目标因为蛋白质在血浆中的寿命短而难以实现，因此需要重复注 射治疗用蛋白。因而，治疗用蛋白的血浆浓度呈现"锯齿"分布，表现为
多个高浓度的峰和极低浓度的谷。由于治疗用蛋白(例如白细胞介素IL2) 的高毒性，峰浓度大大高于健康受试者体内的基础浓度，可能导致明显的 有害效果。此外，谷浓度远低于疗效所需的浓度，因此，病人得到的治疗 不足，却要经受长期的副作用影响。
此外，为了保证病人的治疗用蛋白血浆浓度接近治疗的最佳值，这里 讨论的药物制剂必须允许延长释放治疗用蛋白，从而限制血浆浓度随着时 间而变化。
进一步，该活性制剂应优选地满足以下为本领域技术人员公知的条件 1 )延长释放活性的和非变性的治疗用蛋白，例如，人体蛋白或合成蛋 白，以使治疗用蛋白的血浆浓度保持在治疗水平；
2) 注射粘度足够低以便于注射；
3) 生物相容性以及生物可降解的形式，不呈现毒性或导致免疫反应， 具有良好的局部免疫耐受性。为了达到这些目的，现有技术中其中一个最优的方式是开发用于延长 释放治疗用蛋白的剂型，其由加载治疗用蛋白质的纳米颗粒的低粘度液体 悬浮液组成。这些悬浮液促进天然治疗用蛋白的给药。
因此，FlamelTechnologies提出了一种方法，其中，治疗用蛋白与含有 疏水基团和亲水基团的共聚氨基酸的纳米颗粒结合。
专利US-B-5904936记载了两性分子聚氨基酸共聚物的平均粒径为 0.01-0.5 ia m的亚微米颗粒(NPV),以及平均粒径为0.5-20 n m的微米颗粒 (MPV)。该两性分子聚氨基酸共聚物含有至少两种类型的氨基酸，其一 为中性及疏水的，另一种为可电离的。蛋白，例如胰岛素，在水性溶液中 自发被吸附到这些颗粒之上。例如，该聚氨基酸共聚物为聚(L-亮氨酸-嵌 段-L-谷氨酸钠)的嵌段共聚物。所述专利记载了通过向聚亮氨S^/谷氨酸的 胶体悬浮液中加入单价阳离子盐(硫酸铵)或多价阳离子盐(Fe2+、 Fe3+、 Zn2+、 Ca2+、 Al2+、八13+或0!2+)、酸(HC1)或阳离子聚合物(聚赖氨酸) 使NPV聚合为MPV。
专利申请WO-A-2005/033181公开了线性的、两性分子的阴离子均聚氨 基酸，其含有天冬氨酸残基谷氨酸残基，其末端带有包含8-30个碳原子的疏 水基团。例如，特别的，该疏水改性的远螯均聚氨基酸为具有PheOC18/C18 末端的聚谷氨酸钠或具有PheOC18/oc-维生素E末端的聚谷氨酸钠。在水中， 这些疏水改性的远螯均聚氨基酸自发形成纳米颗粒的胶体悬浮液，该纳米 颗粒能够在水性悬浮液中pH为7.4的条件下易于和至少一种活性蛋白(胰岛 素)结合。
有益地，根据专利US-B-5904936和WO-A-2005/033181的悬浮液矢量分 析的活性蛋白(如胰岛素)在体内的释放时间能够增加。
在PCT申请WO-A-05/051416中记载的药剂形式部分实现了释放时间的 增加。在所述专利申请中，聚(L-谷氨酸钠)的纳米颗粒(0.001-0.5 Mm) 疏水改性胶体悬浮液在一定浓度下注射，使得在皮下注射后，其和内源性 的血清白蛋白接触，在病人的注射部位形成凝胶体。然后蛋白緩慢的被释 放，通常为一周左右。
若需要蛋白的释放时间超过上述专利申请中所述的一周，则有以下几 种可能性。第 一种办法是增加聚合物的浓度，从而減緩体内注射后的蛋白释放。 然而，这种方法的危害是溶液粘度的急剧上升，令该体系无法被注射。
第二种方法是使蛋白分散在与水不混溶的可注射的脂相中，从而降低 蛋白在皮下介质中的扩散。然而，这种方法的危害是与脂相接触的蛋白的
潜在变性。
进一步，专利US6235282 Bl记载了一种可注射的油包水乳液，作为制 备疫苗的免疫原助剂。从免疫学角度看，该乳液的水相中包含了一种活性 物质或疫苗抗原。因此，导致在水相中活性物质的不稳定性，以及在水-油界面上活性物质的变性风险。所述专利未涉及活性成分的延长释放。
专利申请US2004/0071716 Al涉及一种用于疫苗制剂的助剂。该助剂包 括油包水乳液。乳化剂为高分子乳化剂，或者更确切的，是具有通式 A-COO-B-OOC-A的顺序共聚物，其中B为可溶于水的聚乙二醇的二价残基， A为可溶于脂的单羧酸化合物残基。根据实施例，该病毒抗原存在于水相中， 因此同样伴随着病毒抗原稳定性和变性风险的问题。所述专利申请未涉及 活性成分的延长释放。

发明内容
本发明的发明人提供了 一种低粘度脂形式，其用于延长与聚合物结合 的治疗用蛋白的释放时间，且不会降低蛋白的稳定性，从注射能力角度看， 也不会使治疗形式的粘度高于可接受限度。
本发明首先涉及一种药物组合物，用于延长释放至少 一种活性成分。 该组合物含有至少 一种在水相中的活性成分，该水相含有至少 一种两性聚 合物。该水相为在连续脂相中的分散体形式。更确切的，该组合物为油包 水的乳液形式，含有
药学上可接受的连续脂相，
水性分散相，含有至少 一种两性聚合物和至少 一种与所述两性聚氨 基酸非共价结合的活性成分，以及
至少一种药学上可接受的表面活性剂。 在本发明的一种变形中，所述两性聚合物带有至少一个疏水基团。在本发明的一种变形中，所述两性聚合物为两性聚氨基酸，可选地带 有至少一个疏水基团。因此，在本发明的一种变形中，所述药物组合物为
油包水乳液形式，含有下列组分 药学上可接受的连续脂相，
水性分散相，含有至少一种带有至少一个疏水基团的两性聚氨基酸， 和至少一种与所述两性聚氨基酸非共价结合的活性成分，以及 至少一种药学上可接受的表面活性剂。 在本发明另 一 种变形中，该两性聚合物为带有至少 一 个疏水基团的多糖。
这类药物组合物可以通过惯用途径给药，特别的，通过至少以下一种 途径口、鼻、眼、皮肤、阴道、直肠或胃肠外。胃肠外给药值得一提的 是皮下注射、肌肉注射、腹膜注射、皮内注射、静脉注射、动脉注射、脊 柱内注射、关节内注射以及胸膜内注射。
根据另一特征，本发明还涉及如下所述不同两性聚合物(特别是多糖 和聚氨基酸)在制备药物组合物中的应用，该药物组合物为油包水乳液形 式，其水性分散相含有至少一种所述两性聚合物。本发明的一种变形包括 使用 一种或多种带有至少 一个疏水基团的两性聚氨基酸制备这类药物组合 物。
定义
"水性介质中的物理凝胶体"是指溶解或分散在水相中的分子、大分
以由粘弹性测量定义。在上下文中，物理凝胶体为一种在一定频率范围内 杨氏模量G，大大高于损耗模量G"的体系，因此，定义为两个模量交点的倒 数的特征驰豫时间大于或等于0.1s，特别优选的为大于或等于10s。
基于本发明的目的以及贯穿于整个公开内容，术语"聚氨基酸"包括 含有超过10个氨基酸残基的天然聚氨基酸以及合成聚氨基酸。通常在本发 明中，"该"聚氨基酸应理解为是指用在药物组合物中的不同聚氨基酸的 混合物。基于本发明的目的，措辞"带有"表示所讨论的带有的基团、接枝或 自由基为垂挂基团。换句话说，所述基团相对于两性聚合物主链为侧链基 团。对于含有谷氨酸和/或天冬氨酸残基串联的聚氨基酸而言，该基团为天
冬氨酸残基5位羰基的取代基或谷氨酸残基s位羰基的取代基。对于其他
氨基酸残基，垂挂基团为所述氨基酸残基特定侧链的取代基。 两性多聚糖
在本发明的一种变形中，两性聚合物可以是改性多糖，例如Kuroda等 人(2002 )在Langmuir第18期3780-3786页发表的文章"Hierarchical self-assembly of hydrophobically modified pullulan in water: gelation by networks of nanoparticles"中记载的疏水改性的普鲁兰多糖(胆固醇普鲁糖、 十六碳烷基普鲁糖)。
在本发明的另 一 个变形中，使用的两性多糖选自透明质酸 (hyaluronan)、藻酸盐、壳聚糖、半乳糖醛酸(galacturonan)、疏酸软骨 素、右旋糖苷、纤维素和/或它们的官能衍生物。这类多糖在^^开号为WO 2007/034320的国际专利申请有记载。特别的，这些多糖为透明质酸、藻酸 盐、壳聚糖、右旋糖苷和/或它们被至少一个咪唑基(imidazolyl)或至少一 个疏水基团官能化的衍生物。这类多糖以及它们的合成形态，特别是右旋 糖苷的衍生物，在公开号为WO 2007/116143的国际专利申请中有记载。
两性聚氨基酸
在本发明的另一个变形中，使用的两性聚合物为两性聚氨基酸。在一 个优选的变形中，其为带有至少一个疏水基团的两性聚氨基酸。
在本发明的一个变形中，使用的聚氨基酸为含有重复谷氨酸或天冬氨 酸残基的均聚物或者含有这两种残基的混合物的共聚物。这些残基是谷氨 酸或天冬氨酸残基时可以是盐的形式。以这种方式形成的盐必须是药学上 可接受的。本发明的余下部分描述了通常为药学上可接受的补偿离子的不 同的例子。谷氨酸或天冬氨酸残基以及它们的盐可以具有D或L型。可以想 象到，聚氨基酸可以同时含有D型残基以及L型残基。若是谷氨酸根或谷氨酸残基，重复的残基通过它们的OC或Y位互相结合，若是天冬氨酸或天冬
氨酸根残基，重复的残基通过它们的cc或(3位互相结合。
在本发明的一个变形中，聚氨基酸的主链实质上含有具备L型的氨基酸 残基，它们通过a型联接(通过它们的oc位)互相结合。
在本发明的另一个变形中，两性聚氨基酸通过衍生于天冬氨酸(天冬 氨酸残基)和/或谷氨酸(谷氨酸残基)的单体形成，至少部分所述残基带 有含有至少一个疏水基团[GH]的接枝。特别的，这些氨基酸为PCT申请 WO-A-00/30618中记载的类型。
在本发明的一个变形中，除了含有至少一个疏水基团[GH]的接枝外， 两性聚氨基酸可以带有衍生于组氨酸残基的取代基。这种情况下，所述组 氨酸残基可以通过酰胺键与谷氨酸或天冬氨酸残基相结合。
下面将描述带有疏水基团的不同类型的两性聚氨基酸。为简便起见， 通式将以方括号标识。然而，这些通式对应的两性聚氨基酸尤其可以为序 列聚合物/共聚物、嵌段聚合物/共聚物或无规聚合物/共聚物。可以想象，这 些不同变形可以组合，例如，选择下述合适的两性聚氨基酸混合物或者在 一个或相同两性聚氨基酸中组合不同类型的接枝。
优选的，聚氨基酸的主链选自 cc -L-谷氨酸才艮或oc -L-谷氨酸均聚物； a -L-天冬氨酸根或a -L-天冬氨酸均聚物；以及 a -L-天冬氨酸根/ a -L-谷氨酸根或oc -L-天冬氨酸/ oc -L-谷氨酸共 聚物。
两性聚氨基酸的主链上天冬氨酸和/或谷氨酸单元的分布使得得到的聚 氨基酸或为无规型或为嵌段型或为多嵌段型。同样的，两性聚氨基酸主链 上的疏水基团的分布使得得到的聚氨基酸或为无规型或为嵌段型或为多嵌 段型。因此，下述的通式(I) 、 (II) 、 (III) 、 (IV) 、 (V)应理解为 不仅代表序列(或嵌段)共聚物，而且也代表无规共聚物或多嵌段共聚物。
根据另 一定义，根据本发明所述组合物中使用的两性聚氨基酸的分子 量在2000至100000g/mol之间，优选为5000至40000g/mol之间。
在第一个变形中，所述药物组合物中使用的两性聚氨基酸具有如下通 式(I)，及其药学上可接受的盐<formula>formula see original document page 17</formula>其中
R'为氢原子、C2-C10的直链酰基、C3-C10的支链酰基、焦谷氨酸根 或-R4-[GHl]基团；
R"为-NHRS基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选地 通过-NHRS胺基或-OP^醇基改性；
114各自独立地为直接键或含有l-4个氨基酸残基的间隔基团(spacer group );
Rs为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基或苄基； W为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基、苄基或 -114-
基团；
A和B各自独立地为-CH2-(天冬氨酸残基)基团或-0^2-(:112-(谷氨 酸残基)基团；为疏水基团；
疏水基团[GHl]的摩尔接枝率n/(n+m)相对于两性聚氨基酸足够低， 从而在25 。C 、 pH为7的水溶液中形成聚氨基酸亚微米颗粒的胶体悬浮液。 n/(n+m)优选为l至25moiyo之间；以及
聚合度(n+m)为10-1000，优选为50-300。关于制备及合成如通式(I)所述聚氨基酸的具体内容，可以参见公开
号为FR2840614以及FR2855521的专利申请。
根据第二种可能性，所述两性聚氨基酸具有下述通式(II) 、 (III)、 (IV)中的一种，及其药学上可接受的盐
,COOH
(n)
其中
Ra为C2-C6的直链烯基；
Rb为C2-C6的烯基、C2-C6的二烷氧基或C2-C6的二胺基；
R7各自独立的为直接键、含有1 -4个氨基酸残基的间隔基团或者
-C(0)-CH2-CH2-基团；
R8为-NHI^基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选地
分别通过-NHW胺基或-OR"醇基改性；
W为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基或千基； R^为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基、苄基或
R1 '各自独立的为直接键或含有1 -4个氨基酸残基的间隔基团； 八和8各自独立的为-092-(天冬氨酸残基)基团或-0^2-0^2-(谷氨
酸残基)基团；[GH2]和[GH3]各自独立的为疏水基团；以及 聚合度(ml+m2)和m3为10-1000,优选为50-300。 关于制备及合成如通式(II) 、 (III) 、 (IV)所述聚氨基酸的具体内 容，可以参见公开号为FR2860516的专利申请。
根据第三种可能性，所述两性聚氨基酸具有下述通式(V)，以及其药 学上可接受的盐
<formula>formula see original document page 19</formula>(V)
其中
Re为-NHR's基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选 地分别通过-NHRS胺基或-OR"醇基改性；
Rd为氢原子、C2-C10的直链酰基、C3-C10的支链酰基或焦谷氨酸根
基团；
R"各自独立的为二价、三价或四价的连接基团，优选自-O-、 -NH-、 Cl-C5的-N-烷基、氨基酸残基、C2-C6的二醇、C3-C6的三醇、C2-C6的二 胺、C3-C6的三胺、C2-C6的氨基醇或C2-C6的羟基酸；1113各自独立的为-OH基团或通过胺片段结合的乙醇胺基团； R"为烷基酯基团、-012011基团(组氨醇)、氢原子(组胺)、-C(0)NH2 基团(组酰胺)、-C(0)NHCH3基团或-C(0)N(CH3)2基团；
R"和R"各自独立的为氬原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10支链烷 基或苄基；各自独立的为疏水基团，选自 。直链或支链的C8-C30的烷基，可选地含有至少一个不饱和单位 和/或至少一个杂原子，
。C8-C30的烷基芳基或芳基烷基基团，可选地含有至少一个不饱和 单位和/或至少一个杂原子，以及
。C8-C30的(聚)环基，可选地含有至少一个不饱和单位和/或至少一 个杂原子；
p、 q和r为正整数；
在每个共聚物链平均含有至少3个疏水接枝的条件下，疏水基团[GH] 的摩尔接枝率(p)/(p+q+r)为l-50mol%;
衍生于组氨酸残基的基团的摩尔接枝率(q)/(p+q+r)为l-99mol%;
(r)/(p+q+r)为0-98mol。/o;以及
(p+q+r)为10-1000，优选为30-500。 通常，疏水基团[GH4]中的杂原子为氧原子、氮原子或硫原子。 可用于官能化谷氨酸根单元的组氨酸残基的衍生物各自相同或不同， 可以是，例如，组氨酸酯(如曱酯和乙酯)、组胺醇以及组胺。这些衍生 物也可以为，例如，组酰胺(histidinamide)、组酰胺的N-单曱基衍生物以 及组酰胺的N,N' -二曱基^f汙生物。
在本发明的一个变形中，至少一个疏水基团[GH4]包含在含有至少一个 间隔基团1112的疏水接枝中，从而将疏水基团[GH4]与聚谷氨酸链(例如聚 谷氨酸根主链或骨架)结合。该间隔基团可以包括，例如，至少一个直接 共价键和/或至少一个酰胺键和/或至少一个酯键。例如，该间隔基团特别可 以属于以下几种类型聚谷氨酸根的组成单体单元中的不同氨基酸残基、 氨基醇衍生物、聚胺(如二胺)衍生物、聚醇(如二醇)衍生物以及羟基 酸书t生物。形成具有疏水基团[GH4]的疏水接枝的间隔基团R"可以为二价、三价 或四价的(甚至五价或更高)。对于二价间隔基团R12,疏水接枝含有单基 团[GH4],然而，三价间隔基团R"使疏水接枝具有分叉特征，即，该疏水 接枝具有两个疏水基团[GH4]。可以举出的三价间隔基团R12的例子有氨基 酸残基，例如谷氨酸，或者聚醇残基，例如丙三醇。含有疏水基团[GH4] 的疏水接枝的两个优选(但非限制性)的例子为二烷基丙三醇和二烷基谷 氨酸盐。
关于制备及合成如通式(V)所述聚氨基酸的具体内容，可以参见公开 号为FR2892725的专利申请。
在本发明的一个变形中，具有通式(I) 、 (II) 、 (III) 、 (IV)的 两性聚氨基酸的疏水基团[GHl]、 [GH2]以及[GH3]选自辛氧基、十二氧基、 十四氧基、十六氧基、十八氧基、油氧基(oleyloxy)、生育酚氧基 (tocopheryloxy)以及胆甾醇氧基(cholesteryloxy)。进一步，具有通式(V ) 的两性聚氨基酸的疏水基团[GH4]选自辛基、十二烷基、十四烷基、十六烷 基、十八烷基、油基(oleyl )、生育酚基(tocopheryl )和胆甾醇基(cholesteryl )。 优选的，本发明的该变形中，R4 (通式I) 、 R7 (通式n和iv) 、 R11 (通式 m和iv)为直接键，R12 (通式V)为-O-基团。
在本发明的另一个变形中，可选地与前述变形结合，两性聚氨基酸(I)、 (II) 、 (III) 、 (IV)或(V)中的疏水基团[GHl]、 [GH2]、 [GH3]以及 [GH4]各自独立的为具有下述通式(VI)的单价基团<formula>formula see original document page 21</formula>
其中
R"各自独立的为曱基、异丙基、异丁基、仲丁基或苄基； R18各自独立的为含有6-30个碳原子的疏水基团；以及 tl为0-6。
在本发明的一个变形中，全部或部分疏水基团R"各自独立的选自直链或支链的烷氧基团，含有6-30个碳原子，可选的含有至少一个不饱 和单元和/或至少一个杂原子，
含有6-30个碳原子的烷氧基团，含有一个或多个稠碳环(fUsed carboncycles )，可选地含有至少一个不饱和单元和/或至少一个杂原子，
含有7-30个碳原子的烷氧芳基或含有7-30个碳原子的芳氧烷基，可选地 含有至少一个不饱和单元和/或至少一个杂原子。
通常，杂原子可以为氧、氮或硫原子。实际上但不限于，在具有通式 (1)、 (11)、 (III) 、 (IV)或(V)的两性聚氨基酸中，具有通式(VI) 的疏水基团R"选自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八氧基、 油氧基(oleyloxy)、生育酚氧基(tocopheryloxy)以及胆甾醇氧基 (cholesteryloxy)。
在本发明的一个变形中，疏水基团[GHl]、 [GH2]、 [GH3]以及[GH4]的 摩尔接枝率为lmol。/。-25mo10/。。优选的，摩尔接枝率为5moP/o-20mo1。/。。疏 水基团的摩尔接枝率定义为带有至少一个疏水基团的主链中氨基酸残基数 目比上两性聚氨基酸主链中氨基酸残基的总数(聚合度)。
在本发明的一个变形中，所述两性聚氨基酸还带有至少一个与谷氨酸 根和/或天冬氨酸根残基结合的聚烯基乙二醇型接枝。优选的，该接枝具有 如下所示的通式(VII):<formula>formula see original document page 22</formula>
其中
R"各自独立的为直接键或含有l-4个氨基酸残基的间隔基团； X为杂原子，选自氧、氮和硫；
R"和R"各自独立的为氬原子或C 1 -C4的直链烷基；以及 t2为10-1000，优选为50-300。 实际上，聚烯基乙二醇为，例如，聚乙烯乙二醇。理想的聚烯基乙二 醇的摩尔接枝率为l-30mol%。实际上，根据本发明使用的两性聚合物，特别是具有通式(I) 、 (II)、 (III ) 、(IV )或(V )的两性聚氨基酸的药学上可接受的盐，是羧酸基团
在水性溶液中为离子形式的那些盐。通常与金属或有机阳离子实现成盐 例如下列金属阳离子钠、钾、钓或^:离子；
例如下列有机阳离子基于胺的阳离子、基于低聚胺的阳离子以及 基于聚胺(特别是聚乙亚胺)的阳离子。基于氨基酸的阳离子中一个优选 的变形为选自基于赖氨酸或精氨酸(例如多聚赖氨酸或低聚赖氨酸)的阳离子。
上述两性聚氨基酸很宝贵，因为它们具有可调的接枝率，在pH 7.4时 (如，在磷酸盐緩沖下)在水中分散形成胶体悬浮液。
进一步，活性成分，例如蛋白、肽或小分子，其实例如上所述，能够 自发与这些聚氨基酸结合。这样的结合是多种非共价物化相互作用的结果。 它们可以是，例如，氢键、离子键、疏水相互作用、范德华力或这些非共 价键的共同作用。严格的说，在一些情况下，活性成分和聚氨基酸间可能 没有结合，而只是在聚氨基酸的物理胶体中的空间排列将活性成分包围。
能够用于本发明制剂的两性聚氨基酸通过例如现有技术中熟知的方法 得到。无规聚氨基酸可以通过传统的偶联反应将预先被"间隔基团"官能 化的疏水基团[GH]直接接枝在聚合物上得到。嵌段或多嵌段聚氨基酸可以 通过序列聚合相应的氨基酸N-酸酐(NCA)得到。
例如，均聚谷氨酸根或均聚天冬氨酸根聚氨基酸或嵌段、多嵌段或无 规谷氨酸根/天冬氨酸根共聚物通过传统方法制备。
要得到cc型聚氨基酸，最常用的技术是基于氨基酸N-酸酐(NCA)聚 合，在Fuller, W.D., Verlander， M.S.和Goodman, M. 1976年发表在 《Biopolymers》上15期1869页的文章《A procedure for the facile synthesis of amino acid N-carboxy anhydrides》以及H.R. Kricheldorf撰写的《Alpha-amino acid N-carboxy anhydride and related heterocycles》Springer Verlag ( 1987 )中 有记载。NCA衍生物优选为NCA-O-Me、 NCA-O-Et或NCA-O-Bz衍生物(Me =曱基，Et-乙基，Bz-千基)。得到的聚合物接着在合适的条件下水解 得到其酸形式的聚合物。这些方法是基于本申请发明人的专利 FR-A-2801226中的记载。本发明可以使用的许多聚合物，例如，具有不同分子量的聚(oc-L-天冬氨酸)型、聚(cc-L-谷氨酸)型、聚(cc-D-谷氨 酸)型以及聚(y-L-谷氨酸)型的聚合物是商业上可获得的。ot-P型的聚 天冬氨酸通过缩聚天冬氨酸(以得到聚琥珀酰亚胺)，并碱性水解得到 (Tomida等人在Polymerl997年38期4733-36页发表)。
疏水接枝[GH]与聚合物的酸基团的偶联，简便的通过在碳二亚胺偶联 剂和可选的催化剂的存在下反应聚氨基酸实现，所述催化剂例如为在适合 溶剂中的4-二曱基氨基吡啶，所述适合的溶剂例如二曱基曱酰胺(DMF)、 N-曱基吡咯啉(NMP)或二曱基亚石风(DMSO)。所述碳二亚胺例如为， 二环己基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺。接枝率通过成分和反应物的化学 计量比或通过反应时间化学控制。通过"间隔基团"官能化的疏水接枝[GH] 通过传统的肽偶联或在酸催化下直接缩聚得到。这些技术是现有技术中熟 知的。
先通过疏水接枝合成NCA衍生物，再用NCA衍生物合成嵌段或多嵌段 共聚物。例如，疏水NCA衍生物与NCA-O-千基共聚，之后选择性地通过水 解除去千基。 连续脂相
为本发明的目的，脂相或油相含有疏水有机化合物(其在2(TC-40。C为 液体)或其混合物。优选的，脂相含有至少一种选自可代谢油的油。进一 步，所选的油或其混合物25。C时的动力学粘度小于或等于400mPa.s。可以 设想的是，由于脂相动力学粘度的降低，药物组合物的可注射性改善了。 因此，优选使用具有25。C时的动力学粘度小于或等于150mPa.s的脂相，更 优选的，按照优先级递增的顺序，分别为小于或等于80mPa,s、 40 mPa.s或 30 mPa.s。
可用的可代谢油中，值得一提的是选自动物、植物或合成的中链脂肪 酸的甘油三酯，动物或植物来源的脂肪酸，它们的酯和盐，以及其混合物。 例i口 ，三辛酉臾甘油商旨/發酸甘油酉旨(glycerol tricaprylate/capmte )(例^口 ， Miglyol 812， Sasol )作为中链脂肪酸甘油三酯油使用。另一个例子是， 脂相可以含有选自橄榄油、甜杏仁油(sweet-almond oil)、向日葵油、豆 油、落花生油、玉米油、椰子油、棉籽油、蓖麻油及其混合物的至少一种 油。表面活性剂
选择表面活性剂或其混合物以获得低于6的HLB。
亲水-亲油平衡系数(HLB)是分子亲水性或亲油性程度的经验衡量 值。记载有不同的测量HLB的方法，特别是Griffm在1949年发表在《Journal of the Society of Cosmetic Chemists》 1巻311页的Classification of Surface-Active Agents by "HLB"， 1954年发表在《Journal of the Society of Cosmetic Chemists》5巻259页的Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants, 以及Davies在1957年发表的《Proceedings of the International Congress of Surface Activity》中426-438页中Gas/Liquid and Liquid/Liquid Interface的A quantitative kinetic theory of emulsion type, I. Physical chemistry of the emulsifying agent。
例如，表面活性剂选自聚甘油酯、荒麻酸酯(ricinoleic acid esters )、 山梨聚糖油酸盐、卵磷脂、C6-C20的脂肪酸和/或不饱和脂肪酸的单或二甘 油酯、聚蓖麻酸酯，及其混合物。
优选的，表面活性剂含有聚甘油酯，特别是那些天然脂肪酸酯，例如 油酸、硬脂酸、蓖麻酸、亚油酸以及亚麻酸的酯。聚甘油蓖麻醇酸酯或者 聚甘油聚蓖麻醇酸酯(PGPR)为优选的表面活性剂。 药物组合物的制备
第一步，制备水相，其含有至少一种两性聚合物，其浓度为每g水相 5-100mg，以及至少一种活性成分。例如，在活性成分为干扰素ct-2b时， 可以制备每g水相lmg的浓度。水相在25。C下搅拌足够长的时间，例如，24 小时，以使两性聚合物和活性成分结合。然后通过将HLB低于6的表面活性 剂或其混合物溶解于可代谢油或其混合物中来制备脂相，所述可代谢油或 其混合物25。C下的粘度小于或等于400mPa,s。优选的，所述可代谢油或其 混合物25 。C下的粘度小于lOOmPa.s。
水相和脂相接触约l小时，同时适当搅拌，以保证水相与脂相的质量比 小于或等于50/50，优选为小于或等于30/70。通过转子-定子高速搅拌器或 高压高速搅拌器使水相分散在脂相中。
优选的，基于引起乳液在25。C下转向(inversion)所需的脂相量，所述 药物组合物含有至少过量10%质量的脂相。测量乳液转向点方法的一个例子在Puisieux F.， Seiller M.1983年发表在Paris: Technique et Documentation-Lavoisier第 一巻中的Galenica 5: Les Systdmes Dispers6s — Agents de Surface et Emulsions (Disperse Systems — Surface-active Agents and Emulsions)中有记载。在特定温度的分散水相、连续脂相和表面活性剂中， 当乳液转向时，也就是，乳液从油包水型变为水包油型时，分散水相和连 续脂相具有特定的质量比。该比例称为乳液的转向点。
基于低于该量油包水乳液将转向的脂相量，过量的脂相能够防止在储 存条件下的转向。这种过量也能够限制油包水乳液的粘度。
因此，基于25。C下引起乳液转向所需的脂相量，特别优选的，使用过 量15%质量百分比的脂相；更优选的，按照优先级升高的顺序，过量至少 20 %甚至30 %质量百分比的脂相。
在此条件下，药物组合物中，水性分散相与连续脂相的质量比小于或 等于50:50，优选为小于或等于40:60,特别优选的，小于或等于30.'70。实际 上，连续脂相的部分越高，该油包水乳液的粘度越依赖于连续脂相的粘度。
优选的，所述药物组合物25。C下的动力学粘度小于或等于200mPa.s。 更优选的，按照优先级升高的顺序，该药物组合物25。C下的动力学粘度为 小于或等于150mPa.8，或小于或等于lOOmPa.s。
所述水相含有至少一种两性聚合物以及至少一种活性成分。分散于连 续脂相之前，该水相25。C下的动力学粘度可以大于或等于20mPa,s。该水相 也可以以物理胶体形式分散在连续脂相中。
所述药物组合物能够以肠道外方式注射。可注射性测试记栽在实施例中。
活性成分
通常，活性成分选自蛋白、醣蛋白、与一个或多个聚(亚烷基)二醇链(如 PEG化蛋白，即与一个或多个聚乙二醇链结合的蛋白)结合的蛋白、肽、聚 糖、脂糖(liposaccharide)、类固醇、低聚核苷酸、多聚核苷酸以及它们的
混合物。
在本发明一个优选的变形中，至少一种活性成分是亲水的。 更确切的，活性成分AP选自促红细胞生成素、催产素、后叶加压素、 促肾上腺皮质荷尔蒙、表皮生长因子、血小板源生长因子(PDGF)、造血激励因子(hemopoiesis stimulating factor) 、 VIII因子及XI因子、血色素、 细胞色素、清蛋白、泌乳刺激素、促黄体激素或促性腺激素释放激素
(LHRH) 、 LHRH拮抗剂、人、猪或牛生长激素(GH)、生长激素释力文 因子、胰岛素、生长激素抑制素、胰高血糖素、白细胞介素(IL)(如IL-2、 IL-ll、 IL-12及其混合物)、oc-或P-或Y-干扰素(IFN)以及它们的混合 物、胃泌激素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素、分泌素、降血钙素、 脑啡肽、内吗啡肽(endomorphine)、血管紧缩素、促曱状腺素释放激素
(TRH)、胂瘤坏死因子(TNF)、神经生长因子(NGF)、粒细胞集落刺 激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞 集落刺激因子(M-CSF )、肝素酶、骨成形素蛋白(BMP )、人心钠素(hANP )、 类高血糖素样肽(GLP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、重组乙肝表面 抗原(rHBsAg)、肾素、细胞因子、血管舒緩激肽、杆菌肽、多粘菌素、 黏菌素、短杆菌酪肽、短杆菌肽(gramicidine)、环孢霉素，以及酶、细胞 因子和抗体的合成的类似体、药学活性的改性物和片段，以及它们的混合物。
在一个变形中，活性成分为小的疏水、亲水或两性有机分子，属于蒽 环类、紫杉醇类(taxoid)或喜树碱类，或者属于肽，例如亮丙瑞林或环孢 霉素(cyclosporin)，以及它们的混合物。基于本发明的目的，小分子特别 是指小的非蛋白分子，例如，不含氨基酸的小分子。
在一个变形中，活性成分选自至少一种下列类型的活性物质治疗滥 用酒精的药剂、治疗阿尔茨海默症的药剂、麻醉剂、治疗肢端肥大症的药 剂、止痛剂、平喘药、治疗过敏的药剂、抗癌剂、抗炎剂、抗凝血剂以及 抗血栓形成剂、抗痉挛剂、抗癫痫剂、抗糖尿药物、止吐剂、抗青光眼药 物、抗组胺剂、抗感染剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗帕金森药物、 抗胆碱药、止咳药、碳酸酐酶抑制剂、心血管药物、降血脂药、抗心律失 常药、血管扩张药、抗心绞痛药、抗高血压药、血管保护剂、胆碱酯酶抑 制剂、治疗中枢神经系统失调的药物、中枢神经系统刺激剂、避孕药、生 殖促进药、分娩促进药和抑制剂、治疗粘液粘稠病的药物、多巴胺受体激 动剂、治疗子宫内膜异位的药物、治疗勃起障碍的药物、治疗生育的药物、 治疗胃肠道疾病的药物、免疫调节剂和免疫抑制剂、治疗记忆疾病的药物、抗偏头痛药、肌松药、核苷类似物、治疗骨质疏松的药物、拟副交感神经 药、前列腺素、心理治疗药、镇静药、催眠和镇定药、安定药、抗焦虑药、 精神振奋药、抗抑郁药、治疗皮肤病的药物、甾体和激素、安非他明、减 肥药、非镇痛型止痛药、抗癫痫药、巴比妥类、苯并二氮杂卓类、催眠药、 放松药、精神药品以及这些产品的联合使用。
本发明进一步涉及一种治疗方法，其实质上在于经口、鼻、眼、皮肤、 阴道、直肠、肠胃外路径施用本发明如上所述的组合物。肠胃外路径中值 得一提的是皮下注射、肌肉注射、腹膜注射、皮内注射、静脉注射、动脉 注射、脊柱内注射、关节内注射以及胸膜内注射。


图l:实施例3的两性聚氨基酸溶液(黑色三角)以及油中两性聚氨基 酸悬浮液(黑色方块)的粘度。
图2:实施例3的25G针头(黑色方块)及27G针头(黑色三角)测试两 性聚氨基酸悬浮液的可注射性。
图3:实施例4的无两性聚氨基酸的悬浮液(黑色三角)及含有两性聚 氨基酸的悬浮液(黑色方块)体内释放亚曱蓝。
图4: 10s"时悬浮液相对于时间的粘度变化(实施例6)。
图5:水性液滴相对于时间的直径变化(d50% )(实施例6)。
具体实施方式
实施例l:制备悬浮液
如下制备一种两性聚氨基酸cx-L-聚谷氨酸根聚合物，相对于聚氧乙 烯标准的分子量约为10000，通过聚合NCAGluOMe并水解得到，如专利申 请FR2801226记载。5.5g所述oc-L-聚谷氨酸根聚合物溶于92ml二曱基曱酰胺 (DMF)，在40。C下加热2小时。 一旦聚合物溶解，温度可降至25。C，顺序 加入预先溶于6ml DMF的1.49g天然来源的D-cc-维生素E (98.5%, ADM France提供)、预先溶于6ml DMF的0.09g 4-二曱基氨基吡啶、预先溶于6ml DMF的0.57g二异丙基碳二亚胺。在25。C下搅拌8小时后，反应中间体倒入 800ml含有15。/。氯化钠及盐酸(pH为2)的水中。过滤回收沉淀的聚合物，并以0.1N盐酸和水冲洗。所述聚合物之后再溶于75mlDMF中，如前所述， 在含有盐和酸的pH为2的水中再次沉淀。经水洗两次，聚合物以异丙醚沖洗 数次。在40。C的真空炉中干燥得到大约85 %的收率。
通过质子NMR推测的接枝率约为5.2。/。， HPLC分析显示，残留维生素E 含量低于0.3% 。 NMP作为洗提液通过GPC测量得到的平均分子量Mw为 17500g/mol (以聚曱基丙烯酸曱酯当量表示)。
分别制备15ml如上所述合成的两性聚氨基酸水性溶液，浓度为22mg/g， 以及35ml三辛酸/癸酸甘油酯溶液(Mygilyo1812, Sasol),含有5%质量的 聚荒麻醇酸聚甘油酯(Grindsted PGPR 90, Danisco )。然后，使这两相 接触并通过Ultra-TurraxT8转子-定子高速搅拌器(Ika-Werke)和S8N-5G 探头以20000minM的速率乳化l分钟，或者通过高压高速搅拌器(Emulsiflex C3, Avestin)在1000bar下3次循环，得到在连续相三辛S^/癸酸甘油酯中的两 性聚氨基酸水滴悬浮液，水相和脂相的质量比为30/70。
实施例2:聚氨基酸存在下活性成分的稳定性提高
根据实施例l所述方法得到悬浮液。 一种蛋白，即干扰素oc-2b (IFNa 2b)以lmg/g浓度加入所述水相。
悬浮液中的IFN a 2b通过夹心ELISA (IM3193 kit ， Beckman Coulter) 量化。含有IFNa2b和两性聚氨基酸的悬浮液在37'C下保存一周。与在5'C 下保存一周的同样乳液相比，萃取后，ELISA得到回收率为85。/。的IFNa2b。 在相同储存条件，但不含有两性聚氨基酸的情况下，回收率仅为6%。
实施例3:粘度/可注射性变化
如实施例l所述步骤，将浓度为50mg/ml的两性聚氨基酸水相(在该浓 度下为物理胶体)分散于脂相，得到水凝胶的悬浮液。粘度值通过比较该 悬浮液和最初的胶体测量。该测量使用安装有圆锥-平板几何(2cm或4cm， 1°角)的控压流变仪(Gemini, Bholin )，通过表征25。C下作为切力梯度 (10-lOOOs-1)函数的粘度变化进行。比较显示，在较低切力梯度下(10 s—1)， 悬浮液表征为粘度约为O.lPa.s,这比最初的胶体的粘度低约250倍(见图1 )。该悬浮液的可注射性质通过可注射性测试IT评估。该测试在于测量为 在注射器口得到特定流速而需在注射器塞处施加的力。可注射制剂理解为
在该可注射性测试IT评估后，得到流速为3.5ml/min所需的力低于25N的制剂。
如实施例3所述的悬浮液引入lml注射器(Inject-F， Braun)中，其设有 25G或27G的针头。该注射器置于牵引装置(DY34, Adamel Lhomargy)中。 进行可注射性测试。
如图2结果所示，根据该测试，分散在连续脂相中的两性聚氨基酸悬浮 液可用25G和27G针头注射，而最初的水凝胶则不可。
实施例4:延长释放特性
目的是确定由本发明得到的悬浮液在体内释放入生理介质的活性成分 的比例，该比例是时间的函数。并且将其与无两性聚氨基酸的情况相比较。
根据实施例l所述方法制备第一悬浮液，将O.Ol %质量浓度的水溶性的 亚曱基蓝(Sigma)加入到水相中。
该染料模拟活性成分在体内的测试。制备无两性聚氨基酸的第二悬浮 液，再次加入O.Or/。质量浓度的亚曱基蓝。将50Ml两种悬浮液分别注射入 4ml O.IM磷酸盐緩冲溶液(PBS:磷酸盐緩沖生理溶液，Sigma),所述磷 酸盐緩冲溶液模拟生理介质。每种制品在37。C下搅拌。在不同时间提取60 H l连续相并以60 n 1 O.IMPBS替代。在这些不同部分中的亚曱基蓝浓度通过 可见-紫夕卜光语(Lambda 35 UV/Vis Sepctrometer, Perkin-Elmer Instrument) 在550nm下测定。因此可以确定释放到连续相中的染料的比例相对于时间的 函数。在这样的条件下，观察到的现象显示，染料的释放被延长了在不 含有两性聚氨基酸的悬浮液中，70%的亚曱基蓝在14天中被释放，而水滴 中两性聚氨基酸的存在能够降低释放速率，因为相同情况下14天后释放的 染料比例仅为约200/0 。
结果显示于图3中。
实施例5根据实施例l的方法制备悬浮液，在将其分散于脂相之前，在水相中加
入一种浓度为5mg/g的治疗用蛋白，即人生长激素(hGH: human growth Hormone, Prospec )。将50 n l产品注射入4ml O.IM磷酸盐緩冲溶液(PBS: 磷酸盐緩冲生理溶液，Sigma)。在不同时间提取60 jul连续相并用60iul O.IMPBS替代。全部制品在37。C下搅拌。
外部水相中的hGH的浓度通过液相色谱(HPLC,C18柱)测定。 得到的结果显示，37。C下5天后，释放到外部水相的蛋白比例低于2%。
实施例6:物理稳定性
根据实施例1所述步骤，将浓度为20mg/ml的两性聚氨基酸的水相分散 在得到的脂相中。得到的悬浮液保存在5 。C下，并测试水滴的粘度和粒径相 对于时间的函数。
使用安装有圓锥-平板几何(cone-and-plate geometry ) ( 2cm或4cm， 1°角)的控压流变仪(Gemini， Bholin)，通过确定25。C下10s"切力梯度对 应的粘度值来测量粘度。
以庚烷(SDS)为分散介质，粒径用颗粒测量仪(Mastersizer 200, Malvern)通过激光漫射测量。
结果(图4和图5)显示了这些悬浮液的稳定性，因为在5 'C下3个月后， 水滴的粘度或粒径没有明显变化。
权利要求
1、用于延长释放至少一种活性成分的药物组合物，其含有至少一种在水相中的活性成分，所述水相含有至少一种两性聚合物，且所述水相为在连续脂相中的分散体形式，所述组合物为油包水的乳液形式，含有药学可接受的连续脂相，水性分散相，其含有至少一种两性聚合物和至少一种与所述两性聚合物非共价结合的活性成分，以及至少一种药学上可接受的表面活性剂。
2、 如权利要求l所述的药物组合物，其中，所述两性聚合物为带有至 少 一个疏水基团的两性聚合物。
3、 如权利要求1或2所述的药物组合物，其中，所述两性聚合物为两性 聚氨基酸。
4、 如权利要求3所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸带有至 少一个疏水基团。
5、 如权利要求1或2所述的药物组合物，其中，所述两性聚合物为带有 至少 一个疏水基团的聚糖。
6、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其特征在于，其可以下列方 式给药经口、鼻、眼、皮肤、阴道、直肠和肠胃外路径。
7、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，至少一种活性成分选 自蛋白、醣蛋白、与一个或多个聚(亚烷基)二醇链结合的蛋白、肽、聚糖、脂糖、类固醇、低聚核苷酸、多聚核苷酸及其混合物。
8、 如权利要求7所述的药物组合物，其中，至少一种活性成分为亲水的。
9、 如权利要求7所述的药物组合物，其中，至少一种活性成分选自促 红细胞生成素、催产素、后叶加压素、促肾上腺皮质荷尔蒙、表皮生长因子、血小板源生长因子(PDGF)、造血激励因子、vm因子及xi因子、血色素、细胞色素、清蛋白、泌乳刺激素、促黄体激素或促性腺激素释放激 素(LHRH) 、 LHRH拮抗剂、LHRH激动剂、人生长激素(GH)、猪生 长激素或牛生长激素、生长激素释放因子、胰岛素、生长激素抑制素、胰高血糖素、白细胞介素(IL-2、 IL-ll、 IL-12) 、 a-或P-或y-干扰素、胃泌激 素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素、分泌素、降血钙素、脑啡肽、 内吗啡肽、血管紧缩素、曱状腺素释放激素(TRH)、肿瘤坏死因子(TNF)、 神经生长因子(NGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细 胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肝素酶、 骨成形素蛋白(BMP)、人心钠素(hANP)、类高血糖素样肽(GLP-1)、 血管内皮生长因子(VEGF)、肾素、细胞因子、血管舒緩激肽、杆菌肽、 多粘菌素、都菌素、短杆菌酪肽、短杆菌肽、环孢霉素，以及酶、细胞因 子和抗体的合成的类似体、药学活性改性物和片段，以及它们的混合物。
10、 如权利要求3或4所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸为 聚合物、顺序或无规共聚物、或上述聚合物和/或共聚物的混合物。
11、 如权利要求10所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸的主 链含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的单体，至少部分所述单体带有至少一 个垂挂的疏水基团。
12、 如权利要求10或11所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸 的主链含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的单体，至少部分所述单体带有衍 生于组氨酸残基的垂挂基团。
13、 如权利要求12所述的药物组合物，其中，至少一个所述衍生于组 氨酸残基的垂挂基团通过酰胺键与谷氨酸残基结合。
14、 如权利要求12或13所述的药物组合物，其中，所述衍生于组氨酸 残基的垂挂基团各自相同或不同，选自组氨酸、组氨酸酯、组胺醇、组胺、 组酰胺、N-曱基组酰胺以及N,N，-二曱基组酰胺。
15、 如权利要求10或11所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸 (PAA)具有如下式(I)所示的通式，以及它的药学上可接受的盐<formula>formula see original document page 4</formula>(I)其中W为氢原子、C2-C10的直链酰基、C3-C10的支链酰基、焦谷氨酸根或-R4-[GHl]基团；R2为-NHRS基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选地通过-NHRS胺基或-OI^醇基改性；尺4各自独立地为直接键或含有l-4个氨基酸残基的间隔基团； Rs为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基或千基； Rs为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基、千基或-R4-[GH1]基团；八和8各自独立地为-012-(天冬氨酸残基)基团或-0^2-012-(谷氨 酸残基)基团；[GH1]为疏水基团；疏水基团[GHl]的摩尔接枝率n/(n+m)相对于两性聚氨基酸足够低， 从而在25 。C 、 pH为7的水溶液中形成聚氨基酸亚微米颗粒的胶体悬浮液， n/(n+m)为1至25mol。/。之间；以及 聚合度(n+m)为10-1000。
16、如权利要求10或11所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸 (PAA)具有如下通式(II) 、 (m) 、 (IV)之一，以及它们药学上可接受的盐<formula>formula see original document page 5</formula>其中Ra为C2-C6的直链烯基；Rb为C2-C6的烯基、C2-C6的二烷氧基或C2-C6的二胺基；R"各自独立的为直接键、含有l-4个氨基酸残基的间隔基团或者-C(0)-CH2-CH2隱基团；RS为-NHI^基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选地分别通过-Nffi^胺基或-OR^醇基改性；W为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基或苄基； R"为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10的支链烷基、千基或-R'-[GH3]-基团；R"各自独立的为直接键或含有l-4个氨基酸残基的间隔基团； 八和8各自独立的为-012-(天冬氨酸残基)基团或-(^2-(:112-(谷氨酸残基)基团；[GH2]和[GH3]各自独立的为疏水基团；以及 聚合度(ml+m2)和m3为10-1000。
17、如权利要求10-14任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸(PAA)具有如下通式(V)，以及它的药学上可接受的盐<formula>formula see original document page 6</formula>(V)其中W为-NHR"基团或通过氮结合的末端氨基酸残基，其酸性基团可选 地分别通过-NHRS胺基或-OR"醇基改性；Rd为氢原子、C2-C10的直链酰基、C3-C10的支链酰基或焦谷氨酸根基团；R"各自独立的为二价、三价或四价的连接基团，优选自-O-、 -NH-、 Cl-C5的-N-烷基、氨基酸残基、C2-C6的二醇、C3-C6的三醇、C2-C6的二 胺、C3-C6的三胺、C2-C6的氨基醇或C2-C6的羟基酸；R13各自独立的为-OH基团或通过胺基片段结合的乙醇胺基团；R"为烷基酯基团、-(3!12011基团(组氨醇)、氢原子(组胺)、-C(0)NH2 基团(组酰胺)、-C(0)NHCH3基团或-C(0)N(CH3)2基团；R"和R"各自独立的为氢原子、Cl-C10的直链烷基、C3-C10支链烷 基或苄基；[GH4]各自独立的为疏水基团，选自。 直链或支链的C8-C30的烷基，可选地含有至少一个不饱和单位和/ 或至少一个杂原子，。C8-C30的烷基芳基或芳基烷基基团，可选地含有至少一个不饱和单 位和/或至少一个杂原子，以及。C8-C30的(聚)环基，可选地含有至少一个不饱和单位和/或至少 一个杂原子；p、 q和r为正整数；在每个共聚物链平均含有至少3个疏水接枝的条件下，疏水基团[GH] 的摩尔接枝率(p)/(p+q+r)为l-50mol%;衍生于组氨酸残基的基团的摩尔接枝率(q)/(p+q+r)为1 -99mol%; (r)/(p+q+r)为0-98mol。/。；以及 (p+q+r)为10-1000。
18、 如权利要求15、 16或17所述的药物组合物，其中，所述疏水基团 [GHl]、 [GH2]、 [GH3]选自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八 氧基、油氧基、生育酚氧基以及胆甾醇氧基，所述疏水基团[GH4]选自辛基、 十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、油基、生育酚基和胆甾醇基， 所述R4、 R7、 RU为直接键，所述1112为-0-基团。
19、 如权利要求15、 16或17所述的药物组合物，其中，所述疏水基 团[GHl]、 [GH2]、 [GH3]和[GIW]各自独立的为具有下述通式(VI)的单价 基团其中R卩各自独立的为曱基、异丙基、异丁基、仲丁基或苄基； R"各自独立的为含有6-30个碳原子的疏水基团；以及 tl为0-6。
20、如权利要求19所述的药物组合物，其中，所述疏水基团R"各自独立的选自直链或支链的烷氧基团，含有6-30个碳原子，可选的含有至少一个不 饱和单元和/或至少一个杂原子，含有6-30个碳原子的烷氧基团，含有一个或多个稠碳环，可选地含有 至少一个不饱和单元和/或至少一个杂原子，含有7-30个碳原子的烷氧芳基或含有7-30个碳原子的芳氧烷基，可选 地含有至少 一个不饱和单元和/或至少 一个杂原子。
21、 如权利要求19或20所述的药物组合物，其中，所述疏水基团R"选 自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八氧基、油氧基、生育酚 氧基以及胆甾醇氧基。
22、 如权利要求10-21任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基 酸主链含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的单体，所述聚氨基酸带有至少一 个聚亚烷基二醇类接枝。
23、 如权利要求22任一所述的药物组合物，其中，所述聚亚烷基二醇 类接枝具有如下通式(VII):<formula>formula see original document page 8</formula>其中R"各自独立的为直接键或含有l-4个氨基酸残基的间隔基团； X为杂原子，选自氧、氮和硫；R加和R"各自独立的为氢原子或C1-C4的直链烷基；以及 t2为10-1000。
24、 如权利要求22或23所述的药物组合物，其中，所述聚亚烷基二醇 为聚乙二醇。
25、 如权利要求22、 23或24所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨 基酸的聚亚烷基二醇的摩尔接枝率为l-30mol%。
26、 如权利要求10-17任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基 酸(PAA)的主链为a-L-谷氨酸根或a-L-谷氨酸均聚物。
27、 如权利要求10-16任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基酸(PAA)的主链为a-L-天冬氨酸根或a-L-天冬氨酸均聚物。
28、 如权利要求10-16任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基 酸(PAA )的主链为a-L-天冬氨酸根/a-L-谷氨酸根或a-L-天冬氨酸/a-L-谷氨酸共聚物。
29、 如权利要求15或17所述的药物组合物，其中，所述疏水基团的摩 尔接枝率为lmol%-25mol%。
30、 如权利要求10-29任一所述的药物组合物，其中，所述两性聚氨基 酸(PAA)的分子量为2000-100000g/mol之间。
31、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，所述表面活性剂或 表面活性剂混合物的HLB低于6。
32、 如权利要求31所述的药物组合物，其中，所述表面活性剂选自下 组聚甘油酯、蓖麻酸酯、山梨聚糖油酸盐、卵磷脂、C6-C20的脂肪酸和/ 或不饱和脂肪酸的单或二甘油酯、聚蓖麻酸酯、聚甘油聚蓖麻醇酸酯及其 混合物。
33、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，所述脂相含有至少 一种选自可代谢油的油，所述油或其混合物25。C时的动力学粘度小于或等 于400mPa.s。
34、 如权利要求33所述的药物组合物，其中，所述脂相含有选自动物、 植物或合成来源的中链脂肪酸的甘油三酯，动物或植物来源的脂肪酸，它 们的酯和盐，以及其混合物中的至少一种油。
35、 如权利要求33或34所述的药物组合物，其中，所述脂相含有选自 橄榄油、甜杏仁油、向日葵油、豆油、落花生油、玉米油、椰子油、棉籽 油、蓖麻油及其混合物中的至少 一种油。
36、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，基于引起所述乳液 在25。C时转向所需的脂相量，通过电导滴定法测量，所述药物组合物含有 过量至少10%质量的脂相。
37、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，水性分散相相对于 连续脂相的质量比小于或等于50:50。
38、 如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，所述药物组合物在 25。C时的动力学粘度小于或等于200mPa,s，水相为物理胶体形式，或者在25。C时的动力学粘度大于或等于20mPa,s。
39、如前任一权利要求所述的药物组合物，其中，所述药物组合物中 每lg水相含有5-100mg两性聚氨基酸。
全文摘要
本发明涉及用于延长至少一种活性成分释放的可注射的药物组合物，其含有至少一种在两性聚合物的水相中的活性成分，所述水相为在连续脂相中的分散体形式。所述组合物为油包水的乳液形式，含有药学上可接受的连续脂相，水性分散相，含有至少一种两性聚合物和至少一种与所述两性聚合物非共价结合的活性成分，以及至少一种药学上可接受的表面活性剂。
文档编号A61K9/10GK101563066SQ200780046648
公开日2009年10月21日 申请日期2007年12月20日 优先权日2006年12月20日
发明者戈捷·普利康 申请人:弗拉梅技术公司