一种参舌组合物及其制备方法

专利名称：：一种参舌组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种参舌组合物及其制备方法，尤其是一种临床上用于抑制肿瘤、增强免疫力，预防和治疗各种癌症参舌组合物及其制备方法。技术背景癌症也叫恶性肿瘤，是继心脑血管疾病之后发病率和致死率很高的疾病，严重威胁着人类的健康。从卫生部疾病司获悉，20世纪70年代我国的恶性肿瘤仅占死亡原因的第三位，而90年代以来则上升为第二位。我国恶性肿瘤发病率与30年以前比，增长了29.4%，消除年龄构成不同的影响，增长率仍为11.6%。专家预计，在今后的20-30年内，我国的肿瘤发病率、死亡率都将继续上升。目前，传统的对恶性肿瘤的治疗方法主要采用化疗、放疗、手术三种方法。化疗和放疗药物在杀伤癌细胞的同时也破坏大量的正常细胞，对造血等增殖较快的组织细胞的毒性很大，诸如免疫抑制，骨髓抑制、心脏毒性等；手术治疗只能除去可见的病症，术后易发生肿瘤的转移，很难改善患者生存质量。近年来，中医药学在中药对抗肿瘤方面进行了大量的研究，而且随着研究的深入，己经开始在分子水平上对中药抗肿瘤的机理进行了初步探讨。红参(RADIXGINSENGRUBRA),为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的栽培品(习称"圆参")经蒸制后的干燥根，经过清洗、分选、蒸制、晾晒、烘干等工序加工而成。人参除了含有多种皂甙外，还含有人参炔醇(panaxynol)、|3-榄湘烯(demene)等挥发性成分，以及单糖、双糖、三聚糖、多种氨基酸。人参的地上部分含有黄酮类化合物，称人参黄甙(panasenoside)、三叶甙(trifolin)、人参皂甙、糖类等。红参在蒸制过程中，因热处理会发生化学反应，成分上会发生变化。红参中除含有上述成分外，还含有其特有的成分20(S)-人参皂甙-3-1^3、20-(R)-人参皂甙Rg2、2020-(R)-人参皂甙Rhl、人参皂甙Rh2，挥发性成分人参三炔(panaxytriol)，以及红参酸性多糖(RGAP)。而且，研究表明红参比人参含有更多的人参皂甙Rhl，Rg3，Rg2。此外，有人还从红参中分离出既能防腐又能解热镇痛作用的水杨酰胺(salicymide)。中医认为红参具有大补元气，固脱生津，益智安神等功效。研究表明人参皂甙单体Rh2(GSRh2)是一种人参三醇型皂甙，是红参的主要抗癌成分。通过癌细胞体外培养与癌症动物模型最新研究表明，红参特有的人参皂甙Rh2能明显的抑制癌细胞生长、诱发癌细胞凋亡、增强机体免疫功能。红参中含有的多糖具有抑制毒激素，促进脂肪分解的作用，增强机体免疫功能，可明显降低原发性肿瘤的发病率。白花蛇舌草(HedyotisdiffUsaWilld)，是茜草科耳草属植物，别名蛇舌草、舌针草、龙舌草、鹤色草等。其性甘寒、微苦，以全草供药用，具有清热解毒、活血化淤、利水渗湿、消肿止痛的功效。临床上广泛应用于各种癌症的治疗。白花蛇舌草成分比较复杂，包括甾体、蒽醌、黄酮、三萜、环烯醚萜。其中萜类成分具有一定的抗菌消炎作用；三萜成分熊果酸具有明显的抗肿瘤、抗氧化作用。白花蛇舌草中所含有的多糖具有高度的免疫活性，有明显的免疫增强作用。申请号为200510042044.1、2005100031655.6、200510094404.2的三个专利均涉及到白花蛇舌草的提取方法，并将之制成注射液。白花蛇舌草注射液被收藏为中药成方制剂17册WS3-Z-006-93(Z)中。以上专利和该标准均是采用乙醇提取其醇溶性部分后将药弃去，没有保留具有免疫作用、抑制肿瘤生长的水溶性多糖成分，降低了药物临床疗效，减少了原料的利用率。而且质量控制中总黄酮的测定采用分光光度法，以芦丁计，专属性不强，有效成分(部位)不明确，加重了用药的不安全隐患。人参皂甙的提取方法对本领域技术人员是相当熟悉了；例如CN1110563、CN1277205等公开了人参提取物的制备；白花蛇舌草中黄酮的提取方法可以参考申请号200510042044.1、200510031655.6、200510094404.2等专利，也可以参考部颁标准，中药成方制剂17册WS3-Z-006-93(Z)的标准。这些文献的内容都纳入本文参考。但是这些文献中的提取方法都仅提取了醇溶性的成分，而将具有增强机体免疫力、起预防和治疗肿瘤作用的水溶性多糖成分弃去，降低了该组方的临床疗效，浪费了有效的资源。申请号为200510104352.2的专利，公开了以人参、白花蛇舌草、黄芪三味药材组成的药物组合物。该专利将三味药材分别提取人参多糖或皂甙，白花蛇舌草总黄酮，黄芪多糖或皂甙。该专利药味多，操作工艺繁琐，所提取物或是皂甙或是多糖，而不是皂甙和多糖二种成分有机结合在一起，起协同作用。另一方面也没有提取白花蛇舌草的多糖成分。所公开的药物组合物均没有充分利用药材资源。
发明内容本发明为解决
背景技术：
中存在的上述技术问题，而提供一种最大限度提高药材利用率，节约资源，获得临床疗效好、质量稳定的红参^卩白花蛇舌草中的药效成分，同时制成便于临床使用的制剂，更有效的治疗癌症，减轻患者的痛苦的参舌组合物及其制备方法。本发明的技术解决方案是本发明为一种参舌组合物，其特殊之处在于所述参舌组合物组分包括80-150份的红参和60-120份的白花蛇舌草或由80-150份红参和60-120份白花蛇舌草的原料药制备而成的醇提取物和水提取物。上述红参和白花蛇舌草的醇提取物包括醇提取物即醇包括皂甙、黄酮、对羟基香豆酸和三萜类，所述红参和白花蛇舌草的水提取物包括水溶性多一种参舌组合物的制备方法，其特殊之处在于该方法包括以下步骤1〉按配比取红参和白花舌蛇草，将红参粉碎成粗粉，白花舌蛇草剪段，分别加乙醇溶液回流提取3次，每次持续lh，滤过，滤渣晾干，备用；2〉将步骤l〉中所得两份滤液合并，再用氢氧化钠调节pH值为8-9，静置8-12小时，过滤，所得滤液用稀盐酸调节pH为6-7，放置，过滤，接着从滤液中回收乙醇至无醇味，即得醇提取物；3)将步骤l〉中的药渣加水煎煮两次，第一次lh，第二次0.5h，过滤，合并滤液，滤液浓縮至相对密度为1.05-1.10(在4(TC下测量)，加乙醇醇沉，醇度达80%,静置过夜，滤过，滤液回收乙醇，取沉淀加水溶解，滤过浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85%，静置6-8h，过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗涤两次，真空减压干燥，即得水提取物。上述步骤1〉中乙醇溶液的浓度为60-卯％，优选为75%;加入的乙醇体积为药材重量的6-8倍。上述步骤3)中水煎煮时加入水的体积为药材重量的6-10倍，优选为6-8倍。一种含参舌组合物的药物制剂，其特殊之处征在于该药物制剂包括参舌组合物和药学上可接受的辅剂。上述药物制剂为口服制剂时，参舌提取的醇提物占15-40%，多糖成分占5-20%;为注射液时，参舌提取的醇提物占10-25%，多糖成分占5-15%上述药学上可接受辅剂是能与活性成分相容的药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂中的一种或几种。上述赋形剂是水、生理盐水、葡萄糖、甘油、乙醇或其类似物及其组合。当药物制剂为冻干粉针剂时，所述药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮和氯化钠中的一种或几种。当药物制剂为口服制剂时，所述药学上可接受的载体选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、交联PVP和羧甲基淀粉钠中的一种或几种。一般的化疗药剂不容易进入癌细胞，所以一般的治疗效果并不是太好。癌细胞中的P-糖蛋白(P-glycoprotein)可以将化疗药物排出，所以会造成癌细胞对化学药物产生耐受性差。由于红参中Rh2亲水亲油的特性，能抑制癌细胞中的P-糖蛋白，可以轻易的进入细胞核内而杀死癌细胞。白花蛇舌草含有的黄酮、三萜类成分能增强单核细胞的细胞因子产生，并增强单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能。红参和白花蛇舌草中含有的多糖则能刺激体液免疫和细胞免疫功能，增强NK细胞活性，增加淋巴转化率，对S180、ESA，U14等动物移植肿瘤均有明显的抑制作用，本发明将传统的中药的特点和优势与现代医学技术相结合，经过反复实验，发现将红参与白花蛇舌草配伍后，具有明显的协同效应，能够显著协同的提高抗肿瘤活性，显著的增强机体的免疫能力，并由此获得了一种提取高质量、高收率的红参、白花蛇舌草中的皂甙、人参皂甙Rh2、黄酮、对羟基香豆酸、萜类的醇提物和水溶性多糖成分的提取方法，并且将红参、白花蛇舌草中的醇溶性Rh2、黄酮类、三萜类成分与水溶性多糖成分有机结合起来，起到了协同作用，增效减毒，共同起到治疗和预防肿瘤的作用，大大提高了产品临床疗效，提高了药材利用率。另外本发明的药物组合物可以作为诱导分化剂单独使用，也可以与西药分化剂联合应用，能够克服化疗不良反应，可以更好的治疗癌症。图1红参药材的指纹图谱图；图2白花蛇舌草的指纹图谱图；图3参舌注射剂、中间体、红参、白花蛇舌草的指纹图谱相关图。具体实施方式本发明的参舌组合物组分可以由重量份数的80-150份的红参和60-120份的白花蛇舌草直接混合而成，或者也可由80-150份红参和60-120份白花蛇舌草的原料药制备而成的醇提取物和水提取物构成。其中红参和白花蛇舌草的醇提取物包括皂甙、黄酮、对羟基香豆酸和三萜类，红参和白花蛇舌草的水提取物包括水溶性多糖。本发明用红参而不是人参，红参抗癌和提高免疫作用比人参效果好。大量药理和临床试验验证了红参中特有的人参皂甙Rh2，为抗癌的特效成分，而人参不含该抗癌成分。另一方面提取物包括了醇提取物皂甙、黄酮类及水溶性多糖两大部分，二者起到了协同抗癌和提高免疫作用。本发明根据红参、白花蛇舌草药材的性质以及各自成分的化学性质，提取醇提取物和水提取物的具体步骤如下1)将红参80-150份粉碎成最粗粉，白花舌蛇草60-120份，剪段，加乙醇回流提取3次，每次lh，过滤，滤渣晾干，备用；2)将步骤l)中的滤液合并，用氢氧化钠调节pH值为8-9，静置8-128小时，过滤，滤液用稀盐酸调节pH为6-7，放置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用。即得醇提取物皂甙、黄酮、对羟基香豆酸、三萜类等成分；3)取步骤l)中的药渣加水煎煮两次，第一次lh，第二次0.5h,过滤，合并滤液。滤液浓縮至相对密度为1.05-U0(4(TC测)，加乙醇醇沉，醇度达80%，静置过夜，滤过。滤液回收乙醇。取沉淀加水溶解，滤过浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85%，静置6-8h，过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗涤两次，真空减压干燥，即得水提物多糖成分。步骤l)中的乙醇溶液的浓度为60-90%，优选为75%。加入乙醇溶液的体积为药材重量的6-8倍。步骤2)中的加水煎煮时加入水的体积为药材重量的6-10倍，优选为6-8倍。参舌组合物中红参、白花蛇舌草，可以用相应的红参提取物和白花蛇舌草提取物来代替，具体的加入量可根据具体情况而定，例如红参提取物中含有人参皂甙、多糖以及白花舌蛇草含有的总黄酮、多糖的含量。本发明还提供了一种含有参舌组合物的药物制剂，其包括参舌组合物和药学上可接受的辅剂。当药物制剂为口服制剂时，参舌组合物的醇提取物占15-40%,水提取物多糖成分占5-20%;当药物制剂为注射液时，参舌组合物的醇提取物占10-25%，水提取物多糖成分占5-15%。药学上可接受的辅剂包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与活性成分相容。运用药学上可接受的辅剂制备药物组合物对本领域普通技术人员来说是公知的。本发明的药物组合物包含一种或多种本发明红参、白花蛇舌草醇提取物和水溶性多糖成分组合物作为活性成分，和药学上可接受的辅剂(如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等)组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂。本发明的制剂可以为单位剂量形式，如片剂、丸剂、胶囊(包括持续释放或延迟释释放形式)、粉剂、混悬剂、颗粒剂、酊剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液、针剂、等剂型以及各种缓释剂型，从而适合各种给药方式，例如口服、非肠道注射、粘膜、肌肉、静脉内、皮下、眼内、皮内或经过皮肤等的给药形式。优选本发明的药物制剂为注射剂、冻干粉针剂或口服制剂。载体、赋形剂、稀释剂是药学上可接受的并与活性成分相容。可以选用的合适的赋形剂优选但不仅限于水、生理盐水、葡萄糖，甘油、乙醇或其类似物及其组合。当本发明的药物制剂为冻干粉针剂时，优选其中药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮和氯化钠中的一种或几种。而当本发明的药物制剂为口服制剂时，优选其中药学上可接受的载体选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、交联PVP和羧甲基淀粉钠中的一种或几种。本发明还提供了含有参舌组合物的药物制剂的制备方法，其包括将参舌组合物和药学上可接受的载体混合的过程。药物的制备方式可以采用本专业的一般技术人员所公知的方法从而制备成合适的制剂。例如，可包括将红参、白花蛇舌草醇提取物减压干燥或喷雾干燥，然后和水溶性多糖混合并制成固体制剂的过程。也可以将红参、白花蛇舌草醇提取物不进行干燥直接溶于水，然后和水溶性多糖混合稀释成注射剂的过程。在一个具体实施方案中，本发明提供了口服制剂的具体方法，即将红参、白花蛇舌草组合物和药学上可接受的载体，混合制软材，制粒，干燥，整粒，压片，包衣，可得到相应的片剂药品。在另一个具体实施方案中，本发明还提供了注射剂的具体制法，取红参、白花蛇舌草醇提取物、水溶性多糖和药学上可接受的载体，用注射用水溶解，用40%氢氧化钠调节pH值6.5-8.0，然后向溶解产物加入针用活性炭，搅拌15分钟，冷藏过夜，用孔径为0.45pm的过滤膜过滤，然后将滤液通过0.22pm微孔滤膜除菌过滤，接着无菌分装，冷冻干燥，如果要进行冷冻干燥，还可以包括冷冻干燥的步骤，最后轧盖、包装，即得相应药品。本发明还提供了参舌组合物在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的应用以及补充手术、放疗和化疗的不足。优给药的剂量和形式一般由医师根据患者的具体情况(如年龄、体重、性别、患病时间、身体状况等)确定。一般而言，以红参、白花蛇舌草计，给药的剂量为红参0.10.8mg/kg患者体重，白花舌蛇草0.1~0.8mg/kg优选为红参0.2~0.5mg/kg，白花舌蛇草为0.2~0.5mg/kg(相当于原生药)。给药形式根据各种药物制剂的剂型及其生物利用度来确定，适合的给药形式有口服、非肠道注射、粘膜、肌肉、静脉内、皮下、眼内、皮内或经过皮肤等给药形式，优选口服给药。为了便于理解，以下将通过具体实施例对本发明进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来讲都是显而易见的了。实施例一参舌片剂的制备1.1红参、白花蛇舌草提取物的制备1)取红参1800g粉碎成最粗粉，白花蛇舌草1200g，剪段，加8倍的75%乙醇，每次回流lh，过滤，滤渣晾干，备用；2)滤液合并，用氢氧化钠调节pH值为8.38，静置8-12小时，过滤，滤液用稀盐酸调节pH为6.45，放置过滤，滤液回收乙醇至无醇味，清膏减压干燥或喷雾干燥，即得醇提取物皂甙、黄酮、对羟基香豆酸、三萜类等成分200g。3)取晾干后的药渣加水煎煮两次，第一次加8倍的水，煎煮lh，第二次加6倍的水，煎煮0.5h，过滤，将两份滤液合并。滤液浓縮至相对密度为1.05-1.10(40。C时测)，加乙醇醇沉，醇度达80%，静置8h，滤过。滤液回收乙醇。取沉淀加水溶解，滤过，滤液浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85。％，静置过夜，过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗漆脱水两次，真空减压干燥，即得深咖啡色水提物多糖成分80g。1.2参舌片剂的制备处方<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>制备方法将红参、白花蛇舌草醇提取物200g粉碎，过80目筛，备用；将红参、白花蛇舌草水提物多糖80g，过80目筛。将两者混匀。加入乳糖100g，微晶纤维素45g，交联PVP15g，混合均匀。用5XPVP乙醇溶液制软材，20目制粒，5(TC鼓风干燥，18目筛整粒。加入硬脂酸镁3g，混合均匀，压制成片，包衣，即得。实施例二参舌口服液的制备2.1红参、白花蛇舌草提取物的制备1)取红参1000g粉碎成最粗粉，白花蛇舌草800g，剪段，加6倍的80%乙醇，每次回流lh，过滤，滤渣晾干，备用；2)滤液合并，用氢氧化钠调节pH值为8.67，静置8-12小时，过滤，滤液用稀盐酸调节pH为6.55，放置过滤，滤液回收乙醇至无醇味，即得醇提取物皂甙、黄酮、对羟基香豆酸、三萜类等成分。3)取晾干后的药渣加水煎煮两次，第一次加IO倍的水，煎煮lh，第二次加8倍的水，煎煮0.5h，过滤，合并滤液。滤液浓縮至相对密度为1.05-1.10(4(TC测)，加乙醇醇沉，醇度达80%，静置8h，滤过。滤液回收乙醇。取沉淀加水溶解，滤过，滤液浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85%,静置6h，过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗涤两次，真空减压干燥，即得深咖啡色水提物多糖成分40g。2.2参舌口服液的制备将醇提取物加到600ml水中，加热搅拌至溶解后，加入水提物多糖成分48g，搅拌溶解。加入蔗糖400g，加入适量的三梨醇钾，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.26(6.5-7.5)，加注射用水至1000ml，滤过，分装，10ml/瓶，灌封，流通蒸汽灭菌即得。实施例三参舌注射液的制备3.1红参、白花蛇舌草提取物的制备1)取红参800g粉碎成最粗粉，白花蛇舌草1200g，剪段，加8倍的80%乙醇，每次回流lh，过滤，滤渣晾干，备用；2)滤液合并，用氢氧化钠调节pH值为8.38，静置8-12小时，过滤，滤液用稀盐酸调节pH为6.45，放置过滤，滤液西收乙醇至无醇味，即得醇提取物皂甙、黄酮、对羟基香豆酸、三萜类等成分。3)取晾干后的药渣加水煎煮两次，第一次加8倍的水，煎煮lh，第二次加8倍的水，煎煮0.5h，过滤，合并滤液。滤液浓縮至相对密度为1.05-1.10(4(TC测)，加乙醇醇沉，醇度达80%，静置8h，滤过。滤液回收乙醇。取沉淀加水溶解，滤过，滤液浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85%,静置6h，过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗涤两次，真空减压干燥，即得深咖啡色水提物多糖成分41g。3.2参舌注射液的制备将醇提取物加到800ml水中，加热搅拌至溶解后，加入水提物多糖成分41g，搅拌溶解。用40X氢氧化钠调节pH7.45(6.5-8.0)，加入活性碳5g，70-80'C下，搅拌15min，置冰箱冷藏过夜。滤过，滤液中加入10g聚三梨酯80、亚硫酸钠lg，充分搅拌均匀，滤液定容至1000ml，0.22pm微孔滤膜滤过，灌装于10ml安瓿中，封口，流通蒸汽灭菌30min，冷却，灯检，包装，即得。参见图l、2、3,在该实施例三中制备参舌组合物的实施方案中，为了获得了适合于静脉注射的高质量的制剂，采用中药指纹图谱这一分析方法来控制药材、中间体和制剂的质量。中药指纹图谱对本领域的技术人员应该是相当熟悉的了。中药指纹图谱是指中药材经一定处理后，采用一定的分析手段和分析仪器检测而得到的，能够表示该药材和相应制剂的各组分特性的共有峰的特征。通过指纹图谱主要特征峰的相对保留时间及含量或比例的制定和比对，能够有效的控制产品质量，保证产品的稳定性。红参中的主要成分主要表现为人参皂甙类，白花蛇舌草的主要成分主要为黄酮类、人参皂甙Rh2、三砲类等。本发明采用HPLC法，以酸性缓冲系统梯度洗脱方式，分别以人参皂甙Rh2作为红参图谱中参照物，以白花蛇舌草对羟基香豆酸作为参照峰，计算相对保留时间、峰面积比值、平均相对保留时间和平均峰面积比值，建立了药材的指纹图谱。在此基础上，对十批本发明实施例三获得的参舌注射液指纹图谱进行分析，将数据结果导入计算机，经相似度软件计算，确定了共有的指纹色谱峰，发现制剂中共有的特征峰峰面积约占总峰面积的90%以上，并同时考察了制剂、中间体、药材指纹图谱的相关性。通过指纹图谱的分析，确定了有效成分，保证了产品质量的稳定性。含有参舌组合物的制剂的药效学试验1)、实验材料1.1)动物昆明种小白鼠10-16g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。质量合格证号陕医动证字06-004。C57BL/6小鼠，体重18-22g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，符合健康三级动物，质量合格证号陕医动证字06-018。1.2)药品实施例二中的参舌口服液，由西安新通药物研究有限公司提供，批号070625规格10ml/瓶18g生药/瓶(每瓶含红参10g，白花蛇舌草8g)。用法用量临床上60kg体重每日喝1次，每次1瓶。计算成人日用量为18g生药/瓶*1瓶/次/60kg体重/2411=0.3生药/kg体重/24h。注射用环磷酰胺，山西泰盛制药有限公司。批号060830，规格0.2g瓶。试验时取注射用环磷酰胺1瓶，用0.9X生理盐水配制成30ml后使用。香菇多糖片江苏江阴制药厂生产，批号061010，2.5mg/片。试验时将每片香菇多糖溶于3ml纯净水后使用。微达康颗粒20g/袋哈药集团世一堂制药厂批号060724。试验时将用纯净水配成2g/ml后使用。1.3)瘤株Lewis肺癌细胞，四川抗菌素工业研究所1.4)对荷Lewis肺癌环磷酰胺化疗模型动物T淋巴细胞增殖的影响接种取C57BL/6小鼠60只，雄性，适应实验室7天后开始称重，编号，随机分为6组，每组10只。取皮下生长旺盛的肿瘤作为瘤源，无菌条件操作，剔除胞膜和坏死部分，选取完好的瘤块，置玻璃匀浆内，加入适量的0.9%的生理盐水，配制成比例为1:3的细胞悬液。每只动物于右前腋下接种0.2mlLewis细胞悬液。给药接种次日，按体重随机分为荷瘤对照组，化疗对照组，香菇多糖片组，参舌口服液大、中、小剂量组。除荷瘤对照组外，其余各组第3、5、7天(以接种次日开始计算)i.p环磷酰胺60mg/kg造模，同时按给药方案剂量对小鼠给药。制备淋巴细胞末次给药24h处死小鼠，无菌取脾脏，分离脾细胞，用含有10%的RPMT-1640制备成5*106/ml脾细胞悬液。取100nl加入96孔细胞培养板(每份样本做三个复孔)，在加入10pg/mlConA10(Hil，37°C5XC02培养箱内培养48h，终止前4h加入MTT溶液(5mg/ml)20pl/孔，培养结束后，小心弃去上清液，每孔加入DMSO100nl，充分溶解后，用酶标仪测定OD值(人二570nm)。表1:参舌口服液对肺癌动物荷Lewis肺癌环磷酰胺化疗的模型动物T淋巴细胞试验给药方案<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注药品浓度和药品剂量单位"g/ml"和"g/kg，，为"g生药/ml"和"g生药/kg"的简称。表2:参舌对荷Lewis肺癌环磷酰胺化疗模型动物T淋巴细胞增殖的影响组别样本剂量x天OD值数(g/kgxd)荷瘤对照组环磷酰胺组香菇多糖片组参舌口服液大剂量组+环磷酰胺参舌口服液中剂量组+环磷酰胺参舌口服液小剂量组+环磷__化疗对照组与荷瘤对照组比较AAApo.OOl各给药组与化疗对照组比较,P0.05"PO.01***P<0.001表2结果表明，化疗对照组小鼠OD值极显著低于荷瘤对照组(PO.OOl)，6、3-g的参舌口服液能显著和明显提高化疗模型小组OD值(PO.01和P<0.05)o1.5)参舌口服液对肺癌动物化疗(烷化剂环磷酰胺)的增效作用接种取C57BL/6小鼠90只，雄性，适应实验室7天后开始称重，编号，随机分为9组，每组10只。取皮下生长旺盛的肿瘤作为瘤源，无菌条件操作，剔除胞膜和坏死部分，选取完好的瘤块，置玻璃匀浆内，加入适量的0.9%的生理盐水，配制成比例为1:3的细胞悬液。每只动物于右前腋下接种0.2mlLewis细胞悬液。给药接种次日，按体重随机分为荷瘤对照组，化疗对照组，微达康颗粒组，参舌口服液各剂量组、参舌口服液各剂量组(联合化疗)。除荷瘤对照组和参舌口服液各组外，其余各组从第四天开始连续7天腹腔给予化疗药100.684±0.10810——108.33mgxl0106x100.408±0.1050.535±0.0770.580±0細*'10ix100.556±0.084101.5x10(注射用环磷酰胺(15mg/kg/天)；同时各组按给药方案连续10天给予受试药。于末次给药后48小时，处死动物，称取瘤重，并按照下式计算抑瘤率及化疗药联合中药治疗的增效率Q(Q〉l为增效)模型组平均瘤重一治疗组平均瘤重抑瘤率=-xi00%模型组平均瘤重化疗加中药组抑瘤率化疗组抑瘤率+中药组抑瘤率一化疗组抑瘤率x中药组抑瘤率表3:参舌口服液对肺癌动物化疗(烷化剂环磷酰胺)的增效作用试验给药方案组别受试物给药浓度给药体积给药剂_(g/ml)(ml/kg)量荷瘤对照组纯净水----10—环磷酰胺组纯净水----10—微达康颗粒组微达康颗粒2.002040参舌口服液大剂量组参舌口服液0.6106参舌口服液中剂量组参舌口服液0.3103参舌口服液小剂量组参舌口服液0.15101.5参舌口服液大剂量+环参舌口服液0.6106磷酰胺组参舌口服液中剂量+环参舌口服液0.3103磷酰胺组参舌口服液小剂量+环参舌口服液0.15101.5磷酰胺组_注药品浓度和药品剂量单位"g/ml"和"g/kg"为"g生药/ml"和"g生药/kg"的简称。表4:参舌口服液对肺癌动物化疗(烷化剂环磷酰胺)的if效作用(X士sd)组别平均体重(g)(开始/结束)平均瘤重(g,x士sd)抑瘤率增效率荷瘤对照组19.65/23.031.106±0.206——环磷酰胺组19.79/20.370.652±0.216*"0.410—微达康颗粒+环磷酰胺19.48/21.590.441±0,165**"0週—组参舌口服液大剂』匱组19.51/21.990.858±0.298*0.224—参舌口服液中剂』匱组19.25/20.691.023±0.0970.075—参舌口服液小剂』匱组19.63/21.071.065±0.1820.037——参舌口服液大剂量:+环19.46/21.780.422±0.122**"0.6181,140磷酰胺组参舌口服液中剂量:+环19.59/20.300.568±0.278***0.486l扁磷酰胺组参舌口服液小剂量+环19.75/21.460.629±0.126*"0.4310.998磷酰胺组_注(1)其他各组与荷瘤对照组比较'P<0.05一PO.OOl(2)各给药组(参舌口服液组()未化疗组除外)与化疗对照组比较AP〈0.05"PO.01表4结果显示与荷瘤对照组比较，6g/kg参舌口服液的瘤重明显降低(P<0.05);6、3和1.5g/kg参舌口服液组(联合化疗)均极显著降低瘤重(P0.001)。与化疗对照组比较奥，6g/kg参舌口服液组在化疗的基础上进一步明显降低瘤重(P<0.05)，抑瘤率达到61.8%。与此同时，6g/kg参舌口服液(联合化疗)增效率Q值>1,提示其对肺癌动物化疗(烷化剂环磷酰胺)具有增效作用。注中国药典规定乙醇指95乙醇，因此说明书中没有注明浓度的乙醇均指浓度为95%的乙醇。18权利要求1.一种参舌组合物，其特征在于所述参舌组合物组分包括80-150份的红参和60-120份的白花蛇舌草或由80-150份红参和60-120份白花蛇舌草的原料药制备而成的醇提取物和水提取物。2、根据权利要求1所述的参舌组合物，其特征在于所述红参和白花蛇舌草的醇提取物包括皂甙、对羟基香豆酸和三萜类，所述红参和白花蛇舌草的水提取物包括水溶性多糖。3、一种参舌组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤1)按配比取红参和白花舌蛇草，将红参粉碎成粗粉，白花舌蛇草剪段，分别加乙醇溶液回流提取3次，每次持续lh,滤过，滤渣晾干，备用；2)将步骤l)中所得两份滤液合并，再用氢氧化钠调节pH值为8-9，静置8-12小时，过滤，所得滤液用稀盐酸调节pH为6-7，放置，过滤，接着从滤液中回收乙醇至无醇味，即得醇提取物；3)将步骤l)中的药渣加水煎煮两次，第一次lh，第二次0.5h，过滤，合并滤液，滤液浓縮至相对密度为1.05-1.10(在4(TC下测量)，加乙醇醇沉，醇度达80%，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇，取沉淀加水溶解，滤过浓縮，加乙醇醇沉，醇度达85%,静置6-8h,过滤，滤液回收乙醇，沉淀用乙醇洗漆两次，真空减压干燥，即得水提取物。4、根据权利要求3所述的参舌组合物的制备方法，其特征在于所述步骤l)中乙醇溶液的浓度为60-90%，优选为75%;加入的乙醇体积为药材重量的6-8倍。5、根据权利要求3所述的参舌组合物的制备方法，其特征在于所述步骤3)中水煎煮时加入水的体积为药材重量的6-10倍，优选为6-8倍。6、一种含参舌组合物的药物制剂，其特征在于该药物制剂包括参舌组合物和药学上可接受的辅剂；当药物制剂为口服制剂时，参舌组合物的醇提取物占15-40%，水提取物多糖成分占5-20%;当药物制剂为注射液时，参舌组合物的醇提取物占10-25%，水提取物多糖成分占5-15%。7、根据权利要求6所述的含参舌组合物的药物制剂，其特征在于所述药学上可接受辅剂是能与活性成分相容的药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂中的一种或几种。8、根据权利要求7所述的含参舌组合物的药物制剂，其特征在于所述赋形剂是水、生理盐水、葡萄糖、甘油、乙醇或其类似物及其组合。9、根据权利要求7所述的含参舌组合物的药物制剂，其特征在于当药物制剂为冻干粉针剂时，所述药学上可接受的载体选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、甘氨酸、水解明胶、聚维酮和氯化钠中的一种或几种。10、根据权利要求7所述的含参舌组合物的药物制剂，其特征在于当药物制剂为口服制剂时，所述药学上可接受的载体选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、交联PVP和羧甲基淀粉钠中的一种或几种。全文摘要本发明涉及一种参舌组合物及其制备方法，该参舌组合物组分包括80-150份的红参和60-120份的白花蛇舌草或由80-150份红参和60-120份白花蛇舌草的原料药制备而成的醇提取物和水提取物。本发明提供了一种最大限度提高药材利用率，节约资源，获得临床疗效好、质量稳定的红参和白花蛇舌草中的药效成分，同时制成便于临床使用的制剂，更有效的治疗癌症，减轻患者的痛苦的参舌组合物及其制备方法。文档编号A61K36/185GK101259180SQ20081001802公开日2008年9月10日申请日期2008年4月22日优先权日2008年4月22日发明者红王申请人:红王